Một vai trò mới đối với Interleukin (IL) trong xơ hóa
Mar 17, 2022
Sự tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Phần I.:Nuclear IL-33 hạn chế sự chuyển đổi sớm của nguyên bào sợi thành kiểu hình tiết ra ma trận ngoại bào
FrancescaGatti, Sobuj Mia, Clara Hammarström &et al.
Interleukin(IL)-33 là một cytokine dường như làm trung gianFibrosisbằng cách báo hiệu qua thụ thể ST2 (IL) của nó(Interleukin)-33R / ILiRL1). Tuy nhiên, nó cũng là một loại protein mà sau khi tổng hợp được sắp xếp vào nhân tế bào, nơi nó dường như ảnh hưởng đến việc gấp chromatin. Ở đây chúng tôi mô tả một vai trò mới cho IL hạt nhân(Interleukin)-33 trong việc điều chỉnh kiểu hình nguyên bào sợi trong nước tiểuthậnFibrosisđược thúc đẩy bởi tắc nghẽn niệu quản đơn phương. Hồ sơ phiên âm của IL(Interleukin)-33-thiếu thận 24 h sau khi thắt cho thấy sự biểu hiện tăng cường của các gen xơ và làm giàu các bộ gen liên quan đến sự hình thành và tái tạo ma trận ngoại bào. Những thay đổi này dựa trên tác dụng nội bào của IL(Interleukin)-33 vì chúng không được tái tạo bằng cách điều trị bằng kháng thể trung hòa với L.33 ngăn ngừa IL(Interleukin)-Tín hiệu thụ thể 33R / ST2L cũng như không được quan sát thấy ở thận thiếu L-33R / ST2. Để khám phá thêm chức năng nội bào của lL-33, chúng tôi đã thiết lập hồ sơ phiên mã của các nguyên bào sợi ở người, quan sát thấy rằng việc loại bỏ IL-33 đã làm lệch hồ sơ phiên mã từ viêm sang kiểu hình nguyên bào sợi cơ, được phản ánh ở mức độ cao hơn của protein COL3Al, COL5A1 và transgelin, cũng như mức độ biểu hiện thấp hơn của IL6, CXCL8, CLL7 và CCL8. Tóm lại, phát hiện của chúng tôi cho thấy IL hạt nhân(Interleukin)-33 trong nguyên bào sợi làm giảm phản ứng profibrotic ban đầu cho đến khi các kích thích dai dẳng, như được thực thi bởi UUO, có thể ghi đè lên cơ chế bảo vệ này.
Interleukin-33 (IL-33 / IL(Interleukin)1F1l) là thành viên củainterleukin-1 siêu họ đã nhận được sự chú ý đáng kể với tư cách là người hòa giải giả định củaFibrosisphát triển. Phần lớn sự quan tâm này đã được thúc đẩy bằng cách quan sát thấy rằng việc tiêm IL lặp đi lặp lại(Interleukin)-33, hoạt động thông qua thụ thể xuyên màng ST2 (IL(Interleukin)33RJ / IL(Interleukin)1RL1), gây ra daFibrosis' và bằng cách quan sát IL đó(Interleukin)-33-thiếu hụt đáng kể làm giảm đáng kể gan do carbon tetrachloride gây raFibrosis. Thật vậy, IL(Interleukin)-33 có thể quảng báFibrosisbằng cách tạo IL profibrotic(Interleukin)-13 từ các tế bào bạch huyết bẩm sinh loại 2 (ILC2) và T helper 2lymphocytes '.
Thận kẽFibrosisvà mất tế bào ống nhu mô là kết quả cuối cùng thường gặp của các bệnh thận mãn tính và là yếu tố dự đoán tốt về sự tiến triển của bệnh. Dữ liệu hiện tại được tạo ra từ hai mô hình chuột khác nhau ủng hộ giả thuyết rằng IL(Interleukin)-33 cũng góp phần vào bệnh lý của thậnFibrosis: trong tắc nghẽn niệu quản một bên (UUO), Chen và cộng sự báo cáo giảm tổn thương nhu mô và tăng cường tăng sinh biểu mô ở cả IL(Interleukin)-33- và chuột thiếu ST2 ', và trong thiếu máu cục bộ thận-tái tưới máu, Liang và cộng sự cho thấy rằng sự ức chế IL(Interleukin)-33 báo hiệu bằng cách sử dụng IL hòa tan (Interleukin) -33 thụ thể (sST2) cũng giảmFibrosis.
Các báo cáo đã đề cập đến các đặc tính tạo sợi của IL(Interleukin)-33 thường được thực hiện và giải thích theo quan điểm của một cơ chế mà IL(Interleukin)-33, được giải phóng khỏi các tế bào bị căng thẳng hoặc bị hư hỏng, liên kết với miền ngoại bào của thụ thể của nó. Ngược lại, sắp xếp IL.(Interleukin)-33 đến nhân tế bào sau khi tổng hợp- và khả năng ảnh hưởng của nó để gấp chromatin độc lập thụ thể cho thấy rằng IL-33 cũng có thể thực hiện các chức năng giống như yếu tố phiên mã, độc lập với thụ thể, một phương thức hoạt động đã nhận được ít sự chú ý thử nghiệm hơn nhiều. Những cân nhắc này càng thú vị hơn khi xem xét thực tế là nội địa hóa hạt nhân của IL(Interleukin)-33 là rất quan trọng, như được tiết lộ bởi tình trạng viêm gây chết người, không giải quyết được khi tín hiệu nội địa hóa hạt nhân bị gián đoạn '.
Trung gian di động chính củaFibrosislà myofibroblast, khi được kích hoạt đóng vai trò là tế bào sản xuất collagen và co bóp chính của sửa chữa mô. Myofibroblasts được đặc trưng bởi sự biểu hiện của actin cơ trơn (a-SMAACTA2) cho phép chức năng co bóp của chúng và góp phần vào hiệu ứng phá hủy củaFibrosisphát triển, Trước đây chúng tôi đã chứng minh rằng hạt nhân I-33 được gây ra nhanh chóng và mạnh mẽ trong các nguyên bào sợi nấm trong quá trình chữa lành vết thương thử nghiệm, trong loét dạ dày và viêm loét đại tràng. Thật vậy, biểu hiện của IL(Interleukin)-33 dường như là một đặc điểm chung của myofibroblasts dương tính với a-SMA, bởi vì nó cũng được tìm thấy trong tuyến tụyFibrosisvà trong các tế bào hình sao giống như myofibroblast của gan. Tổng hợp lại, những phát hiện này làm cho nó thú vị để hỏi nếu IL(Interleukin)-33 có thể có một vai trò trong việc điều chỉnh chức năng và sự khác biệt của myofibroblast.
Chúng tôi ở đây mô tả một vai trò mới cho hạt nhân lL-33 trong việc điều chỉnh kiểu hình myofibroblast. Bằng phương pháp xóa di truyền hoặc ức chế dược lý của IL(Interleukin)-33 trong mô hình UUO, cũng như sự cạn kiệt il(Interleukin)-33 trong các nguyên bào sợi da nuôi cấy nguyên phát ở người được kích hoạt, chúng tôi chứng minh rằng IL hạt nhân(Interleukin)-33 hạn chế sự chuyển đổi sớm sang kiểu hình myofibroblastic toàn diện và hỗ trợ kiểu hình viêm. Sự cạn kiệt của IL(Interleukin)-33 tăng cường biểu hiện của các thành phần ma trận ngoại bào COL1Al, COL1A2, COL3A1, COL5A1 và transgelin, nhưng ức chế sự biểu hiện của cytokine IL tiền viêm(Interleukin)-6 và hóa trị liệu CXCL8 CCL7 và CCL8. Do đó, những phát hiện của chúng tôi giới thiệu một quan điểm mới để hiểu vai trò của IL-33 trongFibrosisphát triển và cân bằng nội môi mô.
Cistanche ·tubulosa ·Ngăn chặnthậnbệnh, bấm vào đây để lấy mẫu
Kết quả
Myofibroblasts là IL thống trị(Interleukin)-33 tế bào biểu hiện trong UUO murine.Một nghiên cứu gần đây của Chen và các đồng nghiệp đã báo cáo sự gia tăng biểu hiện của IL(Interleukin)-33 và ST2 vào ngày thứ 4 sau tắc nghẽn niệu quản đơn phương. Chúng tôi đã tiếp cận thí nghiệm của họ bằng cách thu thập thận ở mức 1,7 và 21 ngày sau UUO ở chuột C57BL / 6J, quan sát thấy il tăng đều đặn(Interleukin)33 bản sao mRNA (Hình 1A) và số lượng tế bào biểu hiện IL hạt nhân tăng lên(Interleukin)-33 (Hình 1B). Chúng tôi cũng quan sát thấy sự biểu hiện phiên mã và protein của collagen loại I phản ánh sự phát triển củaFibrosis(Hình IC, D). Sau đó, chúng tôi đã phân tích kiểu hình của IL(Interleukin)-33 tế bào biểu hiện. Giống như Chen và cộng sự, chúng tôi đã quan sát thấy rằng IL(Interleukin)-33 tập hợp con tế bào biểu hiện được nhìn thấy vào ngày 2 bao gồm chủ yếu là các myofibroblasts dương tính với A-SMA, tuy nhiên, chúng tôi không tìm thấy tín hiệu nào cho IL(Interleukin)-33 trong các tế bào nội mô dương tính với CD31 cũng như trong bạch cầu dương tính với CD45 (Hình. IE và Hình S1). Chúng tôi cũng đã quan sát IL(Interleukin)-33 trong các pericytes rải rác (đầu mũi tên màu đỏ trong Hình 1A, bảng điều khiển ngày 21). Một kết hợp miễn dịch kết hợp cho PDGFRB, một dấu hiệu khác cho myofibroblasts và pericytes, cho thấy colocalization rộng rãi (Hình. IE) Hơn nữa, chúng tôi đã đánh giá xem IL có(Interleukin)33 đã được colocalized với các dấu hiệu đã biết của hoạt hóa nguyên bào sợi, phát hiện ra rằng sự biểu hiện của S100A4(còn được gọi là protein đặc hiệu nguyên bào sợi, FSP-1), được thể hiện khá nhiều trong các tế bào nội mô của mao mạch và mạch cỡ trung bình (Hình. IE). Tương tự, VIM/vimentin cũng được tìm thấy chủ yếu trong các tế bào nội mô, đặc biệt là trong cầu thận và các mạch cỡ trung bình, và không có biểu hiện đồng biểu hiện công khai trong IL(Interleukin)33 tế bào dương tính (Hình 1E). Phân tích thêm về IL(Interleukin)-33-biểu hiện myofibroblasts vào ngày 7 tiết lộ rằng chúng chủ yếu được khu trú đến vỏ não và ngã ba corticomedullary. và ít phổ biến hơn trong tủy và nhú (Hình 1F).
Hình 1. Tắc nghẽn niệu quản một bên gây ra IL(Interleukin)-33 biểu hiện ở thận chuột.
(Đ,C) Biểu hiện tương đối của 33 và Collal ở thận từ chuột đối chứng khỏe mạnh (n = 2) hoặc chuột phải phẫu thuật giả (n = 1) hoặc UUO sau l, 7, hoặc 21 ngày (n = 3 tại mỗi thời điểm). Mức độ phiên mã đã được định lượng chi tiết trong Vật liệu và Phương pháp bằng qRT-PCR. Các điểm dữ liệu đại diện cho từng con chuột. (ĐTCK) Photomicrographs đại diện của các phần mô nhuộm màu cho IL(Interleukin)-33 [tín hiệu nâu trong (B) và (F), tín hiệu nâu hoặc màu xanh mòng két trong (E)], COL1 (tín hiệu nâu trong bảng D), Asma (đỏ, E, F), CD31 (tím, E), PDGFRB (teal, E), Vimentin (teal, E) và S100A4 (tím, E) ở thận từ chuột hoặc chuột đối chứng khỏe mạnh phải chịu UUO2 ngày (E), 7 ngày (B, D, F) hoặc 21 ngày (B, D)trước đây. Bảng điều khiển (F) hiển thị các khu vực khác nhau của thận như được dán nhãn. Thanh tỷ lệ = 20 μm.
Xóa di truyền của I-33 có tác động không đáng kể đến sự tiến triển xơ hóa ở UUO nhưng làm trung gian tăng cường sớm tổng hợp collagen.Tiếp theo, chúng tôi đánh giá vai trò giả định của IL(Interleukin)-33 bằng cách so sánh đáp ứng với tắc nghẽn thận trong IL(Interleukin)-33 và chuột loại hoang dã. Trái ngược với Chen và các đồng nghiệp, những người báo cáo đã giảmFibrosisphát triển trong IL(Interleukin)-33 con chuột bị thiếu UUO, chúng tôi quan sát thấy không có sự khác biệt giữa IL(Interleukin)33 - và chuột WT'trong sự phát triển xơ hóa vào ngày7 hoặc 21 sau UUO bằng cách phân tích hóa học miễn dịch collagen loại I (Hình 2A, B). Tuy nhiên, mổ xẻ phản ứng xơ hóa ở cấp độ phiên mã bằng cách đánh giá bảng điểm collagen, chúng tôi đã quan sát thấy sự điều chỉnh sớm, đáng kể lên mức phiên âm Collal cao hơn gấp hai lần và xu hướng tăng Col3al khi so sánh IL(Interleukin)-33-thiếu và hoang dã thận vào ngày 1 (Hình 2C, D). Do đó, chúng tôi đã quyết định sao chép thiết kế thử nghiệm của Chen và cộng sự bằng cách phân tích các mẫu vào ngày thứ 4 sau UUO và bao gồm cả những con chuột thiếu ST2, so sánh chúng với IL(Interleukin)-33-thiếu và chuột WT. Những phân tích này cho thấy sự gia tăng đáng kể colla2 trong IL(Interleukin)Thận thiếu hụt .33 so với thận kiểu hoang dã vào ngày thứ 4nhưng không có sự gia tăng tương ứng ở thận thiếu ST-2 (Hình 2E). Không có sự khác biệt rõ ràng về mức độ phiên mã Collar và Col3al giữa các kiểu gen vào ngày thứ 4, cho thấy rằng ảnh hưởng đến các gen này là ngắn hơn lâu dài (dữ liệu không được hiển thị và Hình 2F).
Hình 2. Biểu hiện collagen trong IL(Interleukin)-33-/và thận kiểu hoang dã trong UUO.
(Đ,B) Photomicrographs đại diện của các phần mô nhuộm màu cho COL1 (màu nâu) trong thận từ chuột I-33 - và WT 7 và 21 ngày sau UUO. (C,D) Khóa học thời gian so sánh phiên mã mRNA của Collal và Col3al trong IL(Interleukin)-33--và chuột WT, cho thấy chuột kiểm soát khỏe mạnh (n = 2), chuột hoạt động giả (n = 1) và chuột chịu UUO1,7, hoặc 21 ngày trước đó (n = 3 tại mỗi thời điểm và của mỗi kiểu gen). (E, F) So sánh phiên mã Collal và Col3al ở thận từ IL(Interleukin)-Chuột -33-, ST2-và WT 4 ngày sau khi phẫu thuật giả (n = 5 trên mỗi kiểu gen) hoặc UUO (n = 10per kiểu gen). Mức độ phiên mã được định lượng bằng qRT-PCR của mRNA. Các điểm dữ liệu đại diện cho từng con chuột, các thanh hiển thị giá trị trung bình.*p<><><>
IL(Interleukin)-33 làm giảm sự biểu hiện của các gen profibrotic trong giai đoạn đầu của UUO.Sự gia tăng biểu hiện của Collar và Col31 vào ngày 1 (Hình 1CD) và Colla2 vào ngày 4 (Hình 2E) trong IL(Interleukin)Chuột thiếu .33 cho thấy vai trò của IL(Interleukin)-33 trong phản ứng sớm với chấn thương. Chúng tôi đã khám phá khả năng này bằng cách đưa nhiều động vật hơn vào một thí nghiệm mở rộng, quan sát mức độ phiên mã tăng lên của Collar, Colla2 và Col3al trong IL(Interleukin)Chuột thiếu .-33 vào ngày 1 (Hình 3A-C).
Đã quan sát thấy rằng IL(Interleukin)-33 trong các mô thận từ những con chuột bị UUO khu trú thành nhân tế bào, tiếp theo chúng tôi hỏi liệu biểu hiện gen bị thay đổi có quan sát thấy trong IL không(Interleukin)-33-chuột thiếu vào ngày 1 sau khi UUO là do việc phát hành là ấn tượng, chức năng IL-33 hạt nhân hoặc do không có IL ngoại bào(Interleukin)-33. Chúng tôi đã giải quyết lựa chọn thứ hai bằng cách sử dụng một kháng thể trung hòa nhắm vào IL(Interleukin)-33 đến chuột loại hoang dã trước UUO (Hình.3D). Phương pháp điều trị này không tái tạo kiểu hình xơ của IL(Interleukin)33 dị nhân, củng cố giả thuyết rằng sự gia tăng biểu hiện gen profibrotic quan sát thấy trong trường hợp không có IL(Interleukin)-33 là do thiếu IL hạt nhân chứ không phải ngoại bào(Interleukin)-33.
Hình 3.IL(Interleukin)-33 làm giảm sự biểu hiện của collagen trong giai đoạn đầu của UUO.
(ĐTCK) Phiên mã Collal, Colla2 và Col3al ở thận từ IL(Interleukin)-33- / và chuột WT l ngày sau khi phẫu thuật giả (n = 5 trên mỗi kiểu gen) hoặc UUO (n = 10per kiểu gen). (Đ) Phiên mã Col3al ở thận từ chuột WT được điều trị bằng thuốc kháng IL(Interleukin)-33, isotype kiểm soát kháng thể hoặc xe trước UUO. Thận đã được thu hoạch24h sau khi UUO (n = 10 cho mỗi nhóm điều trị) hoặc phẫu thuật giả (n = 5). Mức độ phiên mã được định lượng bằng qRT-PCR. Các điểm dữ liệu đại diện cho từng con chuột, các thanh hiển thị giá trị trung bình.**p<><>
Phân tích bảng điểm của IL(Interleukin)-33-thiếu thận cho thấy một hồ sơ của tái tổ chức ma trận ngoại bào và hình thành collagen.Để điều tra phản ứng ban đầu với UUO chi tiết hơn bằng cách lập hồ sơ phiên mã, RNA được chiết xuất từ thận của IL(Interleukin)-33-thiếu và chuột hoang dã 24 giờ sau UUO. Sự phân biệt đối xử tuyến tính của Fisher theo cặp24 đã được sử dụng để xác định 5% hàng đầu (200 gen) các gen biểu hiện khác biệt giữa WT và IL(Interleukin)-33 quả thận bị thiếu cho thấy sự phân tách rõ ràng giữa các kiểu gen trong phân tích thành phần chính (Hình 4A). Một cách tiếp cận không nghiêm ngặt (p<0.05,><0.25, and="" fold="" change="">1.3) đã xác định được 134 đầu dò được kiểm soát xuống và 46 đầu dò được kiểm soát trong IL tương phản(Interleukin)33−/− (n=5) so với WT (n=4) (Suppl. Bảng S1), trong số đó đáng chú ý là Col1a1, Col1a12 và Col3a1 cũng như Acta2 liên quan đến myofibroblast (Hình 4B). Ngoài ra, phân tích bản thể học gen của các gen biểu hiện khác biệt bằng cách sử dụng phân cụm chú thích DAVID (Bảng S2) cho thấy sự làm giàu tích cực đối với các thuật ngữ GO liên quan đến collagen và chất ức chế protease, cũng như liên kết PDGF và tương tác thụ thể ECM, và làm giàu tiêu cực cho các thuật ngữ GO liên quan đến hoạt động oxidoreductase và vận chuyển anion độc lập với natri.
Hình 4. Tóm tắt sự khác biệt phiên mã giữa IL(Interleukin)-33-thiếu và chuột hoang dã 24h sau UUO.
(ĐTCK) Biểu đồ tán xạ 3D cho thấy sự phân bố các mẫu dựa trên phân tích thành phần chính của 200 gen. (B) Bản đồ nhiệt của các gen biểu hiện khác biệt hàng đầu.
Sự suy giảm IL.33 nguyên bào sợi thúc đẩy một dấu hiệu gen phù hợp với sự lắng đọng ma trận ngoại bào tăng lên.Để khám phá chức năng của IL(Interleukin)-33trong IL thống trị(Interleukin)-33-biểu hiện quần thể tế bào của thận bị tắc nghẽn, chúng tôi nghiêng các nguyên bào sợi nuôi cấy của con người về phía một kiểu hình myofibroblast bằng cách cho chúng tiếp xúc với IFN-y và TGF-β trong 24 h² sau khi siRNA qua trung gian hạ gục I-33. Việc hạ gục hiệu quả đã được xác minh cả ở cấp độ protein và bảng điểm (Hình 5A) và đi kèm với việc tăng nồng độ mRNA và protein của COL3A1, COL5A1 và TAGLN (Hình 5B-D) tăng lên. Các phân tích ban đầu cho thấy sự liên quan của TGF-β và thúc đẩy chúng tôi lập hồ sơ phiên mã các nguyên bào sợi người được nuôi cấy, được nuôi cấy được điều trị bằng siRNA thành IL(Interleukin)-33 và được kích hoạt bởi IFN-y (để gây ra IL(Interleukin)-33 biểu hiện)hoặc bằng sự kết hợp củaIFN-y và TGF-B trong 24 giờ Phân tích này đã xác định được 64 gen biểu hiện khác biệt có liên quan đến sự cạn kiệt IL(Interleukin)-33(adj. p<0.05 and="" fold="" change="">1.5, Hình 5E),35 trong số đó là phổ biến cho cả hai phương pháp điều trị cytokine (Hình 5E, F). Hơn nữa, hầu hết các gen cho thấy xu hướng tương tự trong cả hai điều kiện, ngay cả khi chúng đạt đến ngưỡng đã chọn để biểu hiện vi phân chỉ dưới một trong số chúng (Hình 5F), hỗ trợ giả định rằng tác dụng ức chế IL(Interleukin)-33 là tương tự trong cả hai điều kiện. Do đó, để phân tích bản thể gen, chúng tôi đã xem xét các gen được biểu hiện khác biệt bởi IL(Interleukin)-33 cạn kiệt trong ít nhất một điều kiện và thực hiện phân cụm chú thích (Bảng S3), Đồng ý với phát hiện của chúng tôi trong IL, phơi nhiễm UUO(Interleukin)-33-thiếu thận, chúng tôi thấy rằng ức chế IL(Interleukin)-33 trong nguyên bào sợi dẫn đến sự gia tăng biểu hiện của các gen được làm giàu cho các thuật ngữ GO liên quan đến collagen và các thành phần ma trận ngoại bào. Hơn nữa, các gen bị ức chế do cạn kiệt I-33 đã được làm giàu cho các thuật ngữ GO liên quan đến phản ứng với kích thích viêm. Cùng với nhau, dữ liệu của chúng tôi ngụ ý rằng IL(Interleukin)-33 biểu hiện trong nguyên bào sợi phục vụ để làm giảm sự điều chỉnh của các bảng điểm liên quan đến lắng đọng ma trận ngoại bào và kích hoạt myofibroblast, trong khi các bản sao viêm ở một mức độ nào đó được hỗ trợ bởi IL(Interleukin)-33.
Hình 5. Suy giảm IL nguyên bào sợi(Interleukin)-33enforces một dấu hiệu gen phù hợp với sự lắng đọng ma trận ngoại bào tăng lên.
Biểu hiện của IL(Interleukin)Biểu hiện 33 (A), COL5A1 (B), FIBL5 (C) và TGLN (D) ở nguyên bào sợi ở người được điều trị bằng IL(Interleukin)-33-specific và scrambled siRNA được đo bằng gRT-PCR (bảng trên cùng) và western blot (bảng dưới cùng). Các thanh hiển thị giá trị trung bình của 4 thí nghiệm độc lập,*p<0.05.(e)venn diagram="" comparing="" differential="" expression="" of="" transcripts="" in="" response="" to="" the="" silencing="" of="">(Interleukin)33 giữa các tế bào điều khiển và kích hoạt.
(F) Bản đồ nhiệt hiển thị các bản ghi được thể hiện khác biệt để đáp ứng với việc im lặng siRNA của IL(Interleukin)-33 trong các tế bào điều khiển và kích hoạt.
Sự cạn kiệt của IL(Interleukin)-33 trong các nguyên bào sợi hoạt hóa ủng hộ một nguyên bào sợi nấm hơn một kiểu hình viêm.Dựa trên quan sát của chúng tôi rằng hiệu quả của I-33 dường như vẫn tồn tại và trở nên nổi bật hơn theo thời gian mặc dù IL(Interleukin)-33 biểu thức suy giảm (Hình S2A, B), tiếp theo chúng tôi hỏi liệu chức năng hạt nhân chính của IL có(Interleukin)-33 có thể là sự điều chỉnh sự biệt hóa nguyên bào sợi hơn là điều chỉnh trực tiếp các hiệu ứng ủng hộ xơ hóa. Sau khi kích thích, các nguyên bào sợi không hoạt động và các tế bào trung mô khác phát triển các chức năng viêm và/hoặc co bóp. Phổ giữa các nguyên bào sợi viêm và các nguyên bào sợi cơ co bóp vẫn được xác định kém và có lẽ đại diện cho một quá trình chuyển đổi trượt hơn là hai kiểu hình riêng biệt. Tuy nhiên, một ấn phẩm gần đây của Ohlund et al.23 đã so sánh các nguyên bào sợi liên quan đến ung thư (CAL) với các tế bào hình sao tuyến tụy không hoạt động, xác định một kiểu hình viêm được gọi là iCAFs (đồng nuôi cấy ở Transwells với các chất hữu cơ khối u tiết cytokine và biểu hiện mức độ IL cao và thấp(Interleukin)6 và SMA, tương ứng [IL(Interleukin).dPa-SMAl]) và kiểu hình myofibroblastic hợp đồng, myCAFs (IL(Interleukin)6 "a-SMA-, được nuôi cấy trong các lớp đơn dày đặc), Lập hồ sơ phiên âm và so sánh iCAF và mvCAF đã xác định các cấu hình phiên mã đặc trưng. Trong khi các nguyên bào sợi có kiểu hình viêm (iCAF) làm tăng sự biểu hiện của chúnginterleukinsvà các chemokin, những người có kiểu hình myofibroblastic (myCAFs) được đặc trưng bởi sự biểu hiện tăng cường của các gen đáp ứng β TGF và các thành phần ma trận ngoại bào bao gồm collagen3. Chúng tôi đã sử dụng bộ dữ liệu này để tạo danh sách chữ ký bao gồm các gen được điều chỉnh khác biệt hàng đầu giữa các kiểu hình và phân tích làm giàu bộ gen được thực hiện trong phần mềm GSEA. Kết quả chỉ ra rằng sự ức chế I-33 hỗ trợ kiểu hình myofibroblastic co bóp (myFBL) và ức chế kiểu hình viêm (iFBL) trong nguyên bào sợi ở người (Hình 6A, B, Bảng S4), do đó đồng ý với kết quả từ phân tích bản thể gen của chúng tôi. Tại thời điểm này, chúng tôi đã chuyển sự chú ý của mình sang IL(Interleukin)6 và CXCL8, các cytokine đã được đề xuất làm dấu hiệu cho iCAF, phát hiện ra rằng mặc dù các gen này không đáp ứng các tiêu chí biểu hiện khác biệt trong phân tích bộ phiên mã của chúng tôi, việc giảm mức độ biểu hiện của chúng có thể được phát hiện bằng qRT-PCR sau khi cạn kiệt IL(Interleukin)-33 (Hình 6C, D). Trong số các chất trung gian gây viêm được tìm thấy được kiểm soát giảm trong phân tích bảng điểm của chúng tôi (Hình 5F), chúng tôi cũng đã xác nhận sự giảm biểu hiện đối với CCL7 và CCL8 trong các tế bào được điều trị bằng kháng IL(Interleukin)-33 siRNA (Hình 6E, F).
Những quan sát này đã thúc đẩy chúng tôi điều tra xem liệu những phát hiện của chúng tôi có thể được dịch sang mô hình UUO murine vào ngày 1 hay không. Phân tích hóa học miễn dịch (Fg.6G) và định lượng (Hình 6H) cho thấy sự cảm ứng của IL(Interleukin)6 tế bào biểu hiện trong thận kiểu hoang dã, tương tự như các quan sát ở cấp độ phiên mã của Chen và cộng sự4. Ngược lại, chúng tôi quan sát thấy số lượng IL giảm đáng kể(Interleukin)-6 tế bào dương tính trong IL(Interleukin)-33- chuột, đồng ý tốt với dữ liệu nguyên bào sợi người do con người tạo ra trong ống nghiệm của chúng tôi.
Hình 6. Sự cạn kiệt của IL(Interleukin)-33 nghiêng các nguyên bào sợi về phía kiểu hình myofibroblastic.
(Đ,B) Phân tích làm giàu bộ gen cho thấy các tế bào được điều trị bằng IL(Interleukin)SiRNA đặc hiệu -33 đã được làm giàu tích cực đối với dấu hiệu của nguyên bào sợi cơ (myFBL) so với nguyên bào sợi viêm (iFBL) và được làm giàu tiêu cực để có dấu hiệu nguyên bào sợi viêm so với không hoạt động. (Từ C-F) Phiên âm IL(Interleukin)6 (C), IL(Interleukin)8 (D), CCL7 (E) và CCL8 (F) trong nguyên bào sợi ở người được điều trị bằng IL(Interleukin)SiRNA 33 đặc hiệu hoặc xáo trộn được đo bằng gRT-PCR. Mỗi điểm dữ liệu hiển thị các giá trị trung bình của các phép nhân kỹ thuật từ các thí nghiệm độc lập. (G) Photomicrographs đại diện của các phần thận được thu hoạch 4 ngày sau khi phẫu thuật giả hoặc UUO từ WT và IL(Interleukin)-33-/- chuột và được miễn dịch cho IL(Interleukin)-6 (tín hiệu màu nâu). Thanh tỷ lệ = 100 um. (ĐTCK) Định lượng mù của tín hiệu liệt kê số lượng tế bào dương trung bình trên mỗi trường thị giác công suất cao. Các điểm dữ liệu riêng lẻ hiển thị số lượng ô dương trung bình trong một chuột, đếm 3 trường công suất cao trong các khu vực có mật độ cao nhất. *p<>
