Ảnh hưởng của thụ thể Angiotensin II Type I ShRNA đối với huyết áp và tái tạo tâm thất trái ở chuột tăng huyết áp tự nhiên

Trừu tượng:

Nghiên cứu này được thiết kế để nghiên cứu tác động của shRNA thụ thể Angiotensin II loại I (AT1R) đối với huyết áp và tái cấu trúc tâm thất trái ở chuột bị tăng huyết áp tự phát. Mười con chuột Wistar Kyoto (WKY) được sử dụng như một nhóm kiểm soát huyết áp bình thường và 20 con chuột tăng huyết áp tự phát (SHR) được chia ngẫu nhiên thành các nhóm thử nghiệm và nhóm kiểm soát tăng huyết áp. Những con chuột trong nhóm thử nghiệm được tiêm adenovirus tái tổ hợp AT1R shRNA (Quảng cáo5-AT1R-shRNA) qua tĩnh mạch đuôi và những con chuột trong hai nhóm còn lại được tiêm adenovirus tái tổ hợp (Quảng cáo5-EGFP ). Huyết áp tâm thu (SBP) ở động mạch đuôi chuột được đo trước và sau khi tiêm, đồng thời đo tim, thận, động mạch chủ và các mô tuyến thượng thận hai ngày sau khi tiêm lặp lại để quan sát sự phân bố của Ad5-AT1R- shRNA dưới kính hiển vi huỳnh quang. Trước khi tiêm Ad{10}}AT1R-shRNA, huyết áp của nhóm thử nghiệm và nhóm kiểm soát tăng huyết áp cao hơn đáng kể so với nhóm kiểm soát huyết áp bình thường (P<0.01). After two injections, the blood pressure in the experimental group decreased significantly, and the duration of blood pressure reduction reached 19 days. In the experimental group, the kidney, heart, aorta, and adrenal gland tissues showed vigorous fluorescence expression under the fluorescence microscope. Repeated administration of Ad5- AT1R-shRNA has a long-lasting hypotensive effect on SHR and can significantly improve ventricular remodeling.

Trong nghiên cứu thực nghiệm trên chuột, chúng tôi cũng phát hiện ra rằng Cistanche có tác dụng bảo vệ thận, có thể ngăn ngừa tổn thương thận và cải thiện chức năng thận. Trong số đó, Cistanche có thể làm giảm phản ứng căng thẳng oxy hóa của cầu thận và ống thận, đồng thời làm giảm mức độ của các gốc tự do trong mô thận. Ngoài ra, Cistanche cũng có thể làm giảm phản ứng viêm của thận và thúc đẩy quá trình tái tạo và sửa chữa các tế bào thận.

Click vào sản phẩm cistanche nguyên chất

Giới thiệu

Tái tạo tâm thất (hoặc cơ tim) là một khái niệm được đề xuất trong nghiên cứu về bệnh cơ tim thiếu máu cục bộ, bệnh tim do tăng huyết áp, bệnh cơ tim giãn nở và các dạng tổn thương tim khác, chủ yếu được đặc trưng bởi những thay đổi sau tổn thương cơ tim, chẳng hạn như phì đại cơ tim, không phải tế bào cơ tim. tăng sinh và xơ hóa cơ tim, đồng thời mở rộng khoang tim và tăng trọng lượng tim trên cơ sở này [1]. Phì đại cơ tim là sự thay đổi bệnh lý phổ biến nhất trong tăng huyết áp, trong đó một loạt các thay đổi về hình thái và cấu trúc dưới tế bào thường xuất hiện ở cơ tim phì đại.

Một nghiên cứu trước đây đã xác nhận rằng việc kích hoạt quá mức hệ thống RAS (hệ thống renin-Angiotensin) đóng một vai trò quan trọng trong quá trình bệnh lý của quá trình tái cấu trúc tâm thất do tăng huyết áp, do chức năng vận mạch, tăng trưởng tế bào và tác dụng thúc đẩy tăng sinh [2]. Ang II là hoạt chất chính của RAS và có thể phát huy tác dụng sinh học bằng cách kích hoạt đặc biệt AT1R, chất có ái lực cao trên bề mặt nguyên bào sợi tim [3]. Ngoài ra, Ang II cũng có tác dụng giống như yếu tố tăng trưởng nhất định và có thể trực tiếp thúc đẩy quá trình tổng hợp RNA và protein trong tế bào cơ tim để thúc đẩy sự tăng sinh của các tế bào sợi, gây ra sự tái tạo tâm thất [4].

Hơn nữa, công nghệ can thiệp RNA đề cập đến việc sử dụng shRNA để tạo ra RNA hoạt động ngắn can thiệp RNA (siRNA) trong các tế bào và liên kết cụ thể và làm suy giảm mRNA của các gen mục tiêu bổ sung, để ức chế sự biểu hiện của gen mục tiêu [5]. Vectơ adenovirus tái tổ hợp (Ad5-AT1R-shRNA), được thiết kế dựa trên nguyên tắc can thiệp RNA, đã ngăn chặn cụ thể sự biểu hiện của AT1R và đã phát huy tác dụng hạ huyết áp đáng kể trong các nghiên cứu hạ huyết áp trước đây do các nhà điều tra thực hiện [6–8]. Tuy nhiên, là một dạng liệu pháp gen tương đối mới đối với bệnh tăng huyết áp, người ta vẫn chưa biết liệu nó có ảnh hưởng đến việc tái tạo tâm thất do tăng huyết áp hay không, và các tác dụng cũng như tác dụng phụ của việc tiêm tĩnh mạch nhiều lần vẫn chưa được báo cáo.

Trong nghiên cứu hiện tại, những con chuột bị tăng huyết áp tự phát (SHR) đã được chọn làm đối tượng thí nghiệm, huyết áp và sự tái cấu trúc tâm thất của SHR đã được quan sát sau khi tiêm lặp lại Ad5-AT1R-shRNA để nghiên cứu tác động của việc ngăn chặn gen của AT1R do Quảng cáo5-AT1R-shRNA gây ra trong quá trình tu sửa ở bệnh tăng huyết áp.

Nguyên liệu và phương pháp

Thuốc, thuốc thử và dụng cụ

Ad5-AT1R-shRNA và vec tơ adenovirus tái tổ hợp kiểm soát (Ad5-EGFP) mang shRNA của thụ thể Angiotensin II loại 1 (AT1R) được xây dựng và tổng hợp bởi Benyuan-Zhengyang Gene Technology Co., Ltd . (Bắc Kinh, Trung Quốc). Bộ phát hiện hydroxyproline (HYA) được mua từ Viện Kỹ thuật Sinh học Jiancheng Nam Kinh. Dụng cụ đo huyết áp không xâm lấn cho động mạch đuôi chuột (PowerLab, ADInstruments, New South Wales, Australia) được cung cấp bởi Phòng thí nghiệm Tim mạch tại trường đại học của chúng tôi. Máy quang phổ cách tử 722 được sản xuất bởi Nhà máy thiết bị phân tích thứ ba Thượng Hải (Thượng Hải, Trung Quốc). Kính hiển vi điện tử truyền qua (Kính hiển vi điện tử truyền qua loại Fei Tecnai G2 12, Công ty FEI, Hillsboro, OR, Hoa Kỳ) được cung cấp bởi Phòng Kính hiển vi Điện tử của Đại học Y khoa Tongji, Đại học Khoa học và Công nghệ Huazhong. Nghiên cứu hiện tại đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức của Bệnh viện Ngực Thiên Tân.

Phân nhóm và quản lý động vật

Chuột đực trưởng thành SHR và Wistar Kyoto (WKY) đều được 12 tuần tuổi và nặng 280–320 g. Có 3–5 con chuột mỗi lồng, nhiệt độ phòng được giữ ở mức 24 ± 2 độ và độ ẩm tương đối được duy trì ở mức 60–65 phần trăm. Chu kỳ ngày và đêm nhân tạo 12-h được cung cấp, trong đó 7:00 AM–7:00 PM biểu thị phần sáng của chu kỳ và 7:00 PM –7:00 AM biểu thị phần tối của chu kỳ. Những con chuột có thể tự do ăn và uống. Các nhóm chuột bao gồm nhóm kiểm soát huyết áp bình thường (nhóm WKY, n=10), nhóm kiểm soát tăng huyết áp (nhóm SHR, n=10) và nhóm thử nghiệm tăng huyết áp (nhóm thử nghiệm, n{ {20}}).

Những con chuột trong nhóm thử nghiệm được tiêm vào tĩnh mạch 1 ml Ad5-AT1R-shRNA với hiệu giá TCID50 1.7 × 109 qua tĩnh mạch đuôi và những con chuột trong nhóm SHR và WKY được tiêm vào tĩnh mạch 1 ml Ad5-EGFP với hiệu giá TCID50 1.7 × 109 qua tĩnh mạch đuôi. Thời điểm tiêm diễn ra khi bắt đầu thí nghiệm và khi huyết áp đã trở lại trạng thái ban đầu sau mũi tiêm đầu tiên.

Đối với tất cả chuột trong mỗi nhóm, khoảng 80–90 g mô cơ tim đã được lấy và ca phẫu thuật được thực hiện nghiêm ngặt theo hướng dẫn của bộ phát hiện hydroxyco3ine.

Đo huyết áp, nhịp tim và quan sát động vật thí nghiệm

Huyết áp tâm thu (SBP) của động mạch đuôi và nhịp tim được đo bằng phương pháp vòng bít đuôi trong môi trường yên tĩnh tại 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, Các ngày 11, 13, 15, 17, 19, 21 tiêm. Đuôi của con chuột đó đã được làm nóng trước khoảng 40 độ và cố định ở một vị trí thoải mái. Vòng bít nén được đặt ở gốc đuôi chuột, bơm phồng và tạo áp suất. Khi áp suất đạt đến 270 mm Hg (1 mm Hg=0.133 kPa), áp suất được giảm tự động và từ từ, đồng thời huyết áp và nhịp tim được ghi lại bằng hệ thống thí nghiệm chức năng sinh học Medlab kết nối với bộ chuyển đổi áp suất và một bộ khuếch đại. Tất cả chuột được đo liên tục năm lần và phương tiện được tính toán và sử dụng làm SBP và nhịp tim. Sự thèm ăn, hoạt động, nhiệt độ cơ thể, trọng lượng cơ thể (BW) và các phản ứng khác của động vật được quan sát hàng ngày cho đến khi kết thúc thí nghiệm.

Phát hiện sự phân bố của vec tơ adenovirus tái tổ hợp trong các mô chính

Động vật trong nhóm thử nghiệm được tiêm Ad{{0}}AT1R-shRNA được đánh dấu bằng protein huỳnh quang. Hai ngày sau khi tiêm lặp lại Ad5-AT1R-shRNA, các mô tim, thận, động mạch chủ và tuyến thượng thận của nhóm thử nghiệm đã được lấy và sau đó được chuẩn bị ngay lập tức thành các phần đông lạnh. Biểu hiện huỳnh quang được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang. Khi huyết áp giảm, một số động vật đã bị hy sinh và cân nặng. Các con vật được tiêm vào màng bụng 0,4 ml/100 g pentobarbital để gây mê, và tim, thận, động mạch chủ và các mô tuyến thượng thận nhanh chóng được lấy ra. Với một lưỡi dao sắc bén, các cơ quan này được cắt thành các mảnh mô nhỏ có kích thước 1 × 1 × 1 cm và được gửi đến Khoa Giải phẫu bệnh, nơi chúng được chuẩn bị thành các phần đông lạnh. Độ dày của chúng được đo trong khoảng từ 5–8 µm và sự biểu hiện của protein huỳnh quang được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang để đánh giá mức độ hấp thụ của Ad5-AT1R-shRNA bởi các cơ quan chính.

Chuẩn bị mẫu cơ tim

Khi kết thúc thí nghiệm, BW của chuột được đo. Chuột được tiêm màng bụng {{0}}.4 ml/100 g pentobarbital để gây mê. Sau khi mở lồng ngực, quả tim nhanh chóng được lấy ra, cắt bỏ các mạch máu xung quanh, thấm khô máu tim bằng giấy lọc, cân trọng lượng ướt toàn bộ quả tim (HW) và xác định tỷ lệ trọng lượng quả tim so với thể tích (HW/ BW) đã được tính toán [9, 10]. Một số mảnh mô cơ tim 1-mm3 được lấy từ vùng chóp, rửa sạch bằng dung dịch muối đệm phốt phát 0,1 mol/l (PBS), sau đó ban đầu được cố định bằng glutaraldehyde 2,5% (pH 7,2). Sau đó, chúng được cố định bằng dung dịch osmium tetroxide 1% (pH 7.2), khử nước bằng rượu và axeton có gradient tăng dần, ngâm và nhúng bằng nhựa epoxy, rồi chuẩn bị thành các phần siêu mỏng. 60–100 g cơ tim thất trái khác được lấy để đo HYA.

chỉ số quan sát

Huyết áp tâm thu của động mạch đuôi ở trạng thái tỉnh yên tĩnh được ghi lại trước khi tiêm và tại mọi thời điểm sau khi tiêm. Khoảng 80–90 g mô cơ tim đã được lấy và hàm lượng HYA trong mô cơ tim được phát hiện bằng phương pháp sinh học, theo hướng dẫn của bộ phát hiện HYA, sau đó chuyển đổi thành hàm lượng collagen, theo công thức: collagen nội dung=nội dung HYA × 7,46 [11]. BW và CTNH của chuột đã được ghi lại và tỷ lệ CTNH/BW đã được tính toán. Các phần siêu mỏng được nhuộm bằng cả uranyl axetat và chì citrate, đồng thời được quan sát và chụp ảnh dưới kính hiển vi điện tử truyền qua.

Phát hiện biểu hiện của AT1R mRNA bằng phản ứng chuỗi polymerase định lượng huỳnh quang thời gian thực (RT-qPCR)

Khi kết thúc thí nghiệm, {{0}}}.5 g mô tâm thất trái được lấy từ tất cả các nhóm để phát hiện biểu hiện của AT1R mRNA. Trình tự gen AT1R của chuột đã được chọn trên GenBank (số sê-ri NM_030685), và các đoạn mồi và mẫu dò được thiết kế bằng Primer Premier 5.0 và được tổng hợp bởi Sangon Biotech (Thượng Hải, Trung Quốc). Đoạn mồi ngược dòng AT1R là 5'-ACG ATG CTG GTG GCC AAA GT -3' và đoạn mồi xuôi dòng là 5'-ATG ATA AGG AAA GGG AAC AAG AAG C -3'. Trình tự mẫu dò là 5'-ATT ATG AGT CTC GGAATT CGA CGC TCC CCA-3' và biến thể mẫu dò là 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4. Đoạn mồi ngược dòng -actin là 5'-AGG GAA ATC GTG CGT GAC AT -3' và đoạn mồi xuôi dòng là 5'- CCA TAC CCA GGA AGG AAG GCT-3'. Trình tự mẫu dò là 5'-CAC TGC CGC ATC CTC TTC CTC CCT GG-3' và biến thể mẫu dò là 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4.

Tổng số ARN được chiết xuất từ ​​các mô bằng phương pháp một bước Trizol và được sao chép ngược thành cDNA bằng hệ thống sao chép ngược của vi rút bệnh bạch cầu Moloney Murine (MMLV). Chuẩn bị mẫu đường cong chuẩn bao gồm gen mục tiêu và gen giữ nhà (-actin) của mẫu cần được khuếch đại bằng PCR (phản ứng chuỗi polymerase). Pha loãng sản phẩm bằng gradient để tạo thành đường cong chuẩn. Hệ thống phản ứng PCR là 2 µl dung dịch đệm 10 ×, 2 µl MgCl2 và 0.5 µl dNTP. Có {{10}}}.5 µl mồi ngược dòng, 0,5 µl mồi xuôi dòng, 1 µl mẫu dò, 0,4 µl enzym Taq và 2 µl mẫu phản ứng, và khử trùng vô trùng nước được thêm vào cho đến khi thể tích đạt 20 µl. Hệ thống PCR được đặt trong tube PCR huỳnh quang, tiến hành khuếch đại và thu tín hiệu huỳnh quang trên detector PCR định lượng huỳnh quang gen Rotor. Các điều kiện phản ứng như sau: 95 độ, 5 phút; 94 độ, 5 giây; 60 độ , 30 giây trong tổng số 45 chu kỳ đã thực hiện. Các tín hiệu huỳnh quang sau đó được thu thập và kết quả được phân tích.

Để tiếp tục loại bỏ ảnh hưởng của việc định lượng mRNA và hiệu quả phản ứng PCR đến kết quả thí nghiệm, việc phát hiện định lượng số lượng bản sao tuyệt đối của -actin nội kiểm được thực hiện đồng thời, tỷ lệ giữa số lượng bản sao tuyệt đối của AT1R so với -actin đã được sử dụng làm biểu hiện tương đối của gen AT1R.

Phân tích thống kê

Phân tích thống kê dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm thống kê SPSS 12.0. Dữ liệu đo lặp lại giữa ba nhóm được phân tích bằng phân tích hiệp phương sai. Tất cả các bộ dữ liệu đều đáp ứng các giả định để thực hiện ANCOVA. Bài kiểm tra Student-Newman-Keuls (SNK) -q đã được sử dụng để so sánh nhiều lần giữa các phương tiện của nhiều nhóm. Dữ liệu trong tất cả các nhóm được biểu thị dưới dạng trung bình ± SD. P<0.05 was considered statistically significant.

Kết quả

Quảng cáo5-AT1R-shRNA giảm đáng kể SBP trong SHR

Trước khi tiêm, SBP cao hơn đáng kể trong nhóm thử nghiệm và của nhóm SHR cao hơn so với nhóm WKY (P<0.05). Twenty-four hours after the first injection, SBP was significantly lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.01), and="sbp=" did=" not=" decrease=" significantly=" in=" the=" shr=" group=" wky=" p=">0.05). Sau lần tiêm Ad5-AT1R-shRNA đầu tiên, tác dụng hạ huyết áp kéo dài trong 5 ngày ở nhóm thử nghiệm và huyết áp hồi phục vào ngày thứ 7. Sau mũi tiêm thứ hai, huyết áp lại giảm đáng kể và thời gian kéo dài hơn so với sau mũi tiêm đầu tiên, kéo dài trong 14 ngày (Hình 1). Các phản ứng cục bộ và toàn thân của động vật được quan sát hàng ngày và không tìm thấy bất thường nào, chẳng hạn như chán ăn, giảm cân và tăng nhiệt độ. Không có thay đổi đáng kể về nhịp tim trong ba nhóm và sự khác biệt giữa ba nhóm không có ý nghĩa thống kê.

Quảng cáo5-AT1R-shRNA làm giảm đáng kể biểu hiện AT1R mRNA trong mô tim

Để xác minh xem Ad5-AT1R-shRNA có tác động can thiệp RNA đối với sự biểu hiện của AT1R mRNA trong các mô hay không, vào ngày thứ 21 sau khi tiêm Ad5-AT1RshRNA, tổng số RNA của mô tim được xác định trích xuất trong tất cả các nhóm. Sau khi phiên mã ngược thành cDNA, số lượng bản sao của gen được phát hiện bằng phương pháp PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực. Kết quả của đường cong khuếch đại PCR cho thấy biểu hiện của AT1R mRNA ở nhóm thử nghiệm thấp hơn đáng kể so với ở nhóm kiểm soát tăng huyết áp. Hơn nữa, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P<0.05, Fig. 2).

Phân phối của Quảng cáo5-AT1R-shRNA trong các mô

Adenovirus tái tổ hợp được đánh dấu bằng huỳnh quang đã được phân bố trong các mô tim, thận, động mạch chủ và tuyến thượng thận sau 2 ngày tiêm lặp lại Ad5-AT1RshRNA (Hình 3). Vì AT1R được phân bố rộng rãi trong mô, nên kết quả của nghiên cứu này phù hợp với sự phân bố in vivo của AT1R.

Quảng cáo5-AT1R-shRNA làm giảm đáng kể chứng phì đại cơ tim trong SHR

Tình trạng phì đại cơ tim ở chuột có thể được phản ánh bằng cách đo CTNH và tỷ lệ CTNH/BW. Bằng cách đo trọng lượng tim và trọng lượng cơ thể của chuột, nghiên cứu này cho thấy CTNH và CTNH/BW ở nhóm SHR cao hơn đáng kể so với nhóm WKY (P<0.01). The result suggests that there was obvious myocardial hypertrophy in untreated SHR. On the 21st day after Ad5-AT1R-shRNA injection, HW and HW/ BW were lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.05) (Fig. 4).

Quảng cáo5-AT1R-shRNA có thể làm giảm mức độ xơ hóa cơ tim trong SHR

Hàm lượng HYA và collagen ở nhóm SHR cao hơn đáng kể so với nhóm WKY (P<0.01). These results suggest that obvious myocardial fibrosis has been found in the cardiac ventricle in the SHR group. The contents of HYA and collagen were significantly lower in the SHR group than in the SHR group (P<0.01) (Fig. 5).

Quảng cáo5-AT1R-shRNA cải thiện đáng kể cơ sở hạ tầng cơ tim của SHR

Quan sát siêu cấu trúc của cơ tim bằng kính hiển vi điện tử truyền qua cho thấy trong nhóm WKY, màng nhân của các tế bào cơ tim còn nguyên vẹn, các tơ cơ rõ ràng, sự sắp xếp gọn gàng, các đường ngang rõ ràng, các ty thể rõ ràng, và chúng được không tăng sinh sợi collagen trong kẽ cơ tim (Hình 6A và B). Ở nhóm SHR, màng nhân tế bào cơ tim không còn nguyên vẹn, các tơ cơ mờ, sắp xếp không đều, một số tơ cơ biến mất. Có thể thấy rằng các đường ngang không rõ ràng và ty thể bị sưng lên và tích tụ. Hơn nữa, không bào được hình thành trong đó, và một số lượng lớn tăng sản lưới nội chất và tăng sinh sợi collagen đã được quan sát thấy trong mô kẽ cơ tim (Hình 6C và D). So với nhóm WKY và SHR, ở nhóm thử nghiệm, màng nhân của tế bào cơ tim tương đối nguyên vẹn, tơ cơ rõ ràng, sắp xếp tương đối gọn gàng, đường ngang rõ ràng và ty thể không sưng lên. Tuy nhiên, số lượng ty thể tăng lên ở các vùng địa phương và không có sự tăng sinh sợi collagen rõ ràng trong mô kẽ cơ tim (Hình 6E và F).

Cuộc thảo luận

Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi nhận thấy rằng Ad5-AT1R-shRNA có thể làm giảm đáng kể huyết áp của SHR và giảm biểu hiện AT1R mRNA trong mô tim. Vectơ adenovirus tái tổ hợp có tác dụng nhắm mục tiêu nhất định, hiệu ứng này có thể được mô chứa AT1R hấp thụ sau khi tiêm vào tĩnh mạch đuôi. Hơn nữa, Ad5-AT1R-shRNA có thể làm giảm phì đại cơ tim trong SHR, cải thiện tình trạng xơ hóa cơ tim trong SHR bằng cách ức chế biểu hiện AT1R và cải thiện những thay đổi siêu cấu trúc của cơ tim trong SHR.

Ở chuột bình thường, SBP là 110–120 mmHg và ở SHR, SBP có thể cao hơn 200 mmHg. Tỷ lệ mắc bệnh tăng huyết áp là 100% và những con chuột này cũng cho thấy bệnh tim mạch do tăng huyết áp. Vì vậy, loại chuột này thích hợp cho việc nghiên cứu bệnh cao huyết áp ở người. Chuột bị tăng huyết áp tự phát thường bắt đầu biểu hiện phì đại tâm thất trái ở tuổi 10, tình trạng này nặng dần theo tuổi, hàm lượng collagen trong cơ tim tăng đáng kể, xơ hóa cơ tim và tái cấu trúc mô kẽ cơ tim xảy ra [12, 13]. Nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng so với 16-chuột WKY tuần tuổi, CTNH, CTNH/BW, hàm lượng HPA và collagen trong cơ tim tăng đáng kể ở 16-SHR tuần tuổi. Sự gia tăng HW và HW/BW phản ánh sự tăng sinh và phì đại của tế bào cơ tim và sự gia tăng trọng lượng của tim.

Hơn nữa, HYA là duy nhất đối với các sợi collagen và hàm lượng của nó có thể phản ánh hàm lượng collagen và mức độ xơ hóa. Hơn nữa, kết quả kiểm tra bằng kính hiển vi điện tử cho thấy ở nhóm SHR, màng nhân của tế bào cơ tim không còn nguyên vẹn, các sợi cơ mờ, sắp xếp không đều, một số sợi cơ biến mất, các đường ngang không rõ ràng, ty thể bị sưng lên và tích lũy, và không bào được hình thành trong đó. Một số lượng lớn tăng sản lưới nội chất và tăng sinh sợi collagen đã được quan sát thấy trong mô kẽ cơ tim. Kết quả cho thấy rằng quá trình tu sửa tâm thất rõ ràng ở 16-SHR một tuần tuổi.

Các nghiên cứu về liệu pháp gen điều trị tăng huyết áp cho thấy rằng sự ức chế antisense đối với các biểu hiện của AT1R và các thành viên khác của hệ thống RAS đã làm giảm huyết áp và cải thiện những thay đổi bệnh lý của tim trong SHR [14, 15]. Kết quả của các nghiên cứu trước đây cho thấy rằng shRNA được biểu hiện cao ở các mô thận, tim, gan, động mạch chủ và tuyến thượng thận. Điều này tương tự với kết quả của nghiên cứu này. Ngoài ra, Ad5-ACE-AT1R-shRNA có thể cải thiện cơ sở hạ tầng của tế bào cơ tim và giảm huyết áp bằng cách điều chỉnh giảm các biểu hiện của ACE và AT1R.

Tương tự, công nghệ can thiệp RNA đã được sử dụng trong các thí nghiệm trước đây do các nhà nghiên cứu khác thực hiện [16], trong đó biểu hiện gen của AT1R bị ức chế khi truyền Ad5-AT1RshRNA vào tĩnh mạch đuôi, giúp giảm huyết áp. Chúng tôi đã cố gắng đảo ngược chứng phì đại tâm thất trái và xơ hóa cơ tim thông qua liệu pháp gen. Nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng sau khi tiêm lặp lại Ad5-AT1RshRNA, huyết áp trong SHR không chỉ thể hiện tác dụng hạ huyết áp rõ ràng mà còn có tác dụng chồng chất, nghĩa là biên độ và thời gian của tác dụng hạ huyết áp sau lần thứ hai tiêm cao hơn đáng kể so với sau lần tiêm đầu tiên. Kết quả cho thấy hiệu quả của việc tiêm lặp lại Quảng cáo5-AT1R-shRNA sẽ tốt hơn. CTNH, CTNH/BW và hàm lượng HYA và collagen trong tim ở nhóm thử nghiệm thấp hơn đáng kể so với nhóm SHR. Kết quả kiểm tra bằng kính hiển vi điện tử cũng cho thấy tổn thương cơ tim ở nhóm thử nghiệm nhẹ hơn đáng kể so với nhóm SHR và biểu hiện của AT1R mRNA ở nhóm thử nghiệm thấp hơn đáng kể so với nhóm SHR.

Tất cả những kết quả này cho thấy Ad5-AT1RshRNA tạo ra hiệu ứng can thiệp RNA, ngăn chặn một loạt tác động sinh học của sự kết hợp giữa Ang II và AT1R do tăng huyết áp và tái cấu trúc tâm thất gây ra, cho thấy rằng liệu pháp gen này có thể làm giảm không chỉ huyết áp mà còn cải thiện quá trình tu sửa tâm thất trong SHR. Nồng độ Angiotensin II trong huyết tương sẽ tăng lên bằng cách ngăn chặn gen của thụ thể Angiotensin II loại 1. Các tác dụng cổ điển của Angiotensin II trên các cơ quan đích hầu hết được trung gian bởi hai thụ thể màng, thụ thể loại 1 (AT1R) và thụ thể loại 2 (AT2R), làm trung gian cho các chức năng khác nhau. AT1R được chứng minh là thúc đẩy tăng trưởng và tăng sinh, chẳng hạn như co mạch, tăng huyết áp và khả năng co bóp của tim, đồng thời làm trung gian cho các tác động bất lợi, bao gồm rối loạn chức năng nội mô, bệnh tim mạch và viêm.

Ngược lại, AT2R được coi là gây ra các tác dụng ngược, ức chế sự tăng trưởng, thúc đẩy quá trình chết theo chương trình, giãn mạch và hạ huyết áp, đồng thời ngăn ngừa quá trình tái tạo tim mạch [17]. Sau khi tiêm lặp lại, vectơ adenovirus không tạo ra phản ứng bất lợi rõ ràng và tác dụng hạ huyết áp kéo dài hơn. Kết thúc thí nghiệm, ở nhóm thí nghiệm, huyết áp về cơ bản trở về trạng thái ban đầu. Tuy nhiên, biểu hiện của AT1R trong cơ tim thấp hơn so với nhóm SHR. Điều này không có nghĩa là sự thay đổi huyết áp có liên quan trực tiếp đến sự biểu hiện của AT1R trong cơ tim. Người ta suy đoán rằng hệ thống RAS của mô địa phương chủ yếu tham gia vào vai trò xơ hóa mô.

Một hạn chế của nghiên cứu này là huyết áp nên được đo xâm lấn bằng phương pháp đo từ xa vô tuyến, hoặc ít nhất là bằng một hệ thống kết nối, nhưng do sự cố kỹ thuật, chúng tôi chỉ có thể sử dụng phép đo huyết áp vòng bít đuôi, điều này không đáng tin cậy lắm.

Phần kết luận

Liệu pháp gen sử dụng công nghệ RNAi để ức chế biểu hiện AT1R không chỉ được sử dụng như một phương pháp mới để giảm huyết áp mà còn được kỳ vọng là một phương pháp mới để cải thiện quá trình tái tạo cơ tim và suy tim. Tuy nhiên, hiện tại, công nghệ mới này chỉ giới hạn trong nghiên cứu động vật. Sự an toàn và hiệu quả của ứng dụng của nó trong điều trị con người phải được nghiên cứu thêm. Ví dụ, tính an toàn và hiệu quả của vectơ tải nạp và liệu chiến lược liệu pháp gen này có thể được áp dụng cho các loại thay đổi cơ tim khác hay không, cần phải nghiên cứu thêm.

Người giới thiệu

1. Suthahar N, Meijers WC, Silljé HHW, de Boer RA. Từ Viêm đến Xơ hóa-Cơ chế Phân tử và Tế bào của Tái tạo Mô Cơ tim và Quan điểm về Cơ hội Điều trị Khác biệt. Curr Heart Fail Rep. 2017; 14:235–250. [Medline] [CrossRef]

2. Hasan HF, Radwan RR, Galal SM. Yếu tố tăng cường Bradykinin được phân lập từ nọc bọ cạp Leiurus quinquestriatus làm giảm bớt bệnh cơ tim ở chuột được chiếu xạ thông qua việc tu sửa con đường RAAS. Dược phẩm lâm sàng Exp Pharmacol Physiol. 2020; 47:263–273. [Medline] [CrossRef]

3. Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. Xơ hóa mạch máu ở người cao tuổi và tăng huyết áp: Cơ chế phân tử và ý nghĩa lâm sàng. Có thể J Cardiol. 2016; 32:659–668. [Medline] [CrossRef]

4. Wu J, Montaniel KR, Saleh MA, Xiao L, Chen W, Owens GK, et al. Nguồn gốc của các tế bào sản xuất ma trận góp phần gây xơ hóa động mạch chủ trong tăng huyết áp. tăng huyết áp. 2016; 67: 461–468. [Medline] [CrossRef]

5. Lu M, Xing H, Xun Z, Yang T, Ding P, Cai C, et al. Phân phối RNA nhỏ dựa trên exosome: Tiến độ và triển vọng. Châu Á J Pharm Khoa học. 2018; 13:1–11. [Medline] [CrossRef]

6. Xiao C, Qiu L, Zen Q. Xây dựng shRNA nhắm mục tiêu đến các thụ thể angiotensin II loại 1 của chuột và RNAi của nó trong tế bào chất. J Huazhong Đại học Khoa học Công nghệ Med Sci. 2006; 26:4–8. [Medline] [CrossRef]

7. Xiao CS, Zhang JL, Qiu L. [Tác động của shRNA nhắm vào thụ thể angiotensin II loại 1 đối với huyết áp và biểu hiện AT1R mRNA ở chuột tăng huyết áp tự phát]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007; 35:354–358 Trung Quốc. [Medline]

8. Zhang JQ, Sun HL, Ma YX, Wang DW. [Ảnh hưởng của can thiệp RNA nhắm vào thụ thể angiotensin 1a đối với huyết áp và chứng phì đại tim của chuột bị tăng huyết áp 2K1C]. Trung Hoa Yi Xue Za Zhi. 2006; 86: 1138–1143. [Medline]

9. Reaves PY, Wang HW, Katovich MJ, Gelband CH, Raizada MK. Suy giảm huyết áp bằng cách cung cấp hệ thống vec tơ retrovirus chứa cDNA đối kháng thụ thể angiotensin II loại I. phương pháp. 2000; 22:211–218. [Medline] [CrossRef]

10. Guo K, Lan CZ, Yu TT, Huang LL, Wang XH, Pan C, et al. Tác dụng của công thức Xin-Ji-Er-Kang đối với bệnh tăng huyết áp do 2K1C gây ra và tái tạo tim mạch ở chuột. J Ethnopharmacol. 2014; 155: 1227–1235. [Medline] [CrossRef]

11. Paulis L, Matuskova J, Adamcova M, Pelouch V, Simko J, Krajcirovicova K, et al. Hồi quy phì đại thất trái và tái tạo động mạch chủ ở chuột tăng huyết áp thiếu NO: tác dụng của L-arginine và spironolactone. Acta Physiol (Oxf). 2008; 194: 45–55. [Medline] [CrossRef]

12. Kang L, Ge CJ, Hu SJ. Tác dụng có lợi của atorvastatin đối với việc tái cấu trúc tâm thất trái ở chuột bị tăng huyết áp tự phát. dược học. 2007; 80:120–126. [Medline] [CrossRef]

13. Bessa ASM, Jesus ÉF, Nunes ADC, Pontes CNR, Lacerda IS, Costa JM, et al. Kích thích trục ACE2/Ang-(1-7)/Mas ở chuột mang thai tăng huyết áp làm suy giảm rối loạn chức năng tim mạch ở con đực trưởng thành. Tăng huyết áp Res. 2019; 42:1883–1893. [Medline] [CrossRef]

14. Kimura B, Mohuczy D, Tang X, Phillips MI. Suy giảm huyết áp và phì đại tim do vi rút liên quan đến adeno cung cấp antisense angiotensinogen. tăng huyết áp. 2001; 37:376–380. [Medline] [CrossRef]

15. Zhou H, Bian YF, Li ML, Gao F, Xiao CS. [Ảnh hưởng của can thiệp RNA nhắm vào thụ thể angiotensin 1 và men chuyển angiotensin đối với huyết áp và tái cấu trúc cơ tim ở chuột tăng huyết áp tự phát]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2010; 38:60–66 (bằng tiếng Trung Quốc). [Medline]

16. Raja MAG, Katas H, Amjad MW. Thiết kế, cơ chế, phân phối và phương pháp điều trị của siRNA chính tắc và Dicer-substrate. Châu Á J Pharm Khoa học. 2019; 14:497–510. [Medline] [CrossRef]

17. Dasgupta C, Zhang L. Các thụ thể Angiotensin II và khám phá thuốc trong bệnh tim mạch. Thuốc Discov ngày nay. 2011; 16:22–34. [Medline] [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com