Làm thế nào để chiết xuất Cistanche giảm tăng sản viêm

Liên hệ: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Giảm sự tăng sản viêm trong ruột ở chuột dễ bị ung thư ruột kết bằng chiết xuất từ ​​nước của Cistanche Desticola

Yamin Jia, 1,2 và cộng sự

CistancheSa mạc thường được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc để điều trị nhiều vấn đề sức khỏe bao gồm hội chứng ruột kích thích hoặc táo bón. Nghiên cứu này được thiết kế để kiểm tra hiệu quả của chiết xuất từ ​​nước của C. sa mạc phủ trong việc ngăn ngừa ung thư đại trực tràng trên mô hình chuột. Nước chiết giàu polysaccharide của C. sa mạc được điều chế bằng cách đun sôi bột thân của nó trong nước cất. Chuột trống Tgfb1Rag2 được sử dụng làm mô hình thử nghiệm. Ở đây, chúng tôi cho thấy rằng việc cho ăn chiết xuất từ ​​nước của C. sa mạc phủ làm giảm đáng kể số lượng niêm mạctăng sảnvà nhiễm Helicobacter đường ruột ở chuột. Tác dụng có lợi này tương quan với sự kích thích đáng kể của hệ thống miễn dịch, bằng chứng là sự to ra của lá lách với sự gia tăng số lượng đại thực bào lách và các tế bào tiêu diệt tự nhiên, và với khả năng gây độc tế bào mạnh hơn của các tế bào lách. Chiết xuất từ ​​nước trong ống nghiệm của C. sa mạcza đã tăng cường độc tính tế bào của các tế bào lách đơn thuần chống lại một dòng tế bào ung thư ruột kết ở người, và trong nuôi cấy đại thực bào đã điều chỉnh sự biểu hiện nitric oxide synthase II và kích thích thực bào. Kết luận, dữ liệu của chúng tôi chỉ ra rằng việc uống chiết xuất C. sa mạc-la làm giảmviêmtăng sảnPolyp và nhiễm vi khuẩn helicobacter ở chuột do hoạt động kích thích miễn dịch của nó, cho thấy chiết xuất C. sa mạc có thể có tiềm năng trong việc ngăn ngừa các rối loạn viêm đường ruột bao gồm cả ung thư đại trực tràng. Bản quyền © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.

Từ khóa: điều hòa miễn dịch thảo dược;Cistanchetrích xuất; polysaccharid; vi khuẩn Helicobacter;viêmtăng sản; ung thư đại trực tràng.

Cistanchetrích xuấtcó thể giảmGây viêmtăng sản

GIỚI THIỆU

Ung thư đại trực tràng là bệnh ung thư phổ biến thứ ba ở nam giới và thứ hai ở phụ nữ trên toàn thế giới và đứng thứ tư trong nguyên nhân gây tử vong do ung thư (8% tổng số ca tử vong do ung thư; Ferlay et al., 2010). Các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy có nhiều yếu tố nguy cơ liên quan đến bệnh này, bao gồm di truyền (ví dụ tiền sử gia đình mắc bệnh ung thư ruột kết) (Chiến lược và Syngal, 2005) và các yếu tố chế độ ăn uống (ví dụ thịt đỏ và ít sợi; Chao và cộng sự, 2005; Park et al., 2005), vàviêmbệnh đường ruột (IBD; Eaden và cộng sự, 2001; von Roon và cộng sự, 2007; Lukas, 2010). Cho đến nay, mặc dù có nhiều loại thuốc độc tế bào mới và các kỹ thuật phẫu thuật và xạ trị cải tiến được sử dụng để điều trị bệnh này (Cunningham và cộng sự, 2010), một tỷ lệ lớn bệnh nhân ung thư đại trực tràng vẫn không thể chữa khỏi; Ước tính có khoảng 608000 ca tử vong do căn bệnh này trên toàn thế giới vào năm 2008 (Ferlay và cộng sự, 2010). Do đó, cần có những liệu pháp mới và một ứng cử viên là liệu pháp miễn dịch. Các phương pháp điều trị miễn dịch khác nhau đã được đánh giá để điều trị ung thư đại trực tràng, và kết quả cho đến nay rất đáng khích lệ (Burgdorf và cộng sự, 2009). Các polysaccharid thảo dược đã được chứng minh là có các hoạt động điều hòa miễn dịch cụ thể (Jiang và cộng sự, 2010), cho thấy rằng các sản phẩm thảo dược này có thể được sử dụng như một chất bổ trợ kích thích miễn dịch cụ thể chống lại ung thư đại trực tràng.

CistancheSa mạc Ma, được gọi là Rou Cong Rong trong y học thảo mộc Trung Quốc, đã được đưa vào công thức thảo dược cho nhiều vấn đề sức khỏe, bao gồm bất lực, bệnh đái dắt và hội chứng ruột kích thích / táo bón (Jiang và Tu, 2009). Các nghiên cứu thực nghiệm đã phát hiện ra các hoạt động sinh học khác nhau của các chiết xuất khác nhau của C. sa mạc phủ; chiết xuất phenylethanoid glycosides của thảo dược này có hoạt tính chống mệt mỏi ở chuột (Cai và cộng sự, 2010), và giảm đau và chốngviêmtác dụng trên loài gặm nhấm (Lin và cộng sự, 2002), trong khi polysaccharides của nó kích thích sự tăng sinh tế bào lympho T và B trong các mẫu tế bào lympho (Wu và cộng sự, 2005; Dong và cộng sự, 2007). Tuy nhiên, hiệu quả của chiết xuất polysaccharides của C. sa mạcza trong việc kích thích phản ứng miễn dịch in vivo vẫn chưa được kiểm tra.

Rag2^-/-chuột thiếu tế bào lympho T và B trưởng thành và trên nền hỗn hợp (~ 97 phần trăm 129 S6 và ~ 3 phần trăm CF -1) tự phát phát triển liên quan đến viêmtăng sảntrong ruột (Engle và cộng sự, 1999). Giới thiệu di truyền của alen rỗng Tgfb1 (yếu tố tăng trưởng biến đổi b1 (TGF-b1)) vào dòng chuột này dẫn đến sự tiến triển thêm củatăng sảnđối với ung thư biểu mô và ung thư biểu mô (Engle và cộng sự, 2002), và viêm đại tràng phụ thuộc vào hệ vi sinh gây bệnh là cần thiết cho sự phát triển của ung thư ruột kết (Engle và cộng sự, 2002), cho thấy rằng dòng chuột này cung cấp một mô hình lý tưởng cho việc kiểm tra một liệu pháp tiềm năng trong điều trị viêm / ung thư đại trực tràng do IBD. Trong nghiên cứu này, lần đầu tiên chúng tôi chứng minh hiệu quả của chiết xuất nước giàu polysaccharide của C. sa mạc phủ trong việc giảmviêmtăng sảntrong mô hình này.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Chiết xuất nước giàu polysaccharide của quá trình điều chế C. sa mạc.

Thảo dược C. sa mạc được thu hoạch bởi Tiến sĩ Y. Guo (Đại học Nông nghiệp Trung Quốc) ở khu tự trị Nội Mông, Trung Quốc. Bột của toàn bộ thân cây khô (300 g) được đun sôi trong nước cất hai lần: đầu tiên trong 1 giờ trong 500 mL nước, tiếp theo là thu phần nổi phía trên, sau đó trong 45 phút trong 400 mL nước. Phần nổi phía trên được lọc qua giấy lọc Whatman (nhanh trung bình) sau mỗi lần đun sôi, và tập hợp lại với nhau. Dung dịch chiết xuất được làm khô bằng cách đông khô và được giữ ở 80 C. Sản phẩm cuối cùng là khoảng 10 g (sản lượng: ~ 3 phần trăm).

Chuột và nuôi cấy tế bào. Chuột thiếu TGF-b1 (Tgfb1 cộng / - Rag2^-/-) trên nền hỗn hợp (~ 97 phần trăm 129 S6 và ~ 3 phần trăm CF -1) được nhận từ một đàn sinh sản được duy trì trong điều kiện không có mầm bệnh trong cơ sở động vật tại Trung tâm Nghiên cứu Jack Bell (Vancouver, BC). Những con chuột này có nguồn gốc từ Kho lưu trữ Mô hình Chuột của Tổ chức Ung thư Người (MMHCC) (Viện Ung thư Quốc gia tại Frederick, MD, Hoa Kỳ). Chuột C57BL / 6 J (B6) (đực, 8–10 tuần tuổi) được mua từ Phòng thí nghiệm Jackson (Bar Harbour, ME, Hoa Kỳ). Tất cả các động vật cho thí nghiệm được giữ trong nhà ở và chế độ ăn uống thông thường (Chế độ ăn uống 5001 loài gặm nhấm, LabDiet) sau khi cai sữa ở 4 tuần tuổi, và việc xử lý thảo dược và thu thập mẫu được thực hiện theo hướng dẫn của Hội đồng Canada về Chăm sóc Động vật theo
các giao thức được phê duyệt bởi Tiểu ban Sử dụng Động vật tại Đại học British Columbia.

Cả dòng tế bào ung thư biểu mô tuyến ruột kết SW48 0 ở người và dòng tế bào đại thực bào bạch cầu ở chuột RAW 246.7 đều được phát triển trong Eagle's Medium đã được sửa đổi của Dulbecco (DMEM, Invitrogen, Carlsbad, CA, Hoa Kỳ) chứa 1 0 phần trăm bò thai. huyết thanh (FBS) (môi trường DMEM hoàn chỉnh) ở 37- C trong tủ ấm 5 phần trăm CO2 / 95 phần trăm không khí được làm ẩm. Tế bào lách được phân lập bằng cách đập nhẹ các mảnh lá lách trong nước muối đệm phosphat (PBS), sau đó loại bỏ hồng cầu bằng dung dịch đệm ly giải (0. 15 M NH4Cl, 1,0 mM KHCO3, 0,1 mM EDTA, pH 6,8). Sau khi rửa lại bằng PBS, tế bào lách được treo trong môi trường RPMI 1640 được bổ sung 10% FBS (môi trường RPMI hoàn chỉnh).

Cistanchetrích xuấtcó thể giảmGây viêmtăng sản

Điều trị chiết xuất.

Chiết xuất thảo mộc, được gọi làCistanchetrích xuấttrong nghiên cứu này, cuối cùng đã được điều chế bằng cách hoàn nguyên bột khô với nước cất hai lần đã khử trùng và chứa 2–3 phần trăm (w / w) phenylethanoids, 65–7 0 phần trăm (w / w) polysaccharide, và 0. 6–1 phần trăm (w / w) dựa trên protein dựa trên các thử nghiệm sau: số lượng phenylethanoids được xác định bằng độ hấp thụ ở 332 nm sử dụng phép đo quang phổ được mô tả trước đây (Ouyang và cộng sự, 2005); hàm lượng polysaccharid được đo bằng phương pháp axit sulfuric phenol tiêu chuẩn (Dubois và cộng sự, 1956) sau khi kết tủa bằng etanol; và protein được xác định bằng xét nghiệm protein Bio-Rad theo quy trình của nhà sản xuất (Bio-Rad Lab, Hercules, CA, USA). Liều lượng chiết xuất Cistanche là 0,4 g / kg / ngày dựa trên nghiên cứu thử nghiệm của chúng tôi. Lượng nước trung bình cho mỗi con chuột trưởng thành mỗi ngày là khoảng 4 mL, và nếu 1 mL nước uống chứa 3 mgCistanchetrích xuất, mỗi con chuột được uống 12 mg chiết xuất mỗi ngày. Dựa trên thực tế là trọng lượng cơ thể trung bình của một con chuột trưởng thành là 30 g, nước uống chứa 3 mg / mLCistanchetrích xuấtđã cho chuột với liều lượng 0. 4 g / kg / ngày. Những con chuột được điều trị bằng cách cho uống nước uống có chứa 3 mg / mLCistanchetrích xuấtđã được bổ sung ít nhất hai ngày một lần, từ hai tháng tuổi trong ba tháng trong phòng thông thường của cơ sở chăm sóc động vật.

Phân loại mô học của ung thư đại trực tràng.

Khi kết thúc quá trình điều trị ba tháng, cả mô ruột nhỏ và ruột già đều được thu hoạch và mở theo chiều dọc, sau đó nhẹ nhàng xả chất bên trong ra ngoài bằng PBS. Tổng cộng sáu mảnh (mỗi mảnh dài 2 cm) mô ruột của mỗi con chuột được thu thập: ba mảnh từ ruột non ở các vị trí gần, giữa và xa; hai từ ruột già ở các vị trí gần và xa, và một từ manh tràng. Tất cả các mô được cố định trong 10% formalin và nhúng vào parafin. Mỗi phần được nhuộm bằng hematoxylin và eosin (HE) để phân loại mô học của ung thư đại trực tràng. Phân loại bệnh được thực hiện theo các đặc điểm bệnh lý củatăng sản, u tuyến, hoặc ung thư biểu mô trong mỗi mẫu, như đã mô tả trước đây (Engle và cộng sự, 1999) theo kiểu thử nghiệm mù. Tổng số của mỗi thay đổi bệnh lý (tăng sản, u tuyến và ung thư biểu mô) được đếm trong hai phần mô ruột của mỗi con chuột.

Cistanchetrích xuấtcó thể giảmGây viêmtăng sản

Phát hiện vi khuẩn Helicobacter hepaticus (H. hepaticus) trong phân chuột.

Để kiểm tra tác dụng củaCistanchetrích xuấtvề sự phát triển của hệ vi sinh bệnh lý trong ruột, H. hepaticus trong phân được xác định bằng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với mồi 16S rDNA đặc trưng cho loài như đã mô tả trước đây (Shames và cộng sự, 1995). Khoảng 2 0 0 mg phân tươi được hòa tan trong 1 μL PBS và được ủ ở 5 0 độ trong 30 phút, tiếp theo là ly tâm ở 8000 vòng / phút trong 10 phút. Phần nổi phía trên (200 mL) được thu thập và trộn với một lượng tương đương dung dịch proteinase K chứa 5 phần trăm (v / v) của dung dịch proteinase K 18,7 mg / mL (Fermentas Canada, Burlington, ON, Canada) trong dung dịch đệm phân hủy (50 μM Tris – HCl, pH 8,0, 0,1 M EDTA, 0,5% Natri dodecyl sulfat), và ủ ở 70 C trong 30 phút. DNA trong dung dịch thu được được tách chiết bằng kit QIAprep Miniprep theo quy trình của nhà sản xuất (QIAGEN, Mississauga, ON, Canada).
Khuếch đại phản ứng chuỗi polymerase của DNA vi khuẩn được thực hiện trong một hỗn hợp có chứa {{0}}. 75 μL của 1 0 bộ đệm PCR, 0. 5μL của 5 0 mM MgCl2, 0,5 μL mỗi mồi (giác: 5'-GCA TTT GAA ACT GTT ACT CTG; phản cảm: 5'-GGG GAGCUUGAAAACAG, mỗi mồi 100 mM), 0,5 μL Taq polymerase, 18,75 μL H2O không chứa nuclease và 1μL dung dịch DNA phân chưa phân tích. Hỗn hợp PCR được làm nóng ở 94 độ trong 5 phút, tiếp theo là 40 chu kỳ biến tính ở 94 độ trong 1 phút, ủ ở 55 độ trong 1,25 phút và kéo dài ở 72 độ trong 1,5 phút. PCR được kết thúc bằng bước kéo dài 10 phút ở 72 độ. Sản phẩm PCR thu được (25 μL) được điện di trên gel agarose 1% trong đệm Tris-acetate-EDTA (TAE) có chứa 0,5 mg / mL ethidium bromide và được hiển thị dưới ánh sáng UV.

Xác định đại thực bào và tế bào tiêu diệt tự nhiên (NK).

Tỷ lệ phần trăm đại thực bào và tế bào NK trong huyền phù tế bào lách được xác định bằng phân tích phân loại tế bào kích hoạt huỳnh quang (FACS). Một triệu tế bào lách trong đệm FACS được ủ với sự kết hợp kháng thể thích hợp cho các kiểu hình khác nhau của tế bào trong nước đá: anti-CD 3- fluorescein isothiocyanate (FITC) và anti-CD49b-phycoerythrin (PE) (BD Biosciences, Mississauga, ON, Canada) đối với tế bào NK CD3 CD49b và F4 / 80 plus chống chuột như một kháng thể chính và IgG-FITC chống chuột như một kháng thể thứ cấp (eBioscience, San Diego, CA, USA) cho F4 / 80 cộng với đại thực bào. Cường độ huỳnh quang đối với từng loại tế bào được đo bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy và phân tích bằng cách so sánh với các đối chứng nền bằng phần mềm CELLQUEST (BD Biosciences).

Thử nghiệm độc tính tế bào Calcein-acetoxymethyl (calcein-AM).

Hoạt tính ly giải của các tế bào lách hiệu ứng chống lại các tế bào SW480 đích được đánh giá bằng xét nghiệm độc tính tế bào calcein-AM sử dụng hệ thống đồng nuôi cấy như đã mô tả trước đây (Neri và cộng sự, 2001). Tóm lại, các tế bào SW480 được đánh dấu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang calcein-AM như sau: 1 x10⁶tế bào / mL SW48 0 tế bào trong môi trường DMEM hoàn chỉnh được ủ với 15 μM calcein-AM ở 37 độ và thỉnh thoảng lắc. Sau 30 phút ủ, các tế bào được rửa sạch bằng môi trường DMEM hoàn chỉnh để loại bỏ thuốc nhuộm ngoại bào. Tế bào SW480 được đánh dấu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang trong môi trường DMEM hoàn chỉnh (0,2 x 10⁶tế bào / {{{0}}. 25 mL / giếng) đã được gieo vào 24- đĩa giếng. Dựa trên các tỷ lệ khác nhau (12: 1, 6: 1, 3: 1 và 1,5: 1) của E (effector): T (target), tế bào lách trong 0. 25 mL môi trường RPMI hoàn chỉnh cho mỗi giếng đã được thêm vào các giếng với các ô mục tiêu trong ba lần. Các đồng cấy được ủ ở 37 độ trong 5% CO2 trong 24 giờ. Chất nổi được thu thập sau khi đĩa được quay ở tốc độ 2 0 00 vòng / phút trong 5 phút. Sự giải phóng Calcein-AM lên phần nổi được xác định bằng cách sử dụng máy đo quang phổ vi tấm (Fluoroskan Ascent FL, Thermo Labsystems) ở bước phát xạ 527 nm dưới sự kích thích ở 485 nm. Các tế bào đích, được ủ với hỗn hợp 0,25 mL môi trường DMEM hoàn chỉnh và 0,25 mL môi trường RPMI hoàn chỉnh, được sử dụng làm nền hoặc kiểm soát giải phóng tự phát và với sự có mặt của 2%, Triton X -100 được sử dụng làm kiểm soát phát hành tối đa. Độc tính tế bào của tế bào lách được tính như sau:

Phép đo oxit nitric (NO). Oxit nitric tiết ra từ tế bào nhanh chóng bị oxy hóa thành nitrit trong môi trường nuôi cấy. Do đó, nồng độ nitrat trong môi trường được xác định bằng cách sử dụng phương pháp Griess để đo lượng NO tạo ra. RAW264.7 ô (0. 25 x 10⁶

tế bào / giếng trong 0. 5 mL môi trường DMEM hoàn chỉnh) trong 24- đĩa giếng được kích thích bằngCistanchetrích xuất(50–200 mg / mL) và lipopolysaccharide (LPS) (10 ng / mL) như một đối chứng tích cực. Sau 24 giờ xử lý, lần đầu tiên 50 mL dịch nuôi cấy nổi trên mặt với 50 mL 1%
sulphanilamit trong axit photphoric 5 phần trăm trong 96- đĩa giếng ba lần, và được ủ trong 1 0 phút, sau đó 50 mL 0,1% naphthyl ethylene diamine dihydrochloride trong nước cất được thêm vào mỗi giếng. Độ hấp thụ được đọc ở bước sóng 550 nm sau khi ủ trong 10 phút, và mức NO / nitrit được tính bằng đường chuẩn với nồng độ natri nitrit đã biết.

Cistanchetrích xuấtcó thể giảmGây viêmtăng sản

Phong cách phương Tây.

Mức độ tế bào của nitric oxide synthase II (NOS 2 hoặc iNOS) đã được kiểm tra bằng Western blot như đã mô tả trước đây (Du và cộng sự, 2006). Tóm lại, các mẫu protein (khoảng 100 mg / mẫu) được phân đoạn bằng 7% SDS-PAGE và được chuyển vào màng nitrocellulose. Các dải protein NOS II được xác định bằng kháng thể đa dòng kháng NOS II chính của thỏ (N -20) (độ pha loãng 1: 500; Santa Cruz Biotech, Santa Cruz, CA, USA) và kháng thể IgG chống thỏ thứ cấp của dê ( Độ pha loãng 1: 10000; Phòng thí nghiệm Vector, Burlingame, CA, Hoa Kỳ). Phức hợp protein-kháng thể NOS II được hình dung bằng một xét nghiệm phát quang hóa học nâng cao (ECL, Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, Anh). Các khối được tái tạo bằng cách sử dụng IgG kháng b-actin (Sigma-Aldrich Canada, Oakville, ON, Canada) để xác nhận lượng protein được nạp trong mỗi mẫu.

Xét nghiệm khả năng thực bào. Quá trình thực bào được đo bằng số lượng các hạt latex được đánh dấu huỳnh quang (SigmaAldrich Canada, L -3030, biến tính carboxylate, kích thước trung bình 2 mm) bị các tế bào RAW264.7 nhấn chìm như đã mô tả trước đây (Wu và cộng sự, 2 {{ 9}} 0 7). Tóm lại, các tế bào RAW264,7 (0,1 106 tế bào / 0,5 mL / giếng) trong môi trường DMEM hoàn chỉnh được gieo vào 24- đĩa giếng và được kích thích bằng 100 mg / mLCistanchetrích xuấthoặc hoàn thành phương tiện DMEM chỉ làm điều khiển. Sau khi kích thích qua đêm, 2,5 mL hạt latex huỳnh quang trên mỗi giếng được thêm vào dịch cấy đại thực bào và ủ trong 2 giờ. Đối với phân tích tế bào dòng chảy, các tế bào được tách ra bằng pipet sau khi rửa trong PBS, và cường độ huỳnh quang của tế bào thực bào được đo bằng máy đo dòng chảy và phân tích bằng cách so sánh với đối chứng nền (không có hạt) bằng phần mềm CELLQUEST (BD Biosciences).

Phân tích thống kê.

Dữ liệu được trình bày dưới dạng độ lệch chuẩn cộng trung bình (SD). Phân tích phương sai (ANOVA) hoặc kiểm định t của Học sinh được thực hiện phù hợp để so sánh dữ liệu giữa các nhóm. Giá trị p của <0. 05="" được="" coi="" là="" quan="">

KẾT QUẢ

Điều trị bằngCistanchetrích xuấtgiảm tần suất củatăng sảnvà nhiễm H. gan ruột Trong thời gian điều trị (3 tháng), trọng lượng cơ thể và lượng nước uống được theo dõi 2 ngày một lần ở chuột của nhóm được xử lý chiết xuất so với nhóm được điều trị bằng phương tiện, không có sự khác biệt đáng kể. lưu ý (dữ liệu không được hiển thị). Tuy nhiên, phân tích mô học cho thấy rằng việc uốngCistanchechiết xuấtgiảm đáng kể số lượngviêmtăng sảntrong ruột (Hình 1), bằng chứng là những con chuột được uống nước có chiết xuất có íttăng sản(5. 00 cộng với -2. 83 / chuột, n=15) so với những người đang uống nước lã hoặc xe cộ (7,53 cộng với -3. 09 / chuột, n {{9 }}) (giải nén so với xe: p=0. 0133, t-test). Sự khác biệt về số lượng u tuyến và ung thư biểu mô giữa chuột được chiết xuất và được xử lý bằng phương tiện không có ý nghĩa thống kê vì chỉ một số con chuột có các giai đoạn thay đổi bệnh lý này (dữ liệu không được hiển thị).

Hình 1. Giảm tỷ lệ tăng sản bằng cách điều trị bằng nước chiết xuất từ ​​C. sa mạc (Cistanchetrích xuất). Tgfb1 plus / -Rag 2- / - chuột được cho ănCistanchetrích xuấttrong nước uống (Nhóm chiết xuất) so với những người chỉ có nước uống thông thường (Nhóm phương tiện). Tổn thương ung thư trong ruột được kiểm tra mô học với vết H&E. (A) Hình ảnh điển hình của phần mô lành. (B) Hình ảnh điển hình của tăng sản trong phần, được biểu thị bằng một mũi tên. (C) Số lượng tăng sản trong ruột của mỗi con vật được tính bằng mô học (p=0. 0133, chiết xuất so với xe, n=15). Hình này có sẵn màu trực tuyến tại wileyonlinelibrary.com/journal/ptr

Hàm lượng vi sinh vật đường ruột, đặc biệt là nhiễm H. hepaticus, đã được chứng minh là cần thiết cho sự phát triển của tất cả các giai đoạn của ung thư ruột kết bao gồm tăng sản ở Rag2^-/- chuột (Engle và cộng sự, 2002; Erdman và cộng sự, 2003). Để kiểm tra xem việc điều trị bằngCistanchechiết xuấtgiảm hệ vi sinh bệnh lý trong ruột, sự hiện diện của H. hepaticus trong phân của những con chuột được điều trị bằngCistanchetrích xuấtđược xác định bằng PCR so với điều khiển phương tiện. Trong mỗi thí nghiệm, ba con chuột trên mỗi lồng được xử lý bằng chiết xuất Cistanche hoặc phương tiện. Các mẫu phân được thu thập vào cuối 14- giờ qua đêm sau khi lồng được làm sạch. Như thể hiện trong Hình 2, H. hepaticus 16S rDNA trong phân được phát hiện một cách hiệu quả bằng kỹ thuật PCR. Trong ba thí nghiệm riêng biệt (Bảng 1), chỉ có 20–40 phần trăm các mẫu từCistanche-trích xuất-các con chuột được điều trị được phát hiện là dương tính với PCR, trong khi 60–80 phần trăm từ các đối tượng kiểm soát phương tiện là dương tính (trích xuất so với phương tiện: p=0. 0189, t-test, n=3), cho thấy rằng điều trị bằng Chiết xuất Cistanche làm giảm nhiễm H. hepaticus trong ruột ở chuột.

Điều trị bằng chiết xuất Cistanche làm tăng số lượng đại thực bào lách và tế bào NK

Phản ứng miễn dịch đóng một vai trò quan trọng trong việc loại bỏ nhiễm trùng helicobacter. Để kiểm tra xemCistanche trích xuấtĐiều trị ảnh hưởng đến hệ thống miễn dịch ở những con chuột dễ bị ung thư ruột kết này, kích thước của lá lách (12 con chuột trong mỗi nhóm) và số lượng tế bào lách (sáu con chuột được chọn ngẫu nhiên từ mỗi nhóm) được xác định khi kết thúc điều trị. Các lá lách của 12 con chuột trong mỗi nhóm được cân, ba con chuột khác trong thí nghiệm ban đầu không được đưa vào. Như minh họa trong Bảng 2,Cistanche-trích xuất-những con chuột được xử lý (0. 0 55 cộng với -0. 022 g / lá lách) nặng hơn ở nhóm xe (0,038 cộng với -0. 01 g / lá lách; trích xuất so với xe: p =0. 04, t-test). Những dữ liệu này được hỗ trợ thêm bởi sự gia tăng số lượng tế bào lách ở những con chuột được điều trị bằngCistanchetrích xuất, được biểu thị bằng 7,095 cộng với -1. 353 (x10⁶ ô / lá lách) so với 2,941 cộng với -1. 492 (x10⁶tế bào / lách) chuột điều khiển trong xe (trích xuất so với xe: p =0. 002, t-test).

Để đánh giá thêm xemCistanchetrích xuấtđiều trị ảnh hưởng đến một loại phụ cụ thể của tế bào lách ở chuột, số lượng tế bào NK lách (CD3^-CD49b^thêmtế bào) và đại thực bào (FT / 80^thêmtế bào) đã được đếm bằng phân tích FACS. Phần trăm CD3^-CD49b^thêmtế bào trong tế bào lách củaCistanche-trích xuất-các con chuột được điều trị (32,06 cộng với -2. 13 phần trăm) không khác biệt đáng kể so với ở những con chuột được điều trị bằng phương tiện (28,47 cộng với -2. 74 phần trăm; giải nén so với phương tiện: p =0. 3741, t-test, n =6), nhưng tổng số tế bào NK trong lá lách củaCistanche-trích xuất-những con chuột được xử lý (2,22 cộng với - 0. 44x10⁶/ lách) cao hơn nhóm kiểm soát trên xe đó (0. 83 cộng với -0. 17x10⁶/lách; giải nén so với xe: p =0. 01, t-test, n =6; Hình 3B). Kết quả tương tự cũng được thấy khi kiểm tra tế bào FT / 80 plus lách; như trong quần thể tế bào NK lách, sự khác biệt về tỷ lệ tế bào FT / 80 cộng với lách giữa những con chuột được xử lý chiết xuất (35,25 cộng với -7. 28 phần trăm) và chuột điều khiển phương tiện (31,74 cộng -5. 07 phần trăm) không có ý nghĩa (trích xuất so với phương tiện: p =0. 407, n =6), nhưng là tổng số đại thực bào lách trong nhóm được xử lý chiết xuất (2.439 cộng với -0 .452x10⁶tế bào / lá lách) cao hơn so với ở các nhóm đối chứng (1,114 cộng với -0. 685x10⁶tế bào / lá lách; giải nén so với xe: p =0. 001, t-test, n =6; Hình 3D). Tổng hợp lại, những dữ liệu này cho thấy rằng việc điều trị bằngCistanchetrích xuấtcó thể làm tăng tổng số, nhưng không phải tỷ lệ phần trăm hoặc tỷ lệ, các loại phụ của tế bào lách hiệu ứng, tế bào NK và đại thực bào trong lách.

Hình 3. Tăng số lượng tế bào NK lách và đại thực bào khi điều trị bằngCistanchetrích xuất. Tế bào NK hoặc đại thực bào trong huyền phù tế bào lách được xác định bằng phân tích FACS với nhuộm kết hợp giữa kháng thể FITC-anti-CD3e và chất chỉ điểm tế bào APC-anti-CD49b / Pan-NK (đối với tế bào NK) hoặc với một vết đơn lẻ của FITC-anti- FT / 80 (dành cho đại thực bào). (A) Biểu đồ đại diện cho phần trăm tế bào NK lách (CD3^-CD49b^thêm) trong tế bào lách của những con chuột được điều trị bằngCistanchetrích xuấtso với phương tiện. (B) Tổng số tế bào NK trên mỗi lá lách. Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình cộng -SD trong mỗi nhóm (p=0. 01, n=6). (C) Biểu đồ đại diện cho phần trăm đại thực bào lách (FT / 80 cộng) trong tế bào lách của những con chuột được điều trị bằngCistanchetrích xuấtso với phương tiện. (D) Tổng số đại thực bào trên mỗi lá lách. Dữ liệu được trình bày dưới dạng trung bình cộng -SD trong mỗi nhóm (p=0. 001, n =6).

Điều trị bằng chiết xuất Cistanche kích thích độc tế bào của tế bào lách in vivo và in vitro

Đáp ứng miễn dịch không chỉ phụ thuộc vào số lượng tế bào lách mà còn phụ thuộc vào chức năng của chúng, chẳng hạn như độc tính tế bào. Ảnh hưởng củaCistanchetrích xuấtđiều trị về chức năng của tế bào lách (tức là độc tính tế bào) đã được kiểm tra trong đồng nuôi cấy với tế bào SW480. Như thể hiện trong Hình 4A, độc tính tế bào của tế bào lách từ những con chuột được điều trị bằngCistanchetrích xuấtcao hơn so với tế bào của chuột được xử lý bằng phương tiện giao thông, được biểu thị bằng 39,38 cộng với -2. 64 phần trăm giải phóng calcein-AM trong đồng nuôi cấy tế bào lách được xử lý chiết xuất với tế bào SW48 0 ở mức 6 Tỷ lệ: 1, 51,11 cộng với -2. 6 phần trăm với tỷ lệ 3: 1 và 57,33 cộng với -2. 53 phần trăm với tỷ lệ 1,5: 1, so với 27. 75- 0. 18 phần trăm trong đồng nuôi cấy tế bào lách được xử lý bằng phương tiện với tế bào SW480 ở tỷ lệ 6: 1, 40. 97 =-2. 85 phần trăm ở tỷ lệ 3: 1 và 45,16 cộng với -0. 18 phần trăm ở tỷ lệ Tỷ lệ 1,5: 1 (trích xuất so với phương tiện: p <0,0001, anova="" hai="" chiều).="" để="" xác="" nhận="" thêm="" tác="" dụng="" kích="" thích="">Cistanchetrích xuấtvề độc tính tế bào của tế bào lách, độc tính tế bào củaCistanche-trích xuất- tế bào lách chưa từng được xử lý từ chuột B6, chứa các tế bào T và B chức năng, đã được kiểm tra trong đồng nuôi cấy với các tế bào SW480. Như thể hiện trong Hình 4B, bổ sungCistanchetrích xuất(1 0 0 mg / mL) làm tăng đáng kể sự giải phóng calcein-AM trong môi trường đồng nuôi cấy theo cách phụ thuộc vào tế bào lách: 57,64 cộng với -3. 41 phần trăm với tỷ lệ 12: 1, 52,25 cộng { {11}}. 77 phần trăm với tỷ lệ 6: 1 và 45,72 cộng với -2. 43 phần trăm với tỷ lệ 3: 1, so với 14,36 cộng với -0. 05 phần trăm với tỷ lệ 12: 1 , 20,67 cộng với -2. 03 phần trăm với tỷ lệ 6: 1 và 23,1 cộng với -3. 73 phần trăm với tỷ lệ 3: 1 trong đồng cấy không được kích thích (trích xuất so với phương tiện: p <0,0001, hai="" -đi="" anova).="" những="" kết="" quả="" này="" chỉ="" ra="">Cistanchetrích xuấtkích thích hoạt động ly giải của tế bào lách. Lý do tại sao ít gây độc tế bào hơn khi thêm nhiều tế bào lách hiệu ứng hơn vẫn chưa được biết rõ. Một khả năng là mức độ giải phóng calcein-AM trong hệ thống đồng nuôi cấy này có thể không phản ánh chính xác sự chết của tế bào đích vì calcein-AM có thể được tái hấp thu bởi các tế bào lách hiệu ứng sau một thời gian dài ủ bệnh.

Chiết xuất Cistanche kích hoạt các đại thực bào

Kích hoạt đại thực bào là một trong những phản ứng miễn dịch quan trọng chống lại nhiễm trùng và phát triển khối u (Mantovani và cộng sự, 2002, 2008). Để tiết lộ thêm thông tin chi tiết về cơ chếCistanchetrích xuấtđiều trị giảm tăng sản đường ruột và hàm lượng vi sinh vật, tác dụng củaCistanchetrích xuấtvề sản xuất NO và thực bào của đại thực bào, tế bào RAW264.7, đã được kiểm tra. Như được thể hiện trong Hình 5A, sự biểu hiện protein của NOS II đã được điều chỉnh trong các mẫu cấy sau khi ủ vớiCistanchetrích xuất. Những kết quả này được hỗ trợ thêm bởi sự gia tăng sản xuất NO ởChiết xuất Cistanche kích thíchnuôi cấy (Hình 5B), được chứng minh bằng 3,88 cộng với -0. 13 mM nitrit trong 50 mg / mLCistanchetrích xuấtnuôi cấy tế bào RAW264.7 được kích thích so với 0. 11 cộng với -0. 12 mM nitrit trong nuôi cấy đối chứng không được kích thích (ANOVA một chiều, p<>

Thực bào là một quá trình tế bào nhận chìm các phần tử rắn, chẳng hạn như vi khuẩn. Như thể hiện trong Hình 5C và D, việc bổ sungCistanchechiết xuấtsự thực bào của đại thực bào được kích thích, như được chỉ ra bởi nhiều tế bào thực bào hơn (9,8 cộng với -0. 1 phần trăm) được tìm thấy trongCistanche-trích xuất-các nền văn hóa đại thực bào được kích thích so với các nền văn hóa (5,2 cộng với -0. 4 phần trăm) trong các nền văn hóa được kích thích bởi phương tiện (chiết xuất so với phương tiện: p =0. 0007, t-test, n =3) sau 2 giờ ủ. Những dữ liệu này gợi ý rằngCistanchetrích xuấtcó thể trực tiếp kích hoạt đại thực bào bằng cách điều chỉnh tăng sản xuất NO tại chỗ và kích thích quá trình thực bào của đại thực bào trong ruột chuột.

THẢO LUẬN

Nghiên cứu này lần đầu tiên chứng minh rằng việc uốngCistanchetrích xuấtlàm giảm đáng kể tần suất tăng sản và nhiễm H. hepaticus trong ruột của những con chuột dễ bị ung thư ruột kết. Tác dụng có lợi củaCistanchetrích xuấtđiều trị có liên quan đến sự gia tăng số lượng và độc tính tế bào của các tế bào NK lách và đại thực bào. In vitro bổ sungCistanchetrích xuấtkích thích sản xuất NO và thực bào ở đại thực bào. TGF-b1 thiếu Rag2^-/-chuột đã được chứng minh là phát triển ung thư ruột kết (tăng sản, u tuyến hoặc ung thư biểu mô tuyến) từ 3 đến 6 tháng tuổi, và nó đã được chứng minh rằngviêmcác ổ luôn liên quan đến các tổn thương khối u này (Engle và cộng sự, 1999). Các nghiên cứu sâu hơn đã chứng minh rằng ở những con chuột này, sự phát triển ung thư ruột kết là cần thiết cho sự hiện diện của sự lây nhiễm của hệ vi sinh vật gây bệnh vì ung thư ruột kết được loại bỏ hoàn toàn bởi những con chuột nuôi trong điều kiện không có vi trùng (Engle et al., 2002), và H. hepaticus nhiễm trùng cũng gây ra viêm đại tràng và ung thư biểu mô ruột già ở Rag2-/-chuột (Erdman và cộng sự, 2003). Tương tự, ở người, tình trạng vi sinh vật và khả năng miễn dịch của vật chủ là những yếu tố chính cho sự tiến triển của IBD (Fiocchi, 1998), và ung thư biểu mô dạ dày đã được báo cáo là có liên quan đến nhiễm trùng hoặc viêm mãn tính do H. pylori gây ra (Parsonnet et al., 1991; El-Omar và Malfertheiner, 2001). Những phát hiện từ những nghiên cứu này cho thấy rằng nhiễm trùng đường tiêu hóa có thể đóng một vai trò quan trọng trong sự phát triển của ung thư ruột kết. Do đó, nhắm mục tiêu nhiễm trùng đường tiêu hóa có thể trở thành một chiến lược điều trị để phòng ngừa hoặc điều trị ung thư ruột kết cũng như IBD. Nghiên cứu của chúng tôi lần đầu tiên chứng minh rằng việc uốngCistanchetrích xuấtgiảm tần suất củaviêmtăng sảntrong ruột, và số lượng H. hepaticus trong phân ở chuột thiếu TGF-b1. Tác dụng có lợi củaCistanche trích xuấtcó thể là do nó hoạt hóa các đại thực bào, như được thấy bởi sự gia tăng sản xuất NO và thực bào sau khi điều trị bằngCistanchetrích xuất(Hình 5), có thể hạn chế hệ vi sinh gây bệnh đường ruột bao gồm cả vi khuẩn helicobacter (Mantovani và cộng sự, 2002, 2008). Kết quả là, tổn thương củaviêmtăng sảnđã giảm.

Một loạt các hợp chất có hoạt tính sinh học đã được xác định trong các chất chiết xuất của C. sa mạc phủ bao gồm các glycosid phenylethanoid và polysaccharid (Jiang và Tu, 2009). Các glycoside phenylethanoid có tính bảo vệ tế bào, được chỉ ra bởi thực tế là các hợp chất này ngăn chặn quá trình chết tế bào trong tế bào gan được nuôi cấy và tế bào thần kinh hạt tiểu não (Xiong và cộng sự, 1998; Pu và cộng sự, 2003). Trong khi polysaccharid kích thích sự tăng sinh tế bào lympho T và B do mitogen gây ra (Wu và Tu, 2005; Wu et al., 2005; Dong et al., 2007). Nó đã được ghi nhận rõ ràng rằng polysaccharides thảo dược điều chỉnh phản ứng miễn dịch (Jiang và cộng sự, 2010).Cistanchetrích xuấtchứa 2-3 phần trăm phenylethanoids và 65–70 phần trăm polysaccharide, cho thấy tác dụng điều hòa miễn dịch củaCistanchetrích xuấtđiều trị có thể là do hoạt động điều hòa miễn dịch của polysaccharides, phần lớn các chất hoạt tính sinh học trong chiết xuất Cistanche. Tuy nhiên, các tế bào miễn dịch đích của nó (ví dụ như đại thực bào hoặc tế bào NK, hoặc cả hai) và các con đường phân tử cần được nghiên cứu thêm. Ngoài ra, một nghiên cứu gần đây chứng minh rằng việc sử dụng phenylethanoid acetonide thảo dược, một trong những phenylethanoids hoạt tính sinh học trong chiết xuất của C. sa mạc (Xiong và cộng sự, 1996; Jiang và Tu, 2009), có tác dụng hữu ích trong việc giảm dextran viêm đại tràng do sulfat-natri gây ra ở chuột (Hausmann và cộng sự, 2007), bằng chứng rằng phenylethanoids (2-3%) trongCistanchetrích xuấtcó thể đóng góp ít nhất một phần vào hiệu quả của nó trong việc giảmviêmtăng sản, điều này cũng cần được đánh giá trong tương lai.
Kết luận, ung thư đại trực tràng là một trong những bệnh ung thư phổ biến nhất trên toàn thế giới và có thể phòng ngừa được trong phần lớn các trường hợp. Việc sử dụng các chất chiết xuất từ ​​thảo dược không độc hại có thể mang lại một chiến lược hiệu quả để ngăn ngừa sự phát triển của ung thư đại trực tràng và cũng có thể được áp dụng như một chất bổ trợ hóa trị, có thể có lợi cho việc tăng cường hiệu quả chống ung thư hóa trị liệu và / hoặc giảm hóa trị liệu. phản ứng phụ. Các dữ liệu được trình bày trong nghiên cứu này đã chứng minh rõ ràng rằng việc điều trị bằng chiết xuất từ ​​nước của C. sa mạc phủ làm giảm sự tăng sản và nhiễm trùng H. hepaticus trong ruột của những con chuột dễ bị ung thư ruột kết. Nhiễm trùng Helicobacter hoặc ruộtviêmtăng sảnlà một yếu tố nguy cơ phát triển ung thư đại trực tràng. Nghiên cứu hiện tại của chúng tôi chỉ ra rằng việc sử dụng loại thảo mộc này có thể có khả năng phòng ngừa và điều trị ung thư đại trực tràng, đặc biệt là đối với những người bị IBD.

Nhìn nhận

YM được hỗ trợ bởi học bổng nghiên cứu sinh từ Hội đồng Học bổng Trung Quốc.

Xung đột lợi ích

Các tác giá không có xung đột lợ i ích.

Cistanchetrích xuấtcó thể giảmGây viêmtăng sản

Từ: 'GiảmGây viêmTăng sảntrong Ruột ở Chuột dễ bị ung thư ruột kết bởi chiết xuất từ ​​nước củaCistancheDesticola 'của Yamin Jia, 1,2 và cộng sự

--- Bản quyền © 2011 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Res. 26: 812–819 (2012) DOI: 10.1002 / ptr.3637

NGƯỜI GIỚI THIỆU

Burgdorf SK, Nielsen HJ, Rosenberg J. 2009. Liệu pháp miễn dịch trong ung thư đại trực tràng. Scand J Gastroenterol 44: 261–268.
Cai RL, Yang MH, Shi Y, Chen J, Li YC, Qi Y. 2010. Hoạt động chống mệt mỏi của chiết xuất giàu phenylethanoid từCistanchesa mạc. Phytother Res 24: 313–315.
Chao A, Thun MJ, Connell CJ, et al. 2005. Ăn thịt và nguy cơ ung thư đại trực tràng. JAMA 293: 172–182.
Cunningham D, Atkin W, Lenz HJ và cộng sự. 2010. Ung thư đại trực tràng. Lancet 375: 1030–1047.
Dong Q, Yao J, Fang JN, Ding K. 2007. Đặc điểm cấu trúc và hoạt tính miễn dịch của hai polysaccharid chiết xuất được trong nước lạnh từCistanchesa mạc hoá YC. Ma. Carbohydr Res 342: 1343–1349.
Du C, Quan Q, Diao H, Yin Z, Jevnikar AM. 2006. Nitric oxide gây ra quá trình apoptosis trong tế bào biểu mô ống thận thông qua hoạt hóa caspase -8. Am J Physiol Renal Physiol 290: F1044–1054.
Dubois M, Gilles KAJK, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. 1956. Phương pháp so màu để xác định đường của các chất liên quan. Chem hậu môn 28: 350–356.

Eaden JA, Abrams KR, Mayberry JF. 2001. Nguy cơ ung thư đại trực tràng trong bệnh viêm loét đại tràng: một phân tích tổng hợp. Ruột 48: 526–535.
El-Omar EM, Malfertheiner P. 2001. Helicobacter pylori và ung thư dạ dày. Curr Opin Gastroenterol 17 (Phần bổ sung 1): S 24- S27.
Engle SJ, Hoying JB, Boivin GP, ​​Ormsby I, Gartside PS, Doetschman T. 1999. Yếu tố tăng trưởng biến đổi beta1 ngăn chặn ung thư ruột kết không nguyên bào ở giai đoạn đầu của hình thành khối u. Ung thư Res 59: 3379–3386.
Engle SJ, Ormsby I, Pawlowski S, et al. 2002. Loại bỏ ung thư ruột kết ở những con chuột bị thiếu yếu tố tăng trưởng biến đổi không có mầm bệnh-beta 1-. Ung thư Res 62: 6362–6366.
Erdman SE, Poutahidis T, Tomczak M, et al. 2003. CD4 cộng với CD25 cộng với tế bào lympho T điều hòa ức chế ung thư ruột kết do vi sinh vật gây ra ở chuột bị thiếu Rag 2-. Am J Pathol 162: 691–702.
Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM. 2010. Ước tính gánh nặng ung thư trên toàn thế giới năm 2008: GLOBOCAN 2008. Int J Cancer 127: 2893–2917.
Fiocchi C. 1998.Gây viêmbệnh ruột: căn nguyên và bệnh sinh. Khoa tiêu hóa 115: 182–205.
Hausmann M, Obermeier F, Paper DH, et al. 2007. Điều trị in vivo với phenylethanoid acteoside thảo dược cải thiện tình trạng viêm ruột trong bệnh viêm đại tràng do dextran sulfat natri gây ra. Clin Exp Immunol 148: 373–381.
Jiang MH, Zhu L, Jiang JG. 2010. Hoạt động điều hòa miễn dịch của polysaccharid từ thuốc thảo dược Trung Quốc. Mục tiêu của Chuyên gia Opin Ther 14: 1367–1402.
Jiang Y, Tu PF. 2009. Phân tích các thành phần hóa học trongCistancheloài. J Sắc ký đồ A 1216: 1970–1979.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. 2002. Chống cảm thụ và chốngviêmhoạt động doCistanchesa mạc hoá ở loài gặm nhấm. J Ethnopharmacol 83: 177–182.
Lukas M. 2010.Gây viêmbệnh ruột như một yếu tố nguy cơ của ung thư đại trực tràng. Chương 28: 619–624.
Mantovani A, Allavena P, Sica A, Balkwill F. 2008. Viêm liên quan đến ung thư. Bản chất 454: 436–444.
Mantovani A, Sozzani S, Locati M, Allavena P, Sica A. 2002. Phân cực đại thực bào: đại thực bào liên kết với khối u làm mô hình cho thực bào đơn nhân M2 phân cực. Xu hướng Immunol 23: 549–555.
Neri S, Mariani E, Meneghetti A, Cattini L, Facchini A. 2001. Thử nghiệm độc tính tế bào Calcein-acetoxymethyl: tiêu chuẩn hóa một phương pháp cho phép phân tích bổ sung trên các tế bào hiệu ứng thu hồi và chất nổi. Clin Diagn Lab Immunol 8: 1131–1135.
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Wang YC. 2005. Cải thiện sản xuất glycoside phenylethanoid bằng cáchCistanchetế bào sa mạc hoá được nuôi cấy trong lò phản ứng sinh học không khí vòng trong với bộ nâng rây. Enzyme Microb Technol 36: 982–988.
Park Y, Hunter DJ, Spiegelman D, et al. 2005. Lượng chất xơ trong chế độ ăn uống và nguy cơ ung thư đại trực tràng: một phân tích tổng hợp các nghiên cứu thuần tập tiền cứu. JAMA 294: 2849–2857.
Parsonnet J, Friedman GD, Vandersteen DP, et al. 1991. Nhiễm Helicobacter pylori và nguy cơ ung thư biểu mô dạ dày. N Engl J Med 325: 1127–1131.
Pu X, Song Z, Li Y, Tu P, Li H. 2003. Acteoside fromCistanchesalsa ức chế quá trình apoptosis bởi ion 1- methyl -4- phenylpyridinium trong tế bào thần kinh hạt tiểu não. Planta Med 69: 65–66.
Shames B, Fox JG, Dewhirst F, Yan L, Shen Z, Taylor NS. 1995. Xác định nhiễm vi khuẩn Helicobacter hepaticus lan rộng trong phân ở các đàn chuột thương mại bằng phương pháp nuôi cấy và xét nghiệm PCR. J Clin Microbiol 33: 2968–2972.
Chiến lược LL, Syngal S. 2005. Các hội chứng ung thư đại trực tràng di truyền. Kiểm soát Nguyên nhân Ung thư 16: 201–213.
Von Roon AC, Reese G, Teare J, Constantinides V, Darzi AW, Tekkis PP. 2007. Nguy cơ ung thư ở bệnh nhân mắc bệnh Crohn. Đĩa đệm trực tràng 50: 839–855.
Wu TF, Hsu CY, Huang HS, Chou SP, Wu H. 2007. Phân tích proteomic về tác dụng của pycnogenol trong đại thực bào RAW 264.7 cho thấy cảm ứng biểu hiện cathepsin D và tăng cường khả năng thực bào. J Agric Food Chem 55: 9784–9791.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF. 2005. Một arabinogalactan được phân lập từ thân củaCistancheDesticola gây ra sự gia tăng của các tế bào lympho được nuôi cấy. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Wu XM, Tu PF. 2005. Isolation and characterization of alpha-(1-->6) -glucans từCistanchesa mạc. J Asian Nat Prod Res 7: 823–828.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S. 1998. Hoạt động bảo vệ gan của phenylethanoids từCistanchesa mạc. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T. 1996. Tác dụng chống oxy hóa của phenylethanoids từCistanchesa mạc. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.