Hợp chất phenolic từ lá và hoa của cây dâm bụt Roseus: Ứng dụng mỹ phẩm cho da tiềm năng của một loài chưa được điều tra

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

Trừu tượng:Việc sử dụng chiết xuất thực vật trong mỹ phẩm chăm sóc da đang là xu hướng hiện đại do chúng giàu polyphenol hoạt động như các phân tử chống lão hóa. Hoa dâm bụt là loài cây lâu năm nhập tịch ở Ý, có hoa màu hồng mềm rất đẹp; thành phần phenolic và các hoạt tính sinh học của nó vẫn chưa được nghiên cứu. Mục đích của nghiên cứu này là xác định đặc điểm và định lượng các phenol và đánh giá các hoạt động chống oxy hóa, yếu tố bảo vệ ánh nắng mặt trời (SIPF), và chống collagenase của các chiết xuất ethanolic của lá H. roseus (HL) và hoa (HE) .p- Các dẫn xuất của axit Coumaric, chlorogenic và trans-ferulic, cũng như các flavonoid quercetin và kaempferol, là những hợp chất phenol chính được phát hiện. Catechin, epicatechin, kaempferol -3- O-rutinoside, kaempferol -3- O-glucoside, kaempferol -7- O-glucoside, salidroside, oenin và peonidin -3- O-glucoside đã được phát hiện chỉ trong HF, trong khi phloridzin không có trong HL, cũng cho thấy một lượng lớn hơn các dẫn xuất axit hydroxycinnamic. HF giàu flavonoid và tổng số phenol, cũng thể hiện khả năng chống oxy hóa cao hơn.bioflavonoidsSPF và hoạt động chống collagenase của cả hai chất chiết xuất đều tương tự và có thể so sánh với các chất tiêu chuẩn tổng hợp. Các kết quả tổng thể chứng minh rằng chiết xuất từ ​​H. roseus là nguồn đầy hứa hẹn của các hợp chất phenolic hoạt tính sinh học có thể được ứng dụng làm chất chống lão hóa trong mỹ phẩm chăm sóc da.

Từ khóa:chống cắt dán; chất chống oxy hóa; flavonoid; những bông hoa; mỹ phẩm thảo dược; axit hydroxycinnamic; LC-MS / MS-MRM; lá; chăm sóc da; bảo vệ khỏi ánh nắng mặt trời

1. Giới thiệu

Việc sử dụng mỹ phẩm đã có từ xa xưa, và lịch sử của nó cũng hình thành song song với lịch sử của loài người [1,2]. Mỹ phẩm chăm sóc da là một số sản phẩm quan trọng nhất, là ngành hàng chính trong ngành này [1,3]. Do đó, sự quan tâm đến việc chăm sóc da trở nên phổ biến, tạo ra nhu cầu về các sản phẩm hiệu quả có nguồn gốc từ thiên nhiên [2].

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

Nhận thức gần đây về môi trường, chăm sóc sức khỏe và việc sử dụng ít hóa chất tổng hợp đã dẫn đến mối quan tâm ngày càng tăng đối với mỹ phẩm có nguồn gốc thực vật, hiện chiếm 1/3 toàn bộ ngành mỹ phẩm [1A]. Do đó, việc sử dụng các chất chiết xuất từ ​​thực vật và các chất phytoconstituents của chúng làm thành phần hoạt tính là một cách tiếp cận hiện đại "ủng hộ sinh thái" [5,6]. Nhu cầu ngày càng tăng đối với các sản phẩm này có thể là do chúng giảm tác dụng phụ, phổ tác dụng rộng kết hợp với hiệu quả cao và giá cả thường thấp [7,8].

Thực vật rất giàu một số loại hợp chất hoạt tính sinh học, là một trong những nguồn dồi dào nhất của các thành phần mới có tác dụng điều trị nhiều bệnh [9,10]. Ngoài ra, thực vật cũng là nguồn cung cấp chất dưỡng ẩm, hương liệu và sắc tố tự nhiên, chúng rất thú vị cho các ứng dụng mỹ phẩm trên da [5]. Cuối cùng, các chất chiết xuất từ ​​thực vật thường được coi là an toàn và đáp ứng các yêu cầu của cơ quan quản lý [10,11].

Trong số các hợp chất có trong chiết xuất thực vật, phenolics đã được chú ý đặc biệt với tư cách là thành phần hoạt tính [12,13], chủ yếu vì chúng nổi bật như chất chống viêm, kháng khuẩn và chất chống oxy hóa [14,15]. Những đặc tính này làm cho chúng trở thành các phân tử ngăn ngừa và chữa lành lý tưởng cho các rối loạn da, được ứng dụng trong thẩm mỹ và da liễu [16]. Hoạt động chống oxy hóa đáng chú ý của phenolics cũng chịu trách nhiệm một phần trong tác dụng chống lão hóa của chúng, có thể do khả năng làm giảm sự suy thoái collagen và cung cấp khả năng bảo vệ khỏi tia cực tím [16]. Do đó, việc sử dụng các chiết xuất tự nhiên giàu phenolic có khả năng chống oxy hóa cao đã được nghiên cứu và khuyến khích để thay thế các chất chống oxy hóa tổng hợp trong các sản phẩm dùng cho da [12].

Cistanche có thể chống lão hóa

Các sản phẩm tự nhiên chiết xuất từ ​​thực vật thuộc họ Malvaceae được sử dụng trên toàn thế giới, và chi Hibiscus đã gây được sự chú ý lớn vì nhiều hoạt tính dược lý của chiết xuất chúng và vì sự phong phú phenolic cao [17-19]. Hibiscus spp. chứa khoảng 240 loài thảo mộc, cây bụi hoặc cây có hoa hàng năm hoặc lâu năm, phân bố ở các khu vực khác nhau trên thế giới [20]. Chất chiết xuất từ ​​cây dâm bụt đã được ứng dụng trong y học cổ truyền như chất làm mềm để điều trị nhiều chứng rối loạn da và bỏng [19,21].mua cistancheDựa trên các dữ liệu tài liệu này, chiết xuất từ ​​Hibiscus sp. thực vật có thể là thành phần hoạt tính thú vị cho các công thức mỹ phẩm da, bảo vệ tế bào khỏi stress oxy hóa, suy thoái collagen và tác hại của bức xạ UV.

Mặc dù chi Hibiscus bao gồm nhiều loài, nhưng chưa đến 10% trong số chúng đã được điều tra cho đến nay [17]. Hibiscus roseus Thore (syn. H.palustris L., H.moscheutos subsp. Palustris (L.) RT Clausen.) Là loài anherbaceousp lâu năm nhập tịch ở Ý [22,23] Việc xác định và mô tả H. roseus vẫn còn đang được tranh luận [ 20,23]. Theo tài liệu, loài H. moscheutos subsp. Palustris đã được giới thiệu rất sớm ở châu Âu trong khi ở Pháp, nó đã được Thore mô tả như một loài mới, H. roseus, vào năm 1807 [23]. Loài này không được đặc trưng bởi thành phần phenolic và được nghiên cứu về các hoạt động sinh học của nó, điều này làm cho nó trở thành một nguồn tiềm năng của các hợp chất hoạt tính sinh học chưa được khám phá cho các sản phẩm chăm sóc da.

Việc sử dụng dân gian trong điều trị da và phổ rộng về hoạt tính sinh học của các loài Hibiscus chứng minh tầm quan trọng của các nghiên cứu mới tập trung vào chi thực vật này [17]. Do đó, mục đích của nghiên cứu này là xác định đặc điểm của thành phần phenolic và đánh giá khả năng chống oxy hóa, chống nắng và hoạt động ức chế collagenase của các chiết xuất ethanolic từ lá và hoa của H. roseus. Kết quả của chúng tôi lần đầu tiên trình bày thành phần phenolic và hoạt tính sinh học liên quan đến chống lão hóa của H. roseus, cho thấy tiềm năng của loài đang được nghiên cứu này trong các ứng dụng dược phẩm và mỹ phẩm như một chất phụ gia chống oxy hóa và chống lão hóa.

2. Kết quả và thảo luận

2.1.Định lượng và đặc tính phức tạp

Một phân tích mục tiêu, dựa trên LC-MS / MS-MRM (sắc ký lỏng kết hợp với khối phổ song song hoạt động ở chế độ theo dõi nhiều phản ứng), đã được tiến hành để xác định tạm thời các hợp chất phenol có trong dịch chiết etanolic của H. roseus vì thành phần phenolic của thông số kỹ thuật này vẫn chưa được báo cáo trong tài liệu. Mười chín hợp chất phenol được mô tả trước đây trong chi Hibiscus đã được sử dụng làm tiêu chuẩn (Bảng bổ sung S1) để phát triển phương pháp MRM, với việc lựa chọn các chuyển đổi tốt nhất được thiết kế bằng cách tối ưu hóa các thông số thiết bị và dữ liệu tài liệu [24].

The main classes of compounds detected in H.roseus leaf and flower extracts were chlorogenic, p-coumaric, and trans-ferulic acids derivatives and flavonoid derivatives (Figure 1,Table 1), similarly to the previous phytochemical characterization of other Hibiscus species[25-29]. Although the phenolic profile was quite similar, some qualitative differences were observed between flowers (HF) and leaves (HL)(Figure 1 and Table 1). While leaves showed richness in p-coumaric acid derivatives (Figure 1, blue line, peaks with Rt from 2 to 9 min), flowers were especially rich in flavonoid derivatives such as catechins, dihydrochalcones, and anthocyanins (Figure 1, red line, Rt>9,3 phút, Bảng 1).

Mười ba trong số mười chín hợp chất phenol đích đã được xác định chính xác trong các chiết xuất được phân tích bằng LC-MS / MS ở chế độ MRM (Bảng 1).cistanchMRM là một cách hiệu quả để xác định đồng thời một số thành phần, dựa trên tỷ lệ khối lượng trên điện tích (m / z) của ion phân tử (((MH]) và ion con tương ứng của nó. Nó cho phép tăng cường độ chọn lọc và độ nhạy của các phép phân tích LC-MS / MS [30] Phương pháp luận này rất đáng tin cậy và phù hợp để phân tích các chất chiết xuất từ ​​thực vật và các hỗn hợp phức tạp khác dẫn đến độ đặc hiệu cao nhất, độ nhạy tuyệt vời và khả năng ghép kênh cực đại nhờ khả năng phân biệt các hợp chất có cùng các ion mẹ nhưng các đoạn khác nhau [31,32]. Sử dụng phương pháp này, chúng tôi đã giảm đáng kể số lần chạy sắc ký, độ đặc hiệu và độ chính xác cao hơn nhờ sự phân tách tốt các hợp chất được phát hiện với các chuyển tiếp giống nhau, đồng thời tránh làm mất độ nhạy. trong trường hợp các hợp chất đồng rửa giải khác nhau hoặc đối với các hợp chất có nồng độ rất thấp [24,334].

Trong số 13 hợp chất phenol được xác định bằng cách sử dụng các chất chuẩn xác thực (Bảng bổ sung S1), mười hợp chất có mặt độc quyền trong chất chiết xuất từ ​​hoa (Hình 1 vạch đỏ, Bảng 1 HF): catechin và epicatechin (đỉnh 16b và 23), axit chlorogenic (đỉnh 18), peonidin -3- O-glucoside và oenin (đỉnh 21 và 22), axit trans-ferulic (đỉnh 27), ba dẫn xuất kaempferol glycoside (kaempferol -3- O-rutinoside, kaempferol -7- O- glucoside, và kaempferol -3- O-glucoside; đỉnh 30,31b và 32), và salidroside (đỉnh 34). Ngoài ra, phloridzin (đỉnh 33b) chỉ được phát hiện ở chất chiết xuất từ ​​lá iin (đường màu xanh lam Hình 1, Bảng 1 HL), trong khi rutin và quercetin -3- O-glucoside (đỉnh 26b và 28a) được xác định trong cả hai loại chất chiết xuất (Hình 1, Bảng1HF / HL). Các dẫn xuất quercetin tương tự, chẳng hạn như quercetin -3- O-sambubioside và isoquercitrin, trước đây đã được quan sát thấy ở H.sabdariffa [26,29,35,36] và trong các chất chiết xuất từ ​​H. rosa-sinensis [18]. Một số glycoside này có thể tương ứng với các dẫn xuất quercetin mà chúng tôi đã phát hiện ở H. roseus. Ngoài ra, trước đây, tiliroside cũng đã được phát hiện trong các chất chiết xuất từ ​​phenolic củaH. hoa sabdariffa [37,38]. Oenin (malvidin -3- O-glucoside) và peonidin -3- O-glucoside, hai anthocyanins ở đây được xác định lần đầu tiên trong hoa H. roseus, khác với những gì được mô tả trước đây ở hoa H. sabdariffa, delphinidin 3- sambubioside, delphinidin -3- glucoside và cyanidin -3- O-sambubioside [27,35,39,40]. Tuy nhiên, điều quan trọng cần đề cập là phần được nghiên cứu nhiều nhất của hoa của H. sabdariffa là đài hoa (đài hoa), không phải cánh hoa như đã khảo sát ở đây đối với H.roseus.

Ngoài các hợp chất được xác định và xác nhận bởi stan-dards đích xác thực, 27 hợp chất khác đã được xác định một cách giả định trong các chất chiết xuất từ ​​lá và hoa của H.roseus dựa trên MRM (m / z) và các ion con của chúng, do đó xem xét các sản phẩm phân mảnh thu được từ tiền chất (Bảng bổ sung S1). Đặc biệt, sự hiện diện của các dẫn xuất aacid p-coumaric, trans-ferulic, và chlorogenic, và các dẫn xuất quercetin, cũng như các dẫn xuất phloretin và phloridzin đã được tìm thấy trong cả hai dịch chiết (Bảng 1).

Việc định lượng phenol được xác định trong các chiết xuất này được thực hiện bằng phân tích HPLC-DAD (sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp với phát hiện dãy diode; Bảng 2). Hàm lượng các dẫn xuất axit hydroxycinnamic (THC) trong lá cao hơn trong hoa, trong khi một lượng lớn flavonoid (TFC) được tìm thấy trong hoa hơn trong lá (p<0.001,table 2).catechin="" derivatives(tcd),dihydrochalcones(tdc),and="" anthocyanins="" (tac)="" were="" quantified="" only="" in="" flower="" extracts(table=""><0.001).therefore, flowers="" represent="" a="" greater="" source="" of="" phenolics="" compared="" to="" leaves="" (tpc,p="0.02," table="" 2).="">cistanche ÚcTương tự như các chất chiết xuất từ ​​H. sabdariffa, các nhóm hợp chất chính được tìm thấy trong lá H. roseus là các dẫn xuất của axit chlorogenic và p-coumaric cũng như các axit caffeoylquinic và p-coumaroylquinic [26,40,41]. Ngoài ra, anthocyanins đã được báo cáo độc quyền trong Hibiscus spp. hoa và đài hoa, cùng với catechin [19,28,35].

Ngược lại, axit ferulic và các dẫn xuất của nó ít được báo cáo là thành phần của Hibis-cus spp. chất chiết xuất, nhưng chúng có thể có tầm quan trọng lớn đối với các hoạt động sinh học của chúng [6, 42-44]. Thật vậy, các dẫn xuất axit ferulic thu được từ các loài Hibiscus khác nhau cho thấy các đặc tính dược lý quan trọng như hoạt động kháng vi rút và ức chế men chuyển [43,44]. Ngoài ra, axit ferulic được mô tả là một phân tử hoạt động trong dịch chiết H.mutabilis, H.taivanensis [45,46], và trong dịch chiết đài hoa H.sabdariffa [28,38].

Về các ứng dụng mỹ phẩm tiềm năng, người ta đã chứng minh được rằng axit ferulic ức chế sự hình thành melanin [6,42], trong khi các dẫn xuất của axit p-coumaric có các hoạt động ức chế depigmen-tation [47,48], chống viêm và tyrosinase [49]. Ngoài ra, nhiều nghiên cứu làm nổi bật vai trò bổ sung của flavonols và anthocyanins, có thể hoạt động như các hợp chất bảo vệ da, đặc biệt là ức chế sự hình thành hắc tố [50,51] và thông qua hoạt động của chúng như các hợp chất chống lão hóa và ngăn ngừa khối u ác tính [52,53]. Trong quảng cáo, các ứng dụng tiềm năng của chiết xuất H. roseusleaf cho các rối loạn da cũng có thể được tăng cường nhờ sự hiện diện của phloridzin, chất đã cho thấy làm giảm sự biểu hiện của các cytokine gây viêm do tia UVB ở da tiếp xúc với tia cực tím [54].

2.2 Thử nghiệm hoạt động chống oxy hóa

Ngày nay, người ta đã chứng minh rộng rãi rằng sự tích tụ của các loại oxy phản ứng (ROS) là nguyên nhân gây ra quá trình lão hóa da, dẫn đến khô, mất mô dưới da và hình thành nếp nhăn [55,56]. Vì vậy, việc tìm kiếm các hợp chất chống oxy hóa tiềm năng tự nhiên có thể được áp dụng trong các sản phẩm chăm sóc da là rất quan trọng đối với ngành công nghiệp mỹ phẩm.

Kết quả của chúng tôi cho thấy chất chiết xuất từ ​​lá H. roseus có hoạt tính chống oxy hóa thấp hơn (được biểu thị bằng giá trị ECso) so với hoa (Bảng 3). 3). Những kết quả này đồng ý với thành phần và hàm lượng phenol của các chất chiết xuất này (Hình 1, Bảng 1 và 2), vì các chất chiết xuất HF giàu hợp chất phenolic hơn (Bảng 2). Thật vậy, phân tích tương quan giữa các giá trị ECso và hàm lượng của các nhóm phenol khác nhau cho thấy có ý nghĩa và âm tính đối với tất cả các hợp chất ngoại trừ THC. Do đó, lượng flavonoid, catechin, anthocyanins, dihydrochalcones và tổng hàm lượng phenol cao hơn góp phần vào khả năng chống oxy hóa cao hơn (giá trị thấp hơn của EC50 — Bảng 4).

Trong số các flavonoid, quercetin và các dẫn xuất của nó là chất chống oxy hóa và loại bỏ gốc tự do được thiết lập tốt nhất, cũng hoạt động như chất ức chế hiệu quả các oxydase và lipoxygenase [57]. Hơn nữa, các dihydrochalcones, chẳng hạn như phloretin, cũng được mô tả là chất chống oxy hóa mạnh trong các xét nghiệm nhặt rác 2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl (DPPH) và OH- [58]. Ngoài ra, anthocyanins được phân lập từ chiết xuất Hibiscus cho thấy là hợp chất chống oxy hóa chính trong tế bào người [59].

Chiết xuất từ ​​các bộ phận khác nhau của các loài Hibiscus đã cho thấy khả năng chống oxy hóa cao [18,21,27,35,40]. Các phần nhỏ của chiết xuất etanolic của H. sabdariffa cho thấy giá trị EC50 rất thấp trong các thử nghiệm chống oxy hóa, tương quan với hàm lượng cao trong axit protocatechuic [21,59], axit chlorogenic, flavonoid và anthocyanins [24,60]. Ngoài ra, một nghiên cứu trên H. esculentus cho thấy tiềm năng chống oxy hóa in vitro của các dẫn xuất quercetin và catechin có trong chất chiết xuất của nó [61]. Cuối cùng, ở H.acetosella, hoạt tính chống oxy hóa có tương quan chặt chẽ với hàm lượng anthocyanins [62].

Kết quả nghiên cứu của chúng tôi về chiết xuất từ ​​H. roseus ethanolic cho thấy hoạt động chống oxy hóa cao hơn hàng trăm lần so với những gì được báo cáo đối với chiết xuất dạng nước của đài hoa H. sabdariffl, với EC gần 45 mg mL- trong một DPPH tương tự trong ống nghiệm mô hình [56] Tuy nhiên, khác với phát hiện của chúng tôi, tổng hàm lượng flavonoid và khả năng chống oxy hóa của chiết xuất lá H. sabdariffa cao hơn so với hoa [63,64]. 2.3 Hệ số bảo vệ chống nắng trong ống nghiệm (SPF)

Bức xạ tia cực tím là một trong những yếu tố môi trường có hại nhất ảnh hưởng đến sức khỏe và sinh lý của da, là nguyên nhân gây lão hóa da bên ngoài quan trọng [65,6] Tiếp xúc liên tục với bức xạ tia cực tím làm tăng nguy cơ rối loạn sắc tố và hình ảnh da [67]. Điều này chủ yếu là do sự gia tăng nồng độ ROS, dẫn đến kích thích sản xuất collagenase và dẫn đến tổn thương đáng kể đối với các chức năng tế bào da [56]. Do đó, các thành phần bảo vệ tia cực tím, bao gồm cả những thành phần có trong chiết xuất thực vật, được ứng dụng rộng rãi trong mỹ phẩm để tránh sự xâm nhập của bức xạ tia cực tím vào da nhưng cũng ngăn chặn sự sản sinh ROS bằng cách hoạt động như chất chống oxy hóa [56,

Một phương pháp đơn giản để xác minh hiệu quả của các thành phần tự nhiên khác nhau làm bộ lọc UV là xét nghiệm chỉ số chống nắng (SPF), đây là một phương pháp in vitro nhanh chóng và đáng tin cậy dựa trên việc sàng lọc độ hấp thụ trong vùng phổ UV-B (giữa 290 và 320 nm), hữu ích trong giai đoạn đầu của quá trình lựa chọn các thành phần hoạt tính bảo vệ quang [69].

Hàm lượng phenolic cao và hoạt tính chống oxy hóa của H.lợi ích cistancheroseus extracts suggest that they may have also an UV absorbing activity. Both leaf and flower extracts of H. roseus at 0.1 mgmL-1 showed comparable SPF results (p>{{0}}. 0 5): 2,6 ± 0,15 đối với HL và 2,4 ± 0,19 đối với HF. Những kết quả này đầy hứa hẹn vì công thức kem chống nắng tiêu chuẩn chứa 8% homosalate (một loại kem chống nắng hóa học được áp dụng rộng rãi) cho thấy giá trị SPF là 4 [69,70]. Kết quả tìm thấy ở đây đối với H.roseus tương tự như kết quả tìm thấy ở các loài thực vật khác [68,69,71,72] và rất quan trọng khi xem xét nồng độ thấp của các chất chiết xuất được sử dụng để kiểm tra hiệu ứng này.

Các chiết xuất của H. rosa-Sinensis đã cho thấy tác dụng tích cực chống lại tác hại của bức xạ tia cực tím trên da chuột bằng cách bảo vệ chống oxy hóa [73]. Các sản phẩm tự nhiên có SPF cùng với khả năng chống oxy hóa cao và ức chế collagenase và elastase là những ứng cử viên quan trọng được sử dụng để bảo vệ da khỏi tác hại của ánh sáng và ngăn ngừa sự xuất hiện của các nếp nhăn [66,71]. bộ lọc và các dẫn xuất có nguồn gốc tự nhiên đại diện cho một xu hướng trong ngành công nghiệp mỹ phẩm, vì người tiêu dùng cảm nhận những sản phẩm này an toàn hơn, do tác dụng phụ của bộ lọc UV tổng hợp [72].

Hàm lượng tổng số các hợp chất phenolic cao hơn của chiết xuất HF (TPC; Bảng 2) có thể cho thấy hoạt tính hấp thụ tia cực tím cao hơn của chúng. Tuy nhiên, cả chiết xuất từ ​​lá và hoa đều cho kết quả rất giống nhau, cho thấy rằng nhiều hơn tổng hàm lượng phenol, cấu hình phenolic của các chất chiết xuất sẽ liên quan đến việc bảo vệ chống lại tia UV. Bảng 2) có thể góp phần làm tăng giá trị SPF của chúng, vì các hợp chất này có khả năng hấp thụ tia cực tím khoảng 300-320 nm [74], do đó tập trung trong vùng UV-B. Ngược lại, flavonoid và anthocyanins, chủ yếu có trong chất chiết xuất từ ​​hoa, có phổ hấp thụ rộng hơn, trong đó có ít nhất hai dải, với dải chính trong hoặc gần dải nhìn thấy được, khoảng 350 nm đối với flavonols và 505-550 nm cho anthocyanin [53,69]. Thật vậy, các dẫn xuất của axit hydroxycinnamic được sản xuất bởi thực vật, đặc biệt là để bảo vệ chúng khỏi bức xạ UV [75]. Do đó, các dẫn xuất axit hydroxycinnamic này có thể góp phần rất lớn vào việc da người hấp thụ UV-B [6]. Tuy nhiên, xem xét sự hiện diện của anthocyanins và flavonoid bao phủ một phạm vi hấp thụ bước sóng của nội trú, bao gồm cả vùng UV-A và các vùng có thể nhìn thấy, chiết xuất từ ​​hoa H. roseus có thể hứa hẹn cho việc phân tích sâu hơn và phát triển các sản phẩm mỹ phẩm chống nắng. Ngoài ra, hoạt tính chống oxy hóa cao hơn được quan sát thấy đối với HF (Bảng 3) có thể tăng cường tác dụng chống nắng trong các công thức có thể có thêm [69].

2.4. Hoạt động ức chế xúc tác

Both H.roseus extracts showed high collagenase inhibitory activity (>80%)at0.25mg mL-1, which is comparable to that of the synthetic inhibitor 1,10-phenanthroline 1M (Figure 2). The IC50 value of both extracts were very similar( >{{0}}. 0 5), IC5 0 chiết xuất từ ​​hoa =0. 14 ± 0. 02 mg mL -1 và IC50leaf chất chiết xuất =0. 13 ± 0,01 mg mL -1, mặc dù chúng có sự khác biệt về thành phần và hàm lượng phenol (Bảng 1 và 2). Điều này có thể là do sự tương tác hiệp đồng giữa phenolics và collagenase, có thể đóng một vai trò quan trọng trong cơ chế ức chế. Ngoài ra, các hợp chất khác có thể có trong dịch chiết H. roseus và không được phân tích ở đây có thể tham gia vào hoạt động chống collagenase, bao gồm vitamin E và axit ascorbic [71,7]. Hơn nữa, hai hợp chất chuẩn đã được thử nghiệm, axit chlorogenic và quercetin, mà các dẫn xuất của chúng có trong chất chiết xuất từ ​​lá và hoa H. roseus (Bảng 1), thể hiện sự ức chế collagenase rất cao, với giá trị ICso là 5,8 ± 0,5 và 5,6 ± 0,7ug mL -l tương ứng. Do đó, các hợp chất này có thể chịu trách nhiệm cho hoạt động chống collagenase quan sát được. Cần lưu ý rằng các loại phenol khác nhau, cũng có trong chiết xuất thực vật của chúng tôi, đã cho thấy hoạt động chống lão hóa thông qua việc ức chế sự phân hủy collagen và góp phần làm ẩm da [78]. Ví dụ, axit ferulic và các dẫn xuất của nó đã được chứng minh là có tác dụng dưỡng ẩm cho da và kích thích sự tổng hợp các sợi collagen, được sử dụng trong mỹ phẩm như kem chống nhăn [6]. Hơn nữa, flavonols, đặc biệt là các dẫn xuất quercetin, là chất ức chế mạnh enzym collagenase [79].

Kết quả của chúng tôi cho thấy tác dụng đầy hứa hẹn của chiết xuất từ ​​H. roseus chống lại sự suy thoái của collagen, một trong những protein lớn nhất gây mất độ đàn hồi và tính toàn vẹn của da và hình thành các nếp nhăn [80,81]. Enzyme collagenase ức chế việc duy trì độ đàn hồi và độ bền kéo của da [82]. Thật vậy, các nghiên cứu khác nhau đã chỉ ra tầm quan trọng của chất chống oxy hóa tự nhiên do hiệu quả của chúng trong việc trì hoãn quá trình lão hóa sớm thông qua việc ức chế hoạt động của collagenase [78,83].

Các nghiên cứu trước đây đánh giá tác dụng của các loài Hibiscus trong việc kích thích sản xuất collagen và ức chế hoạt động của collagenase đã được tiến hành [56,84,85]. Sự ức chế hoạt động collagenase của các chất chiết xuất từ ​​nước của H. sabdariffa đã được mô tả gần đây trong tài liệu [56]. Tương tự như phát hiện của chúng tôi, các tác giả không quan sát thấy tác dụng ức chế collagenase ở nồng độ thấp của chất chiết xuất mà chỉ ở nồng độ cao đáng kể [56]. Trong một nghiên cứu khác, giá trị ICso trong việc ức chế collagenase của chiết xuất etanol của H. sabdariffin là 0. 75 ± 0. 04 mg mL -1 [65], là một hoạt tính thấp hơn gần sáu lần so với những gì được mô tả ở đây đối với H. roseus.

3. Vật liệu và Phương pháp

3.1 Chất liệu cây trồng

Mười cây Hibiscus roseus Thore, được mua từ một vườn ươm thương mại ở Florence (Ý), được trồng trong các chậu {0}} lít chứa đầy đất cát (cát / than bùn, 60: 40, v / v) và được duy trì trong nhà kính của Bộ Nông nghiệp, Thực phẩm, Môi trường và Lâm nghiệp (DAGRI) —Đại học Florence (UNIFD, Sesto Fiorentino (Ý, 43949 / N, 1137 / E). Cây được trồng trong nhà kính từ tháng 1 đến tháng 7 năm 2019, theo thủ công tưới ở dung tích nước trong chậu. Từ mười loại cây khác nhau này, lá và hoa có hai nhóm được thu thập vào cuối tháng 7 trong thời kỳ ra hoa và ngay lập tức được bảo quản ở độ -80 cho đến khi chiết. 3.2.

Các mẫu đông khô (9 0 0 mg) hoa và lá H.roseus (HF) (HL) được nghiền trong nitơ lỏng và chiết xuất với 3 × 15,0 mL ethanol 75% (pH 2,5 được điều chỉnh bằng HCOOH) bằng một chiết xuất có hỗ trợ siêu âm (UAE). UAE được tiến hành trong bể siêu âm (BioClass @ CP104) sử dụng tần số không đổi 39kHz và công suất đầu vào 100 W, trong 30 phút, ở 5 độ. Sau khi ly tâm (5 phút, 9000 vòng / phút, 5 độ; ALC @ 4239R, Milan, Ý), phần nổi phía trên được phân vùng với 3 × 15mL n-hexan để loại bỏ các hợp chất ưa béo có thể cản trở quá trình phân tích. Pha etanol được giảm đến khô, cân trên cân phân tích kỹ thuật số (Precisa [125A), và cặn được trộn lại bằng dung dịch axit hóa metanol / nước (1: 1 v / v, pH 2,5 được điều chỉnh bằng HCOOH). Quá trình chiết xuất được thực hiện trong ba lần.

3.3.Phân tíchLC-MS: Hồ sơ phenolic của các chất chiết xuất

Phân tích LC-MS được thực hiện bằng cách sử dụng khối phổ ba bốn cực ABSciex API3000 (AB Sciex LC, Framingham, MA, USA) kết hợp với hệ thống Agilent 1100 HPLC với bơm nhị phân và bộ lấy mẫu tự động (Agilent Technologies, Inc, Santa Clara, CA, USA ). Thu thập và giảm dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm Analyst 1.6.2 (AB Sciex LLC, Framingham, MA, USA).

Quá trình phân tách HPLC được thực hiện trên Cột Agilent Phenyl (3 × 1 0 mm; 2,7 um), và chất rửa giải là (A) nước được axit hóa (ở pH 2,5 được điều chỉnh bằng HCOOH) và (B) axetonitril / nước (90/10, ở pH 2,5 được điều chỉnh bằng HCOOH). Một hệ dung môi gradient được sử dụng như sau: 0-3 min, 5 phần trăm B; 3-18 min, 5-40 phần trăm B; 18-28 phút, 40 phần trăm B; 28-38 phút, 40-80 phần trăm B; 38-43 min, 80 phần trăm B, 43-45 min, 80-5 phần trăm B, ở tốc độ dòng 0,4mLmin -l. Phân tích MS được thực hiện trong các điều kiện thí nghiệm sau: Ion hóa hóa học (APCI) sử dụng giao diện máy phun sương được làm nóng; Dòng kim （NC）, -5 μA; Máy phun sương Khí （không khí）, 10 （đơn vị tùy ý）; Khí phụ （không khí）, 3L min-l; Nhiệt độ khí phụ (TEM), 550 độ; Khí rèm (CUR, nitơ), 6 (đơn vị tùy ý); Khí va chạm (CAD, Nitơ), 9 (đơn vị tùy ý, tương ứng với 2,6 × 10 ~ áp suất tế bào va chạm Torr).

Việc xác định các thành phần phenol khác nhau được thực hiện bằng cách tiếp cận mục tiêu, sử dụng phương pháp giám sát nhiều phản ứng (MRM), được tối ưu hóa với các tiêu chuẩn cho 19 hợp chất đích (được chọn dựa trên các nghiên cứu trước đây về thành phần polyphenol của Hibiscus spp. [25,35] ): hai flavan -3- ols (catechin và epicatechin), bảy flavonols (quercetagetin -7- O-glucoside, rutin, quercetin -3- O-glucoside, kaempferol -3- O. rutinoside , kaempferol -7- O-glucoside, kaempferol -3- O-glucoside và quercetin), một este cinnamate (axit chlorogenic), hai axit hydroxycinnamic (axit p-coumaric và trans-ferulic), hai dihydrochalcones ( phloridzin và phloretin), một oxyflavone (salidroside) và bốn anthocyanins (myrtillin, kuromanin, peonidin -3- O-glucoside và oenin). Thời gian lưu và chuyển tiếp MRM tương đối (định lượng và định tính) đã được báo cáo trong Bảng bổ sung S1. Hơn nữa, các nhận dạng dự kiến ​​bổ sung đã được thử nghiệm; được thử nghiệm bằng cách sử dụng phương pháp không có mục tiêu, quét tứ cực từ m / z 100 đến 100 Da.

3.4.HPLC-DAD Phân tích: Định lượng Phenolics

Phân tích HPLC-DAD được thực hiện để định lượng các nhóm phenol khác nhau (dẫn xuất axit hydroxycinnamic, catechin, dihydrochalcones, flavonoid và anthocyanins） trong dịch chiết. Phần nhỏ của mẫu （15 μL） được tiêm vào máy sắc ký lỏng Perkin Elmer Flexar được trang bị một máy bơm 200Q / 410 bậc bốn và một máy dò mảng diode LC 200 (DAD) (tất cả từ Perkin Elmer ", Bradford, CT, Hoa Kỳ). .

Các sắc ký đồ thu được ở 28 0, 330,350 và ở bước sóng 520 nm (để định lượng anthocyanin). Việc xác định và định lượng các hợp chất phenolic được thực hiện dựa trên thời gian lưu, đặc điểm phổ UV, và so sánh với các chất chuẩn, cũng như dựa trên dữ liệu tài liệu [25] và trong phân tích LC-MS trước đó. Các đường chuẩn năm điểm với các chất chuẩn khác nhau (axit chlorogenic, p-coumaric, rutin, epicatechin, naringin và peonidin -3- O-glucoside, tất cả đều từ Sigma-Aldrich "-Merck KGaA, Darmstadt, Đức) được sử dụng để định lượng các polyphenol khác nhau được phát hiện và xác định trong các chất chiết xuất. Nếu không có chất chuẩn thương mại, việc định lượng được thực hiện bằng cách sử dụng đường chuẩn của các chất chuẩn từ cùng một lớp phenolic, đưa ra hàm lượng ước tính. Độ tuyến tính của các đường cong được xác định bằng hệ số xác định (R4), cao hơn 0,99 đối với tất cả các tiêu chuẩn.

Tất cả các chất chiết xuất được phân tích theo ba lần và kết quả định lượng của các phenol được tính bằng mg gl trọng lượng khô (mg gl DW), được biểu thị bằng tổng hàm lượng dẫn xuất axit hydroxy cinnamic (THC), tổng hàm lượng flavonoid (TFC), tổng số dẫn xuất catechin hàm lượng (TCD), tổng hàm lượng dihydrochalcones (IDC), tổng hàm lượng anthocyanin (TAC) và tổng hàm lượng phenolic (TPC), được ước tính là tổng của các hợp chất được xác định riêng lẻ thuộc mỗi lớp.

3.5. Thử nghiệm hoạt động chống oxy hóa

Thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa được thực hiện bằng hai phương pháp khác nhau: thử nghiệm DPPH (2, 2- diphenyl -1- picrylhydrazyl) và thử nghiệm Hydroxyl Radical (OH) -Sấy rác (HRS).

Phương pháp của Khandi và Charles [{{0}}] đã được áp dụng cho xét nghiệm DPPH. Một cách ngắn gọn, các mẫu đã pha loãng của dịch chiết (0. 5 mL) được thêm vào 0. 5 mL dung dịch DPPH (0. 1 mM trong metanol; Sigma-Aldrich @, St. Louis, MI, USA), và hỗn hợp được để phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 4 0 phút trong bóng tối. Thời gian này (4 0 phút) được xác định dựa trên các kết quả phân tích động học của mỗi dịch chiết và các tiêu chuẩn axit chlorogenic và rutin. Sau thời gian phản ứng, độ hấp thụ được đo ở bước sóng 518 nm bằng máy quang phổ PerkinElmer§ Lambda 25UV / VIS. Độ hấp thụ của mẫu trắng (0. 5 mL metanol và 0,5 mL mẫu) và của mẫu đối chứng âm tính (0,5 mL metanol và 0,5 mL dung dịch DPPH) cũng được đánh giá. Tất cả các phân tích được thực hiện trong ba lần. Phần trăm hoạt động chống oxy hóa được tính như sau (1).

4.Kết luận

Các chất chuyển hóa thứ cấp là thành phần hoạt tính tiềm năng cho các công thức mỹ phẩm mới. Trong số này, các hợp chất phenolic chiết xuất từ ​​thực vật có thể có đặc tính chống oxy hóa và chống lão hóa tuyệt vời, có hiệu quả trong việc ức chế các enzym ở da (ví dụ, collagenase) và hấp thụ tia cực tím. Do đó, các chất chiết xuất từ ​​thực vật chưa được nghiên cứu kỹ lưỡng, chẳng hạn như chiết xuất từ ​​H. roseus, có thể đại diện cho các nguồn phân tử hoạt tính sinh học chưa được kiểm chứng.

Chúng tôi đã chứng minh rằng lá và hoa của H.roseus rất giàu các dẫn xuất axit hydroxycinnamic và flavonoid, trong đó hoa có lượng lớn hơn kaempferol glycoside, catechin, dihydrochalcones và anthocyanins, tất cả các hợp chất này chưa được mô tả trong tài liệu về loài này. . Khả năng chống oxy hóa tuyệt vời, đặc biệt là chiết xuất từ ​​hoa, cùng với hoạt tính chống nắng và chống collagenase của cả chiết xuất từ ​​lá và hoa, chỉ ra khả năng sử dụng đầy hứa hẹn của loài này trong các ứng dụng chăm sóc da. Kết luận, kết quả của chúng tôi cho thấy tiềm năng của hoa và lá H. roseus là nguồn cung cấp phenol cũng như hoạt động của chiết xuất của chúng như chất chống lão hóa có thể được sử dụng làm thành phần cho các sản phẩm mỹ phẩm chức năng.

Bài viết này được trích từ Plants 2021, 10, 522. https://doi.org/10.3390/plants10030522 https://www.mdpi.com/journal/plants