Nghiên cứu so sánh về xét nghiệm giới hạn vi sinh vật và tiêu chí của các món thuốc sắc TCM giữa các tiểu bang Hoa Kỳ, Dược điển Châu Âu, Pharmacopeia Nhật Bản và Pharmacopeia Trung Quốc

Tóm tắt

KHÁCH QUAN:Để so sánh sự khác biệt của kiểm tra giới hạn vi sinh và các tiêu chí củaThuốc sắc TCMCác mảnh trong số 43 phiên bản của Hoa Kỳ Pharmacopeia (USP43), 1 0. 0 phiên bản của Pharmacopeia châu Âu ( Pharmacopeia (CHP2020), và để cung cấp giới thiệu cho việc sửa đổi và cải thiện các tiêu chuẩn vi sinh cho các phần thuốc sắc TCM ở Trung Quốc. Phương pháp: Sự khác biệt trong phương pháp xét nghiệm liệt kê vi sinh vật (bao gồm lấy mẫu và chuẩn bị mẫu, lựa chọn vi khuẩn và môi trường nuôi cấy, số lượng vi sinh vật và vi khuẩn chịu nhiệt, v.v.) CHP2020. Kết quả & Kết luận: Về mặt kiểm tra vi sinh của các mảnh thuốc sắc TCM, USP43, EP10.0, JP17 có các điều khoản độc lập của riêng họ. CHP2020 đã thêm "Quy tắc chung 1108". Về mặt kiểm tra các mặt hàng, ngoài tổng số lượng vi khuẩn hiếu khí và tổng số lượng nấm men và nấm mốc kết hợp, CHP2020 và EP10.0 đã cung cấp ba phương pháp để kiểm tra vi khuẩn đối chứng (vi khuẩn gram âm kháng mật, Escherichia coli, Salmonella). Trên cơ sở, thử nghiệm Staphylococcus aureus bổ sung JP17; tuy nhiên, USP43 đã thêm phương pháp thử nghiệm Clostridium và đưa ra khái niệm đánh giá rủi ro vi sinh vật phản cảm; CHP2020 cũng bổ sung một phương pháp mới để đếm vi khuẩn chống nhiệt. Về các tiêu chí giới hạn vi sinh vật, USP43 là chi tiết nhất trong việc phân loại các mảnh thuốc sắc TCM, nghiêm ngặt hơn EP10.0 và JP17; CHP2020 đã không thiết lập một giới hạn thống nhất để kiểm tra vi khuẩn đối chứng của các mảnh thuốc sắc TCM. CHP2020 đã sửa đổi "Tiêu chuẩn giới hạn vi sinh vật đối với chiết xuất TCM và các mảnh thuốc sắc TCM", nhưng nó không hoàn hảo so với Pharmacopoeia của Hoa Kỳ, Châu Âu và Nhật Bản. Có ý kiến ​​cho rằng theo tình hình hiện tại của ô nhiễm vi sinh vật và kiểm soát các mảnh thuốc sắc TCM, xét nghiệm giới hạn vi sinh vật và tiêu chí của các sản phẩm liên quan đến TCM trong Pharmacopoeia nên được cải thiện dần và mức giới hạn vi sinh vật của các sản phẩm tương ứng phải được tinh chỉnh hợp lý.

Từ khóaTCM Piection Piece;Dược phẩm; Kiểm tra giới hạn vi sinh vật; tiêu chí giới hạn; nghiên cứu so sánh

Thuốc thảo dược Trung Quốclà những sản phẩm có thể được sử dụng trực tiếp trong thực hành lâm sàng TCM sau khi chế biến thuốc thảo dược Trung Quốc. Hầu hết trong số chúng có nguồn gốc từ thực vật tự nhiên, động vật hoặc khoáng chất và thường mang một số lượng lớn các vi sinh vật [1-2]. Quá trình xử lý của hầu hết các loại thuốc thảo dược Trung Quốc là đơn giản (chẳng hạn như làm sạch, chiên, v.v.), và việc khử trùng là không đầy đủ, dẫn đến các vi sinh vật gây bệnh còn lại [3-4]. Ngoài ra, trong quá trình vận chuyển và lưu trữ, tiếp xúc với các nhà khai thác và môi trường không có cây xanh bên ngoài cũng làm tăng khả năng các loại thuốc thảo dược Trung Quốc bị ô nhiễm bởi các vi sinh vật gây bệnh, do đó ảnh hưởng đến sự an toàn của chúng [5]. Sự ô nhiễm vi sinh vật của các loại thuốc thảo dược Trung Quốc đã không nhận được đủ sự chú ý và thiếu nghiên cứu về những thay đổi trong quần thể vi sinh vật trong quá trình chế biến của chúng, điều này dẫn đến việc thiếu đánh giá an toàn vi sinh vật của thuốc thảo dược Trung Quốc. Nhiều vi sinh vật gây bệnh tiềm năng (như vi khuẩn kháng nhiệt và độc tố vi khuẩn) đã không được kiểm soát một cách hiệu quả, làm tăng nguy cơ bệnh nhân suy giảm miễn dịch sử dụng thuốc thảo dược Trung Quốc [6]. Mặc dù phiên bản 2015 của dược điển Trung Quốc (tập 1) bao gồm nhiều phương pháp nhận dạng và kiểm tra để phân tích các tính chất vật lý và hóa học của thuốc thảo dược Trung Quốc, các phương pháp kiểm tra cụ thể và giới hạn tiêu chuẩn cho các vi sinh vật liên quan đã bị thiếu trong một thời gian dài. Đồng thời, trong các quy tắc chung của phiên bản 2015 của dược điển Trung Quốc (tập 4), ngoại trừ các loại thuốc thảo dược Trung Quốc được nhập khẩu trực tiếp, không có các mặt hàng kiểm tra vi sinh vật nào cho các dạng thuốc thảo dược Trung Quốc khác được chỉ định [7].

COA của một y học Trung Quốc từ Công ty Công nghệ sinh học Trung Quốc

Bấm vào hình trên để có thêm chi tiết

Y học Trung Quốcđược gọiThuốc thảo dượcỞ châu Âu, y học thô ở Nhật Bản và bổ sung dinh dưỡng ở Hoa Kỳ.

Mặc dù khái niệm của nó không giống hệt như các loại thuốc thảo dược Trung Quốc ở nước tôi [{{0}}], Pharmacopoeia châu Âu 1 0. 0 (EP10.0) Bao gồm các phương pháp kiểm tra vi sinh vật và giới hạn các tiêu chuẩn cho các sản phẩm liên quan (thuốc thảo dược, thuốc thô hoặc bổ sung dinh dưỡng). Phiên bản 2020 của dược điển Trung Quốc (CHP2020) (Tập 4) [13] đã thêm "Phương pháp kiểm tra giới hạn vi sinh vật cho các sản phẩm thảo dược Trung Quốc" (Quy tắc chung 1108), nhưng các tiêu chuẩn giới hạn vi sinh vật có liên quan vẫn chưa hoàn thành, và không có quy định nào và rõ ràng về các tiêu chuẩn giới hạn vi sinh vật. Bài viết này so sánh sự khác biệt giữa USP43, EP10.0, JP17 và CHP2020 về các phương pháp kiểm tra vi sinh vật và giới hạn các tiêu chuẩn cho các loại thuốc thảo dược Trung Quốc, hiểu hướng sửa đổi của các tiêu chuẩn vi sinh vật đối với các loại thuốc thảo dược của họ. Thuốc thảo dược.

1 lượng vi sinh vật của thuốc thảo dược Trung Quốc

Sau khi so sánh các phương pháp thử nghiệm vi sinh vật liên quan đến các loại thuốc thảo dược Trung Quốc trong EP1 0. 0, JP17, USP43 và CHP2020 Các loại thuốc, chẳng hạn như EP10.0 "2.6.12" và "2.6.31", JP17 "5.02", USP43 "2021" và "2022", trong khi CHP2020 đã thêm "Nguyên tắc chung 1108" để phát hiện vi sinh vật trong thuốc thảo dược Trung Quốc. Về mặt thử nghiệm, bốn dược điển đều chỉ định các phương pháp kiểm tra tổng số lượng vi khuẩn hiếu khí (TAMC) và tổng số nấm men và khuôn mẫu kết hợp (TYMC). Sự khác biệt chính được phản ánh trong việc lấy mẫu và lấy mẫu, các loài vi khuẩn và môi trường nuôi cấy, và phương pháp đếm vi sinh vật. Xem Bảng 1 để biết chi tiết.

1.1 Lấy mẫu và lấy mẫu

Thuốc thảo dược Trung Quốc có nhiều loại khác nhau, với các hình dạng, kết cấu và kích thước khác nhau. Ngoài ra, ô nhiễm vi sinh vật là không đồng đều, vì vậy tính đại diện của việc lấy mẫu và kiểm tra là rất quan trọng [14]. Bốn dược điển có sự khác biệt rõ ràng trong các quy định của "lấy mẫu và lấy mẫu". Trong số đó, EP1 0. 0 "2.6.12" [10] và USP43 "2021" [12] có cùng các yêu cầu đối với việc lấy mẫu thuốc thảo dược Trung Quốc làm thuốc hóa học, với thể tích lấy mẫu 10 g hoặc 10 ml. JP17 "5.02" [11] quy định bốn phương pháp lấy mẫu cho các loại thuốc thảo dược Trung Quốc: (1) cho các mẫu khối lượng nhỏ hoặc bột, lấy 50-250 g mẫu và trộn nó; (2) Đối với các mẫu khối lượng lớn, lấy 250-500 g mẫu và trộn nó và cắt nó; (3) Đối với các mẫu đơn không dưới 100 g, lấy ít nhất 5 hoặc 500 g, cắt nó và trộn nó; (4) Đối với các mẫu dưới dạng giải pháp hoặc chế phẩm, hãy trộn chúng và lấy mẫu trực tiếp. Lấy 10 g hoặc 10 ml mẫu hỗn hợp làm mẫu để kiểm tra. CHP2020 "Quy tắc chung 1108" [13] nói rằng "trừ khi có quy định khác, các mẫu thử nghiệm sẽ được rút ra theo phương pháp lấy mẫu vật liệu dược liệu và các mảnh sắc lệnh ('Quy tắc chung 0211'). Khối lượng thử nghiệm phải là 25 g hoặc 25 ml trừ khi có quy định khác và khối lượng thử có thể được giảm cho các giống hoặc giống quý giá có mật độ thấp hơn. "

Dấu vân tay của một y học Trung Quốc từ công ty công nghệ sinh học của Trung Quốc

1.2 Lựa chọn các chủng và phương tiện văn hóa

Về lựa chọn chủng, USP43 liệt kê năm vi sinh vật bao gồm Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739, Bacillus subtilis ATCC 6633 [12]. EP10.0 và JP17 đã thay thế Escherichia coli bằng pseudomonas aeruginosa atcc 9027, và đưa ra các chủng đã đề cập ở trên số lượng biến dạng tương đương của các bộ sưu tập quốc gia, thực phẩm và vi khuẩn biển (NCIMB) Điều khoản này phù hợp với đề xuất điều phối của Hội đồng Hài hòa Quốc tế (ICH) [10-11]].
Các chủng của CHP2 0 20 giống như các chủng của EP10.0 và JP17, nhưng chỉ cho phép các chủng CMCC được phép [13].
Xét về việc lựa chọn phương tiện nuôi cấy, ngoài việc sử dụng phương tiện nuôi cấy TSA và phương tiện nuôi cấy SDA làm phương tiện nuôi cấy thông thường, xem xét rằng các loại thuốc thảo dược Trung Quốc thường chứa một lượng lớn các chất không hòa tan và xác suất cao của vi khuẩn và nấm, các yếu tố trên có thể ảnh hưởng đến kết quả TAMC và TYMC. JP17 cũng quy định rằng một nồng độ TTC nhất định có thể được thêm vào môi trường nuôi cấy TSA để phân biệt các khuẩn lạc vi khuẩn và các tạp chất khác; Nếu sự phát triển của nấm ảnh hưởng đến kết quả đếm TAMC của mẫu, amphotericin B có thể được thêm vào môi trường nuôi cấy TSA để ức chế sự phát triển của nấm; Nếu nấm lây lan và phát triển trong môi trường nuôi cấy SDA có chứa kháng sinh, Rose Bengal có thể được thêm vào để ức chế sự lây lan của hiện tượng [11]. CHP2020 quy định rằng khi việc đếm TYMC bị ảnh hưởng bởi sự phát triển của vi khuẩn, môi trường nuôi cấy SDA có chứa kháng sinh (như chloramphenicol, gentamicin) hoặc môi trường nuôi cấy chọn lọc khác (như môi trường agar natri rose Bengal) có thể được sử dụng [13].
Tuy nhiên, cả USP43 và EP1 0. 0 đều đề cập rõ ràng các yêu cầu liên quan.

1.3 Phương pháp đếm vi sinh vật

Theo phương pháp đếm vi sinh vật, EP1 0. 0 và JP17 đều chỉ định bốn phương pháp đếm, cụ thể là phương pháp lọc màng, phương pháp đếm tấm (đổ, phủ) và phương pháp MPN [10-11]; USP43 không chỉ định phương pháp đếm tấm (đổ) [13], trong khi CHP2020 chỉ chỉ định phương pháp đếm tấm (đổ) [13]. Do phương pháp MPN có độ chính xác thấp và cực kỳ không đáng tin cậy đối với việc đếm nấm, phương pháp MPN chỉ phù hợp cho các tình huống không áp dụng các phương pháp đếm khác và chỉ có thể được sử dụng để đếm TAMC. Về khả năng áp dụng phương pháp, nên thực hiện một cuộc điều tra ứng dụng phương pháp trước khi thử nghiệm. USP43 yêu cầu tỷ lệ phục hồi của số lượng vi khuẩn áp dụng lớn hơn 70%[12] và ba dược điển khác đều áp dụng yêu cầu của hệ số phục hồi là 2 [10-11, 13].
Các yêu cầu về nhiệt độ nuôi cấy của việc đếm TAMC và đếm TYMC phù hợp ở mỗi dược điển, nhưng các quy định về thời gian nuôi cấy và phạm vi đếm thuộc địa thích hợp là hơi khác nhau.

1.4 Số lượng vi khuẩn chịu nhiệt

Thuốc thảo dược Trung Quốc thường được làm nóng trước khi tiêu thụ. Mặc dù sưởi ấm có thể làm giảm sinh học của mẫu và giảm nguy cơ gây bệnh, việc sưởi ấm không thể tiêu diệt vi khuẩn kháng nhiệt trong các loại thuốc thảo dược Trung Quốc. Nó cũng có thể dễ dàng dẫn đến hư hỏng sản phẩm và tích lũy biotoxin. Do đó, CHP2020 đã bổ sung một mục đếm vi khuẩn chịu nhiệt, được định nghĩa là "thuật ngữ chung cho các vi sinh vật được phát hiện bằng tổng số phương pháp aerobic sau khi được đặt trong bể nước (98-100}) trong 30 phút" [13]. Phương pháp này nhằm vào các loại thuốc thảo dược Trung Quốc loại sắc lệnh và đánh giá các vi sinh vật còn lại trong các loại thuốc thảo dược Trung Quốc như vậy sau khi điều trị bằng cách sưởi ấm; Ba dược điển khác không bao gồm các phương pháp liên quan.