Liên hệ: jerry.he@wecistanche.com

Mi Young Ahn1 *, Ban Ji Kim1, Ha Jeong Kim1, Jae Sam Hwang1, Yi-Sook Jung2 và Kun-Koo Park3

Cistanche có tác dụng chống lão hóa

trừu tượng

Bối cảnh: Nghiên cứu này nhằm đánh giáchống lão hóatác dụng của một hợp chất có nguồn gốc từ côn trùng mới được điều chế, glycosaminoglycan trong bọ phân (GAG), được tiêm trong phúc mạc cho chuột SD già như một phần của chế độ ăn uống của chúng trong 1 tháng. Việc sử dụng GAG cho côn trùng được phát hiện có liên quan đến việc giảm tổn thương oxy hóa, mức độ đánh dấu sinh học tế bào gan, hàm lượng protein carbonyl và nồng độ malondialdehyde. Cácchống lão hóa- các cơ chế di truyền phân tử liên quan đến bọ phân GAG vẫn chưa được làm sáng tỏ đầy đủ.

Kết quả: Catharsius molossus (một loại bọ phân) GAG (CaG) sở hữuchống lão hóacác hoạt động; nó làm giảm mức độ creatinine kinase trong huyết thanh, có các hoạt động điều hòa mạch máu động mạch chủ và các hoạt động bảo vệ tim mạch, và duy trì mức đường huyết bình thường ở những con chuột được điều trị. Phân tích microarray được thực hiện với mảng thiết lập dòng nhân bản cDNA 30 K của chuột để xác định cấu hình biểu hiện gen của 14- chuột SD tháng tuổi được điều trị bằng glycosaminoglycan bọ phân 5 mg / kg (CaG5) trên 1- khoảng thời gian tháng, đã được thực hiện để điều trachống lão hóahiệu quả so với Bombus ignitus (một loại ong vò vẽ) nữ hoàng GAG 5 mg / kg (IQG5) hoặc chondroitin sulfate 10 mg / kg. CaG5 và IQG5 có tác dụng chống viêm rõ rệt, mang lại sự ức chế các giá trị axit béo tự do, axit uric, sGPT, IL -1 beta và CK. Ngoài ra, tác dụng chống đông máu và chống huyết khối đã được thấy: nồng độ của yếu tố 1 (fibrinogen) được tăng lên trong huyết tương chuột được điều trị bằng CaG. Nhóm chuột được xử lý CaG 5-, so với nhóm đối chứng, thể hiện sự điều hòa của 131 gen, bao gồm lipocalin 2 (Lbp) và chất ức chế serine peptidase, Kaszal type3 (Spink3) và 64 gen điều hòa, bao gồm cả lysyl oxidase (Lox ), serine khử nước (sds) và retinol saturase (Retsat).

Kết luận: Dữ liệu của chúng tôi cho thấy glycosaminoglycan trong bọ phân có thể là một phương pháp điều trị hữu ích cho những con chuột già, điều này cho thấy tiềm năng của nó như một vật liệu sinh học trị liệu cho quá trình lão hóa.

Từ khóa: Tác dụng chống lão hóa, Bọ hung (Catharsius molossus), Nữ hoàng B. ignitus, Glycosaminoglycan

Tiểu sử

được sử dụng, bằng cách tinh chế, chiết xuất và xác định các thành phần có hoạt tính mạnh, như thực phẩm chức năng hoặc thuốc. Chiết xuất từ ​​bọ hung Catharsius molossus, được tìm thấy ở Trung Quốc, cho thấy hoạt tính tiêu sợi huyết rõ rệt và tác dụng chống oxy hóa và chống tăng đường huyết trên chuột được ăn chế độ ăn nhiều chất béo [9, 10]. Hàm lượng protein car-bonyl trong máu và nồng độ malondialdehyde của mô gan được xử lý bằng chiết xuất từ ​​bọ hung hoặc aceton trong khoảng thời gian 1- tháng, đã giảm đáng kể so với đối chứng [10]. Gần đây, một peptit của bọ cánh cứng Ko- rean, LLCIALRKK-NH2, là peptit 9- mer có nguồn gốc từ Copris tripartitus Coprisin, được phát hiện có tác dụng diệt khuẩn chống lại E. coli và hoạt động kháng khuẩn bằng cách gây ra hiện tượng hư hỏng DNA nghiêm trọng. , gây ra cái chết giống như apoptosis [11]. Một sản phẩm có nguồn gốc từ rượu, chiết xuất từ ​​rượu B. ignitus queen (BIQ) có hiệu quả tiềm năng cao nhất trong số tất cả các sản phẩm của ong vò vẽ được thử nghiệm để điều trị chứng viêm ở chuột SD, vì nó làm giảm đáng kể tình trạng phù chân [12]. Vì vậy, chúng tôi đã chuẩn bị GAGs lấy từ số lượng lớn nhất có thể thu được của C. molossus hoặc B. ignitus Queen để kiểm trachống lão hóađặc tính. Lão hóa liên quan đến sự suy giảm dần dần khả năng sinh lý của một sinh vật, và được biểu hiện bằng những thay đổi tích lũy và sự mất ổn định ở cấp độ toàn bộ hệ thống [13]. Lão hóa cũng có liên quan đến mô hình biểu hiện gen khác biệt cho thấy phản ứng căng thẳng giảm dần giữa các gen chuyển hóa và gen sinh học [14]. Đặc biệt, sự gia tăng mô mỡ nội tạng liên quan đến tuổi tác hoặc béo phì thường đi kèm với tình trạng viêm mãn tính mức độ thấp, được coi là nguyên nhân của các bệnh chuyển hóa khác nhau bao gồm ung thư, bệnh tim mạch và nổi bật nhất là loại hai bệnh tiểu đường [15]. Những GAGs côn trùng này có thể được sử dụng trong một lĩnh vực đang phát triển nhanh chóng với triển vọng sử dụng kỹ thuật mô và vật liệu sinh học làm liệu pháp mới [16].

Trong nghiên cứu này, chúng tôi báo cáo rằng GAG từ bọ phân và BIQ hiển thịchống lão hóacác đặc tính và do đó, những hợp chất này hứa hẹn rất nhiều cho việc sử dụng nhưchống lão hóacác đại lý. Ngoài ra, chúng tôi chứng minh giá trị tiềm năng của glycosaminoglycan trong bọ hung C. molossus trong việc làm giảm các khía cạnh có hại của quá trình lão hóa, như được đo lường cả trong huyết thanh và trong các mô hình biểu hiện gen của 14- chuột SD tháng tuổi sau khi điều trị trong 1 tháng.

Phương pháp

Vật liệu

Điều chế glycosaminoglycan côn trùng

C. molossus khô được mua ở chợ địa phương ở Trung Quốc; ong vò vẽ (ong chúa Bombus ignitus) được nuôi và đông khô tại Khoa Sinh học Nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Quốc gia, Hàn Quốc. Chondroitin sulfat và tất cả các thuốc thử được cung cấp từ Sigma Aldrich (St. Louis, Mo., Hoa Kỳ).

Mỗi con côn trùng khô nặng một kg (1 kg) được ngâm và chiết xuất ba lần bằng etanol bằng phương pháp siêu xà phòng hóa (Branson, Colorado, MI, Hoa Kỳ) trong 3 0 phút. Phần cặn tách ra khỏi dịch chiết rượu được khử chất béo hai lần bằng 2 thể tích axeton. Khoảng 2 0 0 g bột khô, đã khử chất béo và nghiền thành bột được lơ lửng trong 2 L 0. Đệm natri cacbonat 05 M (pH 9). Hỗn dịch được ủ trong 48 giờ ở 60 độ sau khi thêm 28 ml (1,4 phần trăm) Alcalase (Sigma Aldrich, St. Louis, Mo., Hoa Kỳ). Hỗn hợp phân hủy được làm lạnh đến 4 độ, và axit trichloroacetic được thêm vào nồng độ cuối cùng là 5%. Mẫu được trộn, để yên trong 1 giờ, và sau đó ly tâm trong 30 phút ở 8000 × g (Hanil Science Industrial, Incheon, Hàn Quốc). Ba thể tích kali axetat 5% trong etanol được thêm vào một thể tích phần nổi phía trên. Sau khi trộn, huyền phù được bảo quản qua đêm ở 4 độ và sau đó được ly tâm. Lượng kết tủa lên đến 20 g được hòa tan trong 40 ml NaCl 0,2 M và ly tâm. Cetylpyridinium clorua (5%) được thêm vào 0,2 lần thể tích của phần nổi phía trên, và kết tủa được thu thập bằng cách ly tâm. Kết tủa được hòa tan trong 20 ml NaCl 2,5 M. Năm thể tích etanol được thêm vào, và kết tủa được tách bằng ly tâm. Kết tủa được phân giải trong nước và được thẩm tách với 100 thể tích nước [17], và glycosaminoglycan thô đã thẩm tách được đông khô để thu được khoảng 1,1 g CaG, 4,89 g IQG ở dạng bột. GAG thô được nạp vào cột sắc ký gel DEAE Sephadex A -25 (40 x 1,2 cm) được cân bằng với đệm phosphat 50 mM (pH 7,4). Các phân đoạn được rửa giải bằng cách sử dụng gradient natri clorua tuyến tính từ 0 đến 2,5 M NaCl trong dung dịch đệm phosphat với tốc độ dòng 20 ml / h, và glycan đã thẩm tách được đông khô thành GAG tinh khiết.

Loài vật

Chuột Sprague Dawley (SD) (đực), ở 8- tháng tuổi, được cung cấp từ Samtako Co. Ltd. (Osan, Hàn Quốc). Tất cả các quy trình đều tuân theo Hướng dẫn của NIH về Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm. Tất cả các thí nghiệm đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật Phòng thí nghiệm của Học viện Khoa học Nông nghiệp Quốc gia, RDA, Hàn Quốc (NAAS1503) và tuân theo các hướng dẫn quốc gia về chăm sóc và sử dụng động vật (nhà ở riêng lẻ). Những con chuột đã được thích nghi trong 6 tháng trong điều kiện chăn nuôi bình thường (23 ± 2 độ C, độ ẩm 55 ± 10 phần trăm và chu kỳ sáng / tối 12 giờ) và cho ăn chế độ ăn bình thường (D10001, AIN -76 Chế độ ăn dành cho loài gặm nhấm, Nghiên cứu Diet Inc., New Brunswick, NJ, USA) và công ty quảng cáo nước. Các con chuột 14- tháng tuổi được tách thành 4 nhóm điều trị, mỗi nhóm 10 con và được phân bổ theo trọng lượng tương đương nhau (680,2 ± 9,20 g). Các phương pháp điều trị được thực hiện trong PBS hàng ngày và mỗi phương pháp được sử dụng trong phúc mạc.

Các nhóm đối chứng được đưa ra 5 mg / kg CaG (CaG5), 5 mg / kg IQG (IQG5) và 10 mg / kg CS (CS10) (Sigma Aldrich Co., USA). Mỗi nhóm được duy trì theo chế độ ăn uống bình thường (AIN -76 Chế độ ăn kiêng dành cho loài gặm nhấm, Chế độ ăn kiêng nghiên cứu) và điều trị mẫu trong 1 tháng (Sơ đồ 1).

Trọng lượng mô mỡ

Tỷ lệ mỡ bụng và mỡ mào tinh hoàn trên cơ thể được xác định. Các phép đo là sau khi hy sinh vào cuối thời gian điều trị 1- tháng.

Mật độ tế bào mỡ

Các cơ quan bị cắt bỏ và mô mỡ được cố định 10% formalin trung tính. Sau khi nhúng parafin, chúng được nhuộm bằng hematoxylin và eosin, và Toluidine xanh O, được kiểm tra bằng kính hiển vi ánh sáng (Leica CTR6000, Hesse, Đức) và chụp ảnh. Mật độ tế bào mỡ (tế bào / mm2) được xác định trong mô được điều trị và kiểm soát bằng nhuộm màu xanh lam toluidine O (độ phóng đại ban đầu, x400).

Lấy mẫu máu và xét nghiệm máu, huyết tương, huyết thanh

Trên bốn nhóm có tên CON, CaG5, IQG5, CS10 (n =10), sau 1 tháng điều trị, máu (~ 5 ml) được thu thập từ tĩnh mạch chủ sau khi hít CO2 nhẹ và được sử dụng để đo hóa học huyết thanh. Các thông số được kiểm tra bao gồm phospholipid, axit hyaluronic, axit béo tự do, albumin, phosphatase kiềm (ALP), glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT), lactic dehydrogenase (LDH), CK (creatinine phosphokinase), glucose , triglycerid cholesterol toàn phần, cholesterol HDL, cholesterol LDL, creatinin, nitơ urê máu (BUN), tổng số protein, axit uric và protein phản ứng c (CRP). Tất cả các thông số được đánh giá bằng máy phân tích tự động (máy phân tích lâm sàng tự động Hitachi 7060, Tokyo).

Lấy mẫu máu và xét nghiệm huyết tương để phát hiện hoạt tính chống đông máu

Sau 1- tháng điều trị, khoảng 4 ml huyết tương đã được thu thập từ tĩnh mạch chủ sau dưới cách hít CO2 nhẹ và ly tâm. Phần nổi phía trên được sử dụng cho thời gian đông máu như một thử nghiệm hoạt động chống đông máu: thời gian thromboplastin một phần được kích hoạt (APTT), thời gian thrombin, thời gian prothrombin và yếu tố 1 (fibrinogen) như một xét nghiệm hoạt động tiêu sợi huyết bằng máy phân tích lâm sàng tự động nói trên theo hướng dẫn của Green Cross Lab.

Tổn thương lipid oxy hóa

Để xác định thiệt hại do oxy hóa lipid trong tế bào gan chuột, nồng độ malondialdehyde (MDA) được đo bằng xét nghiệm peroxy hóa lipid sử dụng phương pháp màu liên quan đến các chất phản ứng axit thiobarbituric (TBARS) ở bước sóng 535 nm [18].

Tổn thương protein oxy hóa

Chất nổi đồng nhất ở gan và máu, thu được sau khi ly tâm được sử dụng để xác định hàm lượng cacbonyl. Stress oxy hóa protein được đánh giá bằng cách đo hàm lượng protein carbonyl trong máu. Hàm lượng carbonyl được xác định bằng phương pháp xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzym theo quy trình của nhà sản xuất cho bộ kit OxiSelect ™ protein carbonyl ELISA (Cell Biolabs, Inc., San Diego, CA, USA). Hoạt độ CAT (U / mg protein) được đo dựa trên sự phân hủy H2O2 qua trung gian CAT [19].

Chuẩn bị đồng nhất gan để phát hiện enzym oxy hóa

Khoảng bốn nhóm có tên CON, CaG5, IQG5, CS10, các mô gan được đồng nhất trên đá trong dung dịch chiết xuất protein PRO-PREP ™ có thể tích gấp 10- lần dung dịch chiết xuất protein thể tích gấp 10- (iNtRON, Busan, Korea). Phần nổi trên của gan đồng nhất sau khi ly tâm (800 g, 10 phút) được xét nghiệm tìm catalase, gluta-thione peroxidase, glutathione s-transferase và superoxide

hoạt động của quá trình khử men theo hướng dẫn xét nghiệm (bộ OxiSelect ™ ELISA, Cell BioLabs, InC., San Diego, CA, USA).

Xét nghiệm Cytokine IL -1, IL -6 và IL -10

Trên bốn nhóm có tên CON, CaG5, IQG5, CS10, mức IL - 1 hoặc IL - 6 hoặc IL - 10 trong huyết thanh chuột được xử lý bằng GAG côn trùng được đo bằng bộ dụng cụ Elisa thương mại (Quanti-kine, R&D Systems, Inc. , Minneapolis, MN, USA) tuân theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Chuẩn bị RNA và phân tích PCR thời gian thực định lượng

RNA tổng số được phân lập từ gan bằng thuốc thử TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), nồng độ và độ tinh khiết RNA được đo bằng máy quang phổ UV / Vis (Beckman Coulter Co., Miami, FL, USA). DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ 1 g RNA tổng số bằng cách sử dụng Bộ phiên mã ngược cDNA dung lượng cao (Amersham Biosciences Co., Piscataway, NJ, USA). Khuếch đại phản ứng chuỗi polymerase (PCR) thời gian thực được thực hiện với Power SYBR Green Master Mix sử dụng Hệ thống PCR thời gian thực 7500 (cả hai đều từ Hệ thống sinh học ứng dụng), theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Để phát hiện bản sao gen mục tiêu, chúng tôi đã thiết kế đoạn mồi oligonucleotide thuận và nghịch đặc biệt bằng phần mềm Beacon Designer (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA, USA). Trình tự mồi được liệt kê trong Sơ đồ 2. Mức mRNA mục tiêu được chuẩn hóa bằng cách sử dụng glyceraldehyde 3- phosphate dehydrogenase (GAPDH) như một biện pháp kiểm soát nội bộ để đủ điều kiện biểu hiện tương đối của mRNA đích theo phương pháp ngưỡng chu kỳ. Tất cả các mẫu được phân tích trong ba lần.

Trình tự mồi để khuếch đại các gen liên quan đến cơ chế sửa chữa tế bào và tiêu chuẩn nội GAPDH (Sơ đồ 2).

Quy trình vi mạch DNA

Sau khi phân tích mô bệnh học, quá trình lai microarray được thực hiện trên các mẫu gan [2 0]. RNA tổng số được phân lập từ mô gan bằng Qiagen RNeasy Midi Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). Một bộ ghi nhãn microarray FairPlay ™ (Stratagene, La Jolla, CA, USA) đã được sử dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất. DNA được gắn nhãn đã được tải vào một chip microarray. Một buồng lai tạo được lắp ráp bằng chip microarray, Rat Genome 230 2. 0 Array (Affymetrix Inc., Santa Clara, Hoa Kỳ) và được ngâm trong bể nước qua đêm ở 60 độ. Chip microarray được rửa trong đệm rửa I, rửa đệm II, và sau đó rửa đệm III trong 5 hoặc 15 phút. Trang trình chiếu được làm khô bằng cách ly tâm ở 500 g trong 15 phút và được quét bằng Máy quét mảng BMS, áp dụng đầu đọc Array Worx eBiochip chính xác (BioRad, Dallas, TX, Hoa Kỳ), sử dụng các kênh Cy3 và Cy5 [21].

Phân tích tim chuột cô lập

Những con chuột đực Sprague-Dawley nặng 350 ± 50 g được gây mê bằng pentobarbital (100 mg / kg). Tĩnh mạch đuôi được tiêm heparin (1000 U / kg), sau đó đặt nội khí quản. Trong khi chuột được thông khí cơ học bằng máy thở dành cho loài gặm nhấm (Model 7025; Ugo Basile, Comerio-Varese, Ý), trái tim của chúng được tưới máu tại chỗ bằng đệm bicarbonate Krebs-Henseleit đã được điều chỉnh oxy bằng phương pháp đông cứng động mạch chủ ngược dòng. Sau đó, các trái tim được kích thích và chuyển đến một thiết bị Langendorff (Hugo Sachs Electronik, March-Hugstetten, Đức), nơi chúng được truyền dịch bằng đệm bicarbonate Krebs-Henseleit đã được điều chỉnh oxy với áp suất truyền dịch không đổi là 75 mmHg. Một tâm thất cao su chứa đầy nước được đưa vào qua tĩnh mạch phổi và kết nối với đầu dò áp suất Isotec (Hugo Sachs Electronik) để đo áp lực thất trái (LVP). Trái tim được để cân bằng trong 15 phút, lúc đó áp suất cuối tâm trương thất trái (EDP) được điều chỉnh thành 10 mmHg, và thể tích bóng này được duy trì trong suốt thí nghiệm. Sau đó, chức năng co bóp cơ bản, nhịp tim và lưu lượng mạch vành (thăm dò luồng điện từ ngoài cơ thể; Hệ thống sinh học gây mê, Houston,

TX, Hoa Kỳ) đã được đo. Chức năng co bóp của tim được tính bằng cách trừ LVEDP cho áp lực tâm thu đỉnh LV (LVSP), thu được áp lực phát triển (LVDP). Sau khi cân bằng 1 giờ, các vòng động mạch chủ được xử lý bằng phương tiện (nước muối) hoặc CaG (1 0 ug / ml, 100 ug / ml) 10 phút trước khi gây co thắt bởi phenylephrine 1 μM. Sau đó, sự thư giãn phụ thuộc vào nội mạc được gây ra bởi acetylcholine (0,1–100 μM) [22].

Phân tích thống kê

Phương tiện và sai số tiêu chuẩn của tất cả các thông số được nghiên cứu được xác định cho mỗi nhóm bằng cách sử dụng thử nghiệm ANOVA. Bài kiểm tra t của Học sinh được thực hiện để xác định sự khác biệt đáng kể giữa nhóm đối chứng và nhóm được điều trị. Giá trị p<0.05 was="" considered="">

Kết quả

Thay đổi trọng lượng cơ thể và mỡ thừa

Không có sự khác biệt đáng kể về trọng lượng cơ thể trung bình giữa các nhóm điều trị (Hình 1). Trong thời gian quản lý 1- tháng, trọng lượng cơ thể của chuột đực già là tương đương trong nhóm đối chứng và nhóm được điều trị bằng CaG-, IQG- và CS. Trọng lượng cơ thể trung bình hàng tuần được trình bày trong Hình 2a: CON, 685,16 ± 9,14 g; CaG5, 659,54 ± 14,21 g; IQG5, 646,5 0 ± 11,56 g và CS1 0, 662,93 ± 7,82 g. Số lượng chất béo trung bình ở nhóm IQG5 và CS10 giảm đáng kể so với đối chứng: 21,84 ± 7,46 g đối với đối chứng; 20,66 ± 8,47 g đối với CaG5; 16,56 ± 5,97 g đối với IQG5 (IQG5 so với CON, p <0,05); và="" 16,93="" ±="" 5,17="" g="" đối="" với="" cs10="" (cs10="" so="" với="" con,="" p=""><0,05) (hình="" 2a).="" chất="" béo="" từ="" tuyến="" ức="" cũng="" giảm="" đáng="" kể="" ở="" nhóm="" iqg5="" và="" cs10="" so="" với="" đối="" chứng:="" 10,38="" ±="" 2,58="" g="" đối="" với="" nhóm="" đối="" chứng;="" 8,19="" ±="" 4.="" 00="" g="" đối="" với="" cag5;="" 7.="" 00="" ±="" 1,35="" g="" đối="" với="">

(IQG5 đấu với CON, p <0. 0="" 5);="" và="" 8,56="" ±="" 2,53="" g="" đối="" với="" cs10="" (cs10="" so="" với="" con,="" p=""><0,05) (hình="">

Mật độ tế bào mỡ

Mật độ tế bào mỡ [số tế bào / diện tích (mm2)] của các mô gan chuột được điều trị bằng GAG trong bệnh HFD, được đánh giá bằng phương pháp nhuộm màu xanh lam toluidine, đã giảm bởi CaG5 (33. 00 ± 1,73), IQG5 (45 . 00 ± 4,36) hoặc CS1 0 (26. 00 ± 2,52) (CS10 so với CON, p <0,05) khi so sánh với đối chứng (51. 00 ± 5,29) (Hình 2b).

Huyết áp và nhịp tim thay đổi

Không có sự khác biệt đáng kể về huyết áp (huyết áp tâm thu hoặc nhịp tim) được quan sát thấy giữa nhóm 5 mg / kg CaG-, IQG- hoặc CS và nhóm điều trị (dữ liệu không được hiển thị).

Huyết học và hóa học máu

Một số thay đổi phụ thuộc vào liều đã được quan sát thấy giữa nhóm điều trị và nhóm chứng liên quan đến các thông số huyết học được kiểm tra vào cuối đợt điều trị. APTT (giây) tăng 27,5% ở nhóm được điều trị CaG 5-: CON, 35,68 ± 5,68; CaG5, 45,49 ± 1 0. 91; IQG5, 29,93 ± 3,57; CS1 0, 36,83 ± 23,95 (Hình 3). Thời gian huyết khối (giây) như sau: CON, 40,18 ± 2,04; CaG5, 42,13 ± 3,23; IQG5, 36,15 ± 6,67; CS10, 45,02 ± 21,89. Có một sự gia tăng đáng kể (62,6 phần trăm) trong Yếu tố I (fibrinogen, mg / dL) trong nhóm được điều trị CaG 5-: CON, 429,33 ± 142,22; CaG5, 698,29 ± 120,28 (CaG5 so với CON, p <0,05); iqg5,="" 627,14="" ±="" 160,67;="" cs10,="" 790.="" 00="" ±="" 274,22="" (cs10="" so="" với="" con,="" p=""><0,05). thời="" gian="" prothrombin="" (giây)="" như="" sau:="" con,="" 62.="" 86="" ±="" 47,30;="" cag5,="" 52,71="" ±="" 4,96;="" iqg5,="" 52,14="" ±="" 5,58;="" cs10,="" 55.="" 00="" ±="">

Hóa sinh huyết thanh

Trong huyết thanh của nhóm điều trị IQG và CS (Bảng 1), mức phospholipid (mg / dL) thấp hơn đáng kể so với huyết thanh đối chứng sau 1 tháng ở chuột già: CON, 271,78 ± 91,74; CaG5, 233,67 ± 71. 0; IQG5, 173,2 ± 32. {{2 0}} 2 (IQG5 so với CON, p <0. 05);="" cs10,="" 259,7="" ±="" 57,27="" (cs10="" so="" với="" con,="" p=""><0,05). mức="" axit="" béo="" tự="" do="" (μeq="" l)="" đã="" giảm:="" con,="" 686,78="" ±="" 104,67;="" cag5,="" 431,33="" ±="" 66,22="" (cag5="" so="" với="" con,="" p=""><0,05); iqg5,="" 405,6="" ±="" 63,39="" (iqg5="" so="" với="" con,=""><0.05); cs10,="" 566.9="" ±="" 115.38="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). also,="" serum="" gpt="" (alt)="" levels="" (iu/l)="" in="" the="" cag-="" and="" iqg-="" treated="" groups="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" control="" group="" in="" aged="" rats:="" con,="" 76.33="" ±="" 40.21;="" cag5,="" 36.78="" ±="" 8.0="" iu/l;="" iqg5,="" 43.22="" ±="" 13.86="" (iqg5="" vs.="" con,p="" <="" 0.05);="" cs10,="" 53.44="" ±="" 11.36="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). fur-="" thermore,="" the="" mean="" creatinine="" phosphokinase="" (ck="" u/l)="" level="" in="" the="" cag-treated="" group="" was="" lower="" than="" that="" in="">

nhóm đối chứng ở chuột già: CON, 125,78 ± 91,66; CaG5, 1 {{1 0}} 2,89 ± 65,73 (CaG5 so với CON, p <0. 05);="" iqg5,="" 91,22="" ±="" 24,74;="" cs10,="" 131,2="" ±="" 62,56.="" đường="" huyết="" trung="" bình="" (mg="" dl)="" giảm="" đáng="" kể="" ở="" chuột="" già="" (mỗi="" nhóm="" so="" với="" con,="" p=""><0,05): con,="" 435,11="" ±="" 105,42;="" cag5,="" 304,0="" ±="" 44,44;="" iqg5,="" 275,9="" ±="" 43,18;="" cs10,="" 317,8="" ±="">

Mức cholesterol toàn phần trung bình (mg / dl) ở nhóm được điều trị bằng IQG thấp hơn ở nhóm đối chứng ở chuột già, và sự khác biệt đó cũng có ý nghĩa: CON, 212,67 ± 92,82; CaG5, 181,44 ± 68,4; IQG5, 124,1 ± 23,6 (IQG5 so với CON, p <0. 05);="" cs10,="" 198,9="" ±="">

Ngoài ra, mức chất béo trung tính (mg / dL) như sau: CON, 2 0 7,89 ± 1 0 1,95; CaG5, 136,22 ± 61,6; IQG5, 1 0 3,3 ± 35,59 (IQG5 so với CON, p <0. 0="" 5);="" cs10,="" 183,4="" ±="" 104,74.="" mức="" cholesterol="" ldl="" (mg="" dl)="" giảm:="" con,="" 74,67="" ±="" 44,91;="" cag5,="" 69,0="" ±="" 31,3;="" iqg5,="" 41,44="" ±="" 10,14="" (iqg5="" so="" với="" con,="" p=""><0,05); cs10,="" 65,22="" ±="" 18,52.="" nồng="" độ="" acid="" uric="" (mg="" dl)="" giảm="" đáng="" kể="" được="" thấy="" ở="" tất="" cả="" các="" nhóm="" được="" điều="" trị="" bằng="" gag="" so="" với="" nhóm="" chứng="" (mỗi="" nhóm="" so="" với="" con,="" p=""><0,05): con,="" 10,9="" ±="" 2,26;="" cag5,="" 8,12="" ±="" 1,48;="" iqg5,="" 6,49="" ±="" 0,89;="" cs10,="" 8.14="" ±="" 2.17,="" bảng="">

Giảm thiệt hại do oxy hóa

Malondialdehyde (MDA, nmol / ml) được xét nghiệm sau 1 tháng của mỗi lần xử lý GAG [CON, 252,9 ± 13,1; CaG5, 175,1 ± 5,8 (giảm 30,32 phần trăm). Mỗi lần điều trị GAG và chondroitin sulfat làm giảm quá trình peroxi hóa lipid trong tế bào gan (Hình 4a). Nồng độ protein carbonyl trong máu đã giảm với tỷ lệ lần lượt là 68,52 phần trăm, 36,89 phần trăm và 53,70 phần trăm ở GaG5, IQG5 và CS10 (Hình 4b). Tuy nhiên, mỗi GAG không có sự khác biệt thống kê so với đối chứng về hàm lượng car- bonyl tế bào gan (dữ liệu không được hiển thị).

Định lượng enzyme oxy hóa (catalase, GPx, GST, SOD)

Hoạt độ catalase (mg protein / phút) trong tế bào gan sau 1 tháng điều trị GAG như sau: CON, 17,72 ± 2,81; CaG5, 19,87 ± 3,88; IQG5, 17,22 ± 4,55; CS1 0, 19,23 ± 3,55. Hoạt động của catalase trong tất cả các nhóm tế bào gan được xử lý CaG đều tăng lên. Super oxide dismutase (SOD) là một loại enzyme thu gom gốc tự do (siêu oxit). Hoạt độ SOD (nmol / phút / ml) tăng ở các nhóm điều trị so với đối chứng: đối chứng, 381,44 ± 85,32; CaG5, 4 0 0,56 ± 60,62; IQG5, 386,72 ± 69,22; CS10, 513,05 ± 60,07. Hoạt động của glutathione peroxidase (đơn vị / mg protein) trong nhóm tế bào gan được xử lý bằng CaG đã tăng lên đáng kể khi xử lý (CaG5 so với CON, p <0,05), và="" hoạt="" động="" của="" glutathione="" s-transferase="" (nmol="" phút="" ml)="" trong="" nhóm="" cag="" cũng="" tăng="" đáng="" kể="" so="" với="" nhóm="" chứng="" (cag5="" so="" với="" con,="" p=""><0,05) (bảng="">

Sản xuất Cytokine IL -1 và IL -10

Tăng mức IL -10 đã được quan sát thấy trong nhóm được điều trị bằng CaG. Nồng độ IL -1 (ρg / ml) trong huyết thanh đã giảm đi 1

Bảng 1 Kết quả huyết thanh học của chuột già được điều trị bằng CaG hoặc IQG trong 1 tháng

tháng điều trị CaG hoặc IQG, thể hiện các hoạt động chống viêm tương ứng: kiểm soát, 251,3 ± 7 0. 7; CaG5, 102,9 ± 9,5; IQG5, 110,4 ± 5,2; CS10, 110,4 ± 10,1 (mỗi nhóm so với CON, p <0,05). hoạt="" độ="" il="" -10="" (ρg="" ml)="" sau="" 1="" tháng="" điều="" trị="" cag="" ở="" chuột="" đã="" tăng="" lên:="" con,="" 34,9="" ±="" 11,5;="" cag5,="" 67,4="" ±="" 13,3="" (cag5="" so="" với="" con,=""><0.05); iqg5,="" 55.5="" ±="" 24.7;="" cs10,="" 28.0="" ±="" 3.8="" (fig.="" 5).="" the="" il-10="" levels="" in="" the="" cs10="" group,="" was="" statistically="" different="" from="" that="" in="" the="" con="" group="" (cs10="" vs.="" con,p=""><>

Biểu hiện gen bằng phân tích PCR thời gian thực định lượng

The data represented that PCR cycle required number (Ct value) when the concentration of PCR amplicon are equilibrated by sample amplicon. Median CT values of 5 sample's represented, but there was no difference from the control group (Ct vale >2. 0) trên trình tự mồi đã sử dụng (dữ liệu không được hiển thị).

DNA microarray

Phân tích microarray bằng cách sử dụng mảng sao chép cDNA Mouse 28 K được thực hiện để xác định cấu hình biểu hiện gen trong gan chuột SD 15- tháng tuổi được xử lý bằng CS và để cung cấp thông tin về khả năngchống lão hóacác điểm đánh dấu.

So với nhóm đối chứng, nhóm CaG5 thể hiện sự gia tăng gấp 2- đến 4- 118 gen, tăng 4- 8- lần 11 gen và nhiều hơn 8- lần tăng 2 gen. Mức độ biểu hiện của ~ 30, 000 gen còn lại được giữ nguyên. Sáu mươi gen đã được điều chỉnh giảm từ 2- xuống 4- lần và 4 cho thấy giảm 4- đến {14}} lần.

Ở nhóm IQG5 so với nhóm đối chứng, 162 gen tăng từ 2- lên 4- lần, 10 gen tăng từ 4- lên 8- lần và 3 gen tăng lên nhiều hơn 8- lần. Mặt khác, 66 đã được điều chỉnh giảm 2- xuống 4- lần đầu tiên và 7 lần được giảm 4- xuống 8- lần.

Bảng 2 Hoạt động của enzym chống oxy hóa của glycosaminoglycan bọ phân trong gan chuột già

Ở nhóm CS10 so với nhóm đối chứng, 63 gen được điều chỉnh tăng 2- lên 4- lần, 2 gen tăng 4- lên 8- lần và 2 gen được điều hòa gấp hơn 8- lần. Ba mươi tám gen giảm điều hòa từ 2- đến 4- lần, 4 gen giảm điều hòa từ 4- đến 8- lần và 4 gen giảm hơn 8- lần.

Khi so sánh với nhóm đối chứng, gen lipocalin2 (Lcn2) đã tăng lên khoảng 10- lần trong mô gan được xử lý CaG 5-, 46- lần ở nhóm IQ5 và {{6} } gấp trong nhóm CS1 0. Trong các mô gan của chuột được điều trị bằng CaG 5-, lysil oxidase (Lox) được điều hòa giảm theo tỷ lệ 0,13, tức là, biểu hiện gen đã giảm. Nhóm chuột được xử lý CaG5, so với đối chứng, cho thấy 131 gen bao gồm lipocalin 2, protein liên kết oligosaccharide (Lbp) và chất ức chế serine peptidase, Kaszal type3 (Spink3) được điều chỉnh (Bảng 3) và 64 gen bao gồm lysyl oxidase (Lox), serine mất nước (sds) và retinol bão hòa (Retreat) được điều chỉnh giảm (Bảng 4). Nhóm được xử lý CaG 5-, so với nhóm đối chứng, biểu hiện sự điều hòa lên đến 131 gen, bao gồm lipocalin 2, protein liên kết oligosaccharide (Lbp) và chất ức chế serine peptidase Kaszal loại 3 (Spink3) (Bảng 3 ) và điều hòa giảm 64 gen, bao gồm lysyl oxidase (Lox), serine mất nước (sds), và retinol bão hòa (Retsat) (Bảng 4). Những dữ liệu này chỉ ra lipocalin 2 và adipokine, là gen điều chỉnh và lysyl oxidase (liên quan đến heparanase), là gen điều hòa, là các dấu hiệu điều trị tiềm năng có tác dụng chống lão hóa và béo phì

Đặc tính của CaG

Các thành phần của amino, axit và mono-saccharide trung tính của GaG được xác định bằng GC-MS (Bảng 5). Các monosaccharide amin chính của CaG theo thứ tự sau: D-glucosaminic acid> N-acetyl-galactosa- mine> N-acetyl-D-gactosaminitol> galactosamine HCl> galactosaminic acid> galactosamine> glucuronic acid. Ngoài ra, các monosaccharide trung tính được tìm thấy trong CaG chủ yếu là - glucose và mannitol, trong khi các monosaccharide nhỏ bao gồm arabinose và rhamnose.

Các chỉ số của bảo vệ tim mạch

Trong thí nghiệm này, chúng tôi mô tả tác động trực tiếp của CaG lên các động mạch cản bằng cách sử dụng các mạch được ủ trong ống nghiệm với sự co lại do phenylephrine gây ra và sự giãn ra do acetylcholine. CaG được đánh giá là một chất bảo vệ tim mạch. Đường cong nồng độ-đáp ứng đối với CaG đã bị dịch chuyển xuống dưới so với đường cong được thấy sau khi điều trị kiểm soát (chỉ PBS), cho thấy rằng kích thích tim xảy ra theo cách phụ thuộc vào nồng độ (Hình 6).

Thảo luận

Lão hóa là một quá trình suy giảm dần dần về năng lực vật lý-logic của một sinh vật, biểu hiện bằng những thay đổi tích lũy và sự mất ổn định ở cấp độ toàn bộ hệ thống [13]. Glycosaminoglycan được cho là làm giảm các tác động có hại của quá trình lão hóa bằng cách ngăn ngừa sự phá hủy sụn, xương, đĩa đệm, da [23], hệ thống mạch máu [8], v.v. Gần đây, một loại GAG làm vật liệu đa chức năng, polyurethane gốc heparin hoặc là hiện được coi là một trong những chất tương thích sinh học và tương thích máu đã được thiết lập

vật liệu sinh học cung cấp mối quan hệ cấu trúc-tính chất to lớn như cố định heparin trên các mảnh ghép polyurethane biến tính chitosan với các đặc tính chống dính và kháng khuẩn [24]. Ngày nay, sự ra đời của kiểm soát nhiệt độ đã giúp cho việc thiết kế các hệ thống nuôi côn trùng quy mô lớn trở nên khả thi. Do đó, glycosaminoglycan

có thể được lấy từ vỏ côn trùng dưới dạng cặn chiết xuất từ ​​cồn. Các loại thuốc thô như bọ phân và ong chúa B. ignitus đã được nghiên cứu trong nỗ lực xác định các thành phần hoạt tính của chúng hoặc để làm cho các chất chiết xuất an toàn hơn cho con người. Bọ phân C. molossus đã được tinh chế để tạo ra các chất dime N-acetyl- dopamine, molossusamide AC (1–3), cho thấy

Hoạt động ức chế COX -1 và COX -2 [25]; chitosan [26]; hắc tố [27]; và serine protease [9, 28]. Chiết xuất từ ​​ong vò vẽ (Bombus ignitus) đã được chứng minh là có chứa serine protease từ nọc ong [29], peroxiredoxins [30], và protein nhận dạng peptidoglycan (PGRP-S) [31].

Các chiến lược để ngăn ngừa hoặc trì hoãn lão hóa bao gồm việc tiêu thụ chất chống oxy hóa để sửa chữa các tổn thương tế bào bị oxy hóa đối với DNA, protein và lipid, cũng như tái tạo mô qua trung gian tế bào gốc và liệu pháp gen [32]. Là một dấu hiệu tổn thương oxy hóa lipid trong các trạng thái stress oxy hóa lipid tế bào gan, malondialdehyde đã giảm khi điều trị bằng CaG. Ngoài ra, hàm lượng carbonyl trong máu, đặc biệt là bạch cầu trung tính, đã giảm khi điều trị bằng CAG và cho thấy việc sửa chữa các tổn thương protein oxy hóa tế bào.

Glycosaminoglycans từ C. molossus và B. ignitus Queen bao gồm chủ yếu là axit D-glucosaminic như một monosaccharide có tính axit và N-acetyl-galactosaminitol là một amin

monosaccharide, cùng với -glucose và D-mannitol là monosaccharide trung tính. Do đó, hợp chất này có thể tiếp cận các thụ thể của màng tế bào và có thể ngăn ngừa nguyên nhân của các bệnh liên quan đến tuổi tác bằng cách thay đổi quá trình chuyển hóa năng lượng. Glycosami- noglycans có thể sửa chữa các mô liên kết [23], tuổi cartil, đĩa đệm, xương và glycoprotein bị ăn mòn ở cấp độ phân tử, với GAG tạo thành liên kết giữa các protein [9]. Trong trường hợp này, những con chuột được sử dụng đã già và nặng khoảng 680 g, do đó, sẽ không dễ dàng để giảm trọng lượng cơ thể, nhưng chúng tôi đã quan sát thấy trọng lượng mỡ và số lượng tế bào mỡ giảm dần. Như với hầu hết các glycosamino-glycans, CaG và IQG làm giảm nồng độ huyết thanh của các thông số liên quan đến viêm: axit béo tự do, AST (SGPT), creatinine kinase (liên quan đến chức năng tim), glu-cose, axit uric và tăng đường huyết liên quan mức độ: cholesterol, toàn phần, triglycerid, cholesterol LDL, vv Mức độ axit béo tự do (gan nhiễm mỡ liên quan) của các nhóm được điều trị đã giảm đáng kể về mặt thống kê, 36,7% ở nhóm CaG và 40,94% ở nhóm IQG. Ngoài ra, mức sGPT (chức năng gan liên quan) đã giảm đáng kể, 51,58% ở nhóm CaG và 43,38% ở nhóm IQG.

Dữ liệu được tạo ra từ phân tích microarray DNA đã hỗ trợchống lão hóaảnh hưởng của IQG, với những thay đổi có ý nghĩa trong cấu hình biểu hiện gen ở chuột SD 14- tháng tuổi được quan sát thấy sau thời gian điều trị 1- tháng. Những con chuột được điều trị bằng CaG 5-, so với nhóm đối chứng, có sự gia tăng 131 gen, bao gồm lipocalin 2 [33], protein liên kết lipo-saccharide (Lbp) [34], và chất ức chế men pep-tidase, Kazal type3 (Spink3) [35] và giảm ở 64 gen, bao gồm lysyl oxidase (Lox) [36], serine mất nước (sds) [37], và retinol saturase (Retsat) [38]. Điểm dữ liệu cho lipocalin 2 và adipokine, được điều chỉnh tăng và lysyl oxidase (liên quan đến heparanase), được điều chỉnh thấp, là dấu hiệu điều trị tiềm năng chochống lão hóaảnh hưởng ở động vật béo phì.

Nghiên cứu hiện tại đã quan sát thấy những thay đổi có ý nghĩa trong hồ sơ biểu hiện gen ở chuột già sau khi điều trị bằng CaG hoặc IQG trong 1 tháng. Sự biểu hiện gen của lipocalin -2, là một adipokine có liên quan đến kháng insulin [39] và một protein bài tiết có ưu điểm liên kết với lipid, đã tăng lên khoảng 1 0 lần. Điều này phù hợp với một nghiên cứu microarray báo cáo rằng việc ăn đậu nành gây ra sự gia tăng amyloid- chaperone nội sinh, loại lipocalin loại prostaglandin D2 synthase (Ptgds), dẫn đến ức chế amyloid- và ngăn ngừa rối loạn chức năng nhận thức [4 {{{ 22}}]. Protein liên kết lipopolysaccharide (LPS) (LBP), một dấu hiệu đại diện cho sự chuyển vị của vi sinh vật, có liên quan đến việc giảm chức năng thể chất và tăng viêm [41]. Quá trình lão hóa bình thường làm thay đổi hệ thống đông máu ở người; Thuốc chống đông máu tự nhiên, bao gồm anti-thrombin III, heparin cofactor II, protein C, protein S, và chất ức chế con đường yếu tố mô, có thể điều chỉnh các phản ứng của hệ thống đông máu [42]. Trong nghiên cứu này, đã có sự gia tăng đáng kể yếu tố I (fibrinogen) trong CaG (162,6 phần trăm), IQG (146,0 phần trăm) và CS10 (184,0 phần trăm) - các nhóm được điều trị khi so sánh với nhóm được điều trị bằng PBS. Ngoài ra, mức độ LBP (protein liên kết LPS) đã được điều chỉnh trong dữ liệu microarray DNA của chúng tôi, cho thấy rằng heparin (GAG) liên kết với LBP, tạo điều kiện thuận lợi cho việc chuyển LPS thành CD14 và tăng cường hoạt hóa qua trung gian LPS của bạch cầu đơn nhân máu ngoại vi, dẫn đến hoạt tính chống đông máu [43]. Một chất ức chế trypsin, chất ức chế serine protease Kazal-type 3 (Spink3), đã được nghiên cứu trong thí nghiệm này, cho thấy vai trò của điều chế paracrine; nó cũng tham gia vào quá trình cấy phôi [44]. Vì Spink3 là một chất ức chế serine protease quan trọng, nên sự điều hòa lên của nó có thể phản ánh một cơ chế tế bào nội sinh quan trọng có thể ngăn ngừa tổn thương thêm [45]. Sự điều hòa giảm của lysyl oxidase có thể chỉ ra rằng heparin (GAG) ức chế liên kết chặt chẽ của lysyl oxidase với các sợi hình thành trước hầu như không bị ảnh hưởng [46]. Sự điều hòa giảm của retinol bão hòa được thấy trong thí nghiệm này là đáng chú ý, vì retinol saturase thúc đẩy sự hình thành mỡ và được điều chỉnh giảm ở bệnh béo phì [47]. Theo một giả thuyết, mật độ mô mỡ, một dấu ấn sinh học mới dự đoán nguy cơ tử vong ở người lớn tuổi mà dường như không liên quan đến viêm [48], hơn nữa, CaG làm giảm mật độ mô mỡ đáng kể hứa hẹn một khả năngchống lão hóađại lý.

Kết luận

Glycosaminoglycan trong bọ hung làm giảm nồng độ cholesterol và triglycerid trong huyết thanh, làm giảm trọng lượng mô mỡ và bình thường hóa nồng độ acid béo tự do, GPT, glucose và acid uric trong huyết thanh, đồng thời kéo dài thời gian đông máu, ngăn chặn sự kết tụ của máu và lipid tích tụ trong các hàng rào nội mô mạch máu góp phần cân bằng nội môi trong hệ tuần hoàn. IL {{0}} (pg / ml) trong huyết thanh đã giảm sau 1 tháng điều trị bằng CaG hoặc IQG, tác dụng chống viêm của quỷ. Ngoài ra, gen bảo vệ gan lipocalin được tăng cường (10- lần) và lysyl oxidase được điều hòa (0. 1- lần) ở chuột được điều trị bằng CaG. CaG có nguồn gốc từ côn trùng có thể là một

thay thế an toàn hơn cho heparin và các GAG khác từ các nguồn động vật có vú, vì các nguồn côn trùng làm giảm khả năng lây truyền vi rút truyền nhiễm từ động vật như lợn. Những kết quả này cho thấy rằng CaG và BIQ không chỉ có thể là tự nhiênchống lão hóamà còn là thực phẩm chức năng, tương tự như chitosan và các chất sinh học trong tương lai, đóng vai trò quan trọng trong cuộc sống hàng ngày của chúng ta.

Các từ viết tắt

ALP: Phosphatase kiềm; ALT (GPT): Glutamate pyruvate transaminase; aPTT: Thời gian thromboplastin từng phần được kích hoạt; AST (GOT): Glutamate oxaloacetate transaminase; BUN: Nitơ urê máu; CaG 5: Bọ hung (Catharsius molossus) glycosaminoglycan 5 mg / kg; CK: Creatinin phosphokinase; CON: Nhóm điều khiển; CRP: Protein phản ứng C;

CS10: Chondroitin sulfat (10 mg / kg); GAG: Glycosaminoglycan; GGT: - glutamyl transferase; H. Chol: Chol cholesterol cao; IQG5: Queen of Bombus ignitus (một loại ong vò vẽ) glycosaminoglycan 5 mg / kg; l.Chol: Cholesterol thấp; LDH: Lactate dehydrogenase; PT: Thời gian prothrombin; T. Chol: Chol toàn phần; TG: Triglycerid

Sự nhìn nhận

Các tác giả thừa nhận Viện Khoa học Nông nghiệp Quốc gia về tài chính (RDA, PJ011853) và hỗ trợ kỹ thuật.

Kinh phí

Công việc này được hỗ trợ bởi dự án Nghiên cứu Cơ bản của Cục Quản lý Phát triển Nông thôn, PJ011853.

Sự sẵn có của dữ liệu và vật liệu

Tất cả dữ liệu có sẵn trên các cổng của Tạp chí trong bản thảo đã gửi. Không cần tệp / dữ liệu hỗ trợ nào khác cùng với nội dung gửi này.

Lợi ích cạnh tranh

Nhiều tác giả tuyên bố rằng họ không có hứng thú với việc cạnh tranh.

Tác giả đóng góp

MY đã thực hiện hầu hết các thí nghiệm, chuẩn bị bản thảo: hình thành nghiên cứu, tham gia thiết kế và điều phối nó, thu thập và phân tích dữ liệu, và chuẩn bị bản thảo. BJ đã thực hiện các nghiên cứu trên động vật, tham gia vào thử nghiệm enzym liên quan đến quá trình oxy hóa. HJ thực hiện các xét nghiệm cytokine. JS đã tham gia vào quá trình sắp xếp trình tự gen. KK đã tham gia vào DNA microarray. YS đã thực hiện nghiên cứu in vivo về khả năng đáp ứng của động mạch đề kháng. Tất cả các tác giả đã đọc và duyệt bản thảo cuối cùng.

Đồng ý xuất bản

Bản thảo này không chứa bất kỳ dữ liệu cá nhân nào dưới bất kỳ hình thức nào.

Phê duyệt đạo đức

Các nghiên cứu liên quan đến động vật đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật Phòng thí nghiệm của Học viện Khoa học Nông nghiệp Quốc gia, RDA, Hàn Quốc (NAAS1503).

Bản thảo báo cáo các nghiên cứu không có người tham gia, dữ liệu người hoặc mô người.

Ghi chú của nhà xuất bản

Springer Nature vẫn giữ thái độ trung lập đối với các tuyên bố về quyền tài phán trong các bản đồ đã xuất bản và các tổ chức liên kết.

Chi tiết tác giả

1 Phòng Sinh học Nông nghiệp, Học viện Khoa học Nông nghiệp Quốc gia, Cục Quản lý Phát triển Nông thôn (RDA), Wanju-Gun 55365, Hàn Quốc. 2 Đại học Dược, Đại học Ajou, Suwon 442-749, Hàn Quốc. 3Pharmacogenechips Inc., Chuncheon 200-160, Hàn Quốc.