Cistanche để điều trị viêm và bệnh thận: Nguyên nhân của vai trò gây bệnh của tình trạng viêm đối với sự tham gia của thận trong bệnh u nang là gì?
Mar 13, 2022
Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com
Sự tương tác giữa galectin -3 và cystinosin khám phá ra vai trò gây bệnh của tình trạng viêm trong thận liên quan đến chứng nang bàng quang
Tatiana Lobry1,2 et al
Viêmcó liên quan đến bệnh sinh của nhiều rối loạn. Tuy nhiên, các cơ chế cơ bản thường không được biết rõ. Ở đây, chúng tôi kiểm tra xemBệnh loạn dưỡng cystine, protein liên quan đếnBệnh loạn dưỡng cystine, là một chất điều chỉnh quan trọng của galectin-3, một thành viên của họ protein liên kết b-galactosidase, trongviêm. Bệnh loạn dưỡng cystinelà một rối loạn lưu trữ lysosome và, mặc dù có biểu hiện phổ biến của chứng bệnh cystinosis,quả thậnlà cơ quan chính bị ảnh hưởng bởi bệnh.Bệnh loạn dưỡng cystineđã được tìm thấy để tăng cường nội địa hóa của lysosome và sự phân hủy của galectin -3. Trong Ctns–/–chuột, một mô hình chuột củaBệnh loạn dưỡng cystine, galectin -3 được thể hiện quá mức trongquả thận. Sự vắng mặt của galectin -3 ở chuột bị bệnh u nang cải thiện chức năng và cấu trúc thận bệnh lý và giảm sự thâm nhập của đại thực bào / bạch cầu đơn nhân trong thận của Ctns–/–Gal3–/–chuột so với Ctns–/– chuột. Những dữ liệu này thực sự gợi ý rằng galectin -3 làm trung gianviêmtham gia vào, liên quan tớiquả thậntiến triển của bệnh trong bệnh u nang. Hơn nữa, galectin -3 được phát hiện là tương tác với cytokine tiền viêm da MonocyteChemoattractant Protein -1, kích thích việc tuyển dụng bạch cầu đơn nhân / đại thực bào và được chứng minh là tăng đáng kể trong huyết thanh của chuột Ctns - / - và cả những bệnh nhân vớiBệnh loạn dưỡng cystine. Do đó, những phát hiện của chúng tôi làm nổi bật vai trò mới đối với sự tương tác của bệnh cystinosis và galectin -3 trong chứng viêm và cung cấp một lời giải thích cơ học bổ sung choquả thậnbệnh u nang. Điều này có thể dẫn đến việc xác định các mục tiêu thuốc mới bị trì hoãnBệnh loạn dưỡng cystinesự tiến triển.
TỪ KHÓA:bệnh thận mãn tính; Bệnh loạn dưỡng cystine; galectin -3;viêm; protein hóa trị monocyte – 1
cistanche có thể điều trị bệnh thận mãn tính và bệnh bàng quang
Nguyên nhân sâu xa của chứng viêm là do oxit nitric có thể dẫn đến việc sản sinh các tế bào viêm.Cistanchelà một loại thảo dược quý của Trung Quốc. Các thành phần hoạt tính của nó có thể ức chế sự bài tiết oxit nitric và đóng một vai trò trong việc ngăn ngừa và điều trị viêm và bệnh thận.
Tuyên bố dịch
Dù được điều trị nhưng bệnh nhân vẫn tiến triển thành suy thận giai đoạn cuối. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng sự vắng mặt củaBệnh loạn dưỡng cystinedẫn đến suy giảm galectin -3 (Gal -3) lysosome, dẫn đếnviêmvà sự tiến triển củabệnh thận mãn tínhTrongBệnh loạn dưỡng cystine. Những phát hiện này mở ra triển vọng mới về các mục tiêu điều trị tiềm năng có thể hạn chế hoặc làm chậm quá trình thoái hóa thận ở bệnh nhânBệnh loạn dưỡng cystine. Do đó, thuốc chống viêm và chất ức chế Gal -3 như thuốc chống viêm không steroid hoặc indomethacin có thể cải thiện cơ chế bệnh sinh ở thận trong bệnh nang bàng quang.
Viêmlà một phản ứng cấp tính bình thường của một sinh vật đối với chấn thương hoặc nhiễm trùng,1nhưng mãn tínhviêmcó liên quan đến tổn thương mô. Trong trường hợp mắc các bệnh mãn tính, chẳng hạn như bệnh tiểu đường, các mô bị tổn thương sẽ kích hoạt hệ thống miễn dịch, dẫn đến phản ứng viêm liên tục và cuối cùng là thoái hóa mô.2 Cytokine là bộ điều biến chính củaviêmvà có khả năng kích hoạt hoặc giải quyếtviêm3 Ở những bệnh nhân cóbệnh thận mãn tính(CKD), nồng độ cytokine trong huyết tương tăng cao (interleukin [IL] -6 và yếu tố hoại tử khối u-a) vàviêmcác chất đánh dấu (protein phản ứng C, IL -6, hyaluronan và neopterin) có liên quan đến sự tiến triển của bệnh thận giai đoạn cuối.4 Hiểu được các chất trung gian cụ thể kích hoạt các phản ứng viêm giúp tạo điều kiện thuận lợi cho việc khám phá các mục tiêu thuốc thích hợp để ngăn ngừa tổn thương thoái hóa .
Bệnh loạn dưỡng cystinelà một bệnh chuyển hóa lặn-autosomal thuộc họ rối loạn dự trữ lysosome và được đặc trưng bởi sự tích tụ cystine trong tất cả các cơ quan.5 Gen bị lỗi trongBệnh loạn dưỡng cystine, CTNS, mã hóa chất đồng vận chuyển cystine / proton của lysosome, bệnh nang.6,7 Mặc dù CTNS được thể hiện phổ biến,quả thậnlà cơ quan đầu tiên bị ảnh hưởng ở những người cóBệnh loạn dưỡng cystine. Bệnh nhân thường xuất hiện trong năm đầu tiên của cuộc đời với hội chứng Fanconi, đặc trưng bởi rối loạn chất lỏng và điện giải nghiêm trọng, tăng trưởng kém và còi xương.8CKD sau đó phát triển, tiến triển thành bệnh thận giai đoạn cuối và đòi hỏiquả thậncấy ghép. Sự tích tụ cystine trong tất cả các mô cuối cùng dẫn đến rối loạn chức năng đa cơ quan; bệnh nhân bị chứng sợ ánh sáng và mù lòa, suy giáp, thiểu năng sinh dục, tiểu đường, bệnh cơ và suy giảm hệ thần kinh trung ương.9 Trong nền C57BL / 6, một mô hình chuột loại trực tiếp (Ctns–/–) 10 sao chép kiểu hình thận của bệnh nhân u nang,11 cũng như lắng đọng các tinh thể cystine trong giác mạc12và rối loạn chức năng tuyến giáp.13
Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiết lộ một vai trò mới đối vớiBệnh loạn dưỡng cystineTrongviêmthông qua sự tương tác của nó với Gal -3. Gal -3 là một thành viên của họ protein liên kết lectin và b-galactoside 21 và tham gia vào nhiều chức năng sinh học, bao gồmviêm.22Trong ngữ cảnh củaquả thậnbệnh, ức chế Gal -3 đã được chứng minh là làm giảm biểu hiện dấu hiệu chống viêm và xơ hóa thận và ngăn chặn sự suy giảm mức lọc cầu thận trong các mô hình cường aldosteron, tăng huyết áp hoặc béo phì.23–26Ở đây chúng tôi cung cấp bằng chứng rằng, trongBệnh loạn dưỡng cystine, sự thiếu vắng củaBệnh loạn dưỡng cystinedẫn đến biểu hiện quá mức Gal -3 trongthận, tăng cường sự xâm nhập của đại thực bào và tiến triển CKD. Ngoài ra, chúng tôi xác định protein hóa trị đơn bào – 1 (MCP -1) như một chất trung gian tiềm năng, tiết lộ các mục tiêu gen mới cho liệu pháp điều trị bằng thuốc. các đối tác sử dụng khối phổ định lượng, chó Madin-Darbyquả thậnTế bào (MDCK) được chuyển nạp với cấu trúc phân tử để biểu hiện ổn định protein dung hợp protein huỳnh quang FL (GFP) cystinosis – green. Ngoài 9 tiểu đơn vị của triphosphatase Hþ adenosine loại không bào đã được công bố trước đây,19Gal -3 được xác định là một trong những protein tương tác vớiBệnh loạn dưỡng cystine(Hình 1a). Sự tương tác này đã được khẳng định thêm bằng phương pháp đồng kết tủa sau đó là phương pháp thấm Western (Hình 1b và c). Ngoài ra, chúng tôi đã chỉ ra rằng sự tương tác giữa Gal -3 vàBệnh loạn dưỡng cystineđược trung gian bởi miền nhận dạng carbohydrate Gal -3 (CRD) được bản địa hóa trong phần đuôi C của protein. Sự tương tác bị ức chế bởi thiodigalactoside, một chất ức chế mạnh các tương tác galectin-carbohydrate (Hình 1d). Giống như tất cả các galectin, Gal -3 có ái lực với các protein được glycosyl hóa, 21 vì vậy có khả năng tương tác với Gal -3 xảy ra thông qua gốc glycosyl hóa cystinosis nằm ở đuôi N nội tử của protein.27
Cystinosin tăng cường nội địa hóa và suy thoái lysosome của Gal -3
Để xác minh khả năng bản địa hóa lysosome của Gal -3 khi tương tác vớiBệnh loạn dưỡng cystine, chúng tôi đã chỉ ra rằng Gal -3, giống như cathepsin D (một protease nội bào tử), được bảo vệ khỏi sự tiêu hóa bởi proteinase K, trong khi cả hai protein đều được tiêu hóa khi lysosome được thẩm thấu bằng Triton X - 100 (Hình 2a và Phần bổ sung Hình S1). Dữ liệu tương tự thu được trong các lysosome được phân lập từ gan chuột, xác nhận sự bản địa hóa lysosome của Gal -3 in vivo (Hình 2b và c). Do không có kháng thể đáng tin cậy để phát hiệnBệnh loạn dưỡng cystine, nhuộm miễn dịch được thực hiện trênBệnh loạn dưỡng cystine-GFP – biểu hiện dòng tế bào MDCK với kháng thể kháng Gal -3. Nó xác nhận sự hiện diện của Gal -3 trong lòng của lysosome, trong khi cystinosis-GFP và Lamp -2 (một protein xuyên màng của lysosome) chỉ được tìm thấy ở màng của túi (Hình 2d).
Để điều tra nếucystinosinđã tham gia vào hoạt động giao dịch của Gal -3, chúng tôi đã phân tích động lực của cả haiBệnh loạn dưỡng cystinevà Gal -3 - túi dương tính sử dụng kính hiển vi huỳnh quang FL phản xạ bên trong toàn phần tế bào sống hai màu trong các nguyên bào sợi phôi chuột (MEFs) từ loại hoang dã (WT) và Ctns–/–chuột thể hiện cả CTNS-DsRed và Gal -3 - GFP. Phân tích của chúng tôi đã xác nhận rằngBệnh loạn dưỡng cystinevà Gal -3 trải qua quá trình tạo màu thực trong Ctns - / - MEFs được xác nhận bởi sự phân bố không gian tương tự của các phân tử này trong vùng hiển vi huỳnh quang FL phản xạ toàn phần (Hình 2e). Dữ liệu trong WT MEF cũng tương tự (dữ liệu không được hiển thị). Hơn nữa, khi MEFs chỉ được chuyển nhiễm với Gal - 3 - GFP được phân tích, Gal -3 - GFP được tìm thấy trong tế bào chất và không quan sát thấy cấu trúc mụn nước khác biệt, trái ngược với sự đồng chuyển nhiễm với CTNS-DsRed ( dữ liệu không được hiển thị).
Những dữ liệu này đã được xác nhận trong các tế bào 293T, trong đó tín hiệu GFP mạnh trong tế bào chất được quan sát thấy trong các tế bào chỉ biểu hiện Gal -3 - GFP, trong khi ở các tế bào biểu hiện cả Gal -3 - GFP vàcystinosin-DsRed, Gal -3 - GFP chủ yếu được bản địa hóa trong các lysosome biểu hiện của cystinosis-DsRed (Hình 3a). Hơn nữa, việc định lượng biểu hiện protein Gal -3 trong các tế bào được chuyển giao bằng Gal -3 - GFP đơn lẻ hoặc Gal - 3 - GFP và CTNS-DsRed và Gal -3 - GFP và DsRed như đối chứng, cho thấy ít hơn đáng kể các protein Gal -3 - GFP trong các tế bào được đồng chuyển gen với CTNS-DsRed so với các tế bào được truyền nhiễm Gal -3 - GFP đơn lẻ hoặc đồng chuyển nạp với DsRed (Hình 3b). Nhìn chung, những kết quả này cho thấy rằngcystinosintăng cường bản địa hóa lysosome và sự suy thoái của Gal -3. Cystinosin được chứng minh là có liên quan đến CMA.28 Sốc nhiệt Protein 70 kDa (Hsc70) tham gia vào CMA bằng cách hỗ trợ sự mở ra và chuyển vị của các protein cơ chất qua màng vào lòng lysosome trong một cơ chế phụ thuộc LAMP2A. 29,30 Vì Gal { {8}} đã được CMA đề xuất làm giảm chất lượng, 31 chúng tôi đã điều tra bản địa hóa của Gal -3 so với Hsc70 trong MEF cystinotic. Phân tích kính hiển vi đồng tiêu xác nhận sự tạo màu của cấu trúc tích cực Gal -3 - GFP tại Hsc 70- trong cả WT (dữ liệu không được hiển thị) và Ctns–/–tế bào (Hình 3c), hỗ trợ đồng vận chuyển Gal -3 với Hsc70 và gợi ý rằng sự nhận diện của lysosome nhưng không được nhận biết bởi Gal -3 bởi chaperone là khiếm khuyết trongBệnh loạn dưỡng cystine.
Gal -3 có liên quan đến chứng viêm thận ở Ctns–/–chuột
Để nghiên cứu vai trò của Gal -3 trongBệnh loạn dưỡng cystinein vivo, chúng tôi đã tạo ra một mô hình chuột loại trực tiếp kép thiếu cả haicystinosinvà Gal -3 (Ctns–/–Gal -3–/–chuột). WT, Ctns–/–và Gal -3–/–chuột được sử dụng làm đối tượng kiểm soát. Trong C57BL / 6 Ctns–/–chuột, các dị thường về thận xuất hiện khoảng 10 tháng tuổi. 11 Do đó, các nghiên cứu được thực hiện ở 8 đến 9 tháng tuổi, khiquả thậncác dị tật bắt đầu được phát hiện và từ 12 đến 15 tháng khi các dị tật về thận đã tiến triển. Bởi vì hàm lượng cystine được phát hiện là khác nhau ở Ctns nam và nữ–/– thận, chúng đã được phân tích riêng biệt. Nếu hàm lượng cystine tăng theo tuổi ở cả hai kiểu gen, không có sự khác biệt đáng kể nào được quan sát thấy trong thận của nam và nữ giữa Ctns - / - Gal -3 - / - chuột và Ctns–/– chuột từ 8 đến 9 tháng và 12 đến 15 tháng tuổi (Hình 4a).
Chức năng thận được đánh giá trong huyết thanh và nước tiểu và không có sự khác biệt đáng kể giữa WT và Ctns–/–chuột từ 8 đến 9 tháng (dữ liệu không được hiển thị), nhưng ở 12 đến 15 tháng, Ctns–/–chuột cho thấy nồng độ creatinin và urê huyết thanh cao hơn đáng kể so với chuột WT. Thật thú vị, Ctns–/–Gal -3–/–chuột cho thấy chức năng thận được cải thiện so với Ctns–/–chuột từ 12 đến 15 tháng, có creatinin huyết thanh thấp hơn (P <0. 0 5) và urê (P <0,05; Bảng 1).
Nghiên cứu mô học của chuột từ 8- đến 9- tháng tuổi và 12- đến 15- tháng tuổiquả thậncác phần tiết lộ sự hiện diện của các dị thường nghiêm trọng trong Ctns–/– thận, bao gồm teo ống thận, cầu thận co rút và thâm nhiễm đơn nhân. Phân tích mù của các phần thận thay đổi mức độ tổn thương vỏ não từ 1 (cấu trúc mô được bảo tồn) đến 6. Điểm trung bình cho Ctns–/–chuột là 2. 64 - 0. 36 khi 9 tháng tuổi (n ¼ 7) và 4,12 0. 37 khi 12 đến 15 tháng tuổi (n ¼ 16). Trong thận của Ctns–/–Gal -3–/–chuột ở cùng độ tuổi, những dị thường này ít mở rộng hơn đáng kể: 1. 62 - 0. 11 ở 9 tháng (n ¼ 21; P <0. 0="" 5,="" mann-whitney="" t-="" kiểm="" tra)="" và="" 3.="" 04="" -="" 0.="" 22="" ở="" 12="" đến="" 15="" tháng="" (n="" ¼="" 33;="" p=""><0,05, mann-whitney="" t-test)="" (hình="" 4b="" và="" hình="" bổ="" sung="" s2).="" hơn="" nữa,="" một="" tỷ="" lệ="" phần="" trăm="" teo="" ống="" được="" chỉ="" định="" cho="" mọi="" mô="" và="" mức="" trung="" bình="" cho="">–/–chuột và Ctns–/–Gal -3–/–chuột là 66 phần trăm và 42 phần trăm, tương ứng, ở 12 đến 15 tháng (P ¼ 0. 01). Hơn nữa, một sự khác biệt nổi bật giữa Ctns–/–và Ctns–/– Gal -3–/– quả thậncác phần là sự hiện diện của một số xâm nhập đơn nhân trong Ctns–/–Gal -3–/–các phần, trong khi xâm nhập nặng được quan sát thấy nhất quán trong Ctns–/– quả thận(Hình 4b).
Chúng tôi xác định đặc điểm thâm nhiễm đơn nhân được quan sát bằng kiểm tra mô học ở trẻ từ 8- đến 9- tháng tuổi–/– thậnlà đại thực bào / bạch cầu đơn nhân bằng cách đồng miễn dịch nhuộm với CD68 và CD45 và với CD68 và lớp tương thích mô chính II (Hình bổ sung S3), nhưng không phải với CD68 và CD163, cho thấy rằng những đại thực bào này có M 1- giống như cấu hình tiền viêm.32 , 33 Định lượng CD 68- tế bào dương tính cho thấy số lượng đại thực bào / bạch cầu đơn nhân ít hơn đáng kể trong WT, Gal -3–/–và Ctns–/–Gal -3–/– thậnso với Ctns–/– thận(Hình 4c), xác nhận dữ liệu mô học (Hình 4b).
Nhìn chung, những phát hiện này cho thấy rằng Gal -3 có liên quan đến việc tuyển dụng đại thực bào / bạch cầu đơn nhân trong tế bào nangthậnvà sự vắng mặt của nó sẽ cải thiện bệnh thận ở–/–chuột. Do đó nó gợi ý rằngviêmchịu trách nhiệm, ít nhất một phần, cho sự suy giảm chức năng thận ở Ctns–/– chuột.
Thận thiếu ctns biểu hiện quá mức Gal -3
Sử dụng phân tích Western blot, chúng tôi nhận thấy rằng biểu thức Gal -3 đã tăng lên đáng kể trongthậntrong tổng số 12- tháng tuổi Ctns–/–chuột so với chuột WT (Hình 5a và b). Để điều tra xem biểu thức gia tăng này của Gal -3 có dành riêng cho Ctns hay không–/– thận, chúng tôi đã định lượng biểu hiện Gal -3 ở phiên mã và mức protein trongthậntừ những con chuột bị CKD gây ra bởi phẫu thuật cắt thận theo bước 2- tổng phụ tiêu chuẩn và từ những con vật đã trải qua một cuộc phẫu thuật giả. WT và Ctns–/–chuột được sử dụng làm đối tượng kiểm soát. Bảng điểm Gal -3 đã tăng đáng kể ở Ctns - / - và thận giả nhưng tăng cao ở CKDthậnso với chuột WT (Hình 5c). Ngược lại, ở cấp độ protein, Gal -3 chỉ được phát hiện trong Ctns–/–thận, cho thấy rằng chỉ Ctns–/–thận không thể phân hủy protein Gal -3 (Hình 5d). Nhuộm huỳnh quang miễn dịch của Gal -3 trong aoquả thậnở 8 đến 9 tháng cũng cho thấy sự biểu hiện quá mức của Gal -3 trong Ctns–/– thậnso với WTthận(Hình 5e). Hơn nữa, Gal -3 được biểu hiện bởi đại thực bào CD68þ, cũng như các tế bào thận trong Ctns–/– thậntừ 8 đến 9 tháng (Hình S4 bổ sung). Nhìn chung, những dữ liệu này phù hợp với sự suy giảm Gal -3 giảm khi không cóBệnh loạn dưỡng cystinenhư được chứng minh trong ống nghiệm (Hình 3a và b), dẫn đến tích tụ protein Gal -3 trong Ctns–/– thận.
Sự vắng mặt của cystinosin dẫn đến tăng MCP huyết thanh -1 thông qua điều hòa Gal {1}}
Gal -3 điều chỉnhviêmthông qua các cơ chế khác nhau.34 Do đó, để hiểu sâu hơn về cơ chế trongBệnh loạn dưỡng cystine, chúng tôi đã điều tra sự biểu hiện của các cytokine chống viêm hoặc chống viêm khác nhau trong huyết thanh của trẻ từ 12- đến 15- WT, Ctns tháng tuổi–/–, Gal -3–/–và Ctns–/–Gal - 3–/–chuột. Sáu mức cytokine được đo bằng mảng hạt đo tế bào của chuột, MCP -1, interferon-g, yếu tố hoại tử khối u và IL -10, IL -6 và IL -12 p70. Chỉ có biểu hiện MCP -1 tăng lên đáng kể trong huyết thanh chuột Ctns - / - so với chuột WT và Gal -3 - / - và cả chuột Ctns–/–Gal -3–/–chuột có nồng độ MCP -1 trong huyết thanh tương đương với chuột WT (Hình 6a). MCP -1 được tạo ra bởi các loại tế bào khác nhau, với nguồn chính của MCP -1 là đại thực bào và bạch cầu đơn nhân, 35 và đang hoạt động như một chất hóa trị cho bạch cầu đơn nhân và đại thực bào điều chỉnh sự di chuyển và xâm nhập của chúng. Ngược lại, ở cùng độ tuổi, biểu hiện Gal -3 được tìm thấy là giống nhau trong huyết thanh của chuột Ctns - / - (44,33 9,81 ng / ml; n ¼ 5) và chuột WT (40. {12} } .41 ng / ml; n ¼ 7).
Mối quan hệ giữa Gal -3 và MCP -1 đã được điều tra thêm bằng phương pháp đồng kết tủa bằng cách sử dụng Gal -3 - GFP và MCP -1 - DsRed– hoặc Gal -3 - GFP và CTNS-DsRed– (như một đối chứng dương tính) biểu hiện 293T tế bào. Tương tác giữa Gal -3 và MCP -1 đã được quan sát (Hình 6b), cho thấy sự quy nạp trực tiếp của MCP -1 bởi Gal -3. Ủ với N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc), một chất ức chế Gal -3 CRD, cho thấy rằng, trái ngược vớicystinosintương tác, CRD không tham gia vào tương tác giữa Gal -3 và MCP -1 (Hình 6c).
Để đánh giá xem phát hiện này có liên quan ở người hay không, chúng tôi đã đo mức độ Gal -3 và MCP -1 ở bệnh nhânBệnh loạn dưỡng cystinenhững người không trải qua liệu pháp ức chế miễn dịch hoặc đang dùng thuốc chống viêm. Mặc dù nồng độ Gal -3 được phát hiện là hơi tăng trong huyết thanh của bệnh nhân mắc chứng bệnh nang bàng quang so với những người hiến tặng khỏe mạnh, sự khác biệt không có ý nghĩa (Hình 6e), xác nhận kết quả của chúng tôi thu được ở Ctns–/–chuột. Chỉ có 2 bệnh nhân có mức Gal {1}} cao (25,34 và 39,54 ng / ml); chúng được coi là ngoại lệ và do đó không được đưa vào Hình 6e. Ngược lại, bằng cách sử dụng xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym chống lại MCP ở người -1 (Hình 6d), nồng độ MCP -1 trong huyết thanh được phát hiện tăng đáng kể ở những bệnh nhân cóBệnh loạn dưỡng cystine(252. 1 - 18. 4 pg / ml; n ¼ 19; độ tuổi từ 1–23 tuổi) mặc dù được điều trị bằng cysteamine so với đối tượng kiểm soát khỏe mạnh (166. 9 -13. 5 pg / ml; n ¼ 1 0; độ tuổi 8–63 tuổi) (P <0,001). không="" có="" mối="" tương="" quan="" nào="" được="" tìm="" thấy="" giữa="" tuổi="" và="" mức="" mcp="" -="" 1="" ở="" cả="" hai="" bệnh="">Bệnh loạn dưỡng cystinevà những người hiến tặng khỏe mạnh (dữ liệu không được hiển thị).
Cistanchecóchống viêmđặc tính
THẢO LUẬN
Mặc dù thực tế là cystine tích tụ trong tất cả các mô ở những bệnh nhân bị ảnh hưởngBệnh loạn dưỡng cystine, thận là cơ quan dễ bị tổn thương nhất. Vì vậy, chúng tôi tin rằng sự tích tụ cystine không phải là nguyên nhân duy nhất gây ra thoái hóa thận. Ở đây, chúng tôi mô tả một vai trò mới chocystinosintrong quy định củaviêmliên quan đến sự tiến triển của bệnh thận mãn tính ởBệnh loạn dưỡng cystine. Nghiên cứu này có thể giải thích tại sao bệnh nhân tiến triển thành suy thận giai đoạn cuối mặc dù đã điều trị bằng cysteamine.
Nghiên cứu về các đối tác phân tử của bệnh cystinosis cho thấy có sự tương tác trực tiếp với Gal -3, có thể bị ức chế bởi các chất ức chế Gal -3 CRD. Các nghiên cứu gần đây cho thấy rằng Gal -3 có thể tương tác với glycan nằm trong lòng lysosome sau tổn thương lysosome như tích tụ tinh thể.36 Trong nghiên cứu của chúng tôi, sự tương tác giữa Gal -3 vàcystinosinđã được nghiên cứu trong các tế bào khỏe mạnh biểu hiệncystinosinvà do đó, không tích tụ các tinh thể cysteine hoặc cystine. Ngoài ra, sự biểu hiện quá mức của cả Gal -3 và cystinosin trong các tế bào khỏe mạnh đã sửa đổi bản địa hóa dưới tế bào của Gal {1}}, sau đó được bản địa hóa vào các lysosome, so với chỉ biểu hiện quá mức của Gal -3, mà đã nằm trong tế bào chất. Những kết quả này cho thấy rõ ràng rằng sự tương tác giữa Gal -3 và cystinosin đang xảy ra độc lập với tổn thương lysosome và rằng cystinosin chịu trách nhiệm tích cực trong việc bản địa hóa lysosome Gal -3. Trước đây Gal -3 đã được chứng minh là bị phân hủy thông qua quá trình phân giải protein phụ thuộc vào lysosome khi không có Abl và Arg, 2 tyrosine kinase.31
Ngoài ra, chúng tôi đã cho thấy rằngBệnh loạn dưỡng cystinevà Gal -3 đồng bản địa hóa tại các cấu trúc dạng thấu kính động và được huy động cùng nhau theo cách thức không gian.Cystinosintrước đây đã được liên kết với các cơ chế buôn bán của LAMP2A lysosome, thụ thể CMA duy nhất được biết đến, được phân tích sai trongBệnh loạn dưỡng cystine.28Sự xuống cấp Gal -3 trước đây đã được CMA dàn xếp.31Phân tích kính hiển vi đồng tiêu xác nhận sự tạo màu của cấu trúc dương Gal -3 tại Hsc 70- trong cả hai Ctns–/– và các tế bào WT, hỗ trợ đồng vận chuyển Gal -3 với Hsc70 để trình bày tại lysosome và phân hủy bởi CMA khi Hsc70 hỗ trợ sự chuyển vị của các protein cơ chất qua màng vào lòng lysosome.29,30Có thể giải thích kết quả của chúng tôi làcystinosinđiều chỉnh việc buôn bán và phân phối Gal -3 đến các lysosome hoạt động CMA để giảm chất lượng.
Con đường tiểu thuyết này củacystinosin-phụ thuộc Gal {1}} nội địa hóa và suy thoái lysosome được hỗ trợ in vivo vì những con chuột thiếu Gal -3 trong cơ thểquả thận. Hơn nữa, trong khi mRNA tăng Gal -3 bị giới hạn ở Ctns–/–thận so với một mô hình CKD khác, một lượng lớn protein Gal -3 chỉ được phát hiện trongCtns–/– thận. Những dữ liệu này ủng hộ mạnh mẽ kết luận rằngcystinosincó liên quan đến sự thoái hóa của protein Gal -3, có thể kiểm soát sự biểu hiện quá mức của mRNA Gal -3 trong các điều kiện căng thẳng như CKD.
Gal -3 có một số vai trò sinh học, bao gồm các vai trò trong bệnh cấp tính và mãn tínhviêmbằng cách thu hút bạch cầu đơn nhân và đại thực bào.37,38Trong Ctns–/– chuột, chúng tôi đã quan sát thấy sự xâm nhập nặng của đơn nhân chủ yếu ởquả thậnnhư đã mô tả trước đây,11,39được đặc trưng như bạch cầu đơn nhân / đại thực bào. Ngược lại, thận từ Ctns loại trực tiếp kép–/–Gal -3–/–chuột biểu hiện rất ít thâm nhiễm bạch cầu đơn nhân / đại thực bào, điều này cho thấy rõ ràng rằng Gal -3 có liên quan đếnviêmtrong thận của Ctns–/–chuột. Trong bối cảnh chấn thương mô lặp đi lặp lại, Gal -3 có thể kích hoạt quá trình chuyển đổi sang mãn tínhviêmvà xơ hóa.34Phù hợp với những phát hiện này, dữ liệu của chúng tôi chứng minh sự tham gia của Gal -3 vào sự tiến triển của CKD ởBệnh loạn dưỡng cystine. Thật vậy, Ctns loại trực tiếp kép–/– Gal -3–/–chuột thể hiện tốt hơnquả thậnchức năng và cấu trúc so với Ctns–/–chuột. Tương tự, Gal -3 - những con chuột bị thiếu hụt biểu hiện ít xơ hóa thận hơn ởquả thậnso với chuột WT sau khi tắc nghẽn niệu quản một bên,40 và chuột loại trực tiếp Gal -3 bị chấn thương do tái tưới máu do thiếu máu cục bộ có chức năng thận tốt hơn so với chuột WT bị chấn thương do tái tưới máu do thiếu máu cục bộ.41
Mặc dù đã tìm thấy mối tương quan giữa mức độ Gal -3 trong huyết tương và sự phát triển của bệnh CKD, 42 không có sự khác biệt nào về biểu hiện Gal -3 được quan sát thấy trong huyết thanh của chuột và người bị ảnh hưởng bởiBệnh loạn dưỡng cystinevà các đối tượng kiểm soát lành mạnh. Bằng cách đo các mức cytokine khác nhau trong huyết thanh, chúng tôi nhận thấy sự gia tăng đáng kể MCP -1 trong Ctns–/–chuột, trong khi Ctns–/–Gal -3–/–chuột có mức độ tương đương với chuột WT. MCP -1 là một cytokine có thể được giải phóng trong huyết thanh và tạo thành một gradient để thu hút bạch cầu đơn nhân và đại thực bào đến vị trí tổn thương.35 Sự gia tăng MCP -1 trong huyết thanh Ctns–/–chuột so với Ctns–/–Gal -3–/–chuột độc lập với sự tích tụ cystine vìquả thậnhàm lượng cystine tương tự nhau ở cả hai kiểu gen. Hơn nữa, mặc dù điều trị cysteamine cho phép thoát ra khỏi cystine ra khỏi lysosome, MCP -1 đã được phát hiện là tăng đáng kể trong huyết thanh của những bệnh nhân bịBệnh loạn dưỡng cystineso với những người hiến tặng khỏe mạnh. Những dữ liệu này cho thấy sự vắng mặt củacystinosin, chứ không phải là sự tích tụ cystine, là nguyên nhân dẫn đến sự gia tăng MCP -1 trong huyết thanh. Ngoài ra, chúng tôi đã cho thấy sự tương tác trực tiếp giữa Gal -3 và MCP -1, được Gordon-Alonso et al.43 đề xuất gần đây nhưng không được nghiên cứu thêm. Cơ chế kích hoạt của Gal -3 - MCP qua trung gian -1 không được nghiên cứu ở đây. Một giả thuyết là sự hiện diện của một peptit tín hiệu trong MCP của con người -1, có thể bị phân cắt để tăng cường sự bài tiết của nó.44 Hơn nữa, plasmin có thể phân cắt đầu tận cùng C của MCP -1, làm tăng chất hóa trị của nó hiệu lực.45 Ngoài ra, tương quan với dữ liệu của chúng tôi, việc ức chế MCP -1 trong mô hình chuột mắc bệnh thận do đái tháo đường đã ngăn chặn sự xâm nhập của đại thực bào thận và cải thiện chức năng thận. 46,47 TrongBệnh loạn dưỡng cystine, dữ liệu của chúng tôi thực sự gợi ý rằng sự vắng mặt củacystinosindẫn đến sự gia tăng Gal -3, kích hoạt MCP -1 huy động máu, tăng cường thậnviêmvà sự tiến triển củabệnh thận mãn tính.
Những phát hiện này mở ra triển vọng mới về các mục tiêu điều trị tiềm năng có thể hạn chế hoặc làm chậm quá trình thoái hóa thận ở bệnh nhânBệnh loạn dưỡng cystine. Thật vậy, các loại thuốc chống viêm không steroid như aspirin và indomethacin đã được phát hiện để ức chế sự biểu hiện Gal -3 bằng cách ức chế sự phiên mã của nó.48 Indomethacin thực sự được sử dụng để điều chỉnh chứng đa niệu và đa chứng ởBệnh loạn dưỡng cystine, 49 và một nghiên cứu gần đây trên 307 bệnh nhân châu Âu bị bệnh bàng quang cho thấy kết quả thận được cải thiện ở những bệnh nhân được điều trị bằng indomethacin.50 Theo nghiên cứu của chúng tôi, việc sử dụng indomethacin hoặc thuốc chống viêm không steroid choBệnh loạn dưỡng cystinebệnh nhân có thể được xem xét lại.
PHƯƠNG PHÁP
Thí nghiệm động vật
C57BL / 6 Ctns–/–chuột được cung cấp bởi Tiến sĩ Antignac (Inserm U1163, Paris, Pháp). C57BL / 6 galectin -3 null (Gal -3–/–) chuột được cung cấp bởi Tiến sĩ Fu-Tong Liu (Đại học California, Davis) và Tiến sĩ Jerrold M. Olefsky (Đại học California, San Diego). Chiến lược lai tạo để tạo ra WT, Ctns–/–, Gal -3–/–, Ctns - / - và Gal - 3–/–chuột được mô tả trong Phương pháp bổ sung.
Dòng tế bào
mớ hỗn độn được tạo ra từ sinh thiết da sơ sinh của WT và Ctns–/–chuột. Các dòng tế bào MEF, 293T và MDCK loại II (ATCC, Manassas, VA) được nuôi trong môi trường Eagle đã sửa đổi của Dulbecco có chứa 1 0 phần trăm huyết thanh bê thai hoặc huyết thanh bò thai, 100 đơn vị / ml penicillin, 0,1 mg / ml streptomycin , và 2 mM L-glutamine.
Phân tích kết tủa đồng miễn dịch và khối phổ
Để nghiên cứu các tương tác protein-protein, các tế bào MDCK đã được chuyển nạp bằng cách sử dụng xương sống vectơ pRRL.SIN.cPPT.PGK / WPRE của virut để biểu hiện ổn địnhcystinosin-GFP.51Đồng kết tủa miễn dịch được thực hiện như được mô tả trong Phương pháp bổ sung. Các protein đồng kết tủa miễn dịch được phân giải bằng điện di trên gel natri dodecyl sulfat-polyacrylamide (SDS-PAGE) và được phân tích bằng phương pháp khối phổ, LTQ Orbitrap như đã được mô tả.19
Tế bào 293T biểu hiện Gal -3 - GFP và MCP -1 - DsRed hoặc Gal -3 - GFP và CTNS-DsRed được sử dụng để đồng kết tủa như được mô tả trong Phương pháp Bổ sung. Các protein đồng kết tủa được phân giải bởi SDS-PAGE và Gal -3 - MCP liên kết -1 được phát hiện bằng cách sử dụng kháng thể kháng DsRed (Phòng thí nghiệm Clontech, Mountain View, CA).
Phân đoạn dưới tế bào
Tám lá gan được lấy từ chuột C57BL / 6 và được chuẩn bị như đã mô tả trước đây. 52 Các điều kiện của gradient về cơ bản giống như được mô tả trong ấn phẩm gốc, 52 ngoại trừ rằng Nycodenz được sử dụng thay vì metrizamide.
Gal -3 - phương pháp điều trị chất ức chế và proteinase K
Lysates từcystinosin-GFP MDCK tế bào và 293T biểu hiện Gal -3 - GFP và CTNS-DsRed hoặc Gal -3 - GFP và MCP -1 - DsRed được ủ có hoặc không có 5 mM thiodigalactoside hoặc 5 mM N -Acetyl-D-Lactosamine, tương ứng, 2 chất ức chế Gal -3 CRD. Sau 30 phút ủ ở 4 - C. Các protein kết tủa được phân giải bằng SDS-PAGE trên gel 10%.
Lysates từcystinosin-Tế bào GFP MDCK và các phân đoạn làm giàu lysosome trong gan chuột được ủ có hoặc không có 2 phần trăm Triton X -100 trong 10 phút ở 4 - C và sau đó ủ 30 phút có hoặc không có 2,5 mg / ml và 25 mg / ml proteinase K, tương ứng. Sau khi bất hoạt enzym bằng 1 mM phenylmethylsulfonyl florua trong 5 phút ở 4 - C, các protein được SDS-PAGE phân giải trên gel 10 phần trăm.
Phân tích miễn dịch huỳnh quang
Tế bào MDCK cố định được ủ với kháng thể chống Đèn -2 (OriGeneTechnologies, Rockville, MD) và kháng thể kháng Gal -3 (CedarlaneLaboratories, Burlington, Ontario, Canada) 2 giờ ở nhiệt độ phòng, sau đó là Alexa Fluor Kháng thể thứ cấp 555 (Invitrogen, Carlsbad, CA) trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. Hình ảnh đồng bộ được chụp bằng kính hiển vi Zeiss LSM 700 (Carl ZeissMicroscopy, Jena, Đức).
Các ô 293T biểu hiện nhanh chóng Gal -3 - GFP, riêng Gal -3 - GFP và DsRed hoặc Gal -3 - GFP vàcystinosin-DsRed được nuôi cấy trên một tấm bìa trước khi được gắn vào một tấm trượt. Tế bào được chụp ảnh bằng thiết bị Keyence BZ-X700 (Keyence Corp., Osaka, Nhật Bản).
đã sửaquả thậncác phần được ủ qua đêm ở 4 - C với kháng thể kháng CD68 (BioLegend, San Diego, CA) hoặc kháng Gal -3 (BioLegend), tiếp theo là kháng thể thứ cấp Alexa Fluor 488 (Invitrogen), 1 giờ ở nhiệt độ phong. Hình ảnh được thu thập bằng thiết bị Keyence BZ-X700. Định lượng biểu hiện CD68 được mô tả trong Phương pháp bổ sung.
MEF biểu hiện Gal -3 - GFP được nhuộm bằng cách sử dụng kháng thể kháng Hsc70 (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) và được chụp ảnh như mô tả trước đây.53
Kính hiển vi huỳnh quang FL phản xạ toàn phần bên trong
WT và Ctns–/–MEF thể hiện Gal -3 - GFP và CTNS-DsRed được gieo hạt trên đĩa borosilicat có 4- buồng 35- mm (Cellvis, Mountain View, CA). Sau 2 ngày nuôi cấy, MEF được phân tích bằng kính hiển vi huỳnh quang FL phản xạ toàn phần như đã mô tả trước đây54và trong Phương pháp bổ sung. Hình ảnh được phân tích bằng phần mềm ImageJ.
Phân tích biểu thức Gal -3
293T ô biểu thị Gal -3 - GFP, Gal -3 - GFP và DsRed, hoặc Gal -3 - GFP và CTNS-DsRed và được giải thíchthậnđược ly giải trong dung dịch đệm xét nghiệm kết tủa phóng xạ có chứa một loại cocktail ức chế proteinase. Protein được phân tách trên gel 4% đến 15% và được tiết lộ bằng cách sử dụng kháng thể anti – Gal -3 (Abcam, Cambridge, UK) hoặc anti – glyceraldehyde -3- phosphate dehydrogenase (Công nghệ tín hiệu tế bào, Danvers, MA) .
Thậnđược đồng nhất trong đệm RLT chứa b-mercaptoethanol bằng cách sử dụng Precellys 24 (Bertin Instruments, Montigny-le-Bretonneux, Pháp). RNA được phân lập và phản ứng chuỗi polymerase kỹ thuật số dạng giọt đặc hiệu Gal -3 được thực hiện như được mô tả trong Phương pháp bổ sung. Biểu thức phiên mã Gal -3 được biểu thị bằng một tỷ lệ so với kiểm soát nội sinh 18S. Một xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (Abcam) đã được sử dụng để phát hiện mức độ Gal -3 ở chuột và huyết thanh người, theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
Chức năng thận
Nồng độ phosphat trong huyết thanh và nước tiểu, creatinin huyết thanh và urê được ước tính bằng cách sử dụng Bộ xét nghiệm QuantiChrom Phosphat, Bộ xét nghiệm Quanti Chrom Creatinin và Bộ xét nghiệm QuantiChrom Urea (BioassaySystems, Hayward, CA). Nồng độ protein trong nước tiểu được đo bằng Bộ công cụ xét nghiệm protein Pierce BCA (Rockford, IL).
Mô học
Vào thời điểm những con chuột bị giết,thậnđược thu thập, cố định trong formalin, và nhúng trong parafin. Các phần được nhuộm bằng hematoxylin và eosin đã được bác sĩ Marie Claire Gubler xem xét một cách mù quáng như được mô tả trong Phương pháp bổ sung.
Đo hàm lượng cystine
Phép đo cystine trong mô được thực hiện bằng phương pháp khối phổ (LC-ESI-MS / MS) như đã mô tả trước đây.39
Phẫu thuật giả và cắt thận tiêu chuẩn
Chuột cống CKD được gây ra bởi phẫu thuật cắt thận giai đoạn 2- tổng phụ tiêu chuẩn như đã mô tả trước đây.55,56Nhóm chuột giả cũng trải qua quy trình tương tự nhưng không cắt bất kỳquả thậnkhăn giấy.
Mức cytokine trong huyết thanh
Để đo nồng độ cytokine trong huyết thanh chuột, chuộtviêmbộ kit tế bào hạt chuỗi (BD Biosciences, San Jose, CA) được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Nồng độ MCP -1 trong huyết thanh người được xác định bằng cách sử dụng xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym chống lại MCP -1 (Abcam, Cambridge, Vương quốc Anh) theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
Phân tích thống kê
Giá trị được biểu thị bằng giá trị trung bình - SEM. Tầm quan trọng của kết quả được đánh giá bằng phép thử t có đuôi 2- không ghép đôi hoặc không ghép đôi 2- với sự hiệu chỉnh của Welch. So sánh nhóm của 3 điều kiện trở lên được thực hiện với phân tích tham số về phương sai, sau đó là kiểm tra so sánh nhiều lần Tukey để so sánh theo từng cặp. Điểm mô học được so sánh bằng cách sử dụng bài kiểm tra Mann-Whitney. Các phân tích được thực hiện bằng phần mềm Prism 6 (GraphPad, San Diego, CA). Giá trị P nhỏ hơn 0. 05 được coi là quan trọng.
Phê duyệt nghiên cứu
Các thí nghiệm trên chuột được tiến hành tuân thủ các giao thức của Ủy ban sử dụng tối thiểu. Việc sử dụng mô người trong nghiên cứu này đã được Đại học California, San Diego, Chương trình Bảo vệ Nghiên cứu Con người chấp thuận.
TIẾT LỘ
SC là thành viên Hội đồng Khoa học và thành viên Hội đồng Quản trị củaBệnh loạn dưỡng cystineTổ chức Nghiên cứu. SC là đồng sáng lập, cổ đông và thành viên của cả hội đồng khoa học và hội đồng quản trị của GenStem TherapeuticsInc. Các điều khoản của thỏa thuận này đã được Đại học California – San Diego xem xét và chấp thuận theo các chính sách xung đột lợi ích của nó. Tất cả các tác giả khác tuyên bố không có lợi ích cạnh tranh.
cung cấp Gal -3–/–chuột. Chúng tôi cảm ơn Lou Devanneaux và NicholeFlerchinger vì sự giúp đỡ kỹ thuật của họ và Elizabeth Souter đã xem xét bản thảo. Chúng tôi ghi nhận Christopher Alfonso từ BDBioscience đã cung cấp chuộtviêmmảng hạt đo tế bào và sự giúp đỡ của anh ấy trong việc giải thích các kết quả. Công việc này được hỗ trợ bởi các khoản tài trợ của Viện Y tế Quốc gia RO 1- DK090058 và R 01- DK110162,Bệnh loạn dưỡng cystineTổ chức Nghiên cứu và Viện Y học Tái sinh California (CIRM, CLIN -09230). TL được hỗ trợ bởi một học bổng tốt nghiệp từ Vaincre Les MaladiesLysosomales. AB và JZ được hỗ trợ bởi một học bổng từBệnh loạn dưỡng cystineTổ chức Nghiên cứu. Cơ sở chia sẻ khoa học thần kinh UCSD được tài trợ bởi Viện quốc gia về rối loạn thần kinh và đột quỵ (NINDS) cấp P 30- NS047101.
NGƯỜI GIỚI THIỆU
1. Medzhitov R. Nguồn gốc và vai trò sinh lý củaviêm. Thiên nhiên. 2008; 454: 428–435.
2. Donath CỦA TÔI. Nhắm mục tiêuviêmtrong điều trị bệnh tiểu đường loại 2. Tiểu đường Obes Obes Metab. 2013; 15 (suppl 3): 193–196.
3. Jaffer U, Wade RG, Gourlay T. Cytokines trong hệ thống trong hội chứng đáp ứng điều hòa: một đánh giá. HSR Proc Chăm sóc Chuyên sâu Cardiovasc Anesth. 2010; 2: 161–175.
4. Pecoits-Filho R, Heimburger O, Barany P, et al. Mối liên quan giữa sự lưu hành của các dấu ấn điều hòa và chức năng thận còn lại ở bệnh nhân CRF. Là JQuả thậnDis. 2003; 41: 1212–1218.
5. Gahl WA, Thoene JG, Schneider JA.Bệnh loạn dưỡng cystine. N Engl J Med. 2002; 347: 111–121.
6.Cherqui S, Kalatzis V, Trugnan G, Antignac C.cystinosinđến màng lysosome đòi hỏi một tín hiệu dựa trên tyrosine và một mô típ sắp xếp mới lạ. J Biol Chem. 2001; 276: 13314–13321.
7. Kalatzis V, Cherqui S, Antignac C, Gasnier B.Cystinosin, protein bị lỗi trongBệnh loạn dưỡng cystine, là một chất vận chuyển cystine lysosomal có H () -driven. EMBO J. 2001; 20: 5940–5949.
8. Cherqui S, Courtoy PJ. Hội chứng Fanconi thận ởBệnh loạn dưỡng cystine: những hiểu biết sâu sắc về bệnh và quan điểm điều trị. Nat Rev Nephrol. 2017; 13: 115–131.
9. Nesterova G, Gahl W. NephropathicBệnh loạn dưỡng cystine: biến chứng muộn của một bệnh đa hệ. Nephrol nhi. 2008; 23: 863 - 878.
10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G, và cộng sự. Sự tích tụ cystine trong nội mạc tử cung ở những con chuột thiếucystinosin, protein bị lỗi trongBệnh loạn dưỡng cystine. Mol Cell Biol. Năm 2002; 22: 7622–7632.
11. Nevo N, Chol M, Bailleux A, và cộng sự. Kiểu hình thận củaBệnh loạn dưỡng cystinemô hình chuột phụ thuộc vào nền tảng di truyền. Ghép số Nephrol. 2010; 25: 1059–1066.
12. Kalatzis V, Serratrice N, Hippert C, et al. Các dị thường ở mắt trongBệnh loạn dưỡng cystinemô hình động vật bắt chước sinh bệnh học. Bác sĩ nhi khoa Res. 2007; 62: 156–162.
13. Hướng dẫn Chevronnay HP, Janssens V, Van Der Smissen P, et al. Một mô hình chuột cho thấy hai cơ chế thay đổi tuyến giáp ở trẻ sơ sinhBệnh loạn dưỡng cystine: giảm tổng hợp thyroglobulin do căng thẳng lưới nội chất / đáp ứng protein không mở và suy giảm quá trình xử lý lysosome. Khoa nội tiết. 2015; 156: 2349–2362.
14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P, et al. Liệu pháp cysteamine làm chậm sự tiến triển của bệnh thậnBệnh loạn dưỡng cystineở cuối thanh thiếu niên và người lớn.Quả thậnInt. 2012; 81: 179–189.
15. Liệu pháp Cherqui S. Cysteamine: một phương pháp điều trịBệnh loạn dưỡng cystine, không phải là một phương pháp chữa bệnh.Quả thậnInt. 2012; 81: 127–129.
16. Gahl WA, Balog JZ, Kleta R. NephropathicBệnh loạn dưỡng cystineở người lớn: tiền sử tự nhiên và tác dụng của liệu pháp cysteamine đường uống. Ann Intern Med. 2007; 147: 242–250.
17. Cherqui S, Courtoy PJ. Hội chứng Fanconi thận ởBệnh loạn dưỡng cystine: những hiểu biết sâu sắc về bệnh và quan điểm điều trị. Nat Rev Nephrol. 2017; 13: 115–131.
18. Napolitano G, Johnson JL, He J, và cộng sự. Suy giảm khả năng tự động qua trung gian chaperone dẫn đến các khuyết tật phân hủy lysosome có chọn lọc trong bệnh tích trữ lysosomeBệnh loạn dưỡng cystine. EMBO Mol Med. 2015; 7: 158–174.
19. Andrzejewska Z, Nevo N, Thomas L, et al.Cystinosinlà một thành phần của phức hợp H -ATPase-điều hòa-rag không bào kiểm soát mục tiêu tín hiệu của phức hợp rapamycin 1 ở động vật có vú. J Am Soc Nephrol. 2016; 27: 1678–1688.
20. Rega LR, Polishchuk E, Montefusco S, et al. Sự kích hoạt của yếu tố phiên mã EB giải cứu các bất thường của lysosome trong bệnh u nangquả thậntế bào.Quả thậnInt. 2016; 89: 862 - 873.
21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galectin -3: một câu chuyện kết thúc mở. Biochim Biophys Acta. 2006; 1760: 616–635.
22. Sciacchitano S, Lavra L, Morgante A, et al. Galectin -3: một phân tử cho bảng chữ cái của các bệnh, từ A đến Z. Int J Mol Sci. 2018; 19 (2).
23. Calvier L, Martinez-Martinez E, Miana M, et al. Tác động của sự ức chế galectin -3 đối với tổn thương tim và thận do aldosterone gây ra. Suy tim JACC. 2015; 3: 59–67.
24. Frenay AR, Yu L, van der Velde AR, et al. Sự ức chế dược lý của galectin -3 bảo vệ chống lại bệnh thận do tăng huyết áp. Am J Physiol Renal Physiol. 2015; 308: F500 – F509.
25. Kolatsi-Joannou M, Giá KL, Winyard PJ, DA dài. Modi ed citrus pectin làm giảm sự biểu hiện của galectin -3 và mức độ nghiêm trọng của bệnh trong giai đoạn cấp tính thực nghiệmquả thậnvết thương. PloS Một. 2011; 6: e18683.
26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L, và cộng sự. Phong tỏa galectin -3 làm giảm sự ứ đọng ở thận trong hai mô hình thực nghiệm không tăng huyết áp về tổn thương thận. PloS Một. 2016; 11: e0166272.
27. Nevo N, Thomas L, Chhuon C, và cộng sự. Tác động củaBệnh loạn dưỡng cystineglycosyl hóa trên sự ổn định của protein bằng cách gắn nhãn đồng vị ổn định động khác nhau bởi các axit amin trong nuôi cấy tế bào (SILAC). Nguyên tố tế bào Mol. 2017; 16: 457–468.
28. Napolitano G, Johnson JL, He J, và cộng sự. Suy giảm khả năng tự động qua trung gian chaperone dẫn đến các khuyết tật phân hủy lysosome có chọn lọc trong bệnh tích trữ lysosomeBệnh loạn dưỡng cystine. EMBO Mol Med. 2015; 7: 158–174.
29. Majeski AE, Xúc xắc JF. Cơ chế của tự động qua trung gian chaperone. Int J Biochem Cell Biol. 2004; 36: 2435–2444.
30. Xie W, Zhang L, Jiao H, et al. autophagy qua trung gian chaperone ngăn chặn quá trình apoptosis bằng cách làm suy giảm BBC3 / PUMA. Autophagy. 2015; 11: 1623–1635.
31. Li X, Ma Q, Wang J, et al. c-Abl và Arg tyrosine kinase điều chỉnh sự phân hủy lysosome của oncoprotein Galectin -3. Cell Death Differ. 2010; 17: 1277–1287.
32. Takeuchi H, Tanaka M, Tanaka A, và cộng sự. Tỷ lệ tiền định của đại thực bào phân cực M 2- trong ung thư bàng quang ảnh hưởng đến sự hình thành mạch, mức độ khối u và khả năng xâm lấn. Oncol Lett. 2016; 11: 3403–3408.
33.Chavez-Galan L, Olleros ML, Vesin D, Garcia I. Ngoài đại thực bào M1 và M2, còn có đại thực bào CD169 () và TCR (). Immunol phía trước. 2015; 6: 263.
34. Henderson NC, Sethi T. Quy định củaviêmbởi galectin -3. Miễn dịch Rev. 2009; 230: 160–171.
35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. Protein hóa trị đơn bào -1 (MCP -1): tổng quan. J Interferon Cytokine Res. 2009; 29: 313–326.
36.Skowyra ML, Schlesinger PH, Naismith TV, Hanson PI. Việc tuyển dụng máy móc ESCRT được kích hoạt thúc đẩy quá trình sửa chữa endolysosome. Khoa học. 2018; 360 (6384).
37.MacKinnon AC, Farnworth SL, Hodkinson PS, et al. Quy định hoạt hóa đại thực bào thay thế bằng galectin -3. J Immunol. 2008; 180: 2650–2658.
38. Sano H, Hsu DK, Yu L, et al. Galectin của con người -3 là một chất hóa trị mới cho bạch cầu đơn nhân và đại thực bào. J Immunol. 2000; 165: 2156–2164.
