HPLC xác định Echinacoside ở Cistanche Cistanche

Hplc xác định echinacoside trong Cistanche Cistanche

Để biết thêm information:ali.ma@wecistanche.com

Mục tiêu:HPLC xác định số lượngechinacosidetrongCistanche ·mặt đất trong điều kiện nitơ lỏng cũng như trong điều kiện sấy khô trong không khí tự nhiên, so sánh nó trongcistanche hoang dãvàCistanche được trồng nhân tạo.

Phương pháp:hệ thống LC-20a HPLC (Shimadzu, Nhật Bản) đã được sử dụng. Cột là YMC trơ ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5μm; YMC Co Ltd, Nhật Bản); Pha di động: acetonitrile-methanol-1% axit formic (10:15:75); Bước sóng phát hiện 334 nm; Tốc độ dòng chảy 0,7 mg · ml-1. Nhiệt độ cột 30 ° C.

Kết quả:các điều kiện xử lý khác nhau có ảnh hưởng rất rõ ràng đến hàm lượng echinacoside, với nồng độ echinacoside nói chung cao hơn trong đất Cistanche dưới nitơ lỏng so với mặt đất trong điều kiện khô không khí tự nhiên; Hàm lượng hoạt chất của hoang dãCistanche ·cao hơn nhiều so với văn hóa nhân tạo.

Nhấp vào sản phẩm bột chiết xuất Cistanche

Cistanche là một loài có nguy cơ tuyệt chủng, một loài thực vật ký sinh sống ở rễ của Clostridium, Salix rubrum. Ở Trung Quốc, Cistanche chủ yếu phân bố ở Nội Mông, Ninh Hạ, Cam Túc và Tân Cương, với danh tiếng tuyệt vời về " nhân sâm sa mạc ", có giá trị y học lớn. Thành phần dược liệu chính của nó là phenylethanolic glycoside, có thể được chia thành echinacoside, lá cohoside, Cistanche và các loại khác tùy thuộc vào nhóm thế của chúng. Trong số đó, echinacoside đã cải thiện chức năng tình dục, chất chống oxy hóa và tác dụng nhặt rác gốc tự do, nhưng cũng có một số tác dụng chống apoptotic. Từ những năm 1980, công nghệ HPLC, cung cấp một phương pháp đơn giản và nhanh chóng để tách glycoside phenylethanolic, đã được sử dụng rộng rãi trong việc tách các sản phẩm tự nhiên. Một phương pháp HPLC đã được chọn để phân tích nội dung của Cistanche, thành phần hoạt động chính của Cistanche hoang dã và được trồng nhân tạo, ở các giai đoạn tăng trưởng khác nhau, cung cấp cơ sở khoa học cho sự phát triển và sử dụng hợp lý của Cistanche và để đánh giá hiệu quả chất lượng của nó.

Dụng cụ và thuốc thử

Shimadzu, Nhật Bản lc-20a Hplc thiết bị, lc-20at song song bơm pít tông đôi, lò nướng cột cto-20a, máy dò bước sóng kép spda-20a UV Vis; Kunshan kq-100 máy làm sạch siêu âm; Acetonitrile (sắc ký tinh khiết, Viện nghiên cứu hóa học Thiên Tân Guangfu); Methanol (sắc ký tinh khiết, Viện nghiên cứu hóa học Thiên Tân Guangfu); Axit formic (sắc ký tinh khiết, Viện nghiên cứu hóa học Thiên Tân Guangfu); nước cất

Kiểm soát: echineoside, nội dung ≥ 98.43% (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Năm mẫu Cistanche: được trồng nhân tạo trong một năm với Cistanche sau đây, được trồng nhân tạo cho Cistanche, Cistanche sấy khô nhân tạo, Cistanche hoang dã và trồng nhân tạo trong hơn ba năm với Cistanche.

2 phương pháp và kết quả

2.1 Xác định điều kiện sắc ký

Để tách đỉnh của echineoside đo được trong sắc ký LC khỏi các chất khác, cũng như để kiểm soát áp suất bơm và bảng thời gian nằm trong phạm vi phù hợp, việc sửa đổi thử nghiệm các điều kiện sắc ký đã được thực hiện và sau khi tối ưu hóa các thí nghiệm với pha di động, người ta đã kết luận rằng nhiệt độ càng cao, thời gian lưu giữ càng ngắn và nồng độ càng thấp, áp suất bơm càng ngắn và thời gian lưu giữ càng thấp, nhưng chiều cao đỉnh trở nên thấp hơn, điều này không thuận lợi cho phép đo. Pha di động cuối cùng được xác định là axit formic acetonitrile-methanol-1% (10:15:75), bước sóng phát hiện 334 nm, tốc độ dòng chảy 0,7 mL / phút và nhiệt độ cột 30 ° C, theo điều kiện khách quan của nhiệt độ phòng và áp suất chịu lực tối đa của máy bơm, dẫn đến thông tin phong phú với hình dạng đỉnh sắc nét và sự phân tách tốt các thành phần。

2.2 xác định cột

YMC-Inertsil ODS-SP (4.6 mm × 150 mm, 5 μ m; YMC Co Ltd, Nhật Bản).

2.3 Chuẩn bị dung dịch thử nghiệm

2.3.1 Chuẩn bị các giải pháp tiêu chuẩn

Một lượng tiêu chuẩn echineoside thích hợp đã được cân chính xác và tăng đột biến với axit formic acetonitrile-methanol-1% pha di động (10:15:75) để tạo ra 0,06 mg · ML - 1, 0,05 mg · ML - 1, 0,04 mg · ML - 1, 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 và 0,005 mg · ML - 1 giải pháp của tiêu chuẩn echinacoside.

2.3.2 Chuẩn bị dung dịch thử nghiệm

Một lượng thích hợp của Cistanche tươi được trồng nhân tạo (dưới một năm), Cistanche tươi nhân tạo và Cistanche tươi hoang dã được nghiền thành bột bằng cách sử dụng vữa dưới nitơ lỏng; Ngoài ra, một lượng thích hợp của 3 Cistanche trên đã được cắt thành khối, không khí được sấy khô tự nhiên trong thông gió bóng râm, và sau khi sấy khô, nó đã được nghiền thành bột. Cistanche khô nhân tạo và hoang dã trong hơn ba năm Cistanche khô được nghiền trực tiếp vào bột. 0,5 g bột Cistanche được chuẩn bị ở trên đã được lấy và đặt vào một ống ly tâm, 25 ml pha di động đã được thêm vào, cân và ngâm trong 30 phút, sonicated trong 40 phút, làm mát và sau đó cân nhắc lại để bù đắp trọng lượng còn thiếu với pha di động, lắc và ly tâm, và siêu chất được lấy trong 0,45 μ M lọc màng lọc vi mô.

2.4 biểu đồ đường cong hồi quy cho mẫu tiêu chuẩn của echinacoside

Các mẫu tiêu chuẩn đã chuẩn bị của echineoside đã được tiêm riêng vào thiết bị LC và nồng độ của đối chứng (mg · L-1) được sử dụng làm abscissa, và các khu vực đỉnh tương ứng được sắc phong để vẽ đường cong tiêu chuẩn, dẫn đến phương trình hồi quy: y = 66 867 100x-46 360,83, R2 = 0,98637, cho thấy echineoside ở 0,1 ~ 1,2 μg trong một mối quan hệ tuyến tính tốt.

3 Thảo luận

Echinacoside là một trong những thành phần hoạt động chính của Cistanche, có thể đại diện tốt cho cơ sở hóa học của tác dụng dược lý của Cistanche, làm cho việc đánh giá chất lượng của dược liệu và tác dụng dược lý của nó tương ứng, và cải thiện sự phù hợp của đánh giá chất lượng Cistanche.

Các điều kiện xử lý khác nhau có ảnh hưởng rõ ràng đến hàm lượng echinacoside, với nồng độ echinacoside nói chung cao hơn trong đất Cistanche dưới nitơ lỏng so với mặt đất trong điều kiện sấy khô không khí tự nhiên. Làm khô không khí thông thường làm giảm lượng echineoside, có thể đã được tiêu thụ trong quá trình sấy hoặc chuyển đổi không khí. Để ngăn chặn sự giảm hàm lượng hoạt chất và đảm bảo hiệu quả của Cistanche, nên chọn một phương pháp điều trị thích hợp.

Một cách nhất quán, hầu hết đều tin rằng môi trường canh tác nhân tạo của Cistanche cũng như thói quen tăng trưởng không thể phân biệt được với tự nhiên mà không có sự khác biệt về chất lượng, có xu hướng chỉ chú trọng đến năng suất và không phân tích chất lượng. Nghiên cứu hiện tại cho thấy lượng Cistanche echinacoside được trồng nhân tạo thấp hơn so với Cistanche echinacoside hoang dã. Cao nhất là 0,3360% cistanche hoang dã và thấp nhất là 0,007 0% cistanche nhân tạo. Do đó, nó vẫn cần được nghiên cứu trong công nghệ canh tác để cải thiện hàm lượng hoạt chất.

Chất lượng của Cistanche phụ thuộc vào lượng hoạt chất của nó, echinacoside, do đó có mối quan hệ chặt chẽ với mùa, thời gian và phương pháp thu hoạch, vì vậy việc thu hoạch Cistanche nên tính đến tình trạng tích lũy của hoạt chất và giai đoạn tăng trưởng và phát triển. Xem xét cả chất lượng và năng suất.

Phương pháp được đề cập trong bài báo này rất đơn giản, chính xác, có thể tái tạo và chính xác để xác định echineoside. Hữu ích cho việc xác định Cistanche.