Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides gây ra quá trình chết rụng ở các tế bào ung thư biểu mô tế bào gan H22 thông qua cả hai con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Pengfei Yuan, Jinyu Li, Adila Aipire, Yi Yang, Lijie Xia, Xinhui Wang, Yijie Li và Jinyao Li

trừu tượng

Tiểu sử:Cistanche tubulosa(Schenk). Tuy nhiên, tác dụng chống khối u của nó đối với ung thư biểu mô tế bào gan vẫn còn khó nắm bắt. Ở đây, chúng tôi đã điều tra tác dụng chống khối u củaC. tubulosa phenylethanoid glycoside(CTPG) trên tế bào ung thư biểu mô tế bào gan H22 cả in vitro và in vivo và cơ chế của nó. Phương pháp: Hình thái, khả năng sống sót, quá trình apoptosis, chu kỳ tế bào và điện thế màng ty thể (Δψm) của tế bào H22 được phân tích lần lượt bằng kính hiển vi đảo ngược, xét nghiệm MTT và đo tế bào dòng chảy. Sự biểu hiện và hoạt hóa của các protein trong con đường apoptosis đã được phát hiện bởi Western blot. Hiệu quả chống khối u in vivo được đánh giá trong một mô hình chuột có khối u được thiết lập bằng cách sử dụng chuột Côn Minh đực. Kết quả: Điều trị CTPG ức chế đáng kể sự phát triển của tế bào H22 theo cách phụ thuộc vào liều lượng và thời gian, tương quan với sự gia tăng quá trình chết rụng và bắt giữ chu kỳ tế bào ở các pha G 0 / G1 và G2 / M. Hơn nữa, sự cô đặc nhiễm sắc thể đã được quan sát thấy trong các tế bào H22 được xử lý CTPG. Điều trị CTPG làm tăng đáng kể tỷ lệ Bax / Bcl -2, giảm Δψm và tăng cường giải phóng cytochrome c. Các mức caspase được phân tách -8 và caspase -9 trong cả hai con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong đã tăng lên đáng kể khiến caspase được kích hoạt tuần tự -7 và -3 để phân cắt PARP. Cuối cùng, CTPG (Cistanchetubulosaphenylethanoid glycoside) ức chế sự phát triển của tế bào H22 ở chuột và cải thiện tỷ lệ sống sót của chuột bị khối u. Kết luận: Những kết quả này cho thấy rằng CTPG đã ngăn chặn sự phát triển của tế bào H22 thông qua cả con đường apoptosis bên ngoài và bên trong.

Tiểu sử

Ung thư gan đứng thứ sáu về tỷ lệ mắc ung thư và thứ tư về tử vong do ung thư trên toàn thế giới. Hơn nữa, nó xếp hạng thứ tư về tỷ lệ mắc ung thư và hạng nhất về tỷ lệ tử vong do ung thư ở các nước có chỉ số xã hội học thấp [1]. Tại Trung Quốc, ung thư gan là nguyên nhân gây tử vong do ung thư đứng hàng thứ ba trong năm 2015 [2]. Hơn 90% ung thư gan nguyên phát là ung thư biểu mô tế bào gan (HCC) trên thế giới [3]. Hiện nay, cắt gan là lựa chọn chính để điều trị ung thư biểu mô tế bào gan. Tuy nhiên, ít hơn 30 phần trăm bệnh nhân mắc ung thư biểu mô tế bào gan đáp ứng các tiêu chuẩn của phẫu thuật cắt bỏ gan và tỷ lệ sống chung 5- năm vẫn thấp là 35-50 phần trăm do tỷ lệ tái phát cao [4, 5 ]. Sự sẵn có của các lựa chọn điều trị cho bệnh nhân mắc ung thư biểu mô tế bào gan trung bình đến cao cấp là rất hạn chế. Sorafenib, một loại thuốc nhắm mục tiêu phân tử, đã được FDA chấp thuận là phương pháp điều trị đầu tay cho HCC nâng cao. Tuy nhiên, sorafenib chỉ kéo dài thời gian sống thêm khoảng 3 tháng và tỷ lệ đáp ứng là dưới 4 phần trăm [6, 7]. Việc phát triển các loại thuốc hoặc chiến lược mới chống lại HCC là cấp thiết. Y học cổ truyền Trung Quốc (TCM) một mình hoặc kết hợp với các chiến lược khác đã được sử dụng để điều trị HCC và cho thấy những lợi ích lâm sàng bao gồm kéo dài thời gian sống thêm, cải thiện chất lượng cuộc sống, giảm phản ứng có hại, v.v. [8, 9].Cistanche, một loại bệnh TCM, có các chức năng sinh học khác nhau, chẳng hạn nhưchống oxy hóa, chống viêm, chống lão hóa,và bảo vệ thần kinh [10, 11]. Phenylethanoid glycoside đã được coi là thành phần hoạt động chính củaCistanche, có các hoạt động đa dạng bao gồm chống oxy hóa, chống viêm, bảo vệ gan và bảo vệ thần kinh [12–15]. Nhóm của chúng tôi đã báo cáo rằngCistanche tubulosa phenylethanoid glycoside(CTPG) có thể gây ra quá trình apoptosis ở tế bào F10 melanoma B 16- và ức chế sự phát triển của khối u ở chuột [16]. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã đo lường tác dụng chống khối u của CTPG trên tế bào HCC H22 cả in vitro và in vivo và nghiên cứu cơ chế của nó. Chúng tôi phát hiện ra rằng CTPG gây ra quá trình apoptosis trong tế bào H22 thông qua cả con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong và ngăn chặn sự phát triển của khối u H22 ở chuột.

Phương pháp

Dòng di động

Tế bào ung thư biểu mô tế bào gan H22 của chuột được lấy từ Phòng thí nghiệm Trọng điểm về Tài nguyên Sinh vật và Kỹ thuật Di truyền Tân Cương, Đại học Tân Cương (Urumqi, Tân Cương, Trung Quốc) và được nuôi cấy trong môi trường RPMI 1640 (Gibco) bổ sung 100 U / ml penicillin và 100 ug / ml streptomycin, và 10% huyết thanh bò thai bất hoạt nhiệt (Gibco) ở 37 độ trong môi trường ẩm ướt 5% CO2.

Thử nghiệm MTT

CTPG được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Hetian Dichen (Hetian, Tân Cương, Trung Quốc) và các hợp chất chính của CTPG đã đủ tiêu chuẩn và định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao [16]. Khả năng sống sót của tế bào được đánh giá bởi 3- (4, 5- dimethylthiazol -2- yl) -2, 5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , Hoa Kỳ) khảo nghiệm. Tế bào H22 được cấy vào 96- đĩa giếng ở mật độ 2 × 1 0 4 tế bào trong môi trường 1 0 0 ul trên mỗi giếng và được nuôi cấy ở 37 độ. Sau 24 giờ, các tế bào được xử lý với các nồng độ khác nhau của CTPG (0, 100, 200, 300 và 400 ug / ml) hoặc 0,3% DMSO (bằng với CTPG 400 ug / ml) trong 24, 48 và 72 giờ tương ứng. . Sau khi ly tâm ở tốc độ 1000 vòng / phút trong 7 phút, phần nổi phía trên được loại bỏ và 100 ul dung dịch MTT (5 mg / ml trong PBS) được thêm vào mỗi giếng. Các đĩa được ủ ở 37 độ trong 4 giờ và 100 ul DMSO được thêm vào để hòa tan các tinh thể formazan đã hình thành. Giá trị OD490 được phát hiện bởi 96- đầu đọc vi tấm tốt (Phòng thí nghiệm Bio-Rad, CA, Hoa Kỳ). Khả năng tồn tại của tế bào được tính theo công thức: Khả năng tồn tại của tế bào (phần trăm)=(ODt Xử lý / ODOURS) × 100 phần trăm.

Phát hiện apoptosis

Tế bào H22 được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 1 0 0, 200, 300 và 400 ug / ml) hoặc 0,3% DMSO trong 24 giờ, sau đó được nhuộm bằng Annexin V FITC / Propidium iodide (PI) Bộ dụng cụ phát hiện bệnh chết chóc (YEASEN, Trung Quốc) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các mẫu được phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy (BD FACSCalibur, Hoa Kỳ).

Phát hiện điện thế màng ty thể

Tế bào H22 được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 200 và 400 ug / ml) trong 24 giờ, sau đó được nhuộm bằng thuốc nhuộm JC -1 thấm màng (Beyotime, Trung Quốc) trong 20 tối thiểu ở 37 độ. Sau khi rửa hai lần với đệm JC -1, các mẫu được trộn lại với 300 ul của đệm JC -1 và được phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy (BD FACSCalibur, Hoa Kỳ).

Phân tích chu kỳ tế bào

Tế bào H22 được cấy vào đĩa nuôi cấy 6 0 mm và được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 1 0 0, 200, 300 và 400 ug / ml) hoặc 0,3% DMSO cho 24 giờ Tất cả các tế bào được thu thập và rửa hai lần bằng PBS. Tế bào được cố định trong 70% ethanol lạnh ở - 20 độ trong 2 giờ và rửa hai lần bằng PBS, sau đó được đình chỉ lại trong dung dịch đệm nhuộm màu 300 ul Propidium iodide / RNase (BD Biosciences). Sau 10 phút ở nhiệt độ phòng, các mẫu được thu thập bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy (BD FACSCalibur, Hoa Kỳ) và phân bố chu kỳ tế bào được phân tích bằng phần mềm ModFit LT 3.0.

Hoechst 33,258 nhuộm

Sự thay đổi hình thái của nhân tế bào H22 được phân tích bằng thuốc nhuộm liên kết DNA thấm qua màng Hoechst 33,258. Tế bào H22 được gieo hạt trong 6- đĩa giếng ở nồng độ 1 × 1 0 5 tế bào / giếng trong môi trường 2 ml. Sau khi hợp lưu 60% ~ 70%, các tế bào được xử lý bằng CTPG (0, 100, 200, 300 và 400 ug / ml) trong 24 giờ. Các tế bào được thu thập và cố định bằng 4% Paraformaldehyde lạnh ở 4 độ trong 10 phút. Sau khi rửa bằng PBS, các tế bào được nhuộm bằng Hoechst 33,258 (Beyotime, Trung Quốc) ở 4 độ trong 10 phút. Các mẫu được quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang ngược (Nikon Eclipse Ti-E, Nhật Bản).

phong cách phương Tây

Anti-caspase -3, anti-caspase -3, Anti-Bcl -2 và anti-Bax đã được mua từ Beyotime Biotech Co., Ltd. (Thượng Hải, Trung Quốc). Chống caspase -7, chống phân cắt caspase -7, chống caspase -8, chống phân cắt caspase -8, chống caspase -9, chống -cleaved-caspase -9, chống PARP, PARP chống phân cắt, IgG-HRP chống chuột và IgG-HRP chống thỏ đã được mua từ Công nghệ Tín hiệu Tế bào. Hoạt chất chống - - được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học ComWin Bắc Kinh (Bắc Kinh, Trung Quốc).

Tế bào H22 được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 1 0 0, 200, 300 và 400 ug / ml) hoặc 0,3% DMSO trong 24 giờ. Các tế bào được thu thập và ly giải bằng Dung dịch Ly giải Tế bào RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) trong 30 phút trên đá. Các mẫu được chia nhỏ (12, 000 g trong 15 phút ở 4 độ) để thu thập các chất nổi phía trên và nồng độ protein được đo bằng bộ BCA (Thermo Fisher Scientific, Hoa Kỳ). Một lượng protein bằng nhau trong mỗi mẫu được phân lập bằng 12% SDS-PAGE và chuyển sang màng PVDF (Biosharp, Trung Quốc). Sau khi ngăn chặn bằng đệm TBST chứa 5% sữa không béo, các màng được ủ với các kháng thể sơ cấp tương ứng và các kháng thể thứ cấp được liên hợp với peroxidase củ cải ngựa (HRP), tương ứng. Sau khi rửa bằng TBST, các protein đích được phát hiện bằng bộ xét nghiệm ECL (Beyotime, Trung Quốc).

Động vật và tuyên bố đạo đức

Chuột Côn Minh đực 6-8 tuần tuổi được mua từ Trung tâm Phòng thí nghiệm Động vật, Đại học Y Tân Cương (Urumqi, Tân Cương, Trung Quốc). Chuột được giữ trong một cơ sở động vật có chu kỳ ánh sáng, được kiểm soát nhiệt độ tiêu chuẩn của Đại học Tân Cương. Tất cả các nghiên cứu trên động vật được thực hiện theo hướng dẫn của Ủy ban Chăm sóc và Sử dụng Động vật của Đại học Tân Cương. Đề cương đã được Ủy ban về Đạo đức thí nghiệm Động vật của Phòng thí nghiệm Trọng điểm về Tài nguyên Sinh vật và Kỹ thuật Di truyền Tân Cương (BRGE-AE001), Đại học Tân Cương, phê duyệt.

Nghiên cứu về khối u trên chuột

Để cảm ứng mô hình chuột khối u, chuột Côn Minh đực được tiêm dưới da 1 × 1 0 6 tế bào H22 trong 1 0 0 ul PBS vào sườn bên phải. Sau 3 ngày, chuột được chia ngẫu nhiên thành 3 nhóm (7 chuột / nhóm). Nhóm đối chứng được tiêm 0,1 ml DMSO dưới da xung quanh khối u. Nhóm CTPG -200 và CTPG - 400 được tiêm dưới da với 200 hoặc 400 mg / kg CTPG trong 0,1 ml DMSO xung quanh khối u. Chuột được điều trị 2 ngày một lần trong tối đa 21 ngày. Kích thước khối u được đo bằng thước cặp lên đến 25 ngày và thể tích khối u được tính theo công thức: thể tích khối u (mm3)=(dài × rộng2) / 2. Sau 25 ngày, sự sống sót của những con chuột bị khối u được theo dõi mỗi ngày cho đến khi kết thúc nghiên cứu này.

Phân tích thống kê

Ý nghĩa thống kê được tính toán bằng cách phân tích một chiều phương sai giữa các nhóm điều trị và nhóm chứng. Tất cả dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (SD). p <0. 05="" được="" coi="" là="" có="" ý="" nghĩa="" thống="">

Kết quả

CTPG làm giảm khả năng sống sót của tế bào H22 trong ống nghiệm

Để khám phá tác dụng chống khối u của CTPG đối với HCC, tế bào H22 đã được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 100, 200, 300 và 400 ug / ml) trong ống nghiệm. Sau 24 giờ, hình thái của tế bào H22 được quan sát bằng kính hiển vi đảo ngược. Chúng tôi nhận thấy rằng hình thái của tế bào H22 đã bị thay đổi đáng kể khi điều trị bằng CTPG. Với sự gia tăng nồng độ CTPG, các tế bào trở nên nhỏ và tròn và số lượng tế bào cũng giảm đáng kể (Hình 1a). Thử nghiệm MTT được sử dụng để phân tích khả năng sống sót của tế bào H22 sau khi xử lý CTPG trong 24, 48 và 72 giờ tương ứng. CTPG làm giảm đáng kể khả năng tồn tại của tế bào H22 theo cách phụ thuộc vào liều lượng và thời gian (Hình 1b). CTPG ở 300 ug / ml đạt tốc độ ức chế tốt nhất (Hình 1c). Giá trị IC50 của CTPG đối với tế bào H22 là 236 ug / ml ở 24 giờ và 169,8 ug / ml ở 48 giờ.

CTPG gây ra quá trình apoptosis trong tế bào H22

Để điều tra xem liệu việc giảm khả năng sống sót của tế bào H22 có phải là qua trung gian cảm ứng quá trình tự chết hay không, các tế bào H22 đã được xử lý với các nồng độ CTPG khác nhau (0, 100, 200, 300 và 400 ug / ml) trong 24 giờ và nhuộm với PI và Annexin V. Kết quả đo tế bào dòng chảy cho thấy CTPG gây ra một cách đáng kể quá trình chết rụng của tế bào H22 (bao gồm cả quá trình apoptosis sớm và muộn) theo cách phụ thuộc vào liều lượng (Hình 2a). Mặc dù liều cao CTPG cũng làm tăng đáng kể sự hoại tử của tế bào H22, nhưng hoại tử đóng một vai trò nhỏ trong việc ức chế sự phát triển của tế bào H22 do tỷ lệ thấp hơn (8,3%) so với quá trình chết theo chương trình (52,6%). Hơn nữa, tổng số protein của tế bào H22 đã được phân lập sau khi điều trị bằng CTPG và các biểu hiện của ung thư hạch bạch huyết tế bào B chống apoptotic 2 (Bcl -2) và pro-apoptotic BCL -2- protein X liên kết (Bax) được phát hiện bởi Phong cách phương Tây. Dữ liệu quét thang độ xám cho thấy rằng mức độ biểu hiện của Bax và Bcl -2 lần lượt được tăng và giảm. Tỷ lệ Bax / Bcl -2 đã tăng lên đáng kể (Hình 2b). Những kết quả này cho thấy CTPG gây ra quá trình apoptosis trong tế bào H22.

CTPG gây ra sự ngưng tụ nhiễm sắc thể và bắt giữ chu kỳ tế bào trong tế bào H22

Người ta đã báo cáo rằng tổn thương DNA và sự ngừng chu kỳ tế bào do thuốc gây ra có thể ức chế sự phát triển của tế bào khối u và gây ra quá trình apoptosis trong tế bào khối u [17, 18]. Để phát hiện hình thái của nhân trong tế bào H22 sau khi xử lý CTPG trong 24 giờ, tế bào H22 được nhuộm bằng Hoechst 33.342 và quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang ngược. Các tế bào được xử lý CTPG cho thấy sự gia tăng phụ thuộc vào liều lượng của chất nhiễm sắc cô đặc sáng của nhân, trong khi các tế bào không được xử lý cho thấy nhân được nhuộm màu đồng nhất (Hình 3a). Sự phân bố chu kỳ tế bào trong các tế bào H22 được phân tích thêm bằng phương pháp nhuộm PI sau khi xử lý CTPG trong 24 giờ. Như thể hiện trong Hình 3b, điều trị CTPG làm tăng đáng kể tỷ lệ tế bào pha G 0 / G 1- và G2 / M và giảm đáng kể tỷ lệ tế bào pha S, cho thấy rằng CTPG gây ra G Bắt giữ pha 0 / G1 và G2 / M trong các ô H22. Liều cao của CTPG cũng làm tăng đáng kể tỷ lệ tế bào G1 phụ.

CTPG làm giảm điện thế màng ty thể và tăng giải phóng cytochrome c

Con đường phụ thuộc vào ty thể đóng một vai trò quan trọng trong việc khởi phát quá trình apoptosis [19, 20]. Những thay đổi của điện thế màng ty thể (Δψm) có thể được theo dõi bằng nhuộm JC -1 do tập hợp JC -1 (huỳnh quang đỏ) có thể phân hủy thành monomer (huỳnh quang xanh lục) với sự giảm Δψm [21]. Sau khi xử lý CTPG trong 24 giờ, tế bào H22 được nhuộm bằng thuốc nhuộm JC - 1. Dữ liệu đo tế bào dòng chảy cho thấy huỳnh quang màu đỏ trong kênh FL -2 và huỳnh quang màu xanh lá cây trong kênh FL -1 đã giảm đáng kể và tăng lên khi điều trị bằng CTPG. Tỷ lệ PE− FITC cộng với các tế bào đã tăng lên đáng kể (Hình 4a), cho thấy rằng CTPG làm giảm Δψm trong các tế bào H22. Điều này phù hợp với tỷ lệ Bax / Bcl -2 tăng lên. Do đó, chúng tôi quan sát thấy sự giải phóng cytochrome c đã tăng lên đáng kể khi điều trị bằng CTPG (Hình 4b). Những kết quả này chỉ ra rằng CTPG có thể gây ra một phần quá trình chết rụng trong tế bào H22 thông qua con đường phụ thuộc vào ty thể (nội tại).

CTPG đã kích hoạt con đường caspase và ngăn chặn quá trình sửa chữa DNA

Tiếp theo, sự hoạt hóa của caspase do CTPG gây ra thông qua cả hai con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong được phân tích. Sau khi xử lý CTPG trong 24 giờ, tổng số protein được phân lập từ các tế bào H22 và mức độ của các caspase pro và phân cắt được phát hiện bằng Western blot. So với kiểm soát không được điều trị hoặc kiểm soát DMSO, điều trị CTPG được điều chỉnh một cách đáng kể không chỉ mức caspase bị phân cắt -8 (con đường bên ngoài) mà còn cả mức độ của caspase bị phân cắt -9 (con đường nội tại) (Hình. 5). Tuần tự, caspase được kích hoạt -8 và -9 sẽ phân cắt pro-caspase -3 và -7 đã được quan sát trong Hình. 5. Caspase được kích hoạt -3 đã phân cắt DNA sửa chữa enzyme poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) để ngăn chặn quá trình sửa chữa DNA và tích tụ tổn thương DNA như được quan sát trong Hình 3a.

Những kết quả này chỉ ra rằng CTPG gây ra quá trình apoptosis trong tế bào H22 thông qua cả con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong.

CTPG ngăn chặn sự phát triển của H22 HCC in vivo và cải thiện tỷ lệ sống sót của chuột bị khối u

Cuối cùng, tác dụng chống khối u của CTPG đối với HCC đã được đánh giá trong một mô hình chuột bị khối u, được thiết lập bằng cách tiêm dưới da các tế bào H22. Sau 3 ngày tiêm tế bào H22, những con chuột bị khối u được điều trị bằng CTPG 8 lần. Trọng lượng cơ thể của chuột và kích thước khối u được theo dõi tại các thời điểm đã chỉ định. Như thể hiện trong Hình 6a, trọng lượng cơ thể của chuột trong mỗi nhóm không có sự khác biệt đáng kể, cho thấy rằng các liều CTPG đã chọn không có tác dụng phụ rõ ràng. Điều thú vị là sự phát triển của khối u ở những con chuột được điều trị bằng cả 2 0 0 mg / kg và 400 mg / kg CTPG đều bị ức chế đáng kể (Hình 6b). Hơn nữa, hai liều điều trị CTPG đã cải thiện đáng kể khả năng sống sót của chuột bị khối u (3/7, 3/7) so với nhóm đối chứng (0/7) vào cuối thí nghiệm (Hình 6b). Chúng tôi cũng phát hiện ra rằng CTPG tăng cường đáng kể sự gia tăng của tế bào lách được phân lập từ chuột Côn Minh đực theo cách phụ thuộc vào liều lượng (Hình 6c), cho thấy rằng CTPG có tác dụng kích thích miễn dịch.

Thảo luận

TCM đã được sử dụng để điều trị các bệnh khác nhau bao gồm cả ung thư từ lâu đời. Người ta đã báo cáo rằng TCM có thể gây ra quá trình apoptosis ở các loại tế bào khối u khác nhau thông qua cả con đường truyền tín hiệu bên ngoài (qua trung gian thụ thể chết) và bên trong (phụ thuộc vào ty thể) để phát huy tác dụng kháng u [22–25]. Hai con đường có thể kích hoạt caspase -8 và -9, tương ứng [24, 26]. Ở đây, chúng tôi nhận thấy rằng CTPG đã ngăn chặn đáng kể sự phát triển của tế bào H22 thông qua việc cảm ứng quá trình apoptosis và bắt giữ chu kỳ tế bào. Các mức caspase được phân cắt -8 và -9 được điều chỉnh tăng đáng kể bởi điều trị CTPG, cho thấy rằng cả hai con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong đều liên quan đến việc khởi phát quá trình apoptosis. Nghiên cứu trước đây của chúng tôi cho thấy CTPG gây ra quá trình chết rụng ở tế bào F10 melanoma B 16- bằng con đường phụ thuộc vào ty thể, làm tăng mức caspase phân cắt -9 nhưng không phải caspase -8 [16]. CTPG có thể kích hoạt các đường truyền tín hiệu riêng biệt trong các loại tế bào khối u khác nhau.

Tính toàn vẹn của màng ti thể được điều chỉnh chặt chẽ bởi các thành viên của họ protein BCL -2 bao gồm Bax và Bcl -2 [27, 28]. Tỷ lệ Bax so với Bcl -2 đóng một vai trò quan trọng trong con đường chết rụng phụ thuộc vào ty thể [29]. Trong các tế bào H22 được xử lý bằng CTPG, tỷ lệ Bax / Bcl -2 được điều chỉnh tăng đáng kể, điều này có thể gây ra sự giảm Δψm và giải phóng cytochrome c được quan sát thấy trong nghiên cứu này. Do đó, pro-caspase -9 đã bị phân tách và kích hoạt. Cuối cùng, những người khởi xướng caspase hoạt động -8 và -9 đã kích hoạt kẻ hành quyết caspase -3 để phân cắt PARP nhằm ngăn chặn quá trình sửa chữa DNA. Kết hợp lại với nhau, những kết quả này gợi ý rằng CTPG gây ra quá trình apoptosis trong tế bào H22 thông qua cả con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong.

Trong mô hình chuột có khối u, CTPG ngăn chặn đáng kể sự phát triển của HCC H22 và cải thiện đáng kể sự sống sót của chuột bị khối u. Điều thú vị là liều CTPG phụ thuộc vào việc thúc đẩy sự gia tăng của tế bào lách từ chuột Côn Minh, điều này phù hợp với nghiên cứu trước đây của chúng tôi [16].

Những kết quả này cho thấy CTPG có thể ngăn chặn sự phát triển của H22 HCC ở chuột thông qua cả tác dụng kháng u trực tiếp và tăng cường miễn dịch gián tiếp.

Kết luận

CTPG ngăn chặn sự phát triển của tế bào H22 cả in vitro và in vivo và gây ra quá trình chết rụng ở tế bào H22 thông qua cả con đường tín hiệu bên ngoài và bên trong. Những dữ liệu này chỉ ra rằng CTPG có thể là một ứng cử viên tiềm năng để điều trị HCC.