Cistanche Tubulosa bảo vệ các tế bào thần kinh Dopaminergic thông qua việc điều hòa quá trình tự hủy và yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc từ tế bào thần kinh đệm: in Vivo và in Vitro-Ⅱ

Kiểm tra hành vi

Kiểm tra bơi lội (Zhu và cộng sự, 2014)

Sự phối hợp chuyển động của cơ thể ở chuột được đo bằng bài kiểm tra Bơi lội. Những con chuột được đặt riêng lẻ trong một bể nước (cao 25 ​​cm và đường kính 10 cm) chứa 10 cm nước và được thử nghiệm trong môi trường yên tĩnh để ghi lại thời gian đứng yên của chúng trong hơn 5 phút.

Thử nghiệm hiện trường mở (Kawai và cộng sự, 1998)

Hoạt động vận động được đo bằng cách sử dụng thử nghiệm trường mở. Những con chuột được thử nghiệm trong môi trường yên tĩnh và thiếu ánh sáng và được đặt riêng lẻ trong hộp acrylic trong suốt có kích thước 30 cm × 30 cm × 15 cm có lưới ngăn cách 6 cm × 6 cm ở phía dưới. Những con chuột được cho 10 phút để thích nghi với môi trường, sau đó đo số lượng lưới và tần suất nuôi của từng con chuột trong 5 lần liên tiếp để thu được giá trị trung bình.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ CẢI THIỆN CHỨC NĂNG TÌNH DỤC PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Lấy mẫu mô não

Trước khi lấy mẫu mô, những con chuột được cho ăn tự do với khả năng tiếp cận nước miễn phí và được can thiệp bằng thuốc trong 14 ngày liên tiếp. Bốn con chuột trong mỗi nhóm được chọn và chặt đầu nhanh chóng. SN (Bregma: −2,75 mm −2,92 mm) từ mỗi con vật được phân lập và đặt trên băng. Các mô não được rửa bằng dung dịch natri clorua lạnh 0,9% để loại bỏ máu và làm khô trên giấy lọc trước khi bảo quản ở −80◦C. Bốn con chuột trong mỗi nhóm được gây mê trong màng bụng và ngực của chúng được mở ra. Sau đó, một kim tiêm truyền được đưa vào tâm thất trái của mỗi con vật. Để loại bỏ máu trong hệ thống tuần hoàn, phần phụ tâm nhĩ phải đã được cắt và con vật được truyền nước muối thông thường 4◦C cho đến khi gan chuyển sang màu nhạt để đảm bảo tưới máu liên tục. Khi nước thải của tâm nhĩ phải trở nên trong, mỗi con vật được tưới máu bằng chất cố định paraformaldehyde 4%. Sau khi truyền dịch, mô não của mỗi con vật sau đó được mổ xẻ cẩn thận và cố định sau trong 4% paraformaldehyde trong 24 giờ. Các mô não cố định sau đó được rửa sạch dưới vòi nước đang chảy, khử nước trong một loạt dung dịch etanol đã được phân loại và làm sạch bằng dung dịch xylene. Tiếp theo là ngâm và nhúng parafin.

Sự thay đổi số lượng DA được đo bằng HPLC

SN dạng bột nano từ mỗi nhóm được đặt trong bể nước đá chứa dung dịch natri clorua 0,9% (tỷ lệ 1:9). Mô não được đồng nhất hóa bằng cách sử dụng máy phá vỡ tế bào siêu âm và ly tâm ở tốc độ 1200 vòng / phút trong 20 phút ở 4◦C để thu được chất nổi phía trên. Đối với HPLC, cột Hypersil AA-ODS (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) ở nhiệt độ cột 30◦C đã được sử dụng. Phát hiện huỳnh quang được thực hiện ở bước sóng 280 nm λex và 340 nm λem. Thể tích tiêm là 10 µL.

Biểu hiện của TH, GDNF, GFR 1 và Ret được phát hiện bằng hóa mô miễn dịch

Các phần paraffin (dày 5 µm) của từng mô não được phân lập từ mỗi con vật và đặt vào bồn nước ấm 40◦C để làm phẳng và bám dính vào các phiến kính. Tất cả các phiến mô được ủ trong lò ở nhiệt độ 60◦C trong 3–6 giờ, sau đó là tẩy sáp bằng xylene, khử nước bằng gradient ethanol và thu hồi kháng nguyên bằng cách ủ trong dung dịch đệm axit citric và đun nóng trong lò vi sóng trong 20 phút. Sau đó, các phiến mô được ủ trong dung dịch H2O2 3% ở nhiệt độ phòng trong 10 phút. Sau khi được rửa ba lần trong PBS, các phiến mô được ủ với huyết thanh bình thường trong buồng kín ở nhiệt độ phòng trong 20 phút. Nhuộm hóa mô miễn dịch được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Máy phân tích hình ảnh Motic Med 6.0 đã được sử dụng để tính giá trị của mật độ quang tích hợp trong các ô được nhuộm màu tích cực.

Phân tích Western Blot trong mô não của chuột

Nghiên cứu này đánh giá biểu hiện protein của tyrosine hydroxylase (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 và Bax. Dịch ly giải não của mỗi nhóm được đồng nhất hóa trong 3{{10}} phút trên đá, sau đó là ly tâm ở nhiệt độ thấp, 20,000 vòng/phút, ở 4 ◦C trong 5 phút để thu lấy phần nổi phía trên. Các mẫu protein được phân tách dưới áp suất không đổi bằng cách sử dụng gel SDS-PAGE 10% như mô tả ở trên. Nồng độ kháng thể chính: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml và Bax 0,11 mg/ml. Thủ tục cũng giống như trên.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ CHỐNG LÃO HÓA CHỐNG ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Phân tích thống kê

Nghiên cứu này sử dụng phần mềm thống kê SPSS 20.0 để xử lý và phân tích dữ liệu. Các giá trị tham số được biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (¯x ± S). ANOVA đã được sử dụng để phân tích dữ liệu đơn yếu tố. LSD hoặc bài kiểm tra Games-Howell được sử dụng để so sánh các nhóm. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

KẾT QUẢ

Các thành phần hoạt động của bột nano C. tubulosa

Trong phạm vi quét 200–400nm, ECH ở C. tubulosa và VER ở bước sóng 330 nm có đỉnh hấp thụ tối đa, xuất hiện trong vòng 20 phút. ICA có đỉnh hấp thụ tối đa ở bước sóng 270 nm và xuất hiện sau 20 phút (Hình 1A). Kết quả cho thấy các mẫu âm tính không ảnh hưởng đến việc phát hiện (Hình 1B). Các mẫu và mẫu đối chứng có cùng các pic sắc ký và mẫu âm tính không có. Điều này cho thấy các thành phần khác trong mẫu không ảnh hưởng đến thành phần được đo. Hơn nữa, ba thành phần và các đỉnh liền kề có thể đạt tới đường cơ sở phân tách và mức độ phân tách lớn hơn 1,5.

Bột nano C. tubulosa làm giảm MPP+ -Gây độc tế bào trong tế bào MES23.5

Khả năng tồn tại của tế bào MES23.5 giảm đáng kể khi tăng nồng độ MPP+. Hình 2F cho thấy độc tính tế bào đáng kể của các nồng độ MPP+ khác nhau.

Bột nano C. tubulosa làm giảm độc tính tế bào do MPP+-gây ra và tăng cường khả năng tồn tại của tế bào MES23.5. Hình 2G cho thấy liều lượng bột nano C. tubulosa là 10–250 µg/mL gây ra tác dụng bảo vệ phụ thuộc vào liều lượng đối với các tế bào MES23.5 được xử lý bằng MPP{7}}.

Tác dụng hình thái tế bào của bột nano C. tubulosa

Các tế bào MES23.5 bình thường có độ bám dính tế bào tốt và có hình trục chính với ranh giới tế bào và khớp thần kinh rõ ràng. Các tế bào MES23.5 bị hỏng do MPP+- có biểu hiện độ bám dính và độ co rút của tế bào kém, đồng thời nhiều tế bào bị treo lơ lửng trong môi trường với các khớp thần kinh bị co lại. Những tế bào này tập hợp lại, thu nhỏ lại và tròn trịa với các không bào bên trong và nhân bị phân hủy hoặc xẹp xuống. Bột nano C. tubulosa ở các liều lượng khác nhau đã cải thiện hình thái tế bào của tế bào MES23.5 ở các mức độ khác nhau bằng cách cải thiện độ bám dính tế bào và độ thanh thải khớp thần kinh của nhóm chất dẫn. Các tế bào MES23.5 trong nhóm điều trị bằng C. tubulosa liều cao cho thấy hình thái tương tự như nhóm đối chứng bình thường (Hình 2A–E).

Tác dụng của bột nano C. tubulosa đối với biểu hiện TH và quá trình chết theo chương trình trong tế bào

Hình 3 cho thấy sự giảm đáng kể biểu hiện protein TH trong nhóm chất dẫn. Biểu hiện protein TH tăng khác nhau ở các nhóm được điều trị bằng C. tubulosa với liều lượng khác nhau. Tuy nhiên, xét nghiệm LSD cho thấy không có sự khác biệt đáng kể giữa ba nhóm được điều trị.

Hình 4 cho thấy kết quả đánh giá apoptosis bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Tỷ lệ apoptosis ở nhóm xe cao hơn đáng kể so với các nhóm khác. Các tế bào được xử lý với các liều lượng khác nhau của bột nano C. tubulosa cho thấy mức độ suy giảm tỷ lệ apoptotic khác nhau so với nhóm phương tiện. Các tế bào ở nhóm điều trị C. tubulosa liều trung bình và cao có sự cải thiện đáng kể nhất về tỷ lệ apoptotic so với các nhóm điều trị C. tubulosa khác. Thử nghiệm LSD cho thấy không có sự khác biệt đáng kể giữa hai nhóm được điều trị nhưng cũng có sự khác biệt đáng kể giữa nhóm dùng liều thấp.

Tác dụng của bột nano C. tubulosa đối với sự biểu hiện protein Bcl2/Bax trong tế bào

Hình 5 cho thấy sự biểu hiện của protein Bcl2 trong các tế bào của nhóm phương tiện thấp hơn đáng kể so với nhóm đối chứng bình thường. Ngược lại, sự biểu hiện protein Bax trong các tế bào của nhóm phương tiện cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng bình thường. Các nhóm điều trị bằng C. tubulosa cho thấy biểu hiện protein Bcl2 tăng lên và giảm biểu hiện protein Bax trong các tế bào MES23.5 được điều trị bằng MPP+-. Giữa ba nhóm được điều trị, có sự khác biệt đáng kể trong xét nghiệm LSD. Những tác dụng này phụ thuộc vào liều lượng.

Kiểm tra hành vi

Kết quả của bài kiểm tra Bơi lội cho thấy những con chuột trong nhóm phương tiện có thời gian đứng yên tương đối dài và tăng dần theo thời gian. Vào ngày thứ 14, những con chuột trong nhóm phương tiện có thời gian đứng yên lâu hơn đáng kể so với những con chuột trong nhóm đối chứng bình thường. Thời gian đứng yên của chuột trong

liều thấpC. tubulosanhóm điều trị không khác biệt đáng kể so với nhóm chuột trong nhóm phương tiện. Tuy nhiên, thời gian đứng yên của những con chuột trong nhóm điều trị bằng C. tubulosa liều cao ít hơn đáng kể so với những con chuột trong nhóm phương tiện.

Kết quả của thử nghiệm trường mở cho thấy rằng sau tổn thương do MPTP gây ra ở chuột, những con chuột trong nhóm phương tiện đã thể hiện sự suy giảm đáng kể về khả năng hoạt động tự phát thể hiện qua tần suất nuôi. Sau 14-ngày sử dụngBột nano C. tubulosa, những con chuột trong nhóm điều trị liều trung bình và cao có tần suất nuôi cao hơn đáng kể so với những con chuột trong nhóm phương tiện (Hình 6A, B).

Ảnh hưởng của bột nano C. tubulosa đến hàm lượng DA ở chuột

Những thay đổi về hàm lượng DA của SN được xác định bằng HPLC. Người ta nhận thấy hàm lượng DA trong não của nhóm phương tiện đã giảm đáng kể. Hàm lượng DA trong não của chuột PD ở nhóm điều trị bằng C. tubulosa liều thấp không khác biệt đáng kể so với những con chuột trong nhóm phương tiện. Tuy nhiên,Điều trị C. tubulosatăng mức DA trong não của chuột PD theo cách phụ thuộc vào liều lượng. Não của chuột PD được điều trị bằng C. tubulosa liều cao có hàm lượng DA cao hơn đáng kể so với não của chuột trong nhóm phương tiện (Hình 6C).

Tác dụng của bột nano C. tubulosa đối với biểu hiện TH ở chuột

Số lượng tế bào dương tính với TH và mức độ biểu hiện protein TH trong SN của chuột PD do MPTP gây ra thấp hơn so với chuột trong nhóm đối chứng. Sau khi điều trị bằng C. tubulosa, số lượng tế bào dương tính với TH và mức độ biểu hiện protein TH trong SN của chuột PD do MPTP gây ra đã tăng lên, với sự khác biệt đáng kể giữa nhóm điều trị bằng C. tubulosa liều cao và nhóm phương tiện bằng thử nghiệm LSD; và có sự khác biệt đáng kể giữa ba nhóm được điều trị (Hình 7).

Tác dụng của bột nano C. tubulosa đối với sự biểu hiện protein của GDNF và các thụ thể của nó, GFR 1 và Ret ở chuột

Sự biểu hiện protein của GDNF và các thụ thể của nó, GFR 1 và Ret, trong các tế bào được nhuộm màu dương tính, được đánh giá bằng phương pháp hóa mô miễn dịch. Phân tích Western blot được sử dụng để đánh giá mức độ biểu hiện protein trong SN của các nhóm chuột khác nhau. Kết quả của các nhóm khác nhau là tương tự nhau khi sử dụng hai phương pháp phát hiện. Sự biểu hiện của GDNF và các protein thụ thể của nó, GFR 1 và Ret, trong các tế bào được nhuộm màu tích cực trong SN của chuột trong nhóm phương tiện, thấp hơn đáng kể so với những con chuột trong nhóm đối chứng bình thường. Các liều điều trị C. tubulosa khác nhau đã làm tăng số lượng tế bào GDNF-, GFR 1- và Ret dương tính (Hình 8A–S).

Biểu hiện protein GDNF, GFR 1 và Ret trong SN của chuột trong nhóm phương tiện thấp hơn đáng kể so với chuột trong nhóm đối chứng. Tăng nồng độ xử lý củaNăng lượng nano C. tubulosatăng cường đáng kể sự biểu hiện của các protein này. Biểu hiện protein GDNF, GFR 1 và Ret trong SN của chuột trong nhóm điều trị bằng C. tubulosa liều cao cao hơn đáng kể so với những con chuột trong nhóm phương tiện (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Tác dụng của bột nano C. tubulosa đối với sự biểu hiện protein của Bcl2/Bax ở chuột

Sự biểu hiện protein Bcl2 đã giảm đáng kể và sự biểu hiện protein Bax được tăng cường đáng kể ở SN của chuột trong nhóm phương tiện (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

CUỘC THẢO LUẬN

PD và Apoptosis

PD là một rối loạn thoái hóa thần kinh. Theo Zhang và cộng sự. (2005), tỷ lệ mắc bệnh là 10,7% ở dân số Trung Quốc trên 55 tuổi và 1,67% ở những người trên 65 tuổi. Số lượng bệnh nhân PD đã tăng lên hàng năm cùng với tốc độ già hóa toàn cầu, đặt gánh nặng tài chính nặng nề lên gia đình bệnh nhân và xã hội nói chung. Trong não, tế bào thần kinh dopaminergic chủ yếu tham gia vào quá trình tổng hợp và bài tiết DA. Chúng phân bố rộng rãi trong hệ thần kinh trung ương và chủ yếu nằm ở SN (80%). TH là enzyme giới hạn tốc độ chính để tổng hợp DA. Do đó, việc ức chế hoạt động TH làm giảm tổng hợp DA (Huot và Parent, 2007). Những thay đổi bệnh lý và sinh hóa chính của PD là quá trình tự hủy của các tế bào thần kinh dopaminergic trong SN, giảm đáng kể DA đen thể vân và sự hình thành thể Lewy trong các tế bào thần kinh dopaminergic (Dexter và Jenner, 2013). Nguyên nhân của PD liên quan đến các yếu tố di truyền, yếu tố môi trường và sự lão hóa của hệ thần kinh (Allam và cộng sự, 2005). Cơ chế bệnh sinh của PD vẫn chưa rõ ràng trong y học hiện đại. Kể từ cuối những năm 1960, liệu pháp thay thế levodopa đã được sử dụng thành công để điều trị bệnh Parkinson và được công nhận là bước ngoặt lớn trong điều trị bệnh Parkinson. Tuy nhiên, việc áp dụng lâu dài liệu pháp này sẽ gây ra tác dụng phụ và liệu pháp này không điều trị được nguyên nhân cơ bản của bệnh PD (Del Sorbo và Albanese, 2008). Do đó, nghiên cứu tích cực về các loại thuốc hoặc phương pháp điều trị mới nhằm mục đích bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic là rất quan trọng để điều trị bệnh PD.

Trong các nghiên cứu trước đây, việc áp dụng nhãn cuối dUTP qua trung gian deoxynucleotidyl transferase chỉ ra rằng 0.6%–4,8% tế bào thần kinh dopaminergic ở SN của bệnh nhân PD đã biểu hiện apoptosis (Mochizuki và cộng sự, 1996). Kính hiển vi điện tử cho thấy các đặc điểm apoptotic, bao gồm sự ngưng tụ màu sắc và thể apoptotic trong các tế bào dopaminergic (Anglade et al., 1997). Tompkins và cộng sự. (1997) đã thực hiện phân tích siêu cấu trúc của việc khám nghiệm tử thi mô não từ những bệnh nhân mắc bệnh PD, AD và bệnh cơ thể Lewy lan tỏa (DLBD). Họ tìm thấy các cơ thể apoptotic trong lớp SN dày đặc ở bệnh nhân PD và DLBD, cung cấp bằng chứng thuyết phục về apoptosis thần kinh ở PD và các bệnh liên quan. Do đó, việc giảm hoặc ức chế apoptosis ở các tế bào thần kinh dopaminergic là nền tảng cho điều trị PD.

Các nghiên cứu trước đây cho thấy MPTP gây ra các triệu chứng giống PD. MPTP vượt qua hàng rào máu não và được chuyển hóa bởi monoamine oxidase loại B trong tế bào hình sao. Sau đó, nó được chuyển đổi thành MPP+ độc hại, tích tụ trong ty thể của các tế bào thần kinh dopaminergic thông qua việc hấp thụ protein của chất vận chuyển DA. Do đó, nó tạo ra các gốc oxy tự do dư thừa, ức chế hoạt động phức tạp của chuỗi hô hấp ty thể và tổng hợp ATP. Những sự kiện này thúc đẩy hơn nữa sự hình thành gốc tự do và các phản ứng căng thẳng oxy hóa, và cuối cùng dẫn đến sự thoái hóa và chết của các tế bào thần kinh dopaminergic. Do đó, nghiên cứu này đã sử dụng MPP + để thiết lập một phương tiện in vitro ở các tế bào thần kinh dopaminergic MES23.5 và MPTP để tạo ra một con chuột phương tiện để xác minh lẫn nhau. Theo kết quả xét nghiệm MTT, MPP+ làm giảm đáng kể khả năng tồn tại của tế bào MES23.5, cho thấy MPP+ gây độc tế bào đối với các tế bào thần kinh dopaminergic. Kết quả cũng chứng minh rằng C. tubulosa đã tăng cường một cách hiệu quả sự biểu hiện của protein chống apoptotic và ức chế sự gia tăng của quá trình chết theo chương trình do MPP{11}}gây ra.

PD và GDNF

GDNF là một yếu tố dinh dưỡng thần kinh, được Lin và cộng sự phân lập lần đầu tiên. (1993). Lin và cộng sự. (1993) cũng cho thấy GDNF có tác dụng dinh dưỡng cụ thể đối với các tế bào thần kinh dopaminergic ở não giữa của chuột. GDNF, neurturin (NTN), persephin (PSP) và artemin (ART) tạo thành họ GDNF. Chúng là các protein bài tiết có cấu trúc tương tự nhau và có liên quan đến chức năng (Kotzbauer và cộng sự, 1996; Baloh và cộng sự, 1998; Milbrandt và cộng sự, 1998; Woodbury và cộng sự, 1998).

Thụ thể GDNF bao gồm hai thành phần. Thành phần đầu tiên, GFR, được cố định vào màng ngoài của glycosylphosphatidylinositol (GPI) và neo vào bề mặt của connexin. Thành phần thứ hai là protein Ret. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng có bốn loại GFR khác nhau: GFR 1, GFR 2, GFR 3 và GFR 4. GFR 1 là thụ thể có ái lực cao của GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl và cộng sự, 2001). Protein Ret là một thụ thể chức năng của GDNF. Phân tử homodimer của GDNF liên kết trực tiếp với GFR 1 để tạo thành phức chất và tương tác với Ret, dẫn đến sự dimer hóa và kích hoạt Ret. Do quá trình tự phosphoryl hóa Ret, Ret kích hoạt một số đường truyền tín hiệu TH phổ biến. Trong trường hợp không có protein Ret, GDNF gây ra quá trình phosphoryl hóa protein MAPK, PI{10}} và PLC-, ngoài sự biểu hiện mRNA và hoạt động chức năng của C-fos thông qua protein thụ thể của nó, GFR 1 (He và cộng sự, 2008).

Các nghiên cứu đã chứng minh rằng GDNF có tác dụng bảo vệ mạnh nhất đối với các tế bào thần kinh dopaminergic (Rangasamy và cộng sự, 2010; Campos và cộng sự, 2012). Trong các phương tiện sử dụng MPTP và 6-hydroxydopamine (6-OHDA) để gây ra tổn thương ở các tế bào thần kinh dopaminergic, GDNF bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic bằng cách giảm quá trình chết theo chương trình và thúc đẩy sự phát triển của sợi trục để tạo ra sự biệt hóa tế bào gốc (Lucas và cộng sự, 2012; Littrell và cộng sự, 2013). Lin và cộng sự. (1993) cho thấy GDNF đặc biệt thúc đẩy khả năng tồn tại, sự biệt hóa và sự phát triển sợi trục của các tế bào thần kinh dopaminergic để thúc đẩy sự hấp thu DA trong tế bào thần kinh. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng GDNF không chỉ ngăn ngừa độc tính cấp tính mà còn làm giảm độc tính lâu dài của MPP+ hoặc 6-OHDA trong tế bào thần kinh dopaminergic, hơn nữa còn ngăn ngừa chết tế bào ở các tế bào bị căng thẳng hoặc bị tổn thương (Yu và cộng sự, 2010). Ngoài ra, GDNF còn thúc đẩy sự tăng sinh và biệt hóa tế bào gốc thần kinh đối với các tế bào thần kinh dopaminergic ở não giữa (Lindsay, 1995) để giải cứu các tế bào thần kinh dopaminergic khỏi thoái hóa ngược (Hong-Juan và cộng sự, 2011).

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng biểu hiện GDNF trong SN đã giảm đáng kể ở phương tiện động vật (Yang và cộng sự, 2010). Điều này cho thấy nó có thể là một trong những cơ chế sinh bệnh ở chuột PD. Việc tiêm 5–15 µg/d GDNF vào tâm thất bên hoặc thể vân của động vật vận chuyển do MPTP gây ra trong ba tháng liên tiếp đã thúc đẩy quá trình sửa chữa chất đen thể vân của hệ thống dopaminergic ở động vật vận chuyển (Grondin và cộng sự, 2002). Các nghiên cứu về điều trị GDNF đối với PD trên phương tiện động vật đã chỉ ra rằng tiêm GDNF nội sọ vào các vùng não khác nhau, chẳng hạn như SN, nhân đuôi và tâm thất bên, cải thiện các rối loạn vận động liên quan đến mô hình động vật PD, bao gồm giảm hoạt động vận động, cứng cơ và chấn động (Grondin và cộng sự, 2002). Tuy nhiên, GDNF không thể trực tiếp đi qua hàng rào máu não. Do đó, việc tiêm GDNF vào não cục bộ tiềm ẩn rủi ro và khó khăn đáng kể trong ứng dụng lâm sàng. Các ứng dụng để giới thiệu GDNF ngoại sinh thông qua các vi cầu giải phóng có kiểm soát, viên nang giải phóng kéo dài và gen virut vẫn đang được nghiên cứu (Liang và cộng sự, 2010; Yang và cộng sự, 2010; Qiao và cộng sự, 2012). Do những hạn chế của các kỹ thuật khác nhau để đưa GDNF ngoại sinh vào não, các tác nhân bảo vệ thần kinh thúc đẩy giải phóng GDNF nội sinh rất có ý nghĩa đối với ứng dụng lâm sàng.

PD vàC. tubulosaBột nano

PD phổ biến hơn ở người trung niên và người già. Lý thuyết của TCM cho rằng bệnh PD chủ yếu nằm ở não và chủ yếu là do gan thận suy yếu, ngoài ra còn do thiếu sinh lực và thiếu máu. Theo lý thuyết này, việc điều trị PD nên tập trung vào việc tiếp thêm sinh lực cho thận và tủy xương.Yang và cộng sự. (2010)đã sử dụng các thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, mù đôi và kiểm soát giả dược và phát hiện ra rằng liệu pháp kết hợp sử dụng Madopar và các công thức bồi bổ thận đã làm giảm bớt rối loạn chức năng vận động của bệnh nhân PD. Kết quả điều trị tốt hơn so với điều trị đơn lẻ bằng Madopar. Hiệu quả điều trị của đơn trị liệu TCM hoặc kê đơn kết hợp trong PD đã được xác nhận trên mô hình động vật PD và các ứng dụng lâm sàng. Ứng dụng TCM để bổ thận và thúc đẩy tuần hoàn máu đã giảm liều đơn trị liệu cho bệnh PD bằng Madopar. Một số nghiên cứu cho rằng TCM đã cải thiện các triệu chứng của PD và các tế bào thần kinh dopaminergic được bảo vệ, có thể liên quan chặt chẽ đến việc thúc đẩy biểu hiện GDNF nội sinh (Hong-Juan và cộng sự, 2011; Qiao và cộng sự, 2012).

Hợp chất tăng cường thận được sử dụng trong nghiên cứu này,C. tubulosabột nano, chứaCistanche, epimedium, VàThân rễ đa giác. Nghiên cứu hiện đại cho thấy thành phần hóa học củaCistanchelà ECH, có tác dụng bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic trong SN ở chuột PD do MPTP gây ra và ức chế sự giảm DA và chất vận chuyển DA (Zhao và cộng sự, 2010). Ngoài ra, nó còn ngăn chặn 6-sự suy giảm DA do OHDA gây ra và bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic giai đoạn đầu (Chen và cộng sự, 2007). Epimedium ức chế sự kích hoạt caspase-3 và phát huy vai trò bảo vệ thần kinh (Lưu và cộng sự, 2011). Epimedium flavonoid thúc đẩy sự tăng sinh và biệt hóa tế bào gốc thần kinh một cách hiệu quả (Yao và cộng sự, 2010).

Trong nghiên cứu này,C. tubulosabột nano đối kháng với sự gia tăng của MPP+gây ra apoptosis theo cách phụ thuộc vào liều lượng. Nó cải thiện đáng kể biểu hiện TH trongtrong ống nghiệmphương tiện và có tác dụng chống apoptotic đáng kể ở các tế bào thần kinh dopaminergic. Chuột phương tiện do MPTP gây ra cho thấy rối loạn hành vi và giảm đáng kể biểu hiện TH ở các mô não giữa và mức DA, đây là những đặc điểm bệnh lý điển hình của PD. Liều lượng khác nhau củaC. tubulosabột nano rút ngắn thời gian đứng yên, tăng cường các hoạt động tự chủ, cải thiện rối loạn hành vi, tăng nồng độ DA trong não và tăng biểu hiện TH trong xe cộ. Những kết quả này gợi ý rằngC. tubulosabột nano có tác dụng bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic, từ đó cải thiện các rối loạn hành vi của phương tiện. Liều lượng khác nhau củaC. tubulosabột nano làm tăng sự biểu hiện của protein GDNF và các protein thụ thể của nó trong não của chuột phương tiện. Liều caoC. tubulosađiều trị làm tăng đáng kể biểu hiện Bcl2 và giảm biểu hiện Bax, điều này cho thấy rằngC. tubulosabột nanocó thể thúc đẩy sự biểu hiện và bài tiết GDNF trong não chuột bị tổn thương MPTP. Ngoài ra, nó có thể phát huy tác dụng bảo vệ thần kinh ở các tế bào thần kinh dopaminergic và giảm thiểu quá trình apoptosis của tế bào thần kinh thông qua vai trò hỗ trợ dinh dưỡng thần kinh của GDNF.

Nghiên cứu này đã chứng minh rằngC. tubulosabột nano có tác dụng bảo vệ các tế bào thần kinh dopaminergic ở cả haitrong ống nghiệmVàtrong cơ thể sốngvà tăng biểu thức TH để cải thiện hàm lượng DA. Nó cũng cải thiện các rối loạn hành vi ở chuột phương tiện do MPTP gây ra, điều chỉnh biểu hiện protein của GDNF và các protein thụ thể của nó trong SN và có tác dụng chống apoptotic ở chuột PD. Cơ chế tác dụng lâm sàng củaC. tubulosabột nano trong PD có thể liên quan đến việc tăng hàm lượng GDNF nội sinh trong não và do đó làm giảm tổn thương đối với các tế bào thần kinh dopaminergic.

CISTANCHE TUBULOSA TỰ NHIÊN ĐỂ CẢI THIỆN CHỨC NĂNG TÌNH DỤC PHGS75% ECH 30% ACT 12