Cistanche Glycoside Rg1 cải thiện quá trình xơ hóa gan do lão hóa bằng cách ức chế NOX4/NLRP3 Inflammasome ở chuột SAMP8 Ⅱ

Hình 4. Ảnh hưởng của điều trị Rg1 đối với việc sản xuất ROS ở gan chuột SAMP8. (A) Tích lũy sản xuất ROS trong gan được đo thông qua huỳnh quang DHE và nhuộm Hoechst 33258 (Thanh tỷ lệ, 20 Pha; Độ phóng đại, x400). ( B ) Mật độ trung bình của sản xuất ROS (huỳnh quang đỏ) trong gan. Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± SD; n=3. **P<0.01 vs. SAMR1; ##P<0.01 vs. SAMP8. Rg1, Cistanche glycoside Rg1; SAMP8, senescence‑accelerated mouse prone 8; SAMR1, senescence‑accelerated resistant mouse 1; DHE, dichloroethylene. 

Phương pháp điều trị Rg1 điều chỉnh giảm mức độ biểu hiện của NLRP3, ASC, caspase‑1 và IL‑1 trong gan của chuột SAMP8. Đã có báo cáo rằng việc kích hoạt NLRP3nóng nảyđóng một vai trò quan trọng trongxơ hóa thận liên quan đến lão hóa(42). Do đó, nghiên cứu hiện tại đã điều tra thêm mức độ biểu hiện của các protein liên quan đến NLRP3 để xác nhận xem liệu dòng siêu nhỏ NLRP3 có liên quan đến quá trình xơ hóa gan do tuổi tác hay không. Kết quả cho thấy mức độ biểu hiện của NLRP3, ASC, caspase‑1 và IL‑1 trong các mô gan được điều chỉnh tăng đáng kể ở nhóm SAMP8 so với nhóm SAMR1 (Hình 6A‑E). So với nhóm SAMP8, các nhóm điều trị tempol, apocynin và Rg1 (5 và 10 mg/kg) có mức độ biểu hiện NLRP3, ASC, caspase‑1 và IL‑1 được điều hòa giảm đáng kể trong mô gan của chuột SAMP8 (Hình 6A ‑E). Nhuộm hóa mô miễn dịch đã được thực hiện để đo mức độ biểu hiện của NLRP3 trong các mô gan. Các kết quả phù hợp với biểu thức của NLRP3 được đo bằng cách sử dụng phương pháp làm mờ phương Tây. Sự biểu hiện của NLRP3 đã được điều chỉnh tăng đáng kể trong gan của nhóm SAMP8 so với nhóm SAMR1 (Hình 7A và B), và phương pháp điều trị tempol, apocynin và Rg1 (5 và 10 mg/kg) đã điều chỉnh giảm đáng kể mức độ biểu hiện của NLRP3 ( Hình 7A và B). Những kết quả này cho thấy rằng việc kích hoạt hồng cầu NLRP3 có thể liên quan chặt chẽ đến quá trình xơ hóa gan trong quá trình lão hóa và Rg1 có thể cải thiện tình trạng xơ hóa gan bằng cách ức chế sự kích hoạt của hồng cầu NLRP3. NF-κB và p-NF-κB được đo trong các mô gan bằng phương pháp Western blot. Kết quả cho thấy rằng không có sự khác biệt đáng kể về mức độ biểu hiện của NF‑κB giữa các nhóm (Hình 8A và B). Tuy nhiên, mức độ biểu hiện của p‑NF‑κB đã tăng đáng kể ở nhóm SAMP8 so với nhóm SAMR1 (Hình 8A và C), và cách xử lý tempol, apocynin và Rg1 (5 và 10 mg/kg) đã điều chỉnh giảm đáng kể biểu hiện mức p‑NF‑κB/NF‑κB so với nhóm SAMP8 (Hình 8A và C). Kết quả cho thấy Rg1 có thể ức chế tình trạng viêm ở gan trong quá trình lão hóa bằng cách giảm quá trình phosphoryl hóa NF-κB.

Hình 7. Ảnh hưởng của điều trị Rg1 đối với mức độ biểu hiện của NLRP3 trong gan của chuột SAMP8. (A) Biểu hiện của NLRP3 trong gan (Thanh tỷ lệ, 50 Pha; Độ phóng đại, x400). (B) Mật độ trung bình của vùng bắt màu dương tính với NLRP3 trong gan. Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình ± SD; n=4.**P<0.01 vs. SAMR1;#P<0.05, ##P<0.01 vs. SAMP8. Rg1, Cistanche glycoside Rg1; SAMP8, senescence‑accelerated mouse prone 8; SAMR1, senescence‑accelerated resistant mouse 1;NLRP3, miền pyrin họ NLR chứa 3.

Sự lão hóacó thể thúc đẩyrối loạn chức năng của nhiều cơ quan, chẳng hạn như gan, thận và não (43). Lão hóa đã được chứng minh là làm tăng tính nhạy cảm với viêm gan hoặc xơ hóa(5). Lxơ hóa gan phá hủy cấu trúc của gan, dẫn đếnmất tế bào gan và rối loạn chức năng gan, cuối cùng dẫn đến suy gan (44). Tuy nhiên, cáccơ chế củaTổn thương gan do lão hóa và xơ hóavẫn chưa rõ ràng và không có thuốc hiệu quả chođiều trị xơ gan liên quan đến lão hóa. Do đó, điều quan trọng là tìm hiểu cơ chế lão hóa của gan và tìm ra các loại thuốc thích hợp để ngăn ngừa tổn thương gan và xơ hóa ngay từ khi còn nhỏ để giảm tỷ lệ mắc bệnh.bệnh gan liên quan đến tuổi tác. 

Bổ sung chống lão hóa Cistanche để bán

Rg1, một trong những thành phần hoạt động chính của cistanche, trước đây đã được nghiên cứu về đặc tính chống viêm và chống oxy hóa của nó và được phát hiện là có tác dụng bảo vệ gan (45). Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng Rg1 có thể ức chế sự biến đổi của các tế bào hình sao ở gan thành nguyên bào sợi cơ và ức chế quá trình xơ hóa gan ở chuột do CCl 4 gây ra (45,46). Nghiên cứu trước đây của chúng tôi chỉ ra rằng điều trị Rg1 (5 và 10 mg/kg) cải thiện đáng kể tổn thương thận do lão hóa và xơ hóa ở chuột SAMP8 (35). Nghiên cứu hiện tại được thiết kế để nghiên cứu tác dụng và cơ chế của phương pháp điều trị Rg1 (5 và 10 mg/kg) đối với tổn thương gan liên quan đến lão hóa và xơ hóa ở chuột SAMP8 trong quá trình lão hóa. Kết quả chỉ ra rằng điều trị Rg1 (5 và 10 mg/kg) có thể bảo vệ chống lại tổn thương gan do lão hóa và xơ hóa, đặc biệt là nhóm Rg1 (10 mg/kg). Những kết quả này cũng phát hiện ra rằng sự sắp xếp của các tế bào gan là bất thường và rối loạn và hầu hết các tế bào dường như bị thoái hóa giống như không bào ở nhóm SAMP8, trong khi điều trị Rg1 cho thấy sự cải thiện đáng kể về mô bệnh học gan. Ngoài ra, kết quả đã phát hiện ra rằng tín hiệu gây sốt NOX4/NLRP3, có liên quan chặt chẽ với tổn thương gan do tuổi tác và xơ hóa gan (20), đã bị ức chế đáng kể khi điều trị bằng Rg1 (5 và 10 mg/kg), đặc biệt là ở Rg1 ( 10 mg/kg) nhóm. Những kết quả này gợi ý rằng điều trị Rg1 có thể có hiệu quả trong việc ngăn ngừa tổn thương và xơ hóa liên quan đến tuổi tác theo cách phụ thuộc vào liều lượng, có thể bằng cách ức chế NOX4 và dòng siêu nhỏ NLRP3.

Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng lão hóa là một yếu tố quan trọng có liên quan chặt chẽ với sự hình thành và tiến triển của xơ hóa gan (5,47); tuy nhiên, hiện tại thiếu các lựa chọn điều trị hiệu quả. cistanche là một trong những sản phẩm tự nhiên được sử dụng rộng rãi nhất do có nhiều tác dụng dược lý và hoạt tính sinh học có thể làm chậm quá trình lão hóa (48). Thành phần hoạt chất, Rg1, đã được báo cáo là có tác dụng bảo vệ tế bào HSC-T6 do TGF gây ra và xơ gan do CCl 4 gây ra ở chuột Côn Minh đực (31). Trong nghiên cứu hiện tại, kết quả chỉ ra rằng các mô gan bị tổn thương đáng kể và có dấu hiệu xơ hóa ở chuột SMP8 8 tháng tuổi, chẳng hạn như rối loạn sắp xếp tế bào, thoái hóa không bào và lắng đọng collagen IV ngoại bào dư thừa, có một số điểm tương đồng với những phát hiện của Dumeus et al (49).

Đáng chú ý, điều trị Rg1 trong 9 tuần đã được phát hiện là làm giảm đáng kể tổn thương gan và tích tụ ma trận ngoại bào ở chuột SAMP8. Trước đây người ta đã chứng minh rằng TGF-1 thúc đẩy quá trình xơ hóa gan thông qua quá trình phosphoryl hóa Smad2 (p-Smad2) và tổng hợp collagen, đồng thời làm cạn kiệt TGF-1 có thể làm giảm quá trình xơ hóa gan (50). Trong nghiên cứu hiện tại, kết quả đã chứng minh rằng điều trị bằng Rg1 làm giảm đáng kể biểu hiện của TGF‑1 trong gan của chuột SAMP8. Tempol là một chất nhặt rác oxy hoạt động, đã được báo cáo là làm giảm quá trình sản xuất ROS trong các tế bào thần kinh hồi hải mã được điều trị bằng H 2O2 do khả năng nhặt rác ROS của nó (51). Apocynin thường được sử dụng như một chất ức chế NADPH oxidase, và nó đã được chứng minh là có tác dụng chống oxy hóa rõ rệt đối với nhiều loại bệnh ở hệ thần kinh trung ương, bao gồm bệnh Parkinson và bệnh Alzheimer (52‑54).

Nghiên cứu hiện tại cũng chứng minh rằng tempol và apocynin có tác dụng bảo vệ tương tự đối với tổn thương gan do lão hóa. Những dữ liệu này gợi ý rằng điều trị Rg1 có thể bảo vệ đáng kể chống lạiTổn thương gan do lão hóa và xơ hóaở chuột già.

Những kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây (35) và hỗ trợ thêm cho vai trò của dòng siêu nhỏ NLRP3 trong việc xuất hiện tổn thương gan liên quan đến lão hóa ở chuột SAMP8 (78). Sự cải thiện tình trạng viêm và ức chế kích hoạt hồng cầu NLRP3 đã được quan sát thấy có tác dụng bảo vệ các cơ quan đích (76).

Tương tự như vậy, nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng việc điều trị bằng tempol, apocynin và Rg1 đã điều chỉnh giảm đáng kể mức độ biểu hiện của IL-1 , ASC, caspase-1 và NLRP3 trong các mô gan của chuột SAMP8. Ai cũng biết rằng họ yếu tố phiên mã NF‑κB là yếu tố điều chỉnh trung tâm của quá trình viêm (79). Quá trình phosphoryl hóa NF‑κB ở serine 536 được cho là cần thiết để kích hoạt NF‑κB và chuyển vị hạt nhân (80). Đã có báo cáo rằng việc ức chế chọn lọc hoạt động của NF-κB có thể ức chế quá trình xơ hóa gan do CCl4 gây ra (81). Trong nghiên cứu này, kết quả cho thấy rằng sự biểu hiện của p-NF-κB, yếu tố thúc đẩy sự hình thành thể siêu nhỏ NLRP3, đã được điều chỉnh tăng đáng kể trong các mô gan của chuột già và giảm đáng kể sau khi điều trị bằng Rg1 trong 9 tuần ở chuột SAMP8.

Nhìn chung, những phát hiện này chỉ ra rằng dòng siêu nhỏ NLRP3 có thể là một mục tiêu quan trọng và có liên quan chặt chẽ đến tổn thương gan do lão hóa. Hơn nữa, việc ức chế dòng siêu nhỏ NLRP3 có thể là một cơ chế cơ bản quan trọng của Rg1 trong việc ngăn ngừa tổn thương gan và xơ hóa liên quan đến lão hóa.

Tuy nhiên, nghiên cứu hiện tại có một số hạn chế. Ví dụ, nó chỉ cung cấp các kết quả thử nghiệm trên động vật chứng minh rằng tình trạng xơ hóa gan liên quan đến lão hóa được cải thiện bằng Rg1 nhờ vào sự ức chế hoạt hóa tế bào siêu nhỏ NOX4 và NLRP3 ở chuột SAMP8. Ngoài ra, các chỉ số sinh hóa và chỉ số huyết thanh học đại diện cho chức năng gan, mức độ viêm và stress oxy hóa không được đo lường.

Nghiên cứu trong tương lai sẽ nhằm mục đích nghiên cứu sâu hơn về tác động của điều trị Rg1 đối với chức năng gan do lão hóa, viêm và các chỉ số liên quan đến stress oxy hóa trong huyết thanh, chẳng hạn như aspartate aminotransferase, alanine transaminase, IL-1 và superoxide dismutase. Hơn nữa, các chất ức chế NOX4 hoặc các thí nghiệm loại bỏ NOX4 sẽ được thực hiện để nghiên cứu sâu hơn về cơ chế bảo vệ cơ bản chính xác của Rg1 chống lại tổn thương gan in vitro và in vivo.

Sự nhìn nhận

Kinh phí

Người giới thiệu

1. Stahl EC, Haschak MI, Popovic B và Brown BN: Đại thực bào ở gan lão hóa và bệnh gan liên quan đến tuổi tác. Front Immunol 9.2795 2018.

2.Tominaga K và Suzuki Hl: Tín hiệu TGF-B trong quá trình lão hóa tế bào và bệnh lý liên quan đến lão hóa. Int J Mol Khoa học 20: 5002, 2019.

3. Iwasaki K.Brenner DA và Kisseleva T: Có gì mới trong xơ gan? Nguồn gốc của nguyên bào sợi cơ trong xơ gan.I Gastroenterol Hepatol 27 (Suppl 2): ​​S65-S68 2012.Aydin MM và Akcal KC: Xơ gan. Turk J Gastroenterol 2914-21.2018.

4.Kim IH, Xu J, Liu X, Koyama Y, Ma HY, Diggle K, You YH.5Schilling JM, Jeste D, Sharma K , et ak Lão hóa làm tăng tính nhạy cảm của viêm gan, xơ hóa gan và lão hóa để đáp ứng với một chế độ ăn giàu chất béo ở chuột. Tuổi (Dordr) 38: 291-302, 2016

.6. Stefanatos R và Sanz A: Vai trò của ROS ty thể trong não lão hóa. THÁNG 2 Lett 592: 743-758. 2018.

7. Davalli P Mitic T, Caporali A, Lauriola A và DArca D: Sự lão hóa của ROScell ​​và các cơ chế phân tử mới trong quá trình lão hóa và các bệnh liên quan đến tuổi tác. Oxid Med Cell Longev 2016: 3565127, 2016.Kudryavtseva AV Krasnov GS.Dmitriev AA. Alekseev BYKardymon OL, Sadritdinova AF Fedorova MS, Pokrovsky AVMelnikova NV, Kaprin AD, et al: Rối loạn chức năng ty thể và stress oxy hóa trong lão hóa và ung thư. Oncotarget 7: 44879-449052016.Luangmonkong T, Suriguga S, Mutsaers HAM, Groothuis GMMOlinga P, và Boersema M: Nhắm mục tiêu stress oxy hóa để điều trị xơ hóa gan. Rev Physiol Biochem Pharmacol 17571-102,2018.