Tác dụng của Cistanche đối với chức năng chống lão hóa và miễn dịch của chuột mẫu lão hóa trước và sau khi chế biến

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

trừu tượngMục tiêu: Khám phá các sản phẩm chế biến khác nhau củaCistanchesherba in D - chức năng chống lão hóa galactose ở chuột và ảnh hưởng của chức năng cơ quan miễn dịch. Phương pháp: Chúng tôi chiết xuất các sản phẩm chế biến khác nhau của Cistanches herba. Chuột SD được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng trống, nhóm mô hình lão hóa, nhóm vitamin E, nhóm liều cao, trung bình và thấp, nhóm rượu cistanche liều cao, trung bình và thấp. Với mô hình chuột lão hóa D - galactose được thiết lập, sau khi xử lý, chúng tôi phát hiện hàm lượng MDA, SOD, NO trong huyết thanh của từng nhóm chuột và đếm chỉ số lá lách, chỉ số tuyến ức; và sau đó quan sát những thay đổi hình thái bệnh lý của các mô lá lách và mtDNA trong não. Kết quả: MDA và NO trong huyết thanh của chuột mô hình lão hóa tăng lên đáng kể (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanchesherba có thể làm giảm đáng kể MDA và NO (P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Từ khóa: Cistanches herba; Chế biến; sự lão hóa; miễn dịch

Y học cổ truyền Trung QuốcCistanche DesticolaYC Ma hoặcCistanche DesticolaYC Ma hoặc C. tubulosa (Schenk) Wight là phần thân khô, có vảy củaCistanche Desticola(Schenk) Chắc chắn. Tính ấm, vị ngọt mặn, quy kinh lạc ở thận và ruột già. Nó cần thiết cho việc tăng cường thận và tăng cường dương. Y học được gọi là "sa mạc sâm" (2). Cistanche lần đầu tiên được xuất bản trên tạp chí "Thần Nông's Materia Medica". Nó được liệt kê là lớp hàng đầu. Nó có tác dụng bổ tinh khí và dưỡng tủy, bổ thận tráng dương, tráng dương, kéo dài tuổi thọ, dưỡng huyết dưỡng ẩm, trị khô kiệt,… Có tác dụng chữa vô sinh nữ, nam liệt dương, huyết khô táo bón, lưng gối lạnh. . Các chứng bệnh như đau đớn, vướng víu, đổ máu, v.v.! 3_5] o Ấn bản năm 2010 của "Dược điển Cộng hòa Nhân dân Trung Hoa" cóCistanche tubulosavàCistanche E.

Khi cơ thể già đi sẽ có một số suy thoái cả về chức năng sinh lý và cấu trúc hình thái. Đây là cái mà chúng ta thường gọi là "lão hóa". Biểu hiện của nó chủ yếu là sự suy thoái của các cơ quan, mô, tế bào như giảm độ đàn hồi của mô, các cơ quan bị teo đi, số lượng tế bào giảm đi sẽ khiến nhiều chức năng của cơ thể bị suy giảm dần. Các thí nghiệm đã xác nhận rằngCistanchecó tác dụng chống lão hóa "I", nhưng các nghiên cứu so sánh về tác dụng chống lão hóa củaCistanchetrước và sau khi xử lý vẫn chưa được báo cáo. Thí nghiệm này chủ yếu nghiên cứutác dụng chống lão hóacủaCistanchetrước và sau khi chế biến và cung cấp cơ sở khoa học để nghiên cứu cơ chế của quá trình lão hóa.

Echinacoside

1 vật liệu thí nghiệm

1.1 Động vật thí nghiệm

Chuột SD, nặng 180-220 g. SPF được cung cấp bởi Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., số giấy phép: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Thuốc và thuốc thử

Cistancheđược mua từ tro thịt hoang dã Alashan ở Nội Mông, và được xác định là thân cây thịt khô với lá vảy củaCistanche DesticolaYC Ma của Giáo sư Zhai Yanjun của bệnh viện chúng tôi; Phương pháp chuẩn bị của từng nhóm chất thử như sau, cistanche thô: cistanche thô được hấp trong 2 giờ, cắt thành từng lát dày 6 mm và sấy khô ở 70P. Lấy Cistanche thái lát chiết 3 lần trong nước, sau đó gộp chung thuốc sắc và cô đặc đến nồng độ nhất định. Chuẩn bị Cistanche: Lấy Cistanche thô và ngâm trong rượu vàng trong 8 giờ, thêm 1: 1, hấp trong 16 giờ, cắt thành các lát dày 6 mm, và sấy ở 70 T. Lấy các lát Cistanche và chiết xuất 3 lần với nước, sau đó kết hợp các loại thuốc sắc và cô đặc đến một nồng độ nhất định. Viên nang mềm vitamin E (số lô 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galactose (số lô 710B055, Công ty TNHH Công nghệ Soleibao Bắc Kinh); Bộ nitric oxide (NO) (số lô: BPE30262); Malondialdehyde (số lô: BPE30262) MDA) (số lô BPE30527); kit superoxide dismutase (SOD) (số lô: BPE3O387); tất cả được cung cấp bởi Công ty TNHH Công nghệ sinh học Langdon Thượng Hải; bộ tách chiết DNA ty thể động vật dạng cột (mua từ Công ty TNHH Công nghệ Phòng thí nghiệm Bắc Kinh); Bộ PCR (mua từ Công ty Thuốc thử TIANGEN); các thuốc thử khác tinh khiết trong nước.

1.3 Thiết bị thí nghiệm

Gene cycler (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Máy đọc Microplate (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., USA); Buồng nhiệt độ và độ ẩm không đổi (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); TGL -16 Loại C nói về Máy ly tâm để bàn (Nhà máy Dụng cụ Khoa học Anting Thượng Hải); Máy trộn Vortex (Nhà máy sản xuất nhạc cụ Qingpu Huxi Thượng Hải); Cân điện tử (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Máy trộn Vortex (Nhà máy sản xuất nhạc cụ Qingpu Huxi Thượng Hải).

2 Phương pháp thực nghiệm

2.1 Mô hình và phân nhóm động vật

Sau 1 tuần cho ăn thích nghi, những con chuột được chia ngẫu nhiên thành nhóm trống, nhóm mẫu, nhóm đối chứng,Cistanchenhóm liều cao, trung bình và thấp, và B. striata: nhóm liều cao, trung bình và thấp, mỗi nhóm 9 nhóm 8 miếng. Ngoại trừ nhóm trắng, các nhóm khác được tiêm D-galactose 167,5 mg / kg vào buổi sáng; nhóm trắng được tiêm một lượng tương đương nước muối bình thường; vào buổi chiều, lần lượt cho liều lượng cao, trung bình và thấp của tro thịt và rượu là 5,48 và 2. 74, 1,37 g / kg dung dịch sản phẩm thử nghiệm, nhóm chứng dương tính được cho 2,75 mg / mL vitamin E, nhóm mẫu trắng và nhóm mô hình được cho một thể tích nước muối bình thường bằng nhau bằng cách tiêm vào dạ dày. Trong 6 tuần liên tiếp, cuối cùng họ đã bị xử tử và đo nhiều chỉ số khác nhau.

2.2 Xác định hàm lượng SOD, MDA và NO trong huyết thanh chuột

Máu được lấy từ động mạch chủ bụng của chuột, ly tâm ở tốc độ 3000 vòng / phút trong 15 phút để tách huyết thanh và lưu trữ ở -20 Y để sử dụng sau này. Việc xác định hàm lượng MDA.SOD.NO được thực hiện theo hướng dẫn của bộ thử nghiệm.

2.3 Ảnh hưởng đến trọng lượng của các cơ quan miễn dịch ở chuột mô hình lão hóa

Những con chuột trong mỗi nhóm được cân và hiến tế sau khi lấy máu. Lá lách và tuyến ức được lấy, rửa sạch bằng nước muối, lau khô và cân, tính hệ số của lá lách và tuyến ức.

2.4 Quan sát hình thái mô lá lách

Các lá lách cân được cố định bằng 4% paraformaldehyde, nhúng trong parafin, cắt nhỏ và nhuộm bằng HE. Những thay đổi trong các phần bệnh lý của lá lách trong mỗi nhóm được quan sát dưới kính hiển vi.

2.5 Phương pháp thống kê

Sử dụng phần mềm SPSS để thực hiện phân tích phương sai một chiều và kiểm định LSD-t để so sánh theo từng cặp.

2.6 Phát hiện đột biến mtDNA trong não

Mô não chuột được cho vào cối với nitơ lỏng, nhanh chóng nghiền thành bột, và sau đó tham khảo phương pháp tài liệu, theo hướng dẫn của bộ kit để chiết xuất mtDNA mô não.

Khuếch đại PCR phát hiện sự xóa đoạn mtDNA4834: đoạn mồi đề cập đến trình tự hoàn chỉnh của bộ gen mtDNA của chuột được báo cáo bởi Gada-leta et al. (1898), và các đoạn mồi được tổng hợp bởi Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAAC -3 'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG { {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG -3,

Hệ thống phản ứng PCR: DNA khuôn mẫu 1|xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25|xL, ddH2O 20 jiL, mỗi đoạn 2 mồi. Điều kiện khuếch đại: biến tính 95 Y đầu tiên trong 5 phút; Biến tính 95 T trong 30 s, ủ 56 T trong 30 s, kéo dài 72 T trong 45 s, tổng cộng 35 chu kỳ; lần kéo dài 72 T cuối cùng trong 7 phút. Các sản phẩm khuếch đại được điện di trên gel agarose 1,5%.

Acteoside

3 Kết quả và phân tích

3.1 Tác dụng củaCistanchevề các dấu hiệu vật lý của chuột già

So với nhóm trống, chuột già có bộ lông sẫm màu và vàng, da lỏng lẻo và xỉn màu, da nhão, rụng lông, chán ăn, giảm hoạt động tự phát, chậm vận động, cột sống phình to, bơ phờ, phản ứng chậm và các biểu hiện lão hóa khác. Thời gian tiêm càng lâu, các triệu chứng càng rõ ràng. So với nhóm lão hóa, trạng thái tinh thần, màu lông, cảm giác thèm ăn, hình dạng cơ thể và độ nhạy phản ứng của chuột được cải thiện với sự gia tăng thời gian sử dụng ở mỗi nhóm sử dụngCistanche. Trong số đó, về cơ bản không có sự khác biệt giữa nhóm sản phẩm liều cao và nhóm đối chứng.

3.2 Tác dụng củaCistanchevề hàm lượng MDA, SOD và NO trong huyết thanh của chuột mô hình lão hóa

Kết quả được thể hiện trong Bảng I. So với nhóm trống, nhóm mô hình mda.no đã tăng lên đáng kể (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, MDA.N 0 của nhóm Cistanche liều trung bình và thấp đã giảm đáng kể (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3 Cáitác dụng của Cistanchevề chức năng miễn dịch của chuột mô hình lão hóa Chi

3.3.1 Ảnh hưởng của Cistanche đối với chỉ số lá lách và chỉ số tuyến ức của chuột mô hình lão hóa

Kết quả được thể hiện trong bảng 2. So với nhóm trống, hệ số tuyến ức và lá lách ở nhóm mô hình là g

Có xu hướng giảm nhưng không có ý nghĩa thống kê. So với nhóm mô hình, hệ số tuyến ức và lá lách của mỗi nhóm điều trị đều tăng lên đáng kể (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

So sánh nhóm, hệ số tuyến ức và lá lách của nhóm liều trung bình và liều thấp củaCistanchecó xu hướng giảm

Tiềm năng; so với liều caoCistanche Desticolanhóm liều cao, tuyến ức và lá lách của nhóm dán rượu liều lượng trung bình và thấp

Hệ số nội tạng có xu hướng giảm dần; so với liều caoCistanche Desticolanhóm liều cao, hệ số tuyến ức và lá lách của liều caocistanche Desticolanhóm liều cao có xu hướng giảm dần. Kết quả này cho thấy nhóm dùng liều cao tốt hơn nhóm dùng liều thấp so với các nhóm dùng khác nhau và hiệu quả điều trị của nhóm sản phẩm tốt hơn nhóm sản phẩm thô so với nhóm dùng cùng liều lượng.

Bảng 1 So sánh hàm lượng SOD.MDA.NO trong máu của chuột ở mỗi nhóm (n. =8, x ± s)

Ghi chú:. So với nhóm mô hình I, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 Ảnh hưởng của những thay đổi bệnh lý trong lá lách củaCistanchechuột mô hình lão hóa. Nhóm trống có một nang lá lách mỏng và đồng đều, bờ lách rõ ràng không sưng, phân tách rõ ràng giữa bột giấy màu đỏ và trắng, nhiều nốt lá lách hơn, và cùng kích thước, ở trung tâm lá lách. Số lượng tế bào trong vỏ bạch huyết xung quanh tiểu động mạch dày đặc. Ở nhóm mô hình, lá lách dày lên, màng não và vỏ não sưng lên, cùi trắng đỏ không rõ ràng, cùi trắng giảm rõ rệt, số lượng tế bào lympho giảm, thâm nhiễm một số lượng lớn tế bào viêm, cấu trúc hình thái bị hư hỏng. Mặc dù kích thước của nốt lách ở mỗi nhóm điều trị là khác nhau, nhưng ranh giới cùi trắng và đỏ rất rõ ràng. Số lượng tế bào trong vỏ bạch huyết xung quanh động mạch nhỏ trung tâm của lá lách dày đặc, và hình thái và cấu trúc đã được phục hồi. Hơn nữa, nhóm chưng cất liều cao đã có thể cải thiện những thay đổi bệnh lý. Nó tốt hơn nhóm vitamin E, trong đóCistanchesản phẩm tốt hơn nhóm sản phẩm thô và nhóm liều cao tốt hơn nhóm liều thấp. Xem chèn chèn X-XI.1-10 là mtDNA trong não của chuột ở nhóm trống, nhóm mô hình, nhóm kiểm soát và nhóm cao. mtDNA Hình 3 Kết quả điện di của các sản phẩm khuếch đại mtDNA PCR trong não chuột (mồi PI.P2)

3.4 Xóa và đột biến mtDNA trong não

Theo mồi P3 và P4, có thể thu được một đoạn mtDNA bảo toàn có kích thước khoảng 770bp. Từ Hình 2, chúng ta có thể thấy rằng các đoạn đích đã được khuếch đại ở tất cả 9 làn, cho thấy rằng tất cả 9 nhóm mtDNA đã được trích xuất thành công.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p và 750 bp trong các làn 2, 4, 5, 7, 9 và 10. Các mảnh vỡ đã được thu hồi và gửi đến Công ty Công nghệ sinh học Baocheng Hàng Châu để giải trình tự. So với trình tự được báo cáo bởi Gadateta et al. (1989), nó đã chứng minh rằng có sự xóa bỏ các đoạn mtDNA có kích thước khoảng 4000-5000 bp. Do đó, nó cho thấy rằng có khoảng 4834 bp bị xóa mtDNA trong não của nhóm người mẫu. Các làn 1, 3 và 8 không có mảnh nào, chứng tỏ rằng không có đoạn nào bị mất đoạn ty thể ở 1, 3 và 8. Kết quả cho thấy không có mảnh nào bị thiếu trong nhóm men của máy chưng cất liều cao, nhóm thuốc dương tính, và nhóm trắng, cho thấy nhóm men của máy chưng cất liều cao có thể có tác dụng chống lão hóa. Xem Hình 2 ~ Hình 3.

1-10 là mtDNA trong não của chuột ở nhóm trống, nhóm mô hình, nhóm kiểm soát và nhóm cao. mtDNA Hình 3 Kết quả điện di của các sản phẩm khuếch đại mtDNA PCR trong não chuột (mồi PI.P2)

Cistanche: chống lão hóa

4. Thảo luận

Mô hình lão hóa do sử dụng D-galactose trong dạ dày hiện là mô hình lão hóa được sử dụng phổ biến hơn. Mô hình chủ yếu làm giảm hoạt động của nhiều loại enzym chống oxy hóa, do đó, một số lượng lớn các gốc tự do được tạo ra trong quá trình trao đổi chất của cơ thể, dẫn đến sự lão hóa của cơ thể. Những thay đổi về hình thái mô tương tự như những thay đổi của quá trình lão hóa tự nhiên ⑻. Một số lượng lớn các thí nghiệm đã chỉ ra rằng sự gia tăng bất thường do D-galactose gây ra hàm lượng NO trong não và vỏ tiểu não và máu của những con chuột già. Kết quả của nghiên cứu này đã xác nhận rằng hàm lượng máu của chuột lão hóa cao hơn đáng kể so với nhóm bình thường, điều này tương tự như kết quả được báo cáo trong tài liệu "-m.

Trong thí nghiệm này, tác dụng chống lão hóa của mô hình lão hóa của chuột trước và sau khi chế biếnCistancheđã được nghiên cứu. Kết quả cho thấy MDA và N huyết thanh ở chuột mô hình lão hóa. Tăng lên đáng kể (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.