Cách tách Acteoside khỏi Cistanche Tubulosa

Helin Xu a, Xueqin Li a, ⇑, Yanyan Hao a, Xiaobin Zhao a, Yun Cheng a, Jinli Zhang a, b

một Trường Hóa học và Kỹ thuật Hóa học / Phòng thí nghiệm Trọng điểm về Xử lý Xanh của Kỹ thuật Hóa học ở Tân Cương Bingtuan, Đại học Shihezi, Shihezi 832003, Trung Quốc

b Phòng thí nghiệm trọng điểm về Công nghệ hóa học xanh của Bộ Giáo dục, Trường Kỹ thuật và Công nghệ Hóa học, Đại học Thiên Tân, Thiên Tân 300072, Trung Quốc

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

trừu tượng

Để đạt được sự tách biệt đơn giản và hiệu quảacteoside(ACT), chiết ACT từ chất chiết thô củaCistanchetubulosaqua chất lỏng ion (IL) dựa trên hệ thống hai pha nước (ATPS) được nghiên cứu. IL – ATPS bao gồm [C4mim] BF4 và (NH4) 2SO4 thể hiện hiệu suất chiết xuất tuyệt vời, chiết xuất gần như tất cả ACT(Acteoside)trong pha giàu [C4mim] BF 4-. Độ phân cực cao của [C4mim] BF4 có các thụ thể đa liên kết hydro có lợi cho việc chiết xuất ACT(Acteoside)trong pha giàu IL, và (NH4) 2SO4 không chỉ cung cấp vi môi trường có tính axit yếu để tăng tính ổn định của ACT trong pha giàu IL mà còn làm giảm khả năng hòa tan của ACT(Acteoside)trong giai đoạn giàu muối thông qua hiệu ứng muối ra. Ngoài ra, kết quả mô phỏng phân tử cho thấy rằng nó được chiết xuất trong pha giàu [C4mim] BF 4- thông qua đa tương tác, bao gồm liên kết hydro, lực van der Waals và xếp chồng p-p. Nghiên cứu này hy vọng sẽ cung cấp một tài liệu tham khảo có giá trị cho việc tách các thành phần hoạt tính sinh học từ các sản phẩm tự nhiên.

Từ khóa:Chất lỏng ion, Muối, Hệ thống hai pha nước, Chiết xuất,Acteoside

ActeosideTrongCistanche tubulosa

Giới thiệu

Cistanchetubulosa(Orobanchaceae) là một loài thực vật ký sinh mọc trên rễ của Tamarix và Salvadora và phân bố chủ yếu ở các vùng đất khô cằn và sa mạc phía Tây Bắc Trung Quốc [1–3]. Thân cây của Cistanche tubulosa, được gọi là 'nhân sâm của sa mạc', được chính thức ghi trong Dược điển Trung Quốc (ấn bản năm 2015) [4,5], và các thành phần chính của chúng đã được báo cáo là phenylethanoid glycosid (PhG), polysaccharid, và iridoids.

Các hợp chất PhG, một nhóm các thành phần hoạt tính sinh học hòa tan trong nước trongCistanchetubulosa, có cấu trúc chung bao gồm các gốc axit cinnamic và hydroxyphenylethyl được gắn với nhóm b-glucopyranose thông qua các liên kết este và glycosidic, tương ứng [6].Acteoside(ACT) là thành phần chính của các hợp chất PhG và là thành phần chỉ số để xác định hàm lượng củaCistanchetubulosa[7]. Các nghiên cứu hóa học và dược lý hiện đại đã chứng minh rằng ACT(Acteoside)thể hiện nhiều hoạt động dược lý, chẳng hạn như chống oxy hóa, chống mệt mỏi, bảo vệ thần kinh và bảo vệ gan [8–10]. Vì vậy, ACT có triển vọng ứng dụng rộng rãi trong các lĩnh vực y tế, chăm sóc sức khỏe, thực phẩm,… Tuy nhiên, việc tách và thanh lọc ACT(Acteoside)khó do thành phần phức tạp của các hợp chất PhG, có cấu trúc, độ phân cực và độ hòa tan tương tự nhau. Hiện tại, các phương pháp chính để tách và tinh chế ACT bao gồm in dấu phân tử, tách nhựa hấp phụ macroporous, sắc ký ngược dòng tốc độ cao và tách màng. Ví dụ, Liu và cộng sự đã sử dụng nhựa macroporous để tách PhG khỏi Cistanche Desticola, và Xu và cộng sự. đã sử dụng chất hấp phụ cacbon trung tính để hấp phụ PhG, và khả năng hấp phụ đạt 358,09 mg / g. Tuy nhiên, các phương pháp này có nhiều nhược điểm, chẳng hạn như tốn thời gian, quy trình phức tạp và độ chọn lọc thấp. Vì vậy, việc phát triển một phương pháp đơn giản và hiệu quả để tách chọn lọc các thành phần hoạt tính sinh học từ các sản phẩm tự nhiên là rất mong muốn.

phân đoạn flavonoid tinh khiết vi mô

Trong những năm gần đây, hệ thống hai pha nước (ATPS), có thể được thực hiện trong môi trường nhẹ và có thể mở rộng dễ dàng [11–15], đã nổi lên như một kỹ thuật chiết lỏng lỏng mới để tách các thành phần hoạt tính sinh học [16 –19]. Theo thành phần của nó, ATPS có thể được chia thành ba loại, tức là, hai hoặc nhiều polyme, một polyme và một muối, hoặc hai chất hoạt động bề mặt [20–23]. Tuy nhiên, hầu hết tất cả các polyme tạo pha đều có độ nhớt cao và dải phân cực hẹp không có lợi cho quá trình chuyển khối và hạn chế tính chọn lọc. Trong bối cảnh này, chất lỏng ion (ILs) được đặc trưng bởi độ bay hơi không đáng kể, tính ổn định hóa học, khả năng hòa tan toàn diện đối với các hợp chất hữu cơ và hầu hết các IL đều thân thiện với môi trường [24–28]. Các tính năng này làm cho IL-APTSs có hiệu suất tốt hơn các ATPS khác để phân tách các thành phần hoạt tính sinh học. So với ATPS truyền thống, IL-ATPS tập hợp những ưu điểm của cả IL và ATPS, chẳng hạn như tách pha nhanh, hiệu suất chiết xuất cao và khả năng tương thích sinh học với môi trường [12,29,30]. Hiện tại, IL-ATPS chưa được áp dụng để tách và tinh chế ACT(Acteoside), nhưng người ta đã xác định rằng IL-ATPS có thể được ứng dụng trong chiết xuất và phân tách polysaccharid [31], vanilin [32], polysaccharid lô hội [33], saponin nhân sâm [11], v.v. Ví dụ, He et al. chiết xuất saponin nhân sâm có hoạt tính sinh học bằng IL-ATPS, được chứng minh là một phương pháp đơn giản và hiệu quả để chiết xuất ginsenosit với hiệu suất chiết xuất cao là 99,5% và hệ số phân vùng là 651. Gao et al. chiết xuất astaxanthin trong pha giàu Br [P4448] sử dụng IL ATPS bao gồm [P4448] Br và K3PO4 với hiệu suất chiết lên đến 93,08 phần trăm [34]. Những kết quả này cho thấy IL-ATPS có triển vọng ứng dụng tiềm năng để tách các thành phần hoạt tính sinh học từ các sản phẩm tự nhiên và nó có thể đạt được sự phân tách có chọn lọc cao đối với ACT từCistanchetubulosa.

Trong nghiên cứu này, một kỹ thuật đơn giản, hiệu quả và xanh dựa trên chiết xuất ATPS để tách ACT có chọn lọc cao(Acteoside)từ chiết xuất thô củaCistanchetubulosađược khám phá. Các IL khác nhau ([C4mim] [CF3SO3], [C4mim] Cl, [C4mim] BF4, [C2mim] Br, [C4mim] Br, [C6mim] Br và [C8mim] Br) và các loại muối (NaCl, Na2SO4, Na3C6H5O7 , (NH4) 2SO4, và NaH2PO4) đã được nghiên cứu để xác định IL-ATPS tối ưu để chiết xuất ACT(Acteoside). Hơn nữa, các điều kiện chiết xuất đã được điều chỉnh để đạt được sự phân tách ACT có chọn lọc cao trong pha giàu IL. Ảnh hưởng của các điều kiện chiết khác nhau (ví dụ, nhiệt độ chiết, nồng độ IL, nồng độ dung dịch mẫu, nồng độ muối, pH và thời gian cân bằng chiết) đến hiệu suất chiết ACT được thảo luận chi tiết. Hơn nữa, các mô phỏng phân tử được tiến hành trên ACT, [C4mim] BF4 và H2O để tiết lộ cơ chế chiết xuất.

cistanche tubulosa vs sa mạc

2. Thực nghiệm

2.1. Vật liệu

Thân cây củaCistanchetubulosađược cung cấp bởi Cong Rongtang Biological Technology Co., Ltd. (Tân Cương, Trung Quốc). Các tiêu chuẩn của ACT(Acteoside)(độ tinh khiết - 98 phần trăm, Hình 1a) và echinacoside (độ tinh khiết - 98 phần trăm, Hình 1b) được cung cấp bởi Sunny Biotech Co., Ltd. (Thượng Hải, Trung Quốc). 1- Butyl -3- methylimidazolium trifluoro methanesulfonate ([C4mim] [CF3SO3]), 1- butyl -3- methylimidazolium clorua ([C4mim] Cl), 1- butyl { {13}} methylimidazolium tetrafluoroborate ([C4mim] BF4), 1- ethyl -3- methylimidazolium bromide ([C2mim] Br), 1- butyl -3- methylimidazolium bromide ([C4mim] Br), 1- hexyl -3- methylimidazolium bromide ([C6mim] Br) và 1- octyl -3- methylimidazolium bromide ([C8mim] Br) được cung cấp bởi Chengjie Chemical Co. , Ltd. (Thượng Hải, Trung Quốc). Phân tích amoni sunfat ((NH4) 2SO4), natri dihydro photphat (NaH2PO4), natri sunfat (Na2SO4), natri photphat đisunfat (Na2HPO4), kali hydro photphat (K2HPO4), natri clorua (NaCl) và trinatri citrat khan (Na3C6H5O7 ) được cung cấp bởi Shengao Chemical Reagent Co., Ltd. (Thiên Tân, Trung Quốc). Metanol, axit axetic và axetonitril cấp sắc ký được cung cấp bởi Aladdin Chemical Co., Ltd. (Thượng Hải, Trung Quốc). Ethanol loại phân tích được cung cấp bởi Fuyu Fine Chemical Co., Ltd. (Thiên Tân, Trung Quốc).

Hình 1. Cấu trúc hóa học của (a)acteoside(ACT), và (b) enchinacoside.

2.2. Chuẩn bị chiết xuất thô của Cistanche tubulosa

Một mẫu bột củaCistanchetubulosa(2 0 mg) được ngâm trong 5 0 0 mL dung dịch etanol 50% với siêu âm trong 2 giờ. Cặn trong dung dịch được tách bằng cách ly tâm ở tốc độ 5000 vòng / phút trong 10 phút. Phần nổi phía trên sau khi ly tâm được lọc tuần tự bằng bộ lọc 0,45 và 0,22 lm. Sau đó, dịch lọc được cô đặc và làm khô ở 323 K trong tủ sấy chân không. Cuối cùng, sản phẩm khô được hòa tan trong nước và chiết xuất màu nâu đỏ củaCistanchetubulosađã thu được.

2.3. Trích xuất ACT(Acteoside)bởi IL-ATPS

Một giản đồ để khai thác hiệu quả ACT(Acteoside)bởi IL-ATPS được thể hiện trong Hình 2. Theo đó, 3,75 mL [C4mim] BF4, 3,5 mL nước cất, 11,11% trọng lượng muối và 1. 0 mL dung dịch mẫu có cùng nồng độ ACT và echinacoside là cho vào ống ly tâm 50 ml. Một IL-ATPS khác có cùng thành phần ngoại trừ dung dịch mẫu được chuẩn bị như một hệ thống cản quang. Muối IL-ATPS được hòa tan hoàn toàn bằng siêu âm, và sự hình thành hai pha trong được tăng tốc bằng cách ly tâm ở tốc độ 8000 vòng / phút trong 8 phút. Pha dưới cùng của IL-ATPS là pha giàu IL và pha trên cùng là pha giàu muối. Các thành phần của cả hai pha được phân tích định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).

Nồng độ ACT(Acteoside)và echinacoside trong hai pha được xác định bằng HPLC, và hiệu suất chiết được đánh giá bằng hiệu suất chiết (E, phần trăm), hệ số phân vùng (K), và độ chọn lọc (S). Phương trình sau. (1) phương trình được sử dụng để tính K

K=Cb / Ct (1)

trong đó Cb và Ct (mg / mL) là ACT(Acteoside)nồng độ tương ứng ở pha đáy và pha trên. Phương trình. (2) và (3) được sử dụng để tính E và S, tương ứng.

E=Cb * Vb / Mv * 100 phần trăm (2)

S=K / Kt=Cb * Cet / Ct * Ceb (3)

trong đó mv (mg) là trọng lượng của ACT(Acteoside)trong dung dịch mẫu, Vb (mL) là thể tích ở pha dưới cùng, tương ứng là nồng độ Cet và Ceb echinacoside trong pha trên và dưới (mg / mL).

Hình 2. Sơ đồ để khai thác hiệu quả ACT bằng IL-ATPS

2.4. Thử nghiệm chọn lọc

HÀNH ĐỘNG(Acteoside)và echinacoside được coi là đối thủ cạnh tranh để đánh giá tính chọn lọc của IL-ATPS đối với ACT(Acteoside)do cấu trúc phân tử và tính chất hóa học tương tự của ACT(Acteoside)và echinacoside. 3,75 mL [C4mim] BF4, 3,5 mL nước cất, 11,11% trọng lượng muối và 1. 0 ml dung dịch mẫu có cùng nồng độ ACT và echinacoside được thêm vào ống ly tâm 50 ml. Muối IL-ATPS được hòa tan hoàn toàn bằng siêu âm và sự hình thành hai pha trong được tăng tốc bằng cách ly tâm ở 8000 vòng / phút trong 8 phút. Pha dưới cùng của IL-ATPS là pha giàu IL và pha trên cùng là pha giàu muối. Các thành phần của cả hai pha được phân tích định lượng bằng HPLC.

2.5. Phân tích HPLC

Nồng độ của dung dịch mẫu trong hai pha được phân tích bởi HPLC (2695, Waters Co., USA) với cột C18 ở bước sóng 33 0 nm bằng máy dò tia cực tím. Phương pháp rửa giải gradient được áp dụng để tách và phát hiện các mẫu ở nhiệt độ cột 303 K. Các pha động là (a) axetonitril và (b) axit axetic / nước (1:44, v / v), và tốc độ dòng chảy là đặt thành 1 mL / phút. Pha động và mẫu được lọc qua bộ lọc 0,22 lm trước khi tiêm. Tất cả các thí nghiệm được thực hiện ba lần và thanh sai số được đưa ra trong tất cả các hình.

2.6. Đặc tính hóa

ACT, [C4mim] BF4 và pha giàu [C4mim] BF 4- được phân tích bằng quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR) sử dụng Bruker Vertex 70 (Bruker Optics, Ltd., Germany). Phổ FTIR củaACT, [C4mim] BF4 và pha giàu [C4mim] BF 4- thu được từ 4000 đến 500 cm 1 với độ phân giải 2 cm 1 sử dụng kali bromua làm đối chứng.

2.7. Mô phỏng phân tử

Để hiểu rõ hơn về cơ chế chiết xuất IL-ATPS cũng như các phương thức tương tác giữa ACT và [C4mim] BF4 trong IL ATPS, các tính toán nguyên tắc đầu tiên được thực hiện dựa trên lý thuyết hàm mật độ (DFT). Tối ưu hóa và tính toán năng lượng đơn điểm được thực hiện bằng cách sử dụng hàm M06–2X [35,36] và tập cơ bản 6–31 cộng với G (d) được sử dụng để mô tả các nguyên tử C, H, F, B, N và O. [37]. Để mô phỏng chính xác các tương tác yếu, phương pháp DFT-D3 được sử dụng để mô tả đầy đủ các tương tác phân tán [38]. Theo các báo cáo trước đây [39], các mô phỏng phân tử được thực hiện trên ACT, [C4mim] BF4 và H2O. Đầu tiên, các phù hợp riêng lẻ của các mô hình ACT và [C4mim] BF4 được tối ưu hóa, và sau đó cấu trúc liên kết của [C4mim] BF4 và ACT được tối ưu hóa dựa trên cấu hình riêng lẻ tối ưu của chúng.

Năng lượng liên kết (DE) của ACT(Acteoside)và [C4mim] BF4 và năng lượng liên kết (DE) của ACT và H2O được đánh giá bằng cách sử dụng Công thức. (4) và (5), tương ứng.

△E = Ecom- (EHÀNH ĐỘNGcộng với EIL)
△E = Ecom - (EH2O cộng với EHÀNH ĐỘNG)

trong đó EH2O, EACT, EIL và Ecom là năng lượng tiềm năng của ACT(Acteoside), [C4mim] BF4, H2O, và các phức chất của chúng, tương ứng. Tất cả các phép tính được thực hiện bằng chương trình Gaussian16 [40], và tất cả các phân tử được vẽ bằng phần mềm VMD v.1.9.3. Trong khi đó, một mô hình gradient độc lập (IGM) đã được thiết lập để xác định và định lượng sự suy giảm gradient mật độ điện tử ròng trong phần mềm Multiwfn v.3.5.

ActeosideTrongCistanche tubulosa

3. Kết quả và thảo luận

3.1. Tối ưu hóa IL-ATPS

3.1.1. Sàng lọc ILs

Để đánh giá ảnh hưởng của loại IL lên hiệu suất chiết xuất trong IL-ATPS, bảy loại IL có các cation và anion khác nhau đã được chọn làm thành phần tạo pha để chiết ACT(Acteoside). Như thể hiện trong Hình 3 (a), sự tương tác giữa anion ACT và IL được khảo sát bằng cách kiểm tra sự kết hợp của [C4mim] cộng với dạng cation với các anion khác nhau bao gồm Br-, Cl-, [CF3SO3] -, và BF {{7 }}. Kết quả cho thấy rằng các anion IL đã tăng cường ACT(Acteoside)hiệu suất chiết theo thứ tự BF 4-> [CF3SO3] -> Br-> Cl-. Anion IL tối ưu là BF4, có thể được coi là IL tương ứng có thể cung cấp nhiều thụ thể liên kết hydro hơn cho các nhóm hydroxyl của ACT(Acteoside)hơn các anion IL khác [21]. Điều này cho thấy rằng liên kết hydro là tương tác chính giữa các anion IL và ACT.

Tiếp theo, sự kết hợp của Br với các cation khác nhau bao gồm [C2mim] plus, [C4mim] plus, [C6mim] plus và [C8mim] plus được nghiên cứu để khám phá cấu hình steric tối ưu giữa ACT(Acteoside)và ILscation. Kết quả cho thấy ACT(Acteoside)hiệu suất chiết xuất tăng lên khi chiều dài chuỗi alkyl giảm từ [C8mim] cộng đến [C2mim] cộng. Vì [C2mim] plus không tạo thành ATPS tương ứng với BF4, nên [C4mim] plus được chọn làm cation IL tối ưu

Điều này có thể là do độ phân cực cao của chuỗi alkyl ngắn của [C4mim] cộng, có lợi cho việc hòa tan ACT(Acteoside)và trích xuất nó trong pha giàu IL. Ngoài ra, cation imidazole của [C4mim] plus có hệ thống p thơm, có thể hình thành tương tác p-p với vòng benzen của ACT để đạt được cấu hình âm thanh nổi tối ưu. Do đó, [C4mim] BF4 được chọn là chất tối ưu cho các thí nghiệm sau.

3.1.2. Sàng lọc muối

Để đánh giá ảnh hưởng của loại muối đối với ACT(Acteoside)hiệu suất chiết, năm loại muối (NaH2PO4, (NH4) 2SO4, Na2SO4, NaCl và Na3C6H5O7) được chọn để tạo IL-ATPSs với [C4mim] BF4, và kết quả được thể hiện trong Hình 3 (b). Muối có thể được chia thành axit (NaH2PO4 và (NH4) 2SO4), trung tính (Na2SO4 và NaCl), và muối bazơ (Na3C6H5O7). Có thể thấy từ Hình 3 (b) cho thấy (NH4) 2SO4 tạo ra IL-ATPS với hiệu suất chiết ACT tuyệt vời. Kết quả chỉ ra rằng sự khác biệt về hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc có liên quan đến độ ổn định của ACT(Acteoside)trong các môi trường chiết xuất khác nhau.

Hình 3. Sàng lọc các ATPS. (a) Các loại IL, và (b) các loại muối

Các glycoside của phenol có tính axit ACT bền trong hệ thống axit yếu. Vì (NH4) 2SO4 là một muối có tính axit nên nó có thể cung cấp một vi môi trường axit yếu cho IL-ATPS. Điều này có lợi cho việc tăng hiệu quả chiết xuất và duy trì sự ổn định của ACT(Acteoside)trong giai đoạn giàu IL. Ngoài ra, khả năng tạo muối của các loại muối khác nhau của (NH4) 2SO4 mạnh hơn của NaH2PO4 [24,41]. Muối (NH4) 2SO4 cạnh tranh với ACT(Acteoside)đối với các phân tử H2O trong pha giàu muối, do đó làm giảm độ hòa tan của ACT trong pha giàu muối, và ACT có thể được chiết một cách hiệu quả trong pha giàu IL. Như vậy, (NH4) 2SO4 được chọn là muối tối ưu trong các thí nghiệm sau.

3.2. Tối ưu hóa các điều kiện chiết xuất trong IL – ATPS

3.2.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ chiết

Theo các nghiên cứu trước đây [42], nhiệt độ chiết xuất có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu suất chiết xuất đối với các cấu tử có hoạt tính sinh học trong IL-ATPS, nhiệt độ thấp có lợi hơn cho sự hình thành IL-ATPS. Hình 4 (a) trình bày ảnh hưởng của [C4mim] BF 4- (NH4) 2SO4 dưới dạng IL-ATPS với nhiệt độ chiết trong khoảng 278–318 K đối với hiệu suất chiết ACT(Acteoside). Hình 4 (a) cho thấy hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc giảm khi tăng nhiệt độ chiết, cho thấy rằng điều kiện nhiệt độ cao không thích hợp để chiết ACT trong IL-ATPS.

Nguyên nhân chủ yếu được cho là do tác dụng tạo muối bị suy yếu, và nó dẫn đến việc nước ở pha giàu IL được chuyển sang pha giàu muối IL-ATPS ở nhiệt độ chiết cao [42]. Ngoài ra, nghiên cứu thí nghiệm cho thấy nhiệt độ chiết cao không có lợi cho sự tồn tại ổn định của ACT(Acteoside). Do đó nhiệt độ chiết tối ưu được thiết lập là 278 K

3.2.2. Ảnh hưởng của nồng độ [C4mim] BF4

Hình 4 (b) cho thấy ảnh hưởng của nồng độ [C4mim] BF4 từ 20 đến 60 phần trăm trọng lượng đối với hiệu suất chiết xuất đối với ACT(Acteoside)trong IL-ATPS. Như thể hiện trong Hình 4 (b), hiệu suất chiết ACT tăng lên rõ ràng khi nồng độ [C4mim] BF4 tăng từ 20 đến 50 phần trăm trọng lượng. Tuy nhiên, hiệu suất chiết xuất giảm nhẹ khi tăng nồng độ [C4mim] BF4 từ 50 đến 60 phần trăm trọng lượng. Do đó, nồng độ [C4mim] BF4 cao có lợi cho việc chiết ACT trong pha giàu [C4mim] BF 4-, nhưng nồng độ [C4mim] BF4 quá cao trên 50% trọng lượng dẫn đến giảm hiệu suất chiết ACT.

Điều này rất có thể là do sự gia tăng độ hòa tan của ACT trong pha giàu [C4mim] BF 4- ở nồng độ [C4mim] BF4 cao do ái lực cao giữa ACT và [C4mim] BF4. Do đó, ACT dễ dàng được chiết xuất trong pha giàu [C4mim] BF 4- bằng cách tăng nồng độ [C4mim] BF4. Tuy nhiên, trên nồng độ BF4 [C4mim] là 50 phần trăm trọng lượng, độ nhớt của IL-ATPS tăng lên, dẫn đến sự chuyển khối kém để chiết xuất. Do đó, nồng độ BF4 [C4mim] tối ưu để chiết xuất ACT là 50 phần trăm trọng lượng.

3.2.3. Ảnh hưởng của nồng độ dung dịch mẫu

Nồng độ dung dịch mẫu là một điều kiện quan trọng đối với ACT(Acteoside)khai thác. Hình 4 (c) cho thấy ảnh hưởng của nồng độ dung dịch mẫu đến hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc, có thể phản ánh khả năng di chuyển của ACT giữa pha trên và pha dưới. Hình 4 (c) cho thấy hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc của ACT(Acteoside)tăng khi tăng nồng độ dung dịch mẫu từ {{0}}. 5 đến 2,5 mg / mL. Tuy nhiên, hiệu suất chiết ACT giảm nhẹ khi nồng độ dung dịch mẫu tăng thêm từ 2,5 đến 3,0 mg / mL. Nồng độ dung dịch mẫu cao thúc đẩy khả năng hòa tan của ACT(Acteoside)trong pha giàu [C4mim] BF 4- do ái lực mạnh giữa ACT và [C4mim] BF4.

Việc giảm hiệu suất chiết xuất có thể là do các lý do sau: Một mặt, sự gia tăng quá mức nồng độ dung dịch mẫu đã không cải thiện hiệu suất chiết của IL-ATPS khi pha giàu [C4mim] BF 4- đã có bão hòa trong ACT. Mặt khác, sự gia tăng nồng độ dung dịch mẫu gây ra sự tăng cường liên kết hydro nội phân tử và sự kết hợp của ACT(Acteoside)phân tử, không có lợi cho sự chuyển khối. Do đó, nồng độ dung dịch mẫu tối ưu được xác định là 2,5 mg / mL.

3.2.4. Ảnh hưởng của nồng độ (NH4) 2SO4

Ảnh hưởng của các nồng độ (NH4) 2SO4 khác nhau đến hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc được thể hiện trong Hình 4 (d). Kết quả thí nghiệm cho thấy ba thông số đều tăng khi nồng độ (NH4) 2SO4 tăng từ 2,22 đến 11,11 phần trăm trọng lượng. Tuy nhiên, hiệu suất chiết ACT giảm khi nồng độ dung dịch mẫu tăng hơn nữa từ 11,11 đến 16,66 phần trăm trọng lượng.

Điều này có thể được cho là do hiệu ứng muối ra, đây là một tính năng chính để trích xuất ACT(Acteoside)in the [C4mim]BF4-rich phase. The increase in (NH4)2SO4 concentration can increase the salting-out effect, resulting in a decrease in the solubility of ACT in the(NH4)2SO4–rich phase, which favors ACT extraction in the [C4mim]BF4-rich phase. However, an excessive increase in the(NH4)2SO4 concentration (>11,11 phần trăm trọng lượng) đã làm giảm hàm lượng nước của pha giàu [C4mim] BF 4-, điều này sẽ làm suy yếu ái lực của nó với ACT. Điều này làm giảm hiệu suất khai thác, hệ số phân vùng và độ chọn lọc. Do đó, nồng độ (NH4) 2SO4 tối ưu là 11,11 phần trăm trọng lượng.

3.2.5. Ảnh hưởng của độ pH

Ảnh hưởng của pH đến ACT(Acteoside)hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc trong IL-ATPS được khảo sát trong khoảng pH 2. 0 - 7. 0. Như quan sát trong Hình 4 (e), ba thông số chiết xuất tăng lên khi độ pH tăng từ 2. 0 lên 6. 0. Tuy nhiên, hiệu suất chiết xuất giảm ở pH bằng 7. 0.

Mặt khác, các glycoside của phenol có tính axit của ACT(Acteoside)sẽ ổn định trong môi trường axit, trong khi nó sẽ bị phân ly trong dung dịch kiềm [6]. Mặt khác, ACT có thể trải qua quá trình ion hóa theo cân bằng HA $ H cộng với A ở các giá trị pH khác nhau [33], là dạng không ion hóa có xu hướng đi vào pha giàu IL được ưa chuộng trong điều kiện axit. Vì vậy, thí nghiệm chiết nên được thực hiện trong môi trường axit vừa phải ở pH tối ưu là 6.

3.2.6. Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất

Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất đối với ACT(Acteoside) extraction efficiency, partition coefficient, and selectivity were explored in the range of 10–200 min. As can be seen from Fig. 4 (f), the ACT extraction performance increased with the extraction time, and the maximum extraction efficiency (>99%), partition coeffificient (>35), and selectivity (>225) thu được ở 130 phút. Ngoài ra, ACT(Acteoside)được phát hiện là ổn định trong một vi môi trường có tính axit yếu trong một thời gian dài. Do đó, 130 phút được chọn là thời gian chiết xuất tối ưu.

3.3. Cơ chế chiết xuất ACT với [C4mim] BF4– (NH4) 2SO4 ATPS

3.3.1. Phân tích FTIR

Hình 5 cho thấy phổ FTIR của ACT(Acteoside), [C4mim] BF4 và pha giàu [C4mim] BF 4-. Như được hiển thị trong phổ FTIR của [C4mim] BF4, các đỉnh ở 3162 và 3122 cm 1 có thể là do dao động kéo giãn đối xứng của CAH và dao động kéo dài không đối xứng của CAH từ imidazole, tương ứng. Băng ở 1012 cm 1 có thể được gán cho dao động kéo dài của BF 4-.

Trong phổ FTIR của pha giàu [C4mim] BF 4-, không có đỉnh mới nào xuất hiện so với phổ FTIR của ACT(Acteoside)và [C4mim] BF4. Tuy nhiên, đỉnh đặc trưng của BF 4- ở 1012 cm - 1 đã chuyển sang tần số cao hơn do liên kết hydro giữa ACT và các nguyên tử F. Hơn nữa, các đỉnh đặc trưng của CAH tại 3162 và 3122 cm 1 chuyển sang các tần số thấp hơn. Điều này có thể là do hai lý do: (1) sự hình thành liên kết hydro giữa ACT và nguyên tử N trong [C4mim] cộng, và (2) sự hình thành sự xếp chồng p-p giữa vòng benzen của ACT và vòng imidazole của [C4mim] cộng. Kết quả này phù hợp với kết quả mô phỏng phân tử.

Hình 5. Phổ FTIR của ACT, [C4mim] BF4 và pha giàu [C4mim] BF 4-.

3.3.2. Mô phỏng phân tử

Để khám phá cơ chế trích xuất, các chế độ tương tác có thể có giữa ACT(Acteoside)và [C4min] plus, BF 4- và H2O đã được khảo sát bằng cách sử dụng mô phỏng phân tử. Hình 6 cho thấy các chế độ tương tác tối ưu và cấu trúc liên kết của ACT– [C4min] plus, ACT – BF4 và ACT – H2O. Như được thể hiện trong Hình 6a – h, ACT và [C4mim] plus đã chỉ ra hai cấu trúc liên kết tối ưu, tức là ACT– [C4mim] cộng –1 và ACT– [C4mim] cộng –2, ACT và BF4 có một cấu trúc liên kết tối ưu , ACT – BF 4-, ACT và H2O có năm cấu trúc liên kết tối ưu ACT – H2O – 1, ACT – H2O – 2, ACT – H2O – 3, ACT – H2O – 4 và ACT – H2O – 5.

Hơn nữa, năng lượng liên kết có thể được sử dụng để giải thích sự tương tác giữa hai phân tử. Theo kết quả mô phỏng phân tử, năng lượng liên kết của ACT– [C4mim] cộng –1, ACT– [C4mim] cộng –2, ACT – BF4, ACT – H2O – 1, ACT – H2O – 2, ACT – H2O – 3 , ACT – H2O – 4 và ACT – H2O – 5 là - 129. 71, - 136. 53, -130. 82, - 60. 78, - 53 . 00, - 76. 76, -66. 55, và -53. 49 kJ / mol, tương ứng. Những giá trị này cho thấy rằng năng lượng liên kết của [C4mim] BF4 mạnh hơn năng lượng liên kết của các phân tử H2O. Do đó, ACT có ái lực cao với [C4mim] BF4 và dễ dàng đi vào pha giàu [C4mim] BF4.

Để nghiên cứu thêm về tương tác giữa các phân tử khác nhau, các chế độ tương tác của ACT– [C4min] plus, ACT – BF 4- và ACT – H2O đã được minh họa bằng cách sử dụng phân tích IGM. Như thể hiện trong Hình 6a và b, sự tương tác giữa ACT(Acteoside)và [C4mim] cộng chủ yếu bao gồm liên kết hydro và lực van der Waals. Ngoài ra, ACT– [C4mim] plus –1 và ACT– [C4mim] plus –2 hiển thị các đặc điểm cấu tạo tương tự, với vòng benzen của ACT và vòng imidazole của [C4mim] plus song song với nhau và nằm cách xa nhau trong khoảng 4 Å. Điều này cho thấy sự tồn tại của tương tác xếp chồng ứng dụng giữa ACT(Acteoside)và [C4mim] cộng với [43]. Hình 6c cho thấy sự hiện diện của liên kết hydro mạnh và tương tác van der Waals giữa ACT và BF 4-. Hơn nữa, như trong Hình 6d – h, khi ACT được hòa tan trong H2O, các phân tử ACT và H2O chủ yếu được liên kết thông qua liên kết hydro và van der Waals. Do đó, trên cơ sở các đặc điểm cấu tạo và giá trị năng lượng liên kết, có thể kết luận rằng ACT được chiết xuất trong pha giàu [C4mim] BF 4- thông qua liên kết hydro, tương tác van der Waals và xếp chồng p-p.

Hình 6. Phân tích IGM của tương tác ACT– [C4min] plus, ACT – BF 4- và ACT – H2O: (a) ACT– [C4mim] plus –1, (b) ACT– [C4mim] cộng –2, (c) ACT – BF4, (d) ACT – H2O – 1, (e) ACT – H2O – 2, (f) ACT – H2O – 3, (g) ACT – H2O – 4, và (h ) ACT – H2O – 5.

3.4. Chiết xuất dịch chiết thô

Trong các điều kiện chiết xuất tối ưu, IL-ATPS được sử dụng để khảo sát quá trình chiết xuất của dịch chiết thô. Như thể hiện trong Bảng 1, IL-ATPS có thể trích xuất ACT một cách hiệu quả(Acteoside)từ chiết xuất thô củaCistanchetubulosasang pha giàu IL, và IL-ATPS hầu như không có thay đổi về hiệu suất trích xuất của ACT(Acteoside)từ dịch chiết thô so với hiệu suất chiết của dung dịch chuẩn. Do đó, phương pháp này có thể trích xuất ACT(Acteoside)từ chiết xuất thô củaCistanchetubulosa, có thể cung cấp tài liệu tham khảo cho việc chiết xuất các thành phần hoạt tính sinh học trong tương lai.

3.5. Tách ACT khỏi pha giàu IL

Phương pháp chiết xuất và hấp phụ dung môi để thu hồi ACT(Acteoside)và việc sử dụng lại IL được tìm hiểu trong phần này. Đầu tiên, các dung môi hữu cơ được xem xét để chiết ngược, chẳng hạn như n-butanol (NBA), ethyl acetate (EA), isopentenyl (IPA) và chloroform (CR). Tuy nhiên, hiệu suất thu hồi của các chất chiết hữu cơ thấp, như trong Hình 7. Hơn nữa, một số lượng lớn các chất chiết hữu cơ dễ bay hơi được sử dụng để chiết ngược, điều này sẽ ảnh hưởng đến tính năng '' xanh "của quá trình tách.

Phương pháp hấp phụ đã được lựa chọn để tách ACT(Acteoside)từ pha giàu IL, chẳng hạn như cacbon trung tính có thứ tự (CMK -3), graphene (GR) và ống nano cacbon một thành (SWCNT). Pha giàu IL sau khi chiết IL-ATPS được pha loãng 10 lần với nước khử ion. Hiệu quả thu hồi của ba chất hấp phụ trên được so sánh với ACT trong cùng điều kiện hấp phụ như sau: tỷ lệ rắn-lỏng 1: 1 (mg / mL), 303 K, và 12 h.

Như thể hiện trong Hình 7, sự phục hồi của SWCNT tốt hơn so với CMK -3 và GR. Ngoài ra, hiệu quả giải hấp của ACT(Acteoside)có thể đạt 95,3 phần trăm khi sử dụng metanol, axit axetic và nước siêu tinh khiết với tỷ lệ thể tích 1: 1: 8 ở 318 K. Do đó, SWCNT có thể được sử dụng để thu hồi ACT từ pha giàu IL.

Hình 7. Ảnh hưởng của loại với các chất chiết xuất và chất hấp phụ khác nhau đối với việc tách ACT(Acteoside)từ pha giàu IL.

4.Kết luận

Trong nghiên cứu này, một phương pháp đơn giản và hiệu quả dựa trên IL-ATPS để chiết xuất ACT(Acteoside)từ các chất chiết xuất thô củaCistanche tubulosađã được phát triển thành công. IL-ATPS tối ưu được xác định là [C4mim] BF4– (NH4) 2SO4, và điều kiện chiết tối ưu là nhiệt độ chiết 278 K, nồng độ IL là 5 0 phần trăm trọng lượng, nồng độ dung dịch mẫu là 2,5 mg / mL, nồng độ muối 11,11 phần trăm trọng lượng, độ pH là 6,0 và thời gian cân bằng chiết là 130 phút. Trong các điều kiện chiết xuất tối ưu, hiệu suất chiết, hệ số phân vùng và độ chọn lọc của ACT(Acteoside)được tìm thấy lần lượt là 99,78 phần trăm ± 0. 84 phần trăm, 33,82 ± 1,82 và 230,51 ± 8,26. Do đó, kết luận, hệ thống [C4mim] BF 4- (NH4) 2SO4 cung cấp một phương pháp đơn giản và hiệu quả để tách ACT có chọn lọc cao từ các chiết xuất thô củaCistanchetubulosa. Muối axit (NH4) 2SO4 cung cấp một vi môi trường có tính axit yếu để đảm bảo sự ổn định của ACT(Acteoside)trong pha giàu [C4mim] BF 4-. Hơn nữa, độ phân cực cao của [C4mim] BF4 có các thụ thể đa liên kết hydro có lợi cho việc chiết xuất ACT trong pha giàu [C4mim] BF 4-. Cuối cùng, tương tác ACT và [C4mim] BF4 đã được chứng minh là bao gồm liên kết hydro, lực van der Waals và xếp chồng p-p. Nghiên cứu này cung cấp những hiểu biết sâu sắc cho các nghiên cứu trong tương lai về quá trình phân tách có chọn lọc cao các hợp chất phenolic từ thực vật tự nhiên.

Tuyên bố đóng góp quyền tác giả CRediT

Helin Xu: Khái niệm hóa, Phương pháp luận, Điều tra, Quản lý dữ liệu, Viết - bản thảo gốc, Viết - xem xét và chỉnh sửa. Xue qin Li: Lên ý tưởng, Quản lý dự án, Viết - đánh giá & chỉnh sửa, Giám sát. Yanyan Hao: Quản lý dữ liệu, Viết -xem xét và chỉnh sửa. Xiaobin Zhao: Tài nguyên, Phân tích chính thức. YunCheng: Tài nguyên, Phân tích chính thức. Jinli Zhang: Quản trị dự án, Viết - đánh giá & chỉnh sửa.

Tuyên bố về lợi ích cạnh tranh

Các tác giả tuyên bố rằng họ không có lợi ích tài chính cạnh tranh hoặc mối quan hệ cá nhân nào có thể ảnh hưởng đến công việc được báo cáo trong bài báo này.

Sự nhìn nhận

Công trình này được hỗ trợ bởi Tổ chức Khoa học Khu vực thuộc Quỹ Khoa học Tự nhiên Quốc gia Trung Quốc [tài trợ số22068032]; Quỹ Khoa học Tự nhiên Quốc gia dành cho Các nhà Khoa học Trẻ của Trung Quốc [số tài trợ 21706166]; Chương trình dành cho các nhà lãnh đạo đổi mới khoa học và công nghệ trẻ ở độ tuổi mới lớn ở Bình Tuan [số tài trợ 2019CB024]; Chương trình dành cho các tài năng sáng tạo trẻ của Đại học Shihezi [số tài trợ CXRC201802] và Dự án Khoa học và Công nghệ lớn của Tân Cương Bingtuan [số tài trợ 2017AA007 / 01]. Chúng tôi muốn cảm ơn Trung tâm Phân tích và Kiểm tra của Đại học Shihezi đã cung cấp kính hiển vi và phân tích vi mô cho các mẫu vật của chúng tôi.

anthocyanin

Người giới thiệu

[1] X. Wang, X. Wang, Y. Guo, Xác định nhanh chóng đồng thời sáu thành phần hiệu quả trongCistanchetubulosabằng quang phổ cận hồng ngoại, Molecules 22 (2017) 843, https://doi.org/10.3390/molecules22050843.

[2] Y. Yan, Q. Song, X. Chen, J. Li, P. Li, Y. Wang, T. Liu, Y. Song, P. Tu, Xác định đồng thời các thành phần có phân cực rộng và phạm vi nội dung trongCistanchetubulosasử dụng phép sắc ký tương tác ngược pha-ưa nước được ghép nối tiếp nối-sắc ký khối phổ song song, J. Chromatogr. 1501 (2017) 39–50
[3] W. Zhang, J. Huang, W. Wang, Q. Li, Y. Chen, W. Feng, D. Zheng, T. Zhao, G. Mao, L. Yang, X. Wu, Chiết xuất, thanh lọc , đặc điểm và các hoạt động chống oxy hóa của polysaccharid từCistanchetubulosa, Int. J. Biol. Macromol. 93 (2016) 448–458,
[4] Y. Song, Q. Song, J. Li, N. Zhang, Y. Zhao, X. Liu, Y. Jiang, P. Tu, Một chiến lược tích hợp để phân biệt số lượng chemome giữa Cistanche Desticola và C. tubulosa bằng cách sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao - phép lai ba khối bốn cực-khối phổ bẫy ion tuyến tính, J. Chromatogr. 1429 (2016) 238–247
[5] W. Pei, R. Guo, J. Zhang, X. Li, Chiết xuất glycoside phenylethanoid từCistanche tubulosabằng cách chiết tách đồng nhất cắt tốc độ cao, J. AOAC Int. 102 (2019) 63–68
[6] H. Xu, W. Pei, X. Li, J. Zhang, Sự hấp phụ hiệu quả cao của glycoside phenylethanoid trên cacbon trung tính, Mặt trận. Chèm. 7 (2019)
[7] PL Liao, CH Li, LS Tse, JJ Kang, YW Cheng, Đánh giá an toàn củaCistanchetubulosaghi nhớ sản phẩm thực phẩm sức khỏe: độc tính gen và thử nghiệm độc tính liều lặp lại 28- ngày, Food Chem. Toxicol. 118 (2018) 581–588
[8] YJ Shiao, MH Su, HC Lin, CR Wu, Echinacoside cải thiện tình trạng suy giảm trí nhớ và thâm hụt cholinergic gây ra bởi các peptide amyloid-beta thông qua việc ức chế lắng đọng amyloid và độc tính, Food Funct. 8 (2017) 2283– 2294

[9] H. Shimada, Y. Urabe, Y. Okamoto, Z. Li, A. Kawase, T. Morikawa, P. Tu, O. Muraoka, M. Iwaki, Các thành phần chính củaCistanchetubulosa, echinacoside vàacteoside, ức chế chất đồng vận chuyển glucose phụ thuộc natri 1- sự hấp thu glucose qua trung gian của các tế bào biểu mô ruột, J. Funct. Thực phẩm 39 (2017) 91–95

[10] W. Li, R. Deng, X. Jing, J. Chen, D. Yang, J. Shen,Acteosidecải thiện tình trạng viêm não tự miễn thực nghiệm thông qua việc ức chế sự hoạt hóa mitophagy qua trung gian peroxynitrite, Free Radicals Biol. Med. 146 (2020) 79–91,

[11] A. He, B. Dong, X. Feng, S. Yao, Chiết xuất saponin nhân sâm có hoạt tính sinh học bằng cách sử dụng hệ thống hai pha nước của chất lỏng và muối ion, Sep. Purif. Technol. 196 (2018) 270–280
[12] E. Suarez Garcia, CA Suarez Ruiz, T. Tilaye, MHM Eppink, RH Wijffels, C. van den Berg, Phân đoạn protein và carbohydrate từ chiết xuất vi tảo thô bằng cách sử dụng hệ thống hai pha nước dựa trên chất lỏng ion, tháng 9 . Technol. 204 (2018) 56–65,
[13] L. Wang, W. Li, Y. Liu, W. Zhi, J. Han, Y. Wang, L. Ni, Sự tách màu xanh lá cây của bromelain trong mẫu thực phẩm với khả năng duy trì hoạt tính enzyme cao bằng cách sử dụng dung dịch nước hai- có thể tái chế hệ thống pha chứa chất đồng trùng hợp phản ứng nhiệt tổng hợp mới và muối, Food Chem. 282 (2019) 48–57
[14] A. Tighrine, Y. Amir, P. Alfaro, M. Mamou, C. Nerín, Chiết xuất và phân tích đồng thời chất bảo quản và chất làm ngọt nhân tạo trong nước trái cây bằng phương pháp chiết xuất lỏng-lỏng muối trước khi thực hiện sắc ký lỏng hiệu suất cực cao , Thực phẩm Chem. 277 (2019) 586–594

[15] H. Shaker Shiran, M. Baghbanbashi, F. Ghazizadeh Ahsaie, G. Pazuki, Nghiên cứu sự phân chia curcumin trong hệ hai pha polyme-muối nước, J. Mol. Liq. 303 (2020) 112629

[16] X. Wu, R. Li, Y. Zhao, Y. Liu, Tách polysaccharid từ Spirulina platensis bằng HSCCC bằng ethanol-amoni sulfat ATPS và các hoạt động chống oxy hóa của chúng, Carbohydr. Đa hình. 173 (2017) 465–472

[17] VP Priyanka, RL Gardas, Hệ thống hai pha nước dựa trên ion đơn và dication để chiết xuất natri diclofenac, Sep. Purif. Technol. 234 (2020) 116048
[18] J. Flieger, A. Czajkowska-Zelazko, Hệ thống hai pha nước dựa trên chất lỏng ion để phân lập quinine từ mẫu huyết tương người, Food Chem. 166 (2015) 150–157
[19] X. Zhang, G. Teng, J. Zhang, Ethanol / nước muối hệ thống hai pha dựa trên siêu âm hỗ trợ chiết xuất polysaccharid từ Lilium David Ivar. unicolor Salisb: đặc tính hóa lý và tính chất kháng phân, J. Mol. Liq. 256 (2018) 497–506,
[20] Q. Liu, X. Chen, Y. Guo, C. Han, J. Li, L. Jia, J. Liu, X. Wei, Nghiên cứu nhiệt động lực học của hệ thống hai pha nước của 1- butyl -3- methylimidazolium tetrafluoroborate và natri dodecylbenzene sulfonate, J. Mol. Liq. 279 (2019) 18–22,
[21] DCV Belchior, MV Quental, MM Pereira, CMN Mendonça, IF Duarte, MG Freire, Hiệu suất của chất lỏng ion dựa trên tetraalkylammonium như là thành phần của hệ thống hai pha nước trong quá trình chiết xuất ovalbumin và lysozyme, Sep. Purif. Technol. 233 (năm 2020)

[22] CA Suarez Ruiz, J. Kwaijtaal, OC Peinado, C. van den Berg, RH Wijffels, MHM Eppink, Phân đoạn nhiều bước của các phân tử vi tảo bằng cách sử dụng hệ thống hai pha nước chọn lọc, ACS Bền vững, Chem. Anh 8 (2020) 2441–2452,

[23] AW Vieira, G. Molina, AB Mageste, GD Rodrigues, LR de Lemos, Phân vùng axit salicylic và acetylsalicylic bằng hệ thống hai pha trong nước: khía cạnh cơ chế và nghiên cứu tối ưu hóa, J. Mol. Liq. 296 (2019) 111775
[24] L. Ran, C. Yang, M. Xu, Z. Yi, D. Ren, L. Yi, Tăng cường chiết xuất hai pha trong nước của proanthocyanidins từ hạt nho bằng cách sử dụng chất lỏng ion làm tá dược, Sep. Purif. Technol. 226 (2019) 154–161

[25] LA Mejía-Manzano, BA Barba-Dávila, P. Vázquez-Villegas, SO SernaSaldívar, J. González-Valdez, Chiết xuất cải tiến chất chống oxy hóa tự nhiên từ vỏ rễ Mortonia greggii sử dụng dung môi xanh và hệ thống hai pha dung dịch nước, Tháng 9 Purif. Technol. 211 (2019) 667–672