Tác dụng của Polygona-polysaccharose đối với bệnh Ferroptosis ở chuột mắc bệnh thận đái tháo đường

từ khóa:bệnh thận tiểu đường;polysacarit-polysaccharose; bệnh ferroptosis; chuyển giao; FTH1; GPX4

 

Bệnh thận tiểu đường(DN) là một biến chứng vi mạch nghiêm trọng củađái tháo đường[1] DN là một nghiêm trọngbiến chứng vi mạch của bệnh tiểu đườngđái tháo đường [1], thường biểu hiện dưới dạng albumin niệu vi lượng ở giai đoạn đầu, sau đó là sự phát triển dần dần của Giai đoạn đầu thường biểu hiện với albumin niệu vi lượng, sau đó là sự phát triển dần dần của protein niệu lượng lớn, tốc độ lọc cầu thận giảm dần và creatinine máu tăng dần [2 ]. tăng dần creatinine[2] . Nếu không được điều trị, bệnh có thể dẫn đến bệnh mãn tính. Nếu không được điều trị, nó có thể dẫn đến tổn thương thận tiến triển mãn tính và cuối cùng là bệnh giai đoạn cuối. Nếu không được điều trị, nó có thể dẫn đến tổn thương thận tiến triển mãn tính và cuối cùng là suy thận giai đoạn cuối [3] . Chết sắt Chết sắt là sự tích lũy phụ thuộc sắt của axit béo không bão hòa Chết sắt là sự tích lũy phụ thuộc sắt của quá trình oxy hóa phospholipid axit béo không bão hòa dẫn đến chết tế bào, biểu hiện chủ yếu bằng biểu hiện chính của chết sắt là tích tụ sắt phụ thuộc peroxide lipid nội bào [4] . [4] . Các nghiên cứu Người ta thấy rằng tổn thương tế bào biểu mô ống thận có liên quan mật thiết với sự chết do sắt [5] . Vương và cộng sự.

Wang và cộng sự [6] đã phát hiện ra rằng biểu hiện glutathione peroxidase 4 (GPX4) trong mô kẽ ống thận (GPX4) có liên quan chặt chẽ đến mức độ nghiêm trọng và tiến triển của bệnh DN. GPX4, với tư cách là mục tiêu quan trọng để kích hoạt chương trình chết sắt, là một cảm biến của stress oxy hóa và tín hiệu chết tế bào, và biểu hiện GPX4 giảm dẫn đến sự gia tăng đáng kể biểu hiện GPX4 trực tiếp, dẫn đến sự gia tăng đáng kể lượng oxy sống trong cơ thể[ 7] . . Do đó, ức chế chết tế bào biểu mô ống thận thông qua điều hòa chết sắt Do đó, ức chế chết tế bào biểu mô ống thận thông qua điều hòa chết sắt để giảm tổn thương thận DN có thể là một chiến lược hiệu quả để điều trị DN Do đó, ức chế chết ống thận chết tế bào biểu mô thông qua quy định chết sắt có thể là một chiến lược hiệu quả để điều trị DN.
CácpolysacaritcủaC. flavuslà dược lý quan trọng và phong phú nhất. Đây là một trong những thành phần dược lý quan trọng và phong phú nhất của C. flavus. Nghiên cứu thực nghiệm cho thấy nó đóng một vai trò quan trọng trong việc cải thiện chức năng thận của DN và giảm bớt phản ứng viêm. Li và cộng sự [8] . Li và cộng sự [9] . phát hiện ra rằng Li và cộng sự [9] đã phát hiện ra rằng sự can thiệp của C. flavus polysacarit đã cải thiện đáng kể rối loạn chuyển hóa glucolipid và khả năng dung nạp insulin ở chuột mắc bệnh tiểu đường. Lý và cộng sự. Một nghiên cứu khác cho thấy khả năng dung nạp glucose, glucose 24 giờ và insulin của những con chuột mắc bệnh thận do tiểu đường đã được cải thiện đáng kể sau khi có sự can thiệp của polysacarit chiết xuất màu vàng. Một nghiên cứu khác cho thấy rằng lượng đường trong máu, 24-h microalbumin trong nước tiểu, creatinine trong máu (SCr) và nitơ urê trong máu (BUN) ở chuột mô hình bệnh thận do tiểu đường đã được cải thiện đáng kể sau sự can thiệp của polysacarit Fructus flavus. và nồng độ nitơ urê trong máu (BUN) đã giảm đáng kể trong mô hình bệnh thận do tiểu đường [10]. Việc xử lý DN bằng polysacarit từ Flos Chrysanthemi Tuy nhiên, cơ chế hoạt động cụ thể của nó vẫn chưa rõ ràng. Vì vậy, hiện Trong nghiên cứu này, chế độ ăn giàu chất béo kết hợp với tiêm streptozotocin (STZ) đã được sử dụng để thiết lập mô hình chuột DN.
Vì vậy, trong nghiên cứu này, chúng tôi thiết lập mô hình DN chuột bằng chế độ ăn giàu chất béo kết hợp với tiêm streptozotocin (STZ) và quan sát tác dụng của polysaccharid C. flavus đối với hiện tượng chết sắt ở chuột. Do đó, nghiên cứu hiện tại được thực hiện để quan sát ảnh hưởng của C. flavus polysacarit đối với hiện tượng chết sắt ở chuột được nuôi bằng chế độ ăn nhiều chất béo kết hợp với tiêm streptozotocin (STZ) và để làm rõ cơ chế hoạt động của C. flavus polysacarit trên DN.

Nguyên liệu và phương pháp
1.1 Động vật
Năm mươi con chuột SD đực khỏe mạnh có khối lượng cơ thể (200 ± 20) g được nuôi tại Viện X quang, Viện Khoa học Y khoa Trung Quốc, Bắc Kinh, Trung Quốc, trong chu kỳ sáng-tối 12-h ở nhiệt độ (25 ± 2) độ và độ ẩm tương đối là (50 ± 15) phần trăm và được cho ăn tự do. Chế độ ăn nhiều đường và nhiều chất béo (10% mỡ lợn, 20% sucrose, 2,5% cholesterol, 67,5% thức ăn thông thường), (4,8% chất béo, 20% protein và 59,4% tổng lượng đường), Công ty Công nghệ sinh học Huafukang Bắc Kinh. Thí nghiệm này đã được phê duyệt bởi Bệnh viện Y học Tích hợp Thương Châu (CZX2022-KY-023).

1.2 Thuốc và cách pha chế
polysacaritcủaXương cựa(độ tinh khiết 70 phần trăm , số lô S27804), Công ty TNHH Công nghệ sinh học Yuanye Thượng Hải đã được điều chế bằng nước muối ở nồng độ tương ứng là 200, 800 mg/mL. dung dịch 800 mg/mL. Irbesartan viên nén (lô 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. được bào chế trong nước muối 30 mg/mL. giải pháp.

 

1.3 Thuốc thử và dụng cụ chính
Protein nước tiểu (số lô C035-2-1), SCr (số lô C011-2-1), BUN (số lô C013-2-1) BUN (số lô C013-2-1), malondialdehyde ( MDA, số lô C003-1- 2), glutathione (GSH, lô C006-2-1), tổng hàm lượng ion sắt (số lô A039-2-1), Viện Nghiên cứu Kỹ thuật Sinh học Kiến Thành Nam Kinh Viện Kỹ thuật Sinh học , Nam Kinh, Trung Quốc; Transferrin (số lô ab278498), ferritin Transferrin (lô ab278498), chuỗi nặng ferritin (FTH1, lô ab75973), GPX4 (lô ab252833) và -ferritin (lô ab252833). ab252833), -actin (lô ab179467), Abcam, Vương quốc Anh. Máy đánh dấu enzym đa chức năng iMark680, Bio-Rad, Mỹ. Máy ly tâm Fresco17, Thermo, Mỹ; Máy ly tâm đông lạnh để bàn 5810, Eppndorf, Đức; Định lượng huỳnh quang ABI Prism® 7500 Ứng dụng Biosystems, Hoa Kỳ; Bể điện di dọc DYCZ-24DN, Nhà máy sản xuất dụng cụ Liuyi Bắc Kinh, Bắc Kinh, Trung Quốc; Công ty TNHH hình ảnh hóa phát quang SH-523, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Lập mô hình, phân nhóm và quản lý thuốc
Sau 1 tuần cho ăn thích nghi, 10 con chuột được chọn ngẫu nhiên như bình thường. 40 con chuột còn lại được tham khảo phương pháp tài liệu [11] để thiết lập mô hình chuột DN. Những con chuột được cho ăn với chế độ ăn nhiều đường và chất béo cao trong 7 tuần, sau đó nhịn ăn trong 12 giờ mà không cần nước. Những con chuột được cho ăn với chế độ ăn nhiều đường và chất béo cao trong 7 tuần, sau đó nhịn đói với thức ăn và nước trong 12 giờ. STZ được tiêm trong màng bụng với liều 30 mg/kg. Sau 72 giờ, máu được lấy từ tĩnh mạch đuôi để phát hiện đường huyết ngẫu nhiên và đường huyết Lớn hơn hoặc bằng 16,7 mmol/L được coi là mô hình bệnh tiểu đường thành công. Những con chuột được cho ăn với chế độ ăn nhiều đường và nhiều chất béo trong 1 tuần, và 24-h nước tiểu được thu thập từ lồng trao đổi chất.

 

 

1.5.5 Xét nghiệm Western blot
Thu thập các mô thận, thêm 150 μL dung dịch đệm ly giải RIPA, đồng nhất Phần protein nổi phía trên được giữ lại sau khi ly tâm. Tổng nồng độ protein được xác định bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm protein BCA. Tổng nồng độ protein được xác định bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm protein BCA và nồng độ protein được đồng nhất hóa. Lượng protein tương đương 20 ug, 8 phần trăm -12 phần trăm SDS-PAGE đã được sử dụng để tách protein và protein được chuyển Các màng được đóng lại bằng sữa bột gầy 5 phần trăm ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ. Kháng thể sơ cấp kháng chuột Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) và GPX4 (1:3 000) của thỏ đã được thêm vào. 3,000), GPX4 (1:3,000), -actin (pha loãng 1:5,000) và ủ qua đêm ở 4 độ . Ủ qua đêm ở 4 độ. Màng được rửa sạch, kháng thể thứ cấp (1:9 000) được thêm vào và ủ trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Các màng được rửa bằng TBST, được phát triển bằng phương pháp hóa phát quang ECL và được phát hiện bằng cách sử dụng
Phần mềm Image J đã được sử dụng để phân tích các giá trị thang độ xám của các dải.

 

1.6 Phương pháp thống kê
Phần mềm thống kê SPSS25.0 đã được sử dụng để phân tích. Thí nghiệm Các kết quả được biểu thị bằng xˉ±s, và tất cả dữ liệu đã được kiểm tra về tính quy tắc và chi-square. Tất cả dữ liệu đã được kiểm tra tính quy tắc và chi bình phương, và kiểm tra t được sử dụng nếu chúng hài lòng và kiểm tra phi tham số được sử dụng nếu chúng không hài lòng. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 kết quả
2.1 Ảnh hưởng của Flavopiridium polysaccharid đến khối lượng cơ thể và đường huyết lúc đói của chuột thí nghiệm So với nhóm bình thường, khối lượng cơ thể của chuột thí nghiệm giảm rõ rệt (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Xem Bảng 2.

2.2 Ảnh hưởng của Flavopiridium polysaccharid đến các chỉ số chức năng thận của chuột thí nghiệm
So với nhóm bình thường, hàm lượng SCr, BUN và protein trong nước tiểu 24 giờ của chuột ở nhóm mô hình cao hơn rõ rệt (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Ảnh hưởng của polysaccharid cao chiết vàng đến hình thái mô bệnh học thận chuột thí nghiệm
Cấu trúc cầu thận và ống của chuột thuộc nhóm bình thường không có biểu hiện bất thường nào, màng thylakoid và chất nền thylakoid không tăng sinh, không có thâm nhiễm tế bào viêm, v.v.; mô hình Ở những con chuột mô hình, quan sát thấy thoái hóa và teo ống khu trú, và màng đáy cầu thận hơi mỏng. Những con chuột trong nhóm mô hình cho thấy thoái hóa và teo ống khu trú, màng đáy cầu thận dày lên một chút, tăng sản thylakoid và thoái hóa mỡ của cầu thận và ống. Những con chuột trong mỗi nhóm dùng thuốc cho thấy các tổn thương giảm và sự cải thiện rõ ràng hơn ở nhóm dùng thuốc tích cực và liều cao Flavopiridium polysacarit. Sự cải thiện rõ ràng hơn ở nhóm dùng thuốc tích cực và dùng Flavopiridium polysaccharid liều cao. Xem Hình 1.