Ảnh hưởng của Polysaccharides Cistanche lên hành vi sinh học của tế bào ung thư phổi A549

Tóm tắt: Mục tiêu Để điều tra ảnh hưởng củaCistanche polysaccharidevề hành vi sinh học của tế bào ung thư phổi A549. Phương pháp Các tế bào ung thư phổi A549 được chia thành nhóm đối chứng,Cistanche polysaccharideNhóm 100, 200, 400 ng / mL, nhóm si-NC, nhóm si-LINC01410,Cistanche polysaccharide400 ng / mL cộng với pcDNA,Cistanche polysaccharide400 ng / mL cộng với nhóm pcDNA- LINC01410. Tốc độ tăng sinh của tế bào A549 được phát hiện bằng phương pháp MTT, khả năng nhân bản của tế bào A549 được phát hiện bằng xét nghiệm hình thành khuẩn lạc và 549 tế bào được phát hiện bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy

Tỷ lệ apoptosis của tế bào, phương pháp Transwell được sử dụng để phát hiện khả năng di cư và xâm nhập của tế bào A549, và phương pháp RT-qPCR được sử dụng để phát hiện sự biểu hiện của mRNA LINC01410 trong tế bào A549.

Kết quả:Cistanche polysaccharidecó thể ức chế sự tăng sinh tế bào A549, sự hình thành khuẩn lạc, khả năng di cư và xâm nhập, biểu hiện mRNA LINC01410 (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche polysaccharidevề sự tăng sinh, apoptosis, sự di cư và xâm nhập của các tế bào A549. Sự kết luận:Cistanche polysaccharidecó thể ức chế hoạt động, hình thành dòng, khả năng di chuyển và xâm lấn của tế bào ung thư phổi và thúc đẩy quá trình chết rụng tế bào bằng cách giảm sự biểu hiện của LINC01410.

Từ khóa:Cistanche polysaccharide; tế bào ung thư phổi A549; LINC01410; sự sinh sôi nảy nở; sự chết tế bào

Bấm vào đây để lấy mẫu Cistanche miễn phí cho

Giảm tổn thương gan

Ung thư phổi là khối u ác tính có tỷ lệ mắc và tử vong đầu tiên ở nước tôi. Các phương pháp điều trị ung thư phổi bao gồm chủng ngừa, phẫu thuật và hóa trị [1].

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng y học cổ truyền Trung Quốc và các thành phần của nó có lợi thế lớn trong điều trị ung thư phổi và có thể cải thiện hiệu quả của bệnh ung thư phổi [2-3].Cistanchelà một dược liệu quý ở nước tôi, thành phần chính của nó gồm có phenethyl alcohol tổng glycoside, polysaccharides, iridoids, alkaloids và lignans. Các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng tổng sốphenylethyl glucosides của Cistanchecó thểgiảm tổn thương gan ở chuột mang khối u H22 và ức chế sự phát triển của khối u[4]. Ergosteroside, thành phần hoạt tính của Cistanche, có thể ức chế sự phát triển của khối u và sự tăng sinh tế bào ung thư đại trực tràng ở mô hình xenograft chuột khỏa thân, và gây ra quá trình apoptosis [5].

Cistanche polysaccharidescó thể ức chế ung thư phổi Lewis và các tế bào sarcoma S180 bằng cách tăng hoạt động của các tế bào tiêu diệt tự nhiên và interleukin 2 (IL -2).

Tuy nhiên, các chức năng tiềm năng, các quá trình hình thành sinh học và các cơ chế cơ bản củaCistanche polysaccharidestrong ung thư phổi vẫn chưa rõ ràng. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng lncRNA thường được bãi bỏ quy định trong ung thư phổi và đóng một vai trò quan trọng trong sự xuất hiện, phát triển và điều trị ung thư phổi [7]. LINC01410 được biểu hiện nhiều trong ung thư nội mạc tử cung và ảnh hưởng đến tiên lượng của bệnh nhân ung thư nội mạc tử cung [8]; LINC01410 biểu hiện quá mức thúc đẩy hình thành mạch và di căn ung thư dạ dày bằng cách ức chế miR -532-5 p [9]; Tế bào ung thư tuyến giáp thể nhú tăng sinh, di cư và xâm lấn [10-11], trong khi vai trò của LINC01410 trong ung thư phổi là không rõ ràng. Mục đích của thí nghiệm này là để nghiên cứu ảnh hưởng củaCistanche polysaccharidesvà LINC01410 về kiểu hình ác tính của tế bào ung thư phổi, và liệu LINC01410 có liên quan đến quy định củaCistanche polysaccharidesvề hành vi sinh học ác tính của tế bào ung thư phổi, để cung cấp cơ sở cho các nghiên cứu sâu hơn vềCistanche polysaccharides.

Cistanche polysaccharides

Vật liệu của polysaccharides Cistanche trong Nghiên cứu Điều trị Ung thư

Tế bào ung thư phổi A549 được mua từ American Type Culture Collection (ATCC).Cistanche polysaccharide(độ tinh khiết Lớn hơn hoặc bằng 98 phần trăm, số sản phẩm D3281) được mua từCông ty TNHH công nghệ sinh học Wecistanche Bio-Tech. Huyết thanh bò thai được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Shuoheng Quảng Châu;

Môi trường RPMI -1640 đã được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Hàng Châu Qiannuo; Bộ dụng cụ MTT được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Meixuan Thượng Hải; Buồng transwell và Matrigel được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Unicon Bắc Kinh; Apoptosis kit được mua từ Công ty PromoCell, Đức; Bộ SYBRremix ExTaqTM được mua từ Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.

2 phương pháp của Cistanche polysaccharides trong Nghiên cứu Điều trị Ung thư

2.1 Nuôi cấy tế bào và phân nhóm

Tế bào A549 được nuôi cấy trong môi trường RPMI -1640 chứa 10% huyết thanh bò thai trong tủ ấm 37 độ, 5% CO2. Các tế bào trong giai đoạn tăng trưởng logarit được xử lý bằngCistanche polysaccharideở nồng độ khối lượng tương ứng là 100, 200 và 400 ng / mL và được ghi lại làCistanche polysaccharideNhóm 100, 200 và 400 ng / mL; Các tế bào A549 không được xử lý bằng Cistanche polysaccharide là nhóm đối chứng. Các tế bào A549 đã được chuyển giao tương ứng với si-NC hoặc si-LINC0141, được ký hiệu là nhóm si-NC, nhóm si-LINC01410; si-NC và si-LINC01410 được truyền vào tế bào A549 và được xử lý với 400 ng / mLCistanche polysaccharide, được biểu thị làCistanche Polysaccharide400 ng / mL cộng với nhóm pcDNA,Cistanche polysaccharide400 ng / mL cộng với nhóm pcDNA-LINC01410.

2.2 Phát hiện phương pháp MTT

Tốc độ tăng sinh tế bào A549 Tế bào A549 được xử lý bằngCistanche polysaccharideở các nồng độ khối lượng tương ứng là 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 và 400 ng / mL. Thu thập các tế bào A549 trong mỗi nhóm và đặt chúng vào đĩa 96- giếng, thêm 20 μL MTT vào mỗi giếng, tiếp tục nuôi cấy trong tủ ấm trong 4 giờ, loại bỏ phần nổi phía trên, thêm 150 μL DMSO vào mỗi giếng. , và phát hiện ánh sáng của từng nhóm tế bào ở bước sóng 490 nm. Giá trị mật độ (OD) được sử dụng để tính toán tốc độ tăng sinh tế bào.

Cistanche Cultivation

2.3 Thử nghiệm hình thành khuẩn lạc

A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 ô) đã được ghi lại.

2.4 Phát hiện đo tế bào dòng chảy

Tốc độ chết của tế bào A549 Tế bào A549 trong mỗi nhóm được thu thập và tiếp tục hoạt động trở lại trong dung dịch đệm muối có đệm phosphat 100 μL (1 × 106 / mL), và 1 mL huyền phù tế bào, 10 μL Annexin V-FITC và 5 μLPI được thêm vào ống nghiệm , tránh ánh sáng. Sau khi ủ trong 30 phút, tế bào được thu thập và phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy.

sự chết tế bào.

2.5 Phát hiện bằng phương pháp Transwell

Khả năng di chuyển và xâm nhập của tế bào A549 Huyền phù tế bào A549 (2 × 1 0 4/200 μL, môi trường không chứa huyết thanh) của mỗi nhóm được trải đều trong khoang trên của khoang Transwell và 500 μL RPMI {{ 7}} môi trường chứa 10 phần trăm FBS đã được thêm vào khoang dưới. Các tế bào trong buồng trên được loại bỏ, và các tế bào trong buồng dưới được cố định bằng 4% paraformaldehyde và nhuộm bằng 0,1% tinh thể tím. Các tế bào được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng và 5 trường nhìn được chọn ngẫu nhiên để đếm. Trong thí nghiệm xâm nhập tế bào, Matrigel đã được phủ trước trên khoang trên của buồng Transwell, và các bước còn lại giống như trong thí nghiệm di chuyển.

2.6 Phát hiện RT-qPCR

Sự biểu hiện của LINC 0 1410 mRNA trong tế bào A549 RNA tổng số được chiết xuất từ ​​tế bào bằng thuốc thử TRIzol và cDNA được tổng hợp theo hướng dẫn của bộ phiên mã ngược. Hệ thống phản ứng là 2 μL sản phẩm phiên mã ngược, 10 μL SYBR Green Mix, 0,5 μL mồi thuận và nghịch, và 7 μL nước vô trùng. Các điều kiện phản ứng là 95 độ trong 30 giây, 60 độ trong 30 giây và 72 độ trong 30 giây, trong tổng số 40 chu kỳ; biểu thức tương đối của LINC01410mRNA được tính bằng phương pháp 2- ΔΔCT với GAPDH làm tham chiếu nội bộ. Trình tự mồi là LINC01410 thuận 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC -3 ', ngược 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA -3'; tham chiếu nội bộ GAPDH chuyển tiếp 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT -3 ', đảo ngược 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG -3'.

2.7 Phân tích thống kê

Phần mềm SPSS 2 0. 0 được sử dụng để xử lý, dữ liệu đo lường được biểu thị bằng (x ± s), thử nghiệm t mẫu độc lập được sử dụng để so sánh giữa hai nhóm, phân tích phương sai một chiều được sử dụng để so sánh giữa nhiều và thử nghiệm LSD-t được sử dụng để so sánh từng cặp giữa các nhóm. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

Bột chiết xuất Cistanche

3 kết quả của Cistanche polysaccharides trong Nghiên cứu Điều trị Ung thư

3.1 Tác dụng củaCistanche polysaccharidevề sự tăng sinh và chết rụng của tế bào A549 So với nhóm đối chứng, tốc độ tăng sinh của tế bào A549 trong mỗi nhóm liều củaCistanche polysaccharidetăng lên (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">

3.2 Tác dụng củaCistanche polysaccharidevề khả năng di chuyển và xâm nhập của tế bào A549 So với nhóm đối chứng, số lượng tế bào A549 trong mỗi nhóm liều củaCistanche polysaccharidegiảm (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">

3.3 Tác dụng củaCistanche polysaccharidevề sự biểu hiện của mRNA LINC01410 trong tế bào A549 So với nhóm đối chứng, sự biểu hiện của mRNA LINC01410 trong tế bào A549 trong mỗi nhóm liều củaCistanche polysaccharideđã giảm (P ＜ 0. 05) theo cách phụ thuộc vào liều lượng.