Đánh giá thêm về Salvia Haenkei như một chiến lược sáng tạo để chống lão hóa da và khôi phục tính toàn vẹn của rào cản

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

trừu tượng:Da là hàng rào thiết yếu của cơ thể con người thực hiện nhiều chức năng. Các yếu tố nội sinh, kết hợp với các tác động bên ngoài, liên tục ảnh hưởng đến tính toàn vẹn của da, dẫn đến những thay đổi cấu trúc riêng biệt ảnh hưởng không chỉ đến vẻ ngoài mà còn ảnh hưởng đến các chức năng sinh lý khác nhau của da. Sự thay đổi các chức năng của hàng rào dẫn đến tăng nguy cơ phát triển bệnh tật và các phản ứng phụ, do đó, tầm quan trọng của việc duy trì tính toàn vẹn của hàng rào biểu bì và làm chậm quá trình lão hóa da là điều hiển nhiên.dương vật cistanche phát triểnSalvia hankie (SH) gần đây đã được xác định là một chất chống lão hóa tiềm năng; chiết xuất của nó có thể làm giảm mức độ tế bào già đi bằng cách ảnh hưởng đến sự giải phóng ll.1a và giảm sự tạo ra các loại oxy phản ứng (ROS). Trong nghiên cứu này, chiết xuất SH đã được thử nghiệm trên một dòng tế bào sừng (HaCaT) của con người tiếp xúc với các yếu tố căng thẳng liên quan đến sự lão hóa sớm của tế bào như các gốc tự do và bức xạ tia cực tím B. Chúng tôi xác nhận rằng SH hoạt động như một chất loại bỏ ROS và nhận thấy khả năng khôi phục tính toàn vẹn của hàng rào bảo vệ da bằng cách củng cố cấu trúc xương tế bào, niêm phong các điểm nối chặt chẽ và tăng tốc độ di chuyển của tế bào. Với những kết quả này, công trình này trở nên phù hợp, xác định Salvia hankie là một hợp chất hữu ích cho việc điều trị chống lão hóa da trong hiệu quả lâm sàng.

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

Giới thiệu

Làn da khỏe mạnh và hoạt động tốt là điều cần thiết để bảo vệ sự mất nước và sự xâm nhập của các chất chống lại 100%, vi sinh vật, chất gây dị ứng, chất kích ứng và bức xạ. Việc tiếp xúc hàng ngày với các tác nhân bên ngoài kết hợp với một số yếu tố nội tại, chẳng hạn như di truyền, chuyển hóa tế bào, hormone và quá trình trao đổi chất, dẫn đến sự lão hóa tự nhiên của da [1]. Đặc biệt, hiện tượng lão hóa da có liên quan rất lớn đến bức xạ tia cực tím, ô nhiễm, sử dụng cơ lặp đi lặp lại và trọng lực [2, 3]. Do đó, lão hóa da là kết quả của những thay đổi tích lũy về cấu trúc và sinh lý cũng như sự điều biến tiến triển của các lớp da [2, 4, 5]. Ngay cả khi lão hóa không được coi là một tình trạng bệnh lý, mà là một quá trình sinh học và không thể tránh khỏi, thì mối tương quan của nó với nhiều loại bệnh về da hiện đã được thiết lập rõ ràng. Xét rằng bệnh da liên quan đến tuổi tác phù hợp nhất là rối loạn thoái hóa, u lành tính và ác tính, v.v., tầm quan trọng của việc chăm sóc da để điều trị hoặc ngăn ngừa một số rối loạn da nhất định là rất rõ ràng. [6-8]. Ngày nay, các chiến lược chống lão hóa da hoạt động để đảo ngược các dấu hiệu lão hóa da và biểu bì của lão hóa hình ảnh / theo trình tự thời gian. Dựa trên các phương pháp tiếp cận, chúng có thể được phân loại như sau: chăm sóc thẩm mỹ, tác nhân tại chỗ, thủ thuật xâm lấn, tác nhân toàn thân, tránh các yếu tố ngoại sinh lão hóa, điều chỉnh lối sống và thói quen, và y tế dự phòng [9]. Có hai nhóm tác nhân chính có thể được sử dụng làm thành phần của công thức chống lão hóa: 1. Chất điều hòa tế bào, chẳng hạn như retinol, peptide và các yếu tố tăng trưởng, trực tiếp tác động lên quá trình chuyển hóa và sản xuất collagen; 2. Chất chống oxy hóa, như vitamin, polyphenol và flavonoid, có thể làm giảm sự suy thoái collagen [9].

Bằng chứng đáng kể ủng hộ ý tưởng rằng lão hóa da chủ yếu do ROS, được tạo ra trong quá trình chuyển hóa tế bào oxy hóa nội sinh [10,11]. Được biết, sự tích tụ ROS là nguyên nhân gây ra tổn thương tế bào bao gồm quá trình peroxy hóa lipid, tổn thương protein màng và đột biến DNA dẫn đến thay đổi cấu trúc và chức năng của da. Theo thời gian, các tế bào của con người củng cố sự gia tăng tự nhiên của mức ROS, liên quan đến việc mất một phần khả năng phòng thủ chống oxy hóa. Tình trạng không thể tránh khỏi này được củng cố thêm bằng cách chiếu tia cực tím hàng ngày (UVR) gây ra sự tổng hợp ma trận metalloproteinase (MMPs) và do đó, phá hủy collagen qua trung gian MMP [12, 13]. Các nghiên cứu in vivo đã chứng minh mối quan hệ nhân quả giữa tổn thương oxy hóa ty thể, sự lão hóa của tế bào và kiểu hình lão hóa [10, 14].

Sự lão hóa của tế bào được định nghĩa là sự ngừng ổn định của sự phát triển tế bào xảy ra ở tất cả các tế bào của con người trong quá trình lão hóa [15-17]. Kết quả của các sự kiện căng thẳng, chẳng hạn như biểu hiện quá mức gen sinh ung thư, tạo ROS và tổn thương DNA (ví dụ do tia UVR gây ra, đặc biệt là bởi ánh sáng UVB), các tế bào có thể sớm già đi [18].lợi ích của cistanche salsaTrong trường hợp này, có thể thấy rõ tầm quan trọng của việc phát triển các chiến lược sáng tạo có thể ngăn chặn sự tích tụ của các tế bào già yếu hoặc giết chết chúng một cách có chọn lọc, do đó chống lại quá trình lão hóa và các rối loạn liên quan đến lão hóa. Gần đây, chúng tôi đã xác định Salvia hankie (SH), một loài thực vật Bolivia giàu vitamin B và các đặc tính chống oxy hóa, là một chất chống lão hóa tiềm năng [18].

Sự tích tụ của các tế bào già đi theo thời gian được biết đến là một trong những cơ chế quan trọng nhất mà qua đó các mô trải qua quá trình lão hóa, dường như chủ yếu được kích hoạt bởi sự tồn tại của tình trạng viêm điển hình. Trên thực tế, mặc dù các tế bào già yếu không thể tăng sinh, chúng có hoạt động trao đổi chất cao và chúng tạo ra một số phân tử chống viêm một cách hiệu quả [19]. Bằng cách sử dụng mô hình biểu bì da người (EpiSkin), người ta đã thực sự chứng minh rằng chiết xuất SH làm giảm mức độ tế bào già bằng cách ảnh hưởng đến sự giải phóng ILla và giảm sự tạo ROS [18].

Trong điều kiện cân bằng nội môi, da là một hàng rào hiệu quả bảo vệ khỏi các tác động bên ngoài và các yếu tố nội sinh, đồng thời điều chỉnh sự mất mát của chất lỏng, chất điện giải và protein. Nhiệm vụ quan trọng này chủ yếu được giao cho lớp biểu bì, một biểu mô năng động, phân tầng cao. Hai thành phần chính của lớp biểu bì là lớp sừng, lớp bên ngoài và các điểm nối chặt chẽ (TJs), các điểm nối gian bào niêm phong các tế bào sừng liền kề trong lớp hạt [20]. Sự kết dính tế bào là cần thiết để duy trì tính toàn vẹn của hàng rào biểu bì.cistanche tubulosa liều lượng redditChức năng quan trọng này được thực hiện bởi các mối nối tế bào-tế bào chuyên biệt: kết nối các mối nối (AJs), desmosomes và các mối nối chặt chẽ. Những cấu trúc này không chỉ cho phép các kết nối vật lý giữa các tế bào mà còn tổ chức tổng thể các yếu tố xương tế bào và điều chỉnh các con đường tín hiệu liên quan đến sự phát triển, cấu trúc và sinh lý của mô. Các nghiên cứu di truyền gần đây đã bất ngờ tiết lộ vai trò phi chính tắc của các protein kết nối, làm nổi bật tầm quan trọng của nhiễu xuyên âm, sự phụ thuộc lẫn nhau và bù trừ để cho phép mô bền vững [21].

Ở đây, chúng tôi đã nghiên cứu hoạt động của chiết xuất Salvia haenkei để hiểu cơ chế phân tử chịu trách nhiệm về tác dụng bảo vệ của nó đối với quá trình lão hóa da do ảnh hưởng / thời gian. Với quan điểm này, các tế bào sừng bất tử tự nhiên của con người (HaCaT) được sử dụng làm mô hình in vitro, và cơ chế hoạt động của SH được phân tích theo chế độ cơ bản cũng như trong các điều kiện căng thẳng do chiếu xạ H202 và / hoặc UVB.

KẾT QUẢ

Hồ sơ an toàn của chiết xuất SH và các đặc tính chống lão hóa Căng thẳng oxy hóa trong da đóng một vai trò quan trọng trong quá trình lão hóa và trong cơ chế bệnh sinh của một số rối loạn da [22]. Matic và cộng sự. đã chứng minh hoạt động chống lão hóa của Salvia haenkei cũng tương quan với đặc tính nhặt rác của nó [18]. Những tác dụng bảo vệ này có thể được khai thác để phát triển một phương pháp điều trị phục hồi da mới có thể duy trì tính toàn vẹn của hàng rào. Với mục đích nghiên cứu sâu các đặc tính SH, hoạt tính chiết xuất về khả năng sống của tế bào và sự tạo ROS trong mô hình tế bào HaCaT đã được xác minh lần đầu tiên.

Cistanche có thể chống lão hóa

Thử nghiệm khả năng sống của tế bào được thực hiện để giải quyết các tác dụng gây độc tế bào có thể có của chiết xuất Salvia haenkei trên tế bào sừng. Tế bào HaCaT được xử lý bằng chiết xuất SH （0. 01-10 ug / ml） trong 24 và 48 giờ. Khả năng sống sót của tế bào được đánh giá bằng Thử nghiệm loại trừ màu xanh lam Trypan. Hình 1A và 1B cho thấy việc xử lý bằng chiết xuất SH không ảnh hưởng đến khả năng sống của tế bào, xác nhận tính an toàn của dịch chiết trên tế bào HaCaT trong các điều kiện thí nghiệm đã sử dụng.

Hoạt tính của chiết xuất Salvia haenkei trên quá trình tạo ROS đã được thử nghiệm trong các tế bào HaCaT sau 3-24 giờ điều trị và trước và sau khi tiếp xúc với H2O2.

Kết quả trong Hình 2A cho thấy SH có thể làm giảm mức ROS cơ bản trong tế bào, đặc biệt là trong 3- giờ điều trị. Bên cạnh sự gia tăng đáng kể mức ROS sau khi kích thích H-Oz (Hình 2C), SH có thể ngăn chặn việc sản xuất ROS. Chiết xuất SH (0. 01 ug / ml) làm giảm đáng kể (-25 phần trăm) sự tạo ROS do kích thích oxy hóa gây ra (Hình 2B), cho thấy hiệu quả tương đương với NAC sau 3 giờ điều trị. Điều trị SH trong 24 giờ dường như tăng hiệu quả chống lại ROS hơn, làm giảm đáng kể mức ROS ở 1 và 10 ug / ml (Hình 2B). Những kết quả này xác nhận Salvia haenkei

tác dụng chống oxy hóa, như đã quan sát trước đây [18], cho thấy tác dụng cơ bản chống oxy hóa đã bắt đầu từ các đợt điều trị ngắn; hiệu quả trong việc ngăn ngừa sự gia tăng kích thích oxy hóa có liên quan nhất đến thời gian điều trị dài hơn.

Theo báo cáo, bức xạ tia cực tím gây ra sự gia tăng mức ROS nội bào trong da người, gây ra tổn thương và lão hóa sớm và các bệnh lý khác [23-25]. Do đó, tác động của chiết xuất SH đối với việc sản xuất ROS qua trung gian UVB đã được đánh giá. Đúng như dự đoán, kết quả trong Hình 3C cho thấy sự gia tăng đáng kể mức ROS nội bào sau khi kích thích tia UVB. Điều trị bằng SH, gây ra xu hướng giảm mức ROS cơ bản trong tế bào (Hình 3A), có thể ngăn chặn sự gia tăng gây ra bởi kích thích UVB (Hình 3B). 3 giờ điều trị SH gây ra xu hướng giảm nồng độ ROS; Điều trị SH lâu hơn có hiệu quả hơn trong việc chống lại stress oxy hóa, cho thấy sự giảm đáng kể như được báo cáo trong Hình 3A. Những dữ liệu này nhấn mạnh hoạt động chống oxy hóa của Salvia haenkei cũng trong stress oxy hóa qua trung gian UVB.

Như đã đề cập, ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy rằng các tế bào già tích tụ trong da lão hóa theo trình tự thời gian và ảnh hưởng, góp phần gây ra các bệnh lý và thay đổi da liên quan đến tuổi tác [26]. Do đó, tác dụng của Salvia hankie đã được đánh giá trên các dấu hiệu lão hóa p21 và p27 (ngăn cản quá trình phosphoryl hóa protein của tế bào ung thư nguyên bào võng mạc (Rb) và với hoạt động ức chế trên CDK 2- cyclin E, tương ứng [27]) sau khi áp lực quang gây ra bởi tia cực tím. Kết quả trong Hình 4 cho thấy rằng chiếu tia UVB làm tăng đáng kể mức mRNA p21 và p27 so với đối chứng không được kích thích.cistanche แอ ม เว ย์Một xu hướng tương tự trong việc ngăn chặn sự gia tăng được quan sát thấy trong các tế bào được điều trị bằng SH. SH 1 ug / ml làm giảm đáng kể mức p21 so với kiểm soát kích thích bằng tia UVB, trong khi các nồng độ khác gây ra xu hướng giảm (Hình 4A). Mức P27 được giảm đáng kể bằng cách xử lý trước với SH 0. 0 1,0,1 và 10 ug / ml (Hình 4B).

Người ta cũng xác định rằng các tế bào lão hóa ảnh hưởng tiêu cực đến vi môi trường bằng cách tiết ra một hỗn hợp gây viêm của chemokine, cytokine, hormone tăng trưởng và protease, được gọi là kiểu hình tiết liên quan đến lão hóa (SASP) [28]. Kết quả trong Hình 5 cho thấy kích thích UVB gây ra sự gia tăng đáng kể mức mRNA ILla (A), IL6 (B) và IL18 (C) so với đối chứng không được kích thích. Tiền xử lý với SH thể hiện một hoạt động mạnh mẽ trong việc chống lại sự gia tăng mức độ cytokine. Như thể hiện trong Hình 5A, SH 1 0 ug / ml làm giảm đáng kể mức ILla; sự gia tăng IL6 bị chống lại đáng kể bởi SH 0. 01,0.1 và 10 ug / ml (Hình 5B) trong khi tất cả các nồng độ được thử nghiệm đều có thể làm giảm đáng kể mức IL18 (Hình 5C). Duy trì hàng rào da Với các kết quả được báo cáo ở trên trên một dòng tế bào biểu mô, tác động của chiết xuất SH lên một số protein và các quá trình liên quan đến việc duy trì hàng rào da và sửa chữa tổn thương mô đã được đánh giá.

Biểu thức Sirtuin -1

Một số nghiên cứu trong ống nghiệm báo cáo rằng bức xạ UVB làm giảm mức độ protein Sirtuinl (SIRT1) của nguyên bào sợi người, cho thấy sự tham gia của SIRT1 trong tổn thương qua trung gian UVB [29]. Vì vậy, ảnh hưởng của chiết xuất Salvia haenkei đối với sự biểu hiện của protein Sirtuinl đã được đánh giá bằng xét nghiệm Western blot (Hình 6). Như mong đợi, kích thích UVB gây ra sự giảm đáng kể biểu hiện protein SIRTI trong tế bào HaCaT. Do đó, hoạt động của chiết xuất SH trên các mức SIRT1 đã được nghiên cứu. Điều thú vị là kết quả cho thấy chiết xuất SH 1 ug / ml, so với đối chứng, gây ra sự gia tăng biểu hiện SIRTl (cộng với 4 0 phần trăm) trong các điều kiện cơ bản, cho thấy tác dụng kích thích tiềm năng đối với mức SIRT1. Như mong đợi, kích thích UVB làm giảm đáng kể mức SIRT1. Kết quả cho thấy việc xử lý trước với chiết xuất SH 0,01 ug / ml thể hiện tác dụng cải thiện ở mức độ Sirtuin 1, so với đối chứng được xử lý bằng tia UVB.

Thử nghiệm chữa lành vết thương

Keratinocytes là thành phần chính của lớp biểu bì, cung cấp một rào cản giữa tổ chức và môi trường. Do đó, sự sinh sôi và di chuyển của chúng đóng một vai trò quan trọng trong việc duy trì một hàng rào hiệu quả và trong việc chữa lành vết thương sau chấn thương [3 0, 31]. Do đó, ảnh hưởng của SH đến sự di chuyển tế bào HaCaT đã được đánh giá. Hình ảnh trong Hình 7A cho thấy việc điều trị bằng SH dẫn đến giảm độ dày của vết xước cho thấy ảnh hưởng đến sự di chuyển của tế bào HaCaT. Hình 7B báo cáo cấu trúc kymogram về tốc độ di chuyển của các ô HaCaT; hình ảnh cho thấy sự gia tăng phụ thuộc vào nồng độ trong quá trình di chuyển của tế bào. Biểu đồ trong Hình 7C cho thấy sự gia tăng đáng kể tốc độ di chuyển của tế bào sau 4-8 giờ xử lý với dịch chiết SH 0,01 ug / ml. Mức tăng tối đa đạt được trong khoảng thời gian 8-12 giờ, trong đó tỷ lệ trong các ô tốc độ di chuyển ô là khoảng 165 phần trăm so với điều khiển. Những dữ liệu này, là kết quả thu được về sự tăng sinh tế bào, chỉ ra rằng nồng độ thấp nhất của chiết xuất SH có thể gây ra sự gia tăng tốc độ di chuyển của tế bào mà không liên quan đến kiểu hình tăng sinh.

Các nút giao thông chặt chẽ'maintenance

Cũng như lớp sừng, các điểm nối chặt chẽ (TJ) đóng một vai trò quan trọng trong tính toàn vẹn của da, hoạt động như một rào cản đối với nước và các chất hòa tan, đồng thời tham gia vào quá trình biệt hóa, tăng sinh, phân cực tế bào và quá trình truyền tín hiệu của tế bào. Các nghiên cứu gần đây đã chứng minh rằng tia UV làm thay đổi sự biểu hiện và khu trú của các protein đơn lẻ của cấu trúc TJ, do đó phá vỡ chức năng rào cản của da [32].

Để đánh giá tác dụng của chiết xuất Salvia haenkei như một chất bảo vệ có thể chống lại sự phá vỡ TJs, biểu hiện của chất tắc được đo bằng phương pháp hóa tế bào miễn dịch sau khi tiếp xúc với bức xạ UVB. Hình ảnh trong Hình 8A và 8B cho thấy việc điều trị với cả hai nồng độ SH gây ra sự gia tăng biểu hiện protein tắc, thúc đẩy sự hình thành mối nối hữu ích để duy trì tính toàn vẹn của hàng rào biểu bì. Đúng như dự đoán, sau khi tiếp xúc với bức xạ UVB, các tế bào hiển thị một vòng màng không đều và không xác định (Hình 8A). Xử lý SH, đặc biệt ở nồng độ cao hơn, bảo tồn hình thái của màng duy trì cấu trúc tương đương với đối chứng không kích thích. Chiết xuất SH thúc đẩy tăng cường các mối nối và ngăn ngừa tổn thương do tiếp xúc với tia UVB, duy trì chức năng của hàng rào bảo vệ da.

Biểu thức Filaggrin

Ảnh hưởng của chiết xuất Salvia haenkei đối với sự biểu hiện protein filaggrin (FLG) đã được đánh giá bằng hóa tế bào miễn dịch. Filaggrin là một protein cấu trúc cơ bản trong sự phát triển và duy trì hàng rào bảo vệ da. Kết quả trong Hình 9A và 9B cho thấy sự gia tăng biểu hiện protein filaggrin phụ thuộc vào nồng độ sau khi điều trị trong 24 giờ với chiết xuất SH. Hơn nữa, sự biểu hiện của protein F-actin cho thấy sự phân bố đều đặn của các tế bào, sau khi điều trị bằng SH, dẫn đến sự liên tục cấu trúc có tổ chức của hàng rào biểu mô. Những dữ liệu này chỉ ra rằng SH có tác động có lợi đến hàng rào bảo vệ da, cải thiện sự biểu hiện của filaggrin, điều cần thiết cho sự hình thành và chức năng chính xác của da.

Biểu hiện metalloproteinase

Da tiếp xúc với bức xạ tia cực tím gây ra sự suy giảm chất nền ngoại bào (ECM), khiến da nhăn nheo, chảy xệ và lỏng lẻo, những đặc điểm chính của lão hóa da. Matrix metalloproteinase (MMPs) là nguyên nhân chính chịu trách nhiệm phân hủy các thành phần ECM như collagen, elastin, fibronectin và proteoglycan [33].lấy bao nhiêu cistancheMột số lượng lớn các nghiên cứu nhấn mạnh rằng việc da tiếp xúc với chiếu xạ tia cực tím gây ra sự điều chỉnh các MMP khác nhau, ảnh hưởng đến vẻ ngoài và sức khỏe của da [34-37].

Kết quả trong Hình 1 0 cho thấy bức xạ UVB làm tăng biểu hiện mRNA của gelatinase MMP -2 làm suy giảm các collagens màng đáy và các collagens cấu trúc bị biến tính [38]. Điều trị bằng SH có thể làm giảm đáng kể mức MMP -2 mRNA (SH 0. 01-0. 1-10 ug / ml） cho thấy hoạt động của chiết xuất SH trong việc duy trì tính toàn vẹn cấu trúc của da bị tổn thương do căng thẳng ảnh hưởng đến da.

THẢO LUẬN

Lão hóa da là tác động tích lũy của các yếu tố bên trong và bên ngoài dẫn đến sự suy giảm của da, gây ra mỏng, cứng và mất tính linh hoạt. Da là rào cản đầu tiên giữa sinh vật và môi trường, vì vậy việc duy trì tính toàn vẹn về mặt chức năng và giải phẫu là điều cần thiết. Bên cạnh các quá trình lão hóa tự nhiên và các tình trạng liên quan đến lão hóa như tiểu đường, mãn kinh ..., các yếu tố bên ngoài có thể đồng thời ảnh hưởng đến cấu trúc da; đặc biệt là các yếu tố ảnh hưởng đến ánh sáng, ô nhiễm hoặc lối sống (hút thuốc, ăn kiêng, căng thẳng về cảm xúc, v.v.) có thể cản trở cấu trúc và chức năng của da [39,40]. Tế bào sừng là thành phần chính của lớp biểu bì, cung cấp cơ sở tế bào cho hàng rào ngoài cùng; Trong công việc này, dòng tế bào sừng của con người HaCaT đã tiếp xúc với các yếu tố căng thẳng, chẳng hạn như các gốc tự do và bức xạ tia cực tím B, để bắt chước quá trình lão hóa da tự nhiên, do đó làm thay đổi chức năng hàng rào. Salvia hankie gần đây đã được xác định là một chất chống lão hóa tiềm năng cho thấy ứng dụng của nó trong quá trình lão hóa da và các rối loạn liên quan đến lão hóa da; do đó, tác dụng của chiết xuất từ ​​cây này đã được nghiên cứu sâu về các thông số liên quan đến lão hóa da, duy trì sự toàn vẹn của da và các điều kiện sinh lý. Việc sản xuất các loại oxy phản ứng hoặc các gốc tự do thông qua các quá trình trao đổi chất nội sinh bình thường hoặc UVR và ô nhiễm được cho là góp phần vào quá trình lão hóa da. Da dễ bị tổn thương bởi nhiều loại phản ứng oxy hóa khử, và cân bằng oxy hóa khử là điều cần thiết trong việc duy trì cân bằng nội môi của da. Nồng độ ROS thấp gây ra các hoạt động sinh lý, nhưng mức độ tăng lên của các loài này liên quan đến việc kích hoạt các con đường dẫn đến tăng thoái hóa collagen, tích tụ elastin, kích hoạt các metalloprotease phân hủy nền, v.v. [41]. Hơn nữa, ROS đóng một vai trò quan trọng trong các quá trình bệnh lý bao gồm lão hóa, viêm, chấn thương và cơ chế bệnh sinh của một số bệnh ngoài da như bệnh vẩy nến và bệnh bạch biến [42]. Điều thú vị là chiết xuất Salvia haenkei đã được chứng minh là làm giảm mức ROS trong điều kiện cơ bản, điều kiện stress oxy hóa và điều kiện căng thẳng do chiếu tia UVB gây ra, cho thấy tác dụng bảo vệ tiềm năng chống lại các thay đổi qua trung gian ROS [22].

Để hỗ trợ cho tác dụng chống lão hóa đã quan sát trước đây của Salvia hankie, trong công trình nghiên cứu này, chúng tôi đã chứng minh khả năng làm giảm sự lão hóa của chiết xuất SH trong các tế bào sừng bị kích thích bởi bức xạ UVB. Kết quả cho thấy SH có thể làm giảm sự biểu hiện gen của các dấu hiệu lão hóa p21 và p27, được kích thích bởi bức xạ UVB. Điều thú vị là, chiết xuất SH cho thấy hoạt động đầy hứa hẹn trong việc giảm phản ứng viêm được thúc đẩy bởi sự ảnh hưởng ánh sáng trong tế bào, bằng cách giảm phiên mã interleukin. Hơn nữa, chúng tôi đã chứng minh một cách hấp dẫn rằng chiết xuất Salvia haenkei gây ra biểu hiện protein Sirtuinl không chỉ sau khi căng thẳng mà còn trong các điều kiện cơ bản, cho thấy hoạt động đầy hứa hẹn trong việc làm chậm quá trình lão hóa. Họ Sirtuin, và đặc biệt là SIRT1, đã được chứng minh là đóng một vai trò trong quá trình hình ảnh lão hóa, đặc biệt là thông qua việc ức chế MMPs và sự suy thoái collagen sau đó; nhiều nghiên cứu nhấn mạnh vai trò bảo vệ của nó trong quá trình hình ảnh qua trung gian UVB. Các hợp chất tự nhiên như juglone (5- hydroxy -1, 4- napthalenedione) đã được chứng minh là có khả năng khôi phục SIRT1 về mức bình thường sau khi điều trị bằng tia UVB, cho thấy rằng SIRTI có thể đóng một vai trò trong việc ngăn ngừa ung thư do tia UVB gây ra [29]. Kết quả của chúng tôi cũng cho thấy sự tham gia có thể có của sirtuins trong quá trình sửa chữa sau căng thẳng với tia UVB và vai trò của chúng trong việc duy trì cân bằng nội môi của biểu bì.

Các rối loạn viêm da thông thường, chẳng hạn như viêm da dị ứng và bệnh vẩy nến, cũng như các quá trình lão hóa, làm giảm chức năng hàng rào và phản ứng của các tế bào biểu bì đối với sự phá vỡ hàng rào có thể làm trầm trọng thêm, duy trì hoặc thậm chí khởi phát các tình trạng như vậy. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy khả năng mạnh mẽ của SH trong việc khôi phục tính toàn vẹn của hàng rào bảo vệ da bằng cách điều chế một số protein liên quan đến các quá trình này. Đặc biệt, người ta đã quan sát thấy sự kích thích của phiên mã Occludin và filaggrin chỉ ra một hành động củng cố sự kết dính giữa các tế bào. Thiếu hụt filaggrin di truyền và mắc phải ảnh hưởng đến hàng rào biểu bì, làm thay đổi tổ chức của

các sợi keratin của tế bào xương và cấu trúc của lớp vỏ được ăn mòn của da [43]. Hơn nữa, các khiếm khuyết trong biểu hiện FLG gây ra sự giảm số lượng các hạt keratohyalin, giảm rõ rệt nồng độ yếu tố giữ ẩm tự nhiên (NMF) và kiềm hóa độ pH của da [44]. Hơn nữa, các thay đổi trong các protein claudin và các protein tắc, thuộc về các protein Kết nối chặt chẽ (TJs), được mô tả rõ ràng liên quan đến các quá trình lão hóa. TJ có nhiệm vụ bịt kín khoảng gian bào giữa các tế bào biểu mô, để tạo thành hàng rào chức năng, và tham gia vào quá trình tăng sinh và biệt hóa tế bào [45]. Chiết xuất Salvia haenkei đã được chứng minh là cải thiện sự biểu hiện filaggrin và duy trì sự định vị của chất tắc trên màng tế bào, bị suy giảm bởi bức xạ UVB. Hoạt động bổ sung của chiết xuất SH trong việc duy trì làn da khỏe mạnh đã được chứng minh bằng khả năng làm giảm quá trình phiên mã ma trận metalloproteinase 2 (MMP -2), được kích thích bởi bức xạ UVB. Sự điều tiết của MMPs tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình lão hóa và các bệnh lý về da, bằng cách làm suy giảm collagen và elastin gây ra sự suy giảm chất nền ngoại bào (ECM) [33, 38], do đó việc giảm các proteinase này là có giá trị trong bối cảnh lão hóa da.

Tác động tích cực của điều trị SH được quan sát trong nghiên cứu này đối với các thông số phân tử da phổ biến nhất cũng đã được xác nhận bởi một thử nghiệm lâm sàng gần đây, được thực hiện trong một nhóm gồm 50 phụ nữ da trắng trong độ tuổi từ 45 đến 60 [46]. Salvia hankie đã được sử dụng trong một công thức kem và một số thông số, chẳng hạn như độ đỏ và độ đàn hồi của da, độ sâu của nếp nhăn, và khả năng chống oxy hóa, được đánh giá bằng cả đánh giá lâm sàng và công cụ cũng như tự đánh giá của các đối tượng. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy hiệu quả của SH trong việc cải thiện làn da suy giảm khi áp dụng hàng ngày trong bối cảnh lão hóa da vừa phải. Trên thực tế, sau 84 ngày áp dụng, làn da của phụ nữ trở nên đàn hồi hơn và có ít vùng da đỏ hơn và nếp nhăn nông hơn. Hơn nữa, nghiên cứu cho thấy khả năng chống oxy hóa da tăng dần sau khi thoa kem hàng ngày [46].

Là nơi trú ẩn bảo vệ cơ thể khỏi môi trường bên ngoài, da thường xuyên tiếp xúc với những tổn thương tiềm ẩn, do đó việc chữa lành vết thương là một quá trình cần thiết cho sự tồn tại của mọi sinh vật. Xem xét khả năng đã được chứng minh của SH trong việc duy trì làn da khỏe mạnh và không tỳ vết, chúng tôi giả định rằng chiết xuất này cũng có thể giúp tăng cường tái tạo da bằng cách hữu ích trong việc sửa chữa các tổn thương trên da. Do đó, hoạt động SH trên sự di chuyển của tế bào sừng, là bước quan trọng trong việc khôi phục hàng rào bảo vệ da sau chấn thương, cuối cùng đã được xem xét. Điều trị chiết xuất SH cho thấy một hoạt động thú vị là có thể làm tăng tốc độ di chuyển của HaCaT, thể hiện tác dụng mạnh mẽ trong việc tái lập tổn thương biểu mô sau tổn thương. Vì di chuyển là một yếu tố quan trọng trong quá trình chữa lành vết thương, dữ liệu của chúng tôi, cũng xem xét hoạt động không tăng sinh của chiết xuất, cho thấy tác dụng tiềm ẩn của chiết xuất SH trong việc chống lại tác động của chấn thương trong hàng rào da nhanh hơn, giảm nguy cơ nhiễm trùng.

Dữ liệu của chúng tôi chỉ ra chiết xuất Salvia haenkei như một hợp chất hữu ích để hỗ trợ tái thiết lập hàng rào hoặc làm giảm phản ứng căng thẳng của biểu bì. Đồng thời với thử nghiệm gần đây trên người, nghiên cứu này cung cấp thêm hiểu biết về các cơ chế liên quan đến tác động tích cực của chiết xuất đối với quá trình lão hóa da.

Công trình này, hỗ trợ cho các công trình trước đó [18, 46], xác định một cách đặc biệt hơn cơ chế phân tử có liên quan đến hiệu quả của Salvia hankie trong việc điều chỉnh các thông số da, nhấn mạnh mức độ liên quan của Salvia hankie như một chất hấp dẫn hữu ích cho việc chống lão hóa và các rối loạn da liên quan đến lão hóa.

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Nuôi cấy tế bào và chiếu tia UVB

Tế bào HaCaT (tế bào sừng bất tử tự nhiên của con người) được nuôi cấy trong môi trường Eagle's cải tiến của Dulbecco (DMEM) có hàm lượng glucose cao bổ sung với 10% huyết thanh bò thai (Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2 mM glutamine, 100 U / ml penicillin và 100 ug / ml streptomycin (Lonza, Basilea, Thụy Sĩ). Tế bào được duy trì trong môi trường làm ẩm 5% CO2 trong không khí và ủ ở 37 độ.

Khi được yêu cầu bởi quy trình thử nghiệm, các tế bào được tiếp xúc với bức xạ 30 KJ / m²UVB, được cung cấp bởi đèn UVB PL-S dải hẹp y tế của Philips. Để ngăn chặn sự hấp thụ ánh sáng của môi trường nuôi cấy mô, điều này đã được loại bỏ trước khi chiếu xạ, và thay thế bằng DMEM FBS và không có phenol đỏ, theo quy trình chiếu xạ [47]. Sau khi chiếu tia UVB, các tế bào được nuôi bằng môi trường tăng trưởng tươi hoặc được sử dụng cho các thí nghiệm theo quy trình.

Khả năng sống của tế bào-Thử nghiệm loại trừ màu xanh Trypan 35 x1 0 ³ tế bào được mạ trên 12 đĩa giếng và sau khi ủ qua đêm, được tiếp xúc với các nồng độ khác nhau của chiết xuất Salvia haenkei hydroethanolic theo quy trình thí nghiệm. Dịch chiết đã được IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Ý) vui lòng cung cấp và trình bày hàm lượng axit rosmarinic đánh dấu là 0. 6% w / w bởi HPLC. Sau khi xử lý, các tế bào được rửa sạch, tách ra bằng 0,25 phần trăm trypsin -0. 2 phần trăm EDTA, và lơ lửng trong màu xanh trypan (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Hoa Kỳ) với tỷ lệ l: I trong dung dịch trung bình. Các tế bào được đếm bằng máy đo huyết cầu Burker trong buồng.

Xét nghiệm huỳnh quang ROS

ROS được định lượng bằng cách sử dụng 2 ', 7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), như đã mô tả trước đây [48]. Một cách ngắn gọn, các tế bào (5x10 ') được cấy vào 96- đĩa giếng, để dính qua đêm, và sau đó tiếp xúc với chiết xuất SH trong 3 hoặc 24 giờ. N-acetylcysteine ​​5mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) đã được sử dụng như một đối chứng tích cực.

Đối với điều kiện ứng suất oxy hóa, mức ROS được đo sau khi bổ sung 50 μM Hz-DCF-DA khi không có hoặc có mặt H2Oz [48]. Cường độ huỳnh quang DCF được đo ở bước sóng kích thích 485 nm - phát xạ 535 nm, sử dụng Máy đọc tấm đa nhãn VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Để đánh giá mức ROS trong điều kiện căng thẳng với tia UVB, quy trình đã được sửa đổi một chút, bằng cách ủ các tế bào trong nghiệm thức SH - 50 μM Hz-DCF-DA trong giải pháp PBS. Sau 25 phút ủ ở 37 độ, tấm được tiếp xúc với bức xạ UVB và cường độ huỳnh quang DCF ngay lập tức được đo ở bước sóng kích thích 485 nm - phát xạ 535 nm, sử dụng Máy đọc tấm đa nhãn VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang

1 0 tế bào x104 được tạo hạt trên các tấm phủ thủy tinh, phủ trước bằng collagen trong 24- đĩa giếng, được phép gắn qua đêm và được xử lý bằng chiết xuất SH theo quy trình. Để phát hiện -catenin và các protein tắc, các tế bào đã được tiếp xúc với bức xạ UVB, như được mô tả trong quy trình ở trên. Sau khi chiếu xạ, các tế bào được nuôi bằng môi trường tăng trưởng tươi hoặc được sử dụng để thử nghiệm theo quy trình. Đối với xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang, 4 giờ sau khi chiếu tia UVB, các tế bào được rửa sạch, cố định bằng 4% formaldehyde, được làm thấm với 0,1% Triton X -100 trong PBS, và nhuộm trong 1 giờ ở 37 độ với các kháng thể đặc hiệu với protein khác nhau: thuốc chống tắc mạch đơn dòng cho chuột (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA), thuốc chống filaggrin cho chuột (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Sau khi rửa PBS, các tế bào được ủ với kháng thể thứ cấp / fluorescein isothiocyanate (Alexa Fluor 488 chống chuột hoặc Alexa Fluor 536 kháng thỏ miễn dịch G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) và với phalloidin trong 1 giờ tại nhiệt độ phòng. Sau 10 phút xử lý với RNase, các tấm phủ được gắn trên lam kính bằng cách sử dụng Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Hoa Kỳ) và thêm propidium iodide. Hình ảnh thu được qua kính hiển vi tiêu điểm LSM 800, độ phóng đại 60X, phần mềm ZN 2.1 blue Edition (Carl Zeiss, Jena, Đức) và được định lượng bằng phần mềm ImageJ.

Phân tích thống kê

Phân tích thống kê được thực hiện bằng GraphPad Prism phiên bản 7.02 cho Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Trừ khi có quy định khác, kết quả được trình bày dưới dạng giá trị trung bình cộng với SEM. Bài kiểm tra t của Sinh viên đã được sử dụng và giá trị p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Các từ viết tắt

AJ:tiếp giáp mối nối; ECM: chất nền ngoại bào; FLG: filaggrin; Hz-DCF-DA: 2 ', 7'-dichlorofluorescein-diacetate; H2Oz: Hydrogen Peroxide; MMP: ma trận metalloproteinase; NAC: N-acetylcysteine; NMF: hệ số; ROS: dưỡng ẩm tự nhiên oxy phản ứng

loài; SIRTl: Sirtuinl; SH: Salvia hankie; TJ: mối nối chặt chẽ; UVB: Bức xạ tử ngoại B.

Bài viết này được trích từ www.aging-us.com