Tuliposide H–J Và Các Thành Phần Hoạt Tính Sinh Học Từ Củ Amana Edulis
Mar 20, 2023
Trừu tượng:
Lần đầu tiên, ba mặt hoa tulip mới H–J (1–3) và 11 hợp chất đã biết được lấy từ dịch chiết metanol của củ Amana edulis. Cấu trúc của chúng đã được làm sáng tỏ bằng dữ liệu quang phổ NMR, MS và IR, phép quay quang học và phương pháp của Mosher. Các đặc tính sinh hắc tố của tất cả các chủng phân lập được đánh giá trong các tế bào ung thư hắc tố B16. Do đó, tributyl citrate (9) có hoạt tính chống tạo hắc tố nhưng gây độc tế bào đối với B16. ( cộng )-Axit pyroglutamic (4), ( cộng )-butyl 5-oxo pyrrolidine-2-carboxylat (6), (–)-3-hydroxy-2-metyl butyrolactone (10 ) và 5- (hydroxymethyl)furfural (12) đã làm tăng sản xuất melanin và hoạt động tyrosinase. Những thành phần tích cực đó có thể được nghiên cứu sâu hơn như những ứng cử viên chống lại khối u ác tính và bệnh bạch biến đối với các bệnh về da hoặc làm trắng/giảm sắc tố cho tóc.
Trong nghiên cứu làm trắng, chúng tôi thấy rằng Cistanche cũng có tác dụng làm trắng
Trước hết, Cistanche rất giàu polysacarit và flavonoid. Các hợp chất này hoạt động như chất chống oxy hóa và có thể giúp cơ thể loại bỏ các gốc tự do, làm chậm quá trình lão hóa của da và do đó cải thiện làn da.
Thứ hai, Cistanche còn chứa nhiều loại axit amin, khoáng chất và vitamin rất có lợi cho quá trình phục hồi và tái tạo da. Cistanche có thể thúc đẩy quá trình trao đổi chất của tế bào da, tăng cường khả năng tự sửa chữa của da và phục hồi làn da trở lại màu sắc khỏe mạnh.
Cuối cùng, Cistanche cũng chứa một số axit hữu cơ và chất kiềm, và những thành phần này cũng có tác dụng nhất định đối với quá trình điều hòa và trao đổi chất của lớp biểu bì da. Những chất này có thể cân bằng hiệu quả giá trị pH của da, cải thiện độ dày của lớp sừng và làm cho làn da trở nên trong mờ và mỏng manh hơn.
1. Giới thiệu
Amana edulis (A. edulis; Miq.) Honda, syn. Tulipa edulis (Miq.) Baker thuộc họ Hoa loa kèn, là cây thuốc dân gian dùng chữa bệnh ung thư [1,2]. Tuy nhiên, đã có rất ít nghiên cứu hóa học và sinh học về loài này được báo cáo cho đến nay.
Ví dụ, chiết xuất EtOH 95 phần trăm và 50 phần trăm có thể gây ra quá trình chết theo chương trình trong tế bào ung thư biểu mô dạ dày người (SGC7901) [1] và ung thư gan (BEL7404, HepG2 và Huh7) [2] tương ứng. Các polysacarit được điều chế từ A. edulis có đặc tính chống oxy hóa, bao gồm DPPH, OH− và ABTS cộng với các hoạt động nhặt rác [3–5]. Trong nghiên cứu về các tác nhân mới từ các sản phẩm tự nhiên cho các rối loạn về da, chúng tôi phát hiện ra rằng chiết xuất MeOH của củ A. edulis cho thấy tiềm năng điều hòa quá trình tạo hắc tố chưa được nghiên cứu. Khi tiếp xúc với bức xạ cực tím của ánh sáng mặt trời hoặc các hóa chất độc hại và các yếu tố gây bệnh, quá trình tạo hắc tố vừa phải có thể bảo vệ da của chúng ta khỏi sự tạo ra các loại oxy phản ứng trong tế bào sừng và tế bào hắc tố [6]. Tyrosinase là một enzyme quan trọng trong quá trình hình thành hắc tố để tạo ra nhiều hắc tố hơn giúp chúng ta chống lại các điều kiện nguy hiểm nói trên [7].
Do đó, các thành phần hoạt động của A. edulis xứng đáng được làm sạch cho các ứng dụng y tế tiếp theo. Trong cuộc điều tra này, ba mặt hoa tulip mới H–J (1–3) và 11 hợp chất đã biết (4–14) (Hình 1) đã được phân lập từ A. edulis và được xác định cấu trúc bằng dữ liệu quang phổ NMR, MS và IR, phép quay quang học , hoặc phản ứng Mosher ester. Hợp chất 9 có thể làm giảm hàm lượng hắc tố nhưng gây độc tế bào đối với các tế bào khối u ác tính B16. Các hợp chất 4, 6, 10 và 12 đã làm tăng hoạt động sản xuất melanin và tyrosinase. Nhìn chung, nghiên cứu này đã chứng minh rằng A. edulis và các thành phần hoạt động của nó có thể là tác nhân mới đối với các bệnh liên quan đến hắc tố, chẳng hạn như khối u ác tính và giảm sắc tố (bạch biến da hoặc làm trắng tóc).
2. Kết quả và Thảo luận
2.1. Làm sáng tỏ cấu trúc của các chủng 1–3
Dịch chiết MeOH (TEM) của củ A. edulis được phân chia thành các phân đoạn hòa tan trong EtOAc (TEE), hòa tan trong n-BuOH (TEB) và hòa tan trong H O (TEW) riêng biệt. Phân số. hoạt động của chiết xuất TEE và TEB đã tạo ra glycoside isoprenoid mới 1-3 và các hợp chất đã biết 4-14 (Hình 1). Ngoài ra, các thành phần chính của chiết xuất TEW là carbohydrate.
HRESIMS (phép đo khối phổ ion hóa phun tia điện có độ phân giải cao) của 1 cho thấy (ion M - H- ở m/z 351,1652, cho biết công thức phân tử của CsH2gOg (calcd choC;5HoOg; 351,1655) và hai mức độ không bão hòa. cho thấy sự hấp thụ đối với các chức năng hydroxyl (3376 cm-l) và carbonyl (1725 cm-l). Mười lăm tín hiệu carbon, bao gồm hai methyl, năm methylene, bảy methine và một carbon bậc bốn, đã được quan sát thấy trong NMR một chiều (1D) phổ của 1 (Bảng 1). Carbon bậc bốn được xác định là carbon carbonyl dựa trên độ dịch chuyển hóa học 6c 176,6. Phổ NMR 1D và HSOC (kết hợp lượng tử đơn hạt nhân) hiển thị một dị thường (0/8c: 4,27 (d, J=8.0 Hz)/1{{30}}4,9), năm oxymetholone (0h/8c: 3,21(t, J { {34}}.0 Hz)/75.1, 3.28 (chồng chéo)/71.6, 3.28 (chồng lấp)/78.0, 3.35 (t, J=8.{{67} } Hz)/77,9 và 3,89 (td, I=7.0, 2,5 Hz)/73,6) và ba oxymetylen (6,/6c: 3,57 (dd, J {{64} }.5, 7.0 Hz)4.01 (dd, I {{70}}.5, 2,5 Hz)/73.1, 3,66 (dd, I { Các tín hiệu {78}}.0, 5.0 Hz), 3.85 (brd, I=12.0 Hz)/62.7 và 4.10 (2H, t, J=7.5 Hz)/65.5). Các tương quan HMBC (tương quan đa liên kết dị hạt nhân) (Hình 2) của hợp chất 1 tại các proton methine H-2 (8 2.67, nhóm 5 với C-1 (6 176. 6)/C-3 (6 73.6)/C-4 (6 73.1)/C-5 (6 13.9) , H-3 (6 3.89, td) với C-1/C-2(6 44.6)/C-4/C -5, H-1' (6 4.27, d) với C-4 và các proton metyl H-5 (8 1.14 , d) withC-1/C-2/C-3 gợi ý rằng các gốc metyl và hydroxyl được định vị lần lượt tại C-2 và C-3 Ngoài ra, các proton methylene tại H,-1" (8 4.10, t) và H-4 (6 3.57dd; 4.01, dd) thể hiện 3 tương tác với C{{ 142}} và C-1' (8 104.9), tương ứng, trong phổ HMBC (Hình 2) hỗ trợ các phép gán của nhóm n-butyl tại C-1 và một phiên bản beta -glucose (H-1', 8 4.27, d, J=8.0 Hz) tại C-4 8].
Hình 2 cho thấy các tương quan COSY và HMBC chính được quan sát cho 1. Các cấu hình tương đối tại C-2 và C-3 (3-hydroxy-2-metyl) của 1 có thể được xác định chống -dạng bởi giá trị 3 JH2-H3 là 7.0 Hz (dạng đối kháng: 7.0 Hz; dạng đồng nghĩa: 4.0 Hz) [ 9]. Để xác định cấu hình tuyệt đối, hợp chất 1 được xử lý riêng với (R)- và (S)- -methoxy- -(triflometyl)-phenyl acetyl clorua [(R)- và (S)-MTPA- Cl] với sự có mặt của pyridin-d5 để thu được các este (S)- và (R)-MTPA (1a và 1b) tương ứng. Các este MTPA đã được tạo thành công tại C-3 và C-20/C-30/C-40 , như được làm sáng tỏ từ 1H NMR và 1H-1H COSY quang phổ (1a, H-3, δ 5,82, m; H-20 , δ 5,70, t, J=9.5 Hz; H-30 , δ 4,39, t, J=9.5 Hz; H-40 , δ 5,76, t, J=9.5 Hz; 1b, H-3, δ 5,81, m; H{{64 }} , δ 5,56, t, J=9.5 Hz; H-30 , δ 4,12, t, J=9.5 Hz; H-40 , δ 5,66, t, J= 9.5 Hz). Sự khác biệt giữa các độ dịch chuyển hóa học 1H NMR cho 1a và 1b (∆ các giá trị được hiển thị trong Hình 3) dẫn đến việc gán các cấu hình S- và R tại C-3 và C-2, tương ứng. Do đó, hợp chất 1 được làm sáng tỏ là butyl 4- -D-glucopyranose-(S)-3-hydroxy-(R)-2-metyl butanoat và được đặt tên là mặt hoa tulip H.
Hợp chất 2, tulip side I, có công thức phân tử, C15H28O8, được thiết lập bởi HRESIMS (m/z 359,1686 [M cộng với Na] cộng , calcd cho 359,1682). Phổ 1D NMR của 2 cũng tương tự như của 1, ngoại trừ thực tế là sự dịch chuyển hóa học của tín hiệu metylen δH 1,65 (sext, J=7.0 Hz) và 1,96 (sext, J=7.0 Hz)/δC 34,6 đã được xác định thay vì một methine tại C-3/1 (Bảng 1). Dựa trên dữ liệu COSY và HMBC (Hình 2), hợp chất 2 được cho là bao gồm một isoprenoid, một glucose và cả các nhóm n-butyl. Tương quan HMBC 3 J của H2-1" (δ 4.04, 2H, t, J=7.5 Hz/δC 65,4) với C-1 (δ 178,5) và H-10 (δ 4,19, d, J=8.0 Hz/δC 104,4) với C-4 (δ 68,4) cho rằng nhóm n-butyl và một -glucose nửa [8] lần lượt được kết nối tại C-1 và C-4 (Hình 2). Mối tương quan giữa HMBC và COZY chính được thể hiện trong Hình 2. Cấu hình R của H3-5 tại C-2 của 2 được xác định bằng quá trình thủy phân axit của 2 để tạo ra hợp chất tulipalin tương ứng, 3-metyldihydrofuran-2(3H)-one (Hình S28) [8] với sự quay quang dương giá trị ([ ] 23 D cộng với 18,7, CH2Cl2) (R: [ ] 25 D cộng với 14,7, CHCl3) [10]. Cấu trúc của hợp chất 2 được xác định là butyl 4- -D-glucopyranose-(R){{ 81}}metyl butanoat.
Công thức phân tử của 3 được suy ra là C11H20O8 do sự xuất hiện của ion cộng [M cộng Na] ở m/z 303.1049 (calcd cho 303.1050) trong HRESIMS. Mười một tín hiệu cacbon, bao gồm một metyl (δ 17,6), ba metylen (δ 34,7, 62,8 và 68,6), sáu methine (δ 37,6, 71,6, 75,1, 77,9, 78,0 và 104,4) và một cacbon bậc bốn (δ 180,6) , đã được quan sát trong phổ 1D NMR của 3 (Bảng 1). Carbon bậc bốn được xác định là carbon carbonyl dựa trên độ dịch chuyển hóa học carbon ở δ 180,6. Hơn nữa, hợp chất 3 cho thấy dữ liệu quang phổ tương tự như hợp chất 2, ngoại trừ tín hiệu n-butyl. Trong phổ HMBC (Hình S15), proton dị thường ở δ 4,23 (d, J=8.0 Hz) thể hiện tương tác 3 J với C-4 (δ 68,6) dẫn đến -glucose nằm ở C-4. Các kết nối HMBC và COZY chính được hiển thị trong Hình 2. Hợp chất 3 không được phân lập với số lượng đủ để xác định cấu hình tuyệt đối tại C-2. Cuối cùng, mặt hoa tulip J (3), 4- -D-glucopyranose-(R)-2-axit metyl butanoic, đã được xác định nhờ làm sáng tỏ cấu trúc nêu trên của 1 và 2 trong nghiên cứu này.
Hợp chất 1–3 là các mặt của hoa tulip, một loại sản phẩm chuyên dụng bao gồm 4-hydroxy2-methylene butanoic acid (HMBA) và/hoặc (3S)-3,4-dihydroxy -2-Các nhóm axit butanoic methylene (DHMBA) được acyl hóa ở vị trí C-1 và/hoặc C-6 của -D-glucose (Glc) chủ yếu được tìm thấy trong chi Tulipa [8,11] . Cho đến nay, các dạng tương tự của mặt hoa tulip, bao gồm 1-mặt hoa tulip A, 6-mặt hoa tulip A, 1-mặt hoa tulip B, 6-mặt hoa tulip B và mặt hoa tulip D–G , đã được phân lập từ Tulipa [8,11]. Tuy nhiên, cấu trúc của mặt C của hoa tulip chưa được báo cáo và có thể bị thiếu trong các tài liệu trước đây [11]. Tulipalin, chẳng hạn như tulipalin A và (–)-tulipalin B, là các phần aglycone của các mặt của hoa tulip, chúng tự tạo lactone sau khi giải phóng các nhóm HMBA và/hoặc DHMBA bởi các enzyme chuyển đổi mặt của hoa tulip [8,11]. Trong nghiên cứu này, các hợp chất 1–3 có tên là mặt hoa tulip H–J thuộc về mặt hoa tulip, nhưng liên kết đôi của chúng tại C-2 bị khử và các nhóm -D-glucose được gắn vào C-4 (oxymethylene ), thay vì C-1 (chức năng O-acyl) trong HMBA hoặc DHMBA (Hình 1). Ngoài ra, hợp chất 10 (2S,3S) là tulipalin nhưng không thể được chuyển hóa từ 1 (2R,3S) do các cấu hình khác nhau tại C-2. Các quá trình sinh tổng hợp có thể có của các mặt hoa tulip 1–3 được thể hiện trong Hình S29 [8,11].
Ngoài ra, 11 hợp chất đã biết bao gồm ba chất tương tự axit pyroglutamic (4–6), ba dẫn xuất axit xitric (7–9), hai furanone (10–11), một furan (12) và hai steroid (13–14) đã được lần đầu tiên phân lập được từ A. edulis. Các hợp chất 1–9 và 10–14 lần lượt thu được từ các phần thô TEB và TEE. Chúng được xác định là ( cộng )-axit pyroglutamic (4) [12], ( cộng )-metyl 5-oxo pyrrolidine-2-carboxylat (5) [12], ( cộng )- butyl {{23 }}oxo pyrrolidine-2-carboxylate (6) [12], 1-butyl xitrat (7) [13], 1,10 -dibutyl 5-metyl xitrat (8) [ 13], tributyl citrate (9) [13], (–)-3-hydroxy-2-metyl butyrolactone (10) [14–16], (–)- metyl 3-hydroxy{{ 44}}oxo tetrahydrofuran-3-carboxylat (11) [17], 5-(hydroxymetyl)furfural (12) [18], sitosterol (13) [19] và sitosterol-3- -D -glucose (14) [20] từ dữ liệu quang phổ và so sánh với tài liệu.
2.2. Làm sáng tỏ các thành phần hóa học của TEW
Phổ 1H và 13C NMR của TEW, một phần thô hòa tan trong nước từ chiết xuất TEM, cho thấy rất giống với phổ của carbohydrate (Hình S16 và S17). Polysacarit được điều chế từ loài này đã được báo cáo là có rhamnose, xyloza, arabinose, galactose, mannose, glucose và fructose sau khi phân tích monosacarit [3,8]. Dữ liệu quang phổ NMR và hệ số lưu giữ TLC (sắc ký lớp mỏng) của TEW so với dữ liệu của các tiêu chuẩn đường (Hình S18–S23) cho thấy D-glucose và D-fructose là thành phần chính trong chiết xuất TEW.
2.3. Tác dụng của chiết xuất và phân lập đối với sự hình thành hắc tố
Dịch chiết MeOH (TEM) của loài này được phân tách thành các phần thô TEE, TEB và TEW, và bốn dịch chiết nói trên được đánh giá về tác dụng gây độc tế bào và sinh hắc tố trong các tế bào u ác tính B16 ở nồng độ từ 12,5 đến 200 µg/mL (Hình S24) . TEE thể hiện khả năng gây độc tế bào rõ ràng đối với B16 ở nồng độ 200 µg/mL và TEB cũng như TEW có hoạt tính gây độc tế bào ở nồng độ từ 12,5 đến 200 µg/mL (Hình S24A-1, B-1, C{{13} }, D-1). Trong thử nghiệm sinh học, hormone kích thích tế bào hắc tố ( -MSH) được sử dụng để kích hoạt các tế bào B16 tổng hợp nhiều hắc tố hơn và TEM có thể kích thích quá trình tạo hắc tố ở mức độ vừa phải (Hình S24A-2).
Hầu hết tất cả các chủng phân lập (Hình 1), ngoại trừ 13 và 14, đã được thử nghiệm thêm để điều chỉnh các hiệu ứng tạo hắc tố ở nồng độ từ 10 đến 40 µM, với arbutin được sử dụng như một biện pháp kiểm soát dương tính (Hình 4). Như được trình bày trong Hình 4, hợp chất 9 ức chế sản xuất melanin một cách rõ ràng và phụ thuộc vào liều do gây độc tế bào đối với tế bào B16 với giá trị IC50 (nồng độ ức chế tối đa một nửa) là 81,9 µM (Hình S25). Các dòng phân lập 4, 6, 10 và 12 tăng hàm lượng melanin phụ thuộc vào liều lượng lên đến tỷ lệ phần trăm tối đa lần lượt là 11,9% , 29,8% , 27,2% và 17,6% ở 40 µM mà không gây độc tế bào. Tyrosinase đóng vai trò chính trong hai bước đầu tiên của quá trình tạo hắc tố [6]; do đó, tác dụng của các hợp chất 4, 6, 10 và 12 đối với tyrosinase nội bào đã được đánh giá thêm. -MSH đã tăng hoạt động tyrosinase lên tới 254,3–305,5 phần trăm khi so sánh với nhóm đối chứng (100 phần trăm ) (Hình 5 và Bảng S1).
Do đó, 4 (14,1–21,9 phần trăm ), 6 (15,8–21,9 phần trăm ), 10 (8,5–13,1 phần trăm ) và 12 (7,5–11,8 phần trăm ) tăng vừa phải hoạt động của enzym, tyrosinase, theo cách phụ thuộc vào liều lượng ở nồng độ từ 10 đến 40 µM, trong khi so sánh với nhóm -MSH (Hình 5 và Bảng S1). Biểu đồ tương quan giữa hàm lượng melanin trong tế bào và tác động lên tyrosinase của các hợp chất 4, 6, 10 và 12 được thể hiện trong Hình S26. Hơn nữa, để xác nhận các tác động tạo hắc tố của 4, 6, 10 và 12, mỗi hợp chất được thêm vào trong các tế bào B16 mà không có -MSH đồng xử lý được sử dụng làm đối chứng dương trong xét nghiệm này (Hình S27). Do đó, các cá nhân 4, 6, 10 và 12 không chỉ tăng sản xuất hắc tố (Hình S27) tương tự như các cá thể trong Hình 4. Có ý kiến cho rằng bốn hợp chất nêu trên có thể chỉ tăng cường tác dụng tạo hắc tố của -MSH. Theo đó, các đường dẫn tín hiệu bổ sung trong quá trình tạo hắc tố, chẳng hạn như protein liên quan đến tyrosinase-1 (TRP-1), TRP-2, yếu tố phiên mã liên quan đến microphthalmia, thụ thể melanocortin 1, adenosine monophosphate tuần hoàn, protein kinase A, protein liên kết với yếu tố cAMPresponse, kinase đầu cuối c-Jun N, kinase được điều hòa tín hiệu ngoại bào, p38 và phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B [7,21], cần được thử nghiệm thêm và xác nhận cho các thành phần tích cực đó.
3. Vật liệu và phương pháp
3.1. Quy trình thí nghiệm chung
Phổ NMR được đo trên thiết bị Bruker Avance Ill 500 MHz (BrukerBillerica, Mỹ) cho 1H và 125 MHz cho 13C-NMR. Các giá trị độ dịch chuyển hóa học (0) tính bằng ppm và hằng số ghép () tính bằng Hz với CD; OD, CDCl và/hoặc D, O được sử dụng làm dung môi. Các phép quay quang học thu được trên máy đo phân cực JASCO-P-2000 (JASCO, TokyoJapan) (chiều dài ô 10 mm). Phổ hồng ngoại được ghi lại trên máy quang phổ PerkinElmer Spectrum TwoFT-IR (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Phép đo phổ khối ion hóa ESIMSelectrospray có độ phân giải thấp và độ phân giải cao) được đo trên máy quang phổ khối bẫy công suất cực cao Bruker Daltonics EsquireHCT và máy quang phổ khối Orbitrap (LIOOrbitrap XL, Thermo Fisher Khoa học), tương ứng. TLC được thực hiện trên Kieselgel60 F254 (0,25 mm; Merck) và/hoặc RP-18 F254S (0,25 mm; Merck), các tấm được phủ và sau đó được nhuộm bằng cách phun 5 phần trăm (o/u) lưu huỳnh axit trong dung dịch MeOH và đun nóng trên bếp điện. Silica gel (Silicycle: 70 230 and 230 400 mesh), RP-18 (LiChroprepe 4063 um: Merck. Sephadexn C20 CE Episode 0 pe open w Bre áp dụng cho FoSupelcoTM, Bellefonte) và MCI CHP20P (Sắc ký cột SupelcoT. Bơm Shimadzu LC-20AT và Shimadzu RID-10Máy dò chỉ số khúc xạ (Shimadzu Inc, Kyoto, Nhật Bản), cùng với Cosmosil 5C18-MS-II ( Cột 250 x10 mm id, 5 um) với tốc độ dòng 2,0 mL/phút, được sử dụng cho HPLC. Thuốc thử đường bao gồm D-glucose (MP Biomedicals, LLC, Illkirch, France) và D-fructose (TCI, Tokyoapan) được được sử dụng để phân tích phần thô hòa tan trong nước (TEW).
3.2. Nguyên liệu thực vật
Củ khô của A. edulis (trước đây là T. edulis) được mua từ một hiệu thuốc y học cổ truyền Trung Quốc ở Đài Trung, Đài Loan, vào tháng 9 năm 2018 và được xác định bởi tác giả Giáo sư Chang. Một mẫu chứng từ (TE201809) đã được ký gửi tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Y học Trung Quốc, CMUH Đài Loan.
3.3. Khai thác và cô lập
Củ của A. edulis (5.0 kg) được chiết xuất tám lần bằng MeOH (8.0 L mỗi lần) ở nhiệt độ phòng để thu được dịch chiết thô. Dịch chiết MeOH (TEM, 525.0 g) được phân chia ba lần giữa etyl axetat (EtOAc) và H2O (1500:1500, v/v) để tạo ra EtOAc -phần hòa tan (TEE, 45,0 g) và pha nước, được phân vùng tiếp với n-BuOH/H2O (1500:1500, v/v × 3), sau đó được tách thành n-BuOH hòa tan (TEB, 53,6 g ) và phần hòa tan trong H2O (TEW, 410,0 g).
TEE được xử lý bằng sắc ký cột hở trên silica gel ({{0}}.063–0.200 mm, cột: 7 × 26 cm, đường kính × chiều dài), sử dụng gradient của hexan–EtOAc–MeOH (3{{20}}:1:0; 1:1:0; { {67}}:0:1, v/v/v) và đưa ra 14 phân số con (TEE1–TEE14). Kết tủa 14 (249.0 mg; hiệu suất phân lập: 0.{{100}}0498 phần trăm ) thu được từ phân đoạn TEE12 (2,2 g) được lọc và rửa bằng MeOH. TEE9 (3,6 g) được phân đoạn thành bảy phần nhỏ (TEE9-1 đến 9-7) bằng silica gel (cột: 5 × 24 cm; CH2Cl2–MeOH, 7:1; 1:1; 0:1 , v/v), với phân số TEE9-4 (1,1 g), sau đó được xử lý bằng sắc ký cột Sephadex LH-20 (cột: 5 × 54 cm; CH2Cl2–MeOH, 1:1 đến 0: 1, v/v), để cho bảy phân số (TEE9-4-1 thành 9-4-7). TEE9- 4-5 và TEE9-4-6 được kết hợp (tổng cộng 551,7 mg) và được tinh chế nhiều lần bằng RP-HPLC (MeOH–H2O, 45:55; 20:80, v/v) để thu được 12 (21,0 mg ; tR=13 phút; hiệu suất phân lập: 0,00042 phần trăm ) và rượu mẹ (131,2 mg), được tiếp tục xử lý bằng RP-HPLC (MeOH–H2O; 10:90, v/v) để tạo ra các hợp chất 10 ( 35,5 mg; tR=13 phút; hiệu suất phân lập: 0,00071 phần trăm ) và 11 (1,2 mg; tR=15 phút; hiệu suất phân lập: 0,000024 phần trăm ). Phần TEE6 (2,7 g) được phân lập bằng Sephadex LH-20 (cột: 2,5 × 45 cm; CH2Cl2–MeOH, 1:1; 0:1, v/v) để thu được 13 (6,8 mg; hiệu suất phân lập: 0,000136 phần trăm ).
TEB được sắc ký trên cột Diaion HP{{0}} (6 × 60 cm; H2O–MeOH– axeton, 100:{{15} }:0; 25:75:0; 50:5{{20}}:0; 75:25:{{41 }}; 0:10{{70}}:{{90}}; {{1{{105} }0}}:0:100, v/v/v) để đưa ra sáu phân số (TEB1–TEB6). Phân đoạn TEB5 (502.0 mg) được tinh chế bằng RP-HPLC (MeOH–H2O, 85:15, v/v) để thu được hợp chất 8 (9,3 mg; tR {{34} } phút; hiệu suất phân lập: 0.000186 phần trăm ) và 9 (144,2 mg; tR {{4{{2{{2{{218} }9}}3}}}} tối thiểu; năng suất cô lập: 0,002884 phần trăm ). Phân đoạn TEB3 (5,5 g) được xử lý bằng sắc ký RP-18 (cột: 7 × 25 cm; MeOH–H2O, 1:1; 1:0, v/v) và phép trừ phân đoạn TEB3-6 ( 1,0 g) được phân lập thêm bằng Sephadex LH-20 (cột: 5 × 54 cm; MeOH) để thu được bảy phân số con (TEB3-6-1 đến 3-6-7). TEB3-6-4 (377,1 mg) được phân tách bằng sắc ký gel MCI (cột: 2,5 × 23 cm; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 40:60; 20:80; 0: 100, v/v) để có bảy phân số con (TEB3-6-4-1 thành 3-6-4-7). TEB3-6-4-4 (38,1 mg) được tinh chế bằng RP-HPLC (MeOH–H2O, 45:55 trong axit formic 0,1 phần trăm, v/v) để thu được 1 tinh khiết (12,2 mg; tR=17 phút; năng suất cô lập: 0,000244 phần trăm ). Ngoài ra, tiến hành TEB3-6-4-6 (31,0 mg) với RP-HPLC (MeOH–H2O, 40:60 trong axit formic 0,1 phần trăm, v/v) để thu được 6 (7,1 mg; tR=28 phút ; hiệu suất cô lập: 0,000142 phần trăm ). TEB3-6-5 (410,7 mg) được phân lập bằng sắc ký gel MCI (cột: 2,5 × 23 cm; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 50:50; 40:60; 30: 70; 20:80; 0:100, v/v) để có tám phân số con (TEB3-6-5-1 thành 3-6-5-8). TEB3-6-5-3 (75,1 mg) được tinh chế bằng sắc ký gel MCI (cột: 1 × 20 cm; H2O–MeOH, 80:20; 70:30; 0:100, v/v) để thu được hợp chất 4 (59,3 mg; hiệu suất phân lập: 0,001186 phần trăm ) và 5 (10,2 mg; hiệu suất phân lập: 0,000204 phần trăm ). Phần phụ TEB3-6-5-4 (97,0 mg) được tinh chế bằng RP-HPLC (MeOH–H2O, 40:60 trong axit formic 0,1 phần trăm, v/v) để thu được 7 (46,4 mg; tR=18 phút; năng suất cô lập: 0,000928 phần trăm). TEB3-10 (925,4 mg) được sắc ký bằng sắc ký gel MCI (cột: 2,5 × 28 cm; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 50:50; 40:60; 30 :70; 10:90; 0:100, v/v) để có 8 phân số con (TEB3-10-1 đến 3-10-8) và 2 nguyên chất (393,4 mg; hiệu suất phân lập: 0,007868 phần trăm ). Hợp chất 3 (6,3 mg; tR=8 phút; hiệu suất phân lập: 0,000126 phần trăm ) thu được từ TEB3-10-2 (20,9 mg) bằng cách tinh chế RP-HPLC (MeOH–H2O, 30:70 trong 0,1 phần trăm formic axit, v/v).
3.3.1. Tuliposide H (1)
[ ] 23 D −23,1 (c 0.12, MeOH); IR (gọn gàng) νmax 3376 (OH), 2960, 2934, 2875 (CH), 1725 (C=O), 1640, 1589, 1459, 1382, 1259, 1167, 1075, 1041 (C–O– C), 926, 900, 632, 521 cm−1; Dữ liệu quang phổ 1H và 13C NMR, xem Bảng 1; HRESIMS m/z 351,1652 [M − H]− (calcd cho C15H27O9, 351,1655).
3.3.2. Tuliposide I (2)
[ ] 23 D −25,8 (c 0.2, MeOH); IR (gọn gàng) νmax 3404 (OH), 2961, 2934, 2876 (CH), 1729 (C=O), 1638, 1461, 1378, 1277, 1185, 1165, 1077, 1036 (C–O– C), 897, 736, 625, 517 cm−1; Dữ liệu quang phổ 1H và 13C NMR, xem Bảng 1; HRESIMS m/z 359,1686 [M cộng với Na] cộng (calcd cho C15H28O8Na, 359,1682).
3.3.3. Tuliposide J (3)
[ ] 23 D cộng 9.0 (c 0.1, MeOH); IR (gọn gàng) νmax 3424 (OH), 2953, 2924, 2853 (CH), 1740 (C=O), 1632, 1441, 1401 (C–O–C), 1284, 1205, 1182, 1120 , 1078, 1039, 893, 768, 721 cm−1; Dữ liệu quang phổ 1H và 13C NMR, xem Bảng 1; HRESIMS m/z 303.1049 [M cộng với Na] cộng (calcd cho C11H20O8Na, 303.1050).
3.4. (R)- và (S)-MTPA Dẫn xuất của 1
Việc điều chế dẫn xuất este (S)-MTPA của 1 được thực hiện bằng quy trình este Mosher thuận tiện [22,23]. Hợp chất 1 (3,4 mg, 0.01 mmole) được chuyển vào ống NMR sạch rồi làm khô hoàn toàn trong chân không trước khi chứa đầy nitơ. Ngoài ra, C5D5N ({{20}}.5 mL) và (R)-(−)- -methoxy- -(triflometyl)-phenyl-axetyl clorua (MTPA clorua, 12.2 mg, 0,05 mmole) được thêm ngay vào ống NMR được đậy kín, ống này được lắc kỹ hơn nữa để trộn mẫu và MTPA clorua. Phổ 1H NMR và 1H-1H COSY của hỗn hợp sau khi phản ứng trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng đã được ghi lại. Este (R)-MTPA của 1 cũng được điều chế tương tự theo quy trình nói trên. Hợp chất 1: 1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0,78 (H-400, t), 1,26 (H-300, sext), 1,28 (H3-5, d), 1,52 ( H-200, ngũ phân vị), 3,08 (H-2, ngũ phân vị), 3,95 (H-50, m), 4,03 (H-4a, đ), 4,05 (H -20, trùng lặp), 4,15 (H-100, t), 4,23 (H-30, trùng lặp), 4,23 (H-40, trùng lặp), 4,36 (H{{ 68}}a, dd), 4,39 (H-3, trùng lặp), 4,43 (H-4b, dd), 4,53 (H-60b, d) và 4,95 (H -10, d).
3.4.1. (S)-MTPA Este của 1 (1a)
1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0,77 (H-400, t), 1,17 (H-300, sext), 1,21 (H3-5, d) , 1,37 (H-200, ngũ phân vị), 3,18 (H-2, ngũ phân vị), 3,92 (H-100, t), 3,97 (H-4a, đ), 4,33 (H-50 , m), 4,39 (H-30 , t), 4,49 (H-4b, brd), 4,64 (H-60a, dd), 4,96 (H-10 , d), 5,05 (H-60b, d), 5,70 (H-20 , t), 5,76 (H-40 , t) và 5,82 (H-3, m).
3.4.2. (R)-MTPA Este của 1 (1b)
1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0,79 (H-400, t), 1,26 (H-300, sext), 1,30 (H3-5, d) , 1,50 (H-200, ngũ phân vị), 3,33 (H-2, ngũ phân vị), 3,60 (H-50 , m), 3,94 (H-4a, đ), 4.11 (H-100, t), 4.12 (H-30 , t), 4.13 (H-60a, dd), 4.50 (H-4b, brd), 4,70 (H-10 , d), 4,85 (H-60b, d), 5,56 (H-20 , t), 5,66 (H-40 , t) và 5,81 (H-3, m).
3.5. Thủy phân axit của Tuliposide I (2)
Phân lập 2 (78,6 mg) được thủy phân trong HCl 1 M (1,5 mL) ở 100 ◦C trong 2 giờ [8]. Sau khi làm mát, hỗn hợp phản ứng được chiết bằng CH2Cl2 (2,0 mL × 3) để tạo ra chất tương tự tulipalin, 3-metyldihydrofuran-2(3H)-one (11,1 mg). [ ] 23 D cộng với 18,7 (c 1,1, CH2Cl2); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1,30 (3H, d, J=7.0 Hz), 1,94 (m), 2,45 (m), 2,61 (m), 4,20 (đdd, J {{43} }.8, 6.8, 6.4 Hz), 4.33 (ddd, J=8.8, 8.8, 2.8 Hz). 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 15.2, 30.7, 34.1, 66.2, 180.1 (Hình S28); ESIMS m/z 101.06 [M cộng H] cộng .
3.6. Nuôi cấy tế bào
Các tế bào ung thư hắc tố B16 ở chuột được nuôi cấy trong Môi trường Modified Eagle của Dulbecco (DMEM; GIBCO Invitrogen Corporation, New York, NY, USA) được bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò, 100 U/mL penicillin và 100 µg/mL streptomycin ở 37 ◦C trong tủ ấm 5 phần trăm CO2.
3.7. Đo khả năng tồn tại của tế bào B16
Khả năng gây độc tế bào của các tế bào B16 đối với các hợp chất thử nghiệm được đo bằng MTT với một giao thức được mô tả trước đây với các sửa đổi nhỏ [6]. Các tế bào được cấy vào 96-các đĩa giếng (1 × 103 tế bào/giếng) và được nuôi cấy trong 24 giờ trước khi được xử lý bằng các hợp chất trong 72 giờ nữa. Sau đó, môi trường được loại bỏ, 100 µL thuốc thử MTT (Thermo Science, Waltham, MA, USA) (ở nồng độ cuối cùng là 0,5 mg/mL) được thêm vào mỗi giếng và sau đó ủ ở 37 ◦C trong 1 giờ. Tinh thể formazan được hòa tan trong 100 µL DMSO và mật độ quang được đo bằng cách sử dụng đầu đọc vi bản (SPECTORstar® Nano, BMG LABTECH, Ortenberg, Đức) ở bước sóng 570 nm.
3.8. Đo hàm lượng Melanin trong tế bào B16
Hàm lượng melanin trong các tế bào B16 đã được thử nghiệm theo một phương pháp được mô tả trước đây với một chút sửa đổi [6]. Các tế bào được cấy với mật độ 5 × 103 tế bào/giếng trong 24-các đĩa giếng trong 24 giờ. Môi trường được thay thế bằng môi trường nuôi cấy mới 500 µL chứa 0,5 µM -MSH có hoặc không có hợp chất trong 72 giờ. Arbutin (1 mM) đã được sử dụng làm đối chứng dương tính. Sau đó, môi trường được lấy ra và rửa bằng PBS (pH 6,8) hai lần. Các tế bào được thu hoạch bằng NaOH (200 µL, 2 N) và sau đó đun nóng ở 85 ◦C trong 30 phút. Sau khi làm mát đến nhiệt độ phòng và được ly tâm, độ hấp thụ được đo ở bước sóng 405nm bằng đầu đọc vi bản.
3.9. Hoạt động Tyrosinase nội bào
Xét nghiệm hoạt động tyrosinase nội bào được thực hiện bằng một phương pháp được sửa đổi một chút, đã được báo cáo trước đây [6]. Các tế bào được cấy vào 24-các đĩa giếng với mật độ 5 × 103 tế bào/giếng trong 24 giờ. Các tế bào được xử lý trong DMEM chứa 0,5 µM -MSH có hoặc không có hợp chất trong 72 giờ. Sau khi loại bỏ môi trường, các tế bào được rửa bằng PBS lạnh (pH 6,8) hai lần. Các tế bào được ly giải với dung dịch đệm ly giải 100 µL (1 phần trăm triton X-100 trong PBS) và đông lạnh ở -80 ◦C trong 15 phút.
Sau đó, dịch ly giải tế bào được ly tâm ở 13.200 × g ở 4 ◦C trong 30 phút để thu được phần nổi phía trên. Tổng hàm lượng protein của chất nổi trên bề mặt được định lượng bằng xét nghiệm protein BCA. Tiếp theo, mỗi lysate đã định lượng (30 µg/90 µL) được trộn với 10 µL L-DOPA (15 mM) trong đĩa giếng 96-rồi ủ ở 37 ◦C trong 1 giờ và đo độ hấp thụ ở bước sóng 405 nm sử dụng đầu đọc vi bản.
4.Kết luận
Nhìn chung, 14 hợp chất tinh khiết, bao gồm ba glycoside isoprenoid mới và các mặt của hoa tulip H–J (1–3), đã được phân lập từ A. edulis. Dẫn xuất axit citric 9, tributyl citrate, có hoạt tính chống tạo hắc tố đáng kể nhưng cho thấy khả năng gây độc tế bào đối với các tế bào ung thư hắc tố B16 có thể được nghiên cứu thêm về thuốc chống ung thư hắc tố. Trong khi các chất tương tự axit pyroglutamic 4 và 6, furanone 10 và furan 12 có hàm lượng melanin tăng phụ thuộc vào liều lượng và hoạt hóa tyrosinase có thể được nghiên cứu thêm về bệnh da bạch biến hoặc các chất chống làm trắng và chống giảm sắc tố cho tóc. Tuy nhiên, các cơ chế in vitro và/hoặc nghiên cứu in vivo cần được nghiên cứu chi tiết hơn để xác minh hiệu quả của các thành phần hoạt động.
Nguyên liệu bổ sung:
Các phần sau đây có sẵn trực tuyến, Hình S1–S5: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất 1, Hình S6–S10: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất 2, Hình S11–S15: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất 3, Hình S16–S22: Dữ liệu phổ NMR của TEW, Hình S23: Phân tích TLC của TEW, Hình S24: Độc tính gây độc tế bào và điều chỉnh các tác động tạo hắc tố của TEM, TEE, TEB và TEW, Hình S25: Dữ liệu độc tính tế bào của các hợp chất 1–12, Hình S26: Biểu đồ tương quan giữa hàm lượng hắc tố trong tế bào và tác động lên tyrosinase của các hợp chất 4, 6, 10 và 12, Hình S27: Tác dụng tạo hắc tố của riêng các hợp chất 4, 6, 10 và 12 mà không có -MSH, Hình S28: Dữ liệu quang phổ và quang phổ NMR của sản phẩm thu được từ quá trình thủy phân axit của hợp chất 2, Hình S29: Khả năng sinh tổng hợp hợp chất 1−3, Bảng S1: Ảnh hưởng hoạt tính tyrosinase của các hợp chất 4, 6, 10 và 12.
Sự đóng góp của tác giả:
Khái niệm hóa, C.-LL; xác định nguyên liệu thực vật, Y.-SC; tiến hành phân lập và tinh chế, C.-LL và Z.-AG; tiến hành xét nghiệm sinh học, Y.-LJ; tất cả phân tích quang phổ và xác định cấu trúc, C.-LL và C.-JC; viết bản thảo chuẩn bị ban đầu, C.-LL Tất cả các tác giả đã đọc và đồng ý với phiên bản đã xuất bản của bản thảo.
Kinh phí:
Nghiên cứu này được tài trợ bởi Bộ Khoa học và Công nghệ (MOST 108-2320-B039-035-) và Đại học Y khoa Trung Quốc (CMU108-MF-84), Đài Loan. APC được tài trợ bởi "Trung tâm Nghiên cứu Y học Trung Quốc, Đại học Y khoa Trung Quốc" từ Chương trình Trung tâm Nghiên cứu Khu vực Nổi bật trong khuôn khổ Dự án Mầm giáo dục Đại học của Bộ Giáo dục (MOE) tại Đài Loan (CMRC-CHM{{5} }).
Tuyên bố của Ủy ban Đánh giá Thể chế:
Không áp dụng.
Tuyên bố đồng ý có hiểu biết:
Không áp dụng.
Tuyên bố về tính khả dụng của dữ liệu:
Không áp dụng.
Sự nhìn nhận:
Công trình này được hỗ trợ tài chính bởi Bộ Khoa học và Công nghệ (MOST 108-2320-B-039-035-) và Đại học Y khoa Trung Quốc (CMU108-MF-84), Đài Loan, cũng như "Trung tâm Nghiên cứu Y học Trung Quốc, Đại học Y khoa Trung Quốc" từ Chương trình Trung tâm Nghiên cứu Khu vực Nổi bật trong khuôn khổ Dự án Mầm giáo dục Đại học của Bộ Giáo dục (MOE) tại Đài Loan (CMRC-CHM-1) được trao cho C .-LL
Xung đột lợi ích:
Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.
Sẵn có mẫu:
Các mẫu hợp chất 1–14 có sẵn từ các tác giả.
Người giới thiệu
1. Lin, R.; Lý, Z.; Lin, J.; Ye, J.; Cải, Q.; Chen, L.; Peng, J. Chiết xuất Ethanolic của Tulipa edulis Bak gây ra quá trình chết theo chương trình trong các tế bào ung thư biểu mô dạ dày của con người SGC-7901 thông qua con đường truyền tín hiệu ty thể. ung thư. Hãy để. 2015, 10, 2371–2377. [CrossRef] [PubMed]
2. Quạt, Y.; Hầu, X.; Quách, P.; Lv, X.; Zhao, L.; Vương, H.; Chu, L.; Feng, Y. Chiết xuất Amana edulis gây ra quá trình chết theo chương trình ung thư gan. Bổ sung dựa trên Evid. thay thế. y tế. 2018, 2018, 3927075. [CrossRef] [PubMed]
3. Quý, YH; Liêu, AM; Hoàng, JH; Thakur, K.; Lý, XL; Wei, ZJ Tiềm năng hóa lý và chống oxy hóa của polysacarit được chiết xuất tuần tự từ Amana edulis. quốc tế J. Sinh học. Macromol. 2019, 131, 453–460. [Tham khảo chéo]
4. Quý, YH; Liêu, AM; Hoàng, JH; Thakur, K.; Lý, XL; Wei, ZJ Các đặc tính lưu biến và hành vi nhũ hóa của polysacarit được chiết xuất tuần tự từ Amana edulis. quốc tế J. Sinh học. Macromol. 2019, 137, 160–168. [Tham khảo chéo]
5. Cao, YY; Ji, YH; Liêu, AM; Hoàng, JH; Thakur, K.; Lý, XL; Hu, F.; Trương, JG; Wei, ZJ Ảnh hưởng của các sửa đổi sulfat hóa, phosphoryl hóa và carboxymetyl hóa đối với các hoạt động chống oxy hóa trong ống nghiệm của polysacarit được chiết xuất tuần tự từ Amana edulis. quốc tế J. Sinh học. Macromol. 2020, 146, 887–896. [Tham khảo chéo]
6. Lai, KỶ; Hủ, HC; Tưởng, HM; Lưu, YJ; Dương, JC; Lin, YA; Trần, CJ; Chang, YS; Lee, CL Diterpenes leojaponins mới G−L từ Leonurus japonicus. Fitoterapia 2018, 130, 125−133. [Tham khảo chéo]
7. Ullah, S.; Chung, YC; Hyun, CG Cảm ứng quá trình tạo hắc tố bởi fosfomycin trong các tế bào B16F10 thông qua việc điều chỉnh lại các con đường truyền tín hiệu P-JNK và P-p38. Kháng sinh 2020, 9, 172. [CrossRef] [PubMed]
8. Christensen, LP; Kristiansen, K. Phân lập và định lượng các mặt của hoa tulip và hoa tulip trong hoa tulip (Tulipa) bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao. Liên hệ với Dermat. 1999, 40, 300−309. [Tham khảo chéo]
9. Tripathi, A.; Puddick, J.; Prisep, ÔNG; Lee, PPF; Tan, LT Hantupeptins B và C, cyclodepsipeptide gây độc tế bào từ vi khuẩn lam biển Lyngbya majuscula. Hóa thực vật 2010, 71, 307−311. [Tham khảo chéo]
10. Qabaja, G.; Khó chịu, JE; Benavides, AR; Bullard, GE; Petersen, KS Tổng hợp dễ dàng các este hydroxy được thay thế giàu enantio đa năng thông qua quá trình phân giải động học xúc tác axit Brønsted. tổ chức Hãy để. 2013, 15, 1266−1269. [Tham khảo chéo]
11. Nomura, T.; Kato, Y. Xác định tuliposide G, một loại tuliposide glucoside ester mới và sự phân bố của nó trong hoa tulip. Z.Naturforsch. Sinh học CJ. 2020, 75, 75−86. [Tham khảo chéo]
12. Băng nhóm, FL; Chu, F.; Lý, XT; Ngụy, JL; Ngô, WJ; Zhang, JW Tổng hợp và đánh giá hoạt tính sinh học của các chất tương tự axit L-pyroglutamic từ chì sản phẩm tự nhiên. sinh học. y tế. hóa học. 2018, 26, 4644–4649. [Tham khảo chéo]
13. Vereshchagin, AL; Anikina, EV; Trung Quốc, trí tuệ nhân tạo; Lapin, MF; Azin, LA; Semenov, AA Điều tra hóa học về chất đắng của quả Lonicera caerulea. hóa học. tự nhiên tổng hợp 1989, 25, 289−292. [Tham khảo chéo]
14. Jaime, C.; Ortuño, RM; Font, J. Di- và -lactones thay thế ba lần. Một nghiên cứu về hình dạng bằng cách tính toán cơ học phân tử và phân tích hằng số ghép nối. Tổ chức J. hóa học. 1986, 51, 3946−3951. [Tham khảo chéo]
15. Larchevêque, M.; Henrot, S. Enantiomerally tinh khiết, -epoxyesters từ -hydroxylactones: Tổng hợp -hydroxyesters và (-)-GABOB. Tứ diện 1990, 46, 4277−4282. [Tham khảo chéo]
16. Jaime, C.; Segura, C.; Dinarés, tôi.; Font, J. -lactones được thay thế bằng các nguyên tử hydro phụ. Nghiên cứu cấu hình bằng cách tính toán MM2 và phân tích hằng số khớp nối. Tổ chức J. hóa học. 1993, 58, 154−158. [Tham khảo chéo]
17. Mori, K.; Fukamatsu, K. Tổng hợp (1R,5S)-( cộng )-frontalin từ (S)-(−)-2-axit hydroxyparaconic. Liebigs Ann. hóa học. 1992, 11, 1191−1193.
18. Miyazawa, M.; Anzai, J.; Fujioka, J.; Ishikawa, Y. Các hợp chất diệt côn trùng chống lại Drosophila melanogaster từ Cornus officinalis Sieb. và Zucc. tự nhiên sản xuất. độ phân giải 2003, 17, 337−339. [CrossRef] [PubMed]
19. Lee, CL; Vương, CM; Hủ, HC; Yến, nhân sự; Bài hát, YC; Yu, SJ; Trần, CJ; Lý, WC; Wu, YC Indole alkaloid indigo-doles A–C từ các bộ phận trên không của Strobilanthes ẩm thực trong y học cổ truyền Trung Quốc Qing Dai có đặc tính kháng IL-17. Hóa thực vật 2019, 162, 39−46. [CrossRef] [PubMed]
20. Faizi, S.; Ali, M.; Saleem, R.; Irfanullah; Bibi, S. Hoàn thành các phép gán 1H- và 13C-NMR của đầu nhụy-5-en-3-O- -glucoside và dẫn xuất acetyl của nó. Magn. cộng hưởng. hóa học. 2001, 39, 399–405. [Tham khảo chéo]
21. Kuo, YH; Trần, CC; Ngô, PY; Ngô, CS; Sung, PJ; Lin, CY; Cơ chế ức chế sự hình thành sắc tố do caffeamide gây ra bởi Chiang, HM N-(4-methoxyphenyl) caffeamide. Bổ sung BMC. thay thế. y tế. 2017, 17, 71. [CrossRef] [PubMed]
22. Ohtani, tôi.; Kusumi, T.; Kashman, Y.; Kakisawa, H. Ứng dụng FT NMR trường cao của phương pháp Mosher. Các cấu hình tuyệt đối của terpenoid biển. Mứt. hóa học. Sóc. 1991, 113, 4092−4096. [Tham khảo chéo]
23. Lee, CL; Trương, Pháp; Hsieh, PW; Tưởng, MỸ; Ngô, CC; Hoàng, ZY; Lan, YH; Chen, M.; Lý, KH; Yên, HF; et al. Diterpen ent-abietane gây độc tế bào từ Gelonium aequoreum. Hóa thực vật 2008, 69, 276−287. [CrossRef] [PubMed]
1 Khoa Mỹ phẩm, Đại học Y khoa Trung Quốc, Đài Trung 406040, Đài Loan.
2 Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Y học Trung Quốc, Bệnh viện Đại học Y khoa Trung Quốc, Đài Trung 40402, Đài Loan.
3 Trung tâm Nghiên cứu Y học Trung Quốc, Đại học Y khoa Trung Quốc, Đài Trung 40402, Đài Loan.
4 Khoa Khoa học Dược phẩm Trung Quốc và Tài nguyên Y học Trung Quốc, Đại học Y khoa Trung Quốc, Đài Trung 40402, Đài Loan.
5 Viện Cao học Y học Tổng hợp, Đại học Y khoa Trung Quốc, Đài Trung 40402, Đài Loan.
6 Phòng thí nghiệm lõi Proteomics, Khoa Nghiên cứu Y học, Bệnh viện Đại học Y Dược Trung Quốc, Đài Trung 40402, Đài Loan.
For more information:1950477648nn@gmail.com
