vnNgôn ngữ
Trang chủ / Kiến thức / Nội dung

Kiến thức

Cải thiện khả năng chống lão hóa và tác dụng chống oxy hóa của polysacarit từ hạt Cuscuta Chinensis Lam sau khi thủy phân bằng enzym

Mar 30, 2023

trừu tượng

Cuscuta chinensis polysacarit (CPS) được chiết xuất bằng cách sử dụng nước nóng và polysacarit C. chinensis thủy phân bằng enzym (ECPS) được tạo ra bằng quá trình thủy phân bằng enzym mannanase. Mục đích của nghiên cứu này là điều tra hoạt động chống tạo hắc tố của ECPS và CPS trong các tế bào ung thư hắc tố B16F10. Hoạt tính chống oxy hóa trong ống nghiệm được đánh giá bằng khả năng khử sắt sắt và các hoạt động nhặt gốc tự do DPPH của chúng. Sự phân bố khối lượng phân tử của polysacarit được xác định bằng SEC-MALLS-RI. CPS đã được phân hủy thành công bằng enzym bằng cách sử dụng mannose và trọng lượng phân tử trung bình có trọng lượng của CPS và ECPS là 434,6 kDa và 211,7 kDa. Kết quả của các thử nghiệm hoạt tính sinh học cho thấy rằng polysacarit thủy phân bằng enzym có hoạt tính chống tạo hắc tố và tác dụng chống oxy hóa vượt trội so với polysacarit ban đầu. ECPS thể hiện hoạt động chống sinh hắc tố bằng cách điều chỉnh giảm sự biểu hiện của tyrosinase, MITF và TRP-1 mà không có tác dụng gây độc tế bào trong các tế bào u ác tính B16F10. Tóm lại, ECPS có tiềm năng trở thành một sản phẩm làm trắng da. Theo các nghiên cứu liên quan,hột cálà một loại thảo mộc phổ biến được mệnh danh là “thần dược kéo dài tuổi thọ”. Thành phần chính của nó là cistanoside, có nhiều tác dụng như chống oxy hóa, chống viêm và tăng cường chức năng miễn dịch. Cơ chế giữahột cáVàLàm trắng danằm trong tác dụng chống oxy hóa của cistanche glycosides.hắc tốtrong da người được tạo ra bởi quá trình oxy hóa tyrosine được xúc tác bởityrosinaza, và phản ứng oxy hóa cần có sự tham gia của oxy nên các gốc oxy tự do trong cơ thể trở thành nhân tố quan trọng ảnh hưởng đến quá trình sản sinh melanin. Cistanche chứa cistanoside, một chất chống oxy hóa và có thể làm giảm sự hình thành các gốc tự do trong cơ thể, do đóức chế sản xuất melamin.

từ khóa:Cuscuta chinensis polysacarit; Hoạt động chống ung thư; Enzyme thủy phân polysaccharid; hoạt động chống oxy hóa

Giới thiệu 

Melanin là sản phẩm cuối cùng của quá trình chuyển hóa L-tyrosine, là yếu tố chính quyết định màu tóc và da, đồng thời đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ chống lại tổn thương do bức xạ cực tím (1). Tuy nhiên, sự tích tụ melanin có thể liên quan đến sắc tố bất thường và dẫn đến chứng tăng sắc tố da, nám, hắc tố do ánh nắng và ephelides (2). Quá trình sinh tổng hợp melanin bao gồm một chuỗi các phản ứng oxy hóa và enzym và tyrosinase đóng một vai trò quan trọng trong quá trình này (3). Protein liên quan đến tyrosinase (TRP-1) tạo điều kiện thuận lợi cho sự hình thành DHICA oxidase trong con đường sinh tổng hợp melanin (4). Yếu tố phiên mã liên quan đến microphthalmia nội bào (MITF) là một phiên mã quan trọng

điều hòa các gen sinh tổng hợp hắc tố. MITF cũng tham gia điều hòa sắc tố, tăng sinh và biệt hóa tế bào hắc tố (5). tín hiệu thụ thể a-MSH-melanocortin 1 xảy ra trong các enzyme đặc hiệu tạo hắc tố, bao gồm TRP-1; tyrosinase cũng được quy định bởi MITF (5). Nhiều chất làm trắng da phát huy tác dụng chống tạo hắc tố bằng cách điều chỉnh biểu hiện tyrosinase hoặc tác dụng ức chế hoạt động của tyrosinase. Hơn nữa, mức độ chống oxy hóa nội bào và sản xuất gốc tự do cũng ảnh hưởng đến hàm lượng melanin (6). Do đó, các chất ức chế tyrosinase và các hợp chất chống oxy hóa thường được lựa chọn làm chất làm trắng da. Cuscuta chinensis Lam., được gọi là TuSiZi trong tiếng Trung Quốc, là một loại thuốc truyền thống của Trung Quốc thường được sử dụng như một loại thực phẩm chức năng và được biết là có tác dụng tăng cường khả năng của hệ thống sinh sản (7). Trong những năm gần đây, một số báo cáo đã chỉ ra việc sử dụng nó để điều trị tàn nhang và bệnh bạch biến (8). Các báo cáo khác đã chỉ ra rằng nó có tác động tích cực đến việc bảo vệ da (9) và gây ra sự ức chế hoạt động của tyrosinase (10).

rou cong rong whitening

Click Vào Rou Cong Rong Lợi Ích Để Làm Trắng Da

Hỏi thêm:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Polysacarit là thành phần chính trong chiết xuất nước của C. chinensis Lam. hạt giống, được coi là có hoạt tính chống chết theo chương trình (11) và miễn dịch (12). Các kết quả phân tích trước đây cho thấy C. chinensis Lam. polysacarit bao gồm fructose, mannose, xyloza và arabinose; mannose là thành phần đường chính (13). Nhiều nhà nghiên cứu đã chứng minh rằng độ nhớt (14), phân bố trọng lượng phân tử (Mw) (15) và tỷ lệ monosacarit (16) của polysacarit có ảnh hưởng lớn đến hoạt tính sinh học của chúng. Hơn nữa, nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng các polysacarit bị phân hủy với Mw thấp thể hiện các hoạt động chống oxy hóa và ức chế tyrosinase cao hơn so với polysacarit ban đầu (17). Do đó, việc sản xuất polysaccharid Mw thấp từ C. chinensis Lam. hạt giống là cần thiết để cải thiện hoạt tính sinh học của nó. Trong số các quá trình phân hủy khác nhau, ưu điểm chính của quá trình phân hủy bằng enzyme là tính đặc hiệu của cơ chất, tính chọn lọc cao và điều kiện ôn hòa, tạo ra các sản phẩm thủy phân có cấu trúc rõ ràng (18).

Dựa trên các nghiên cứu dược lý này, chúng tôi đã suy đoán rằng polysacarit C. chinensis (CPS) và polysacarit C. chinensis thủy phân bằng enzym (ECPS) có thể là thuốc thực vật hiệu quả để cải thiện tình trạng tăng sắc tố da. Mannase đã được sử dụng để thu được Mw ECPS thấp từ hạt giống. Ngoài ra, các hoạt động chống tạo hắc tố và chống oxy hóa của các polysacarit có Mw khác nhau đã được ước tính và mối quan hệ giữa các hoạt tính sinh học và Mw của các polysacarit đã được nghiên cứu.

Vật liệu và phương pháp

Thuốc thử

Hóa chất cho hoạt tính enzym và chống oxy hóa được mua từ Công ty Sigma (Mỹ). Tất cả các thuốc thử và hóa chất khác được mua từ Aladdin (Trung Quốc).

Chuẩn bị CPS và ECPS

Dược liệu hạt Cuscuta chinensis Lam được cung cấp bởi Guang Dong Feng Chun Pharmaceutical CO., LTD (Trung Quốc). Khoảng 500 g vật liệu khô được nghiền thành bột và ngâm với 1200 mL etanol 80 phần trăm trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng để loại bỏ chất béo, oligosacarit và vật liệu màu. Các mẫu đã xử lý trước được thấm bằng vải, sau đó phần cặn khô được chiết bằng 3000 mL nước ở 90 độ ba lần. Dịch chiết nước được tách ra khỏi cặn bằng cách ly tâm (4000 g trong 5 phút ở 22 độ ) và sau đó cô ở 70 độ trong chân không; phần ngưng tụ được kết tủa với 60% ethanol ở 3 độ trong 24 giờ. Cuối cùng, kết tủa được khử protein bằng phương pháp Sevag, được thẩm tách bằng màng 3500 Da, đông khô và sau đó được dán nhãn C. chinensis polysacarit (CPS).

Polysacarit C. chinensis thủy phân bằng enzym (ECPS) thu được bằng cách thủy phân với mannose (0.1 phần trăm trong dung dịch đệm natri axetat) theo tỷ lệ mannose trên cơ chất là 5:1 (v/w) ở 60 độ, pH 4,5 trong 6 giờ. Sau đó, phản ứng xúc tác được kết thúc trong nước sôi trong 10 phút. Dung dịch phản ứng được ly tâm ở 10,000 g trong 15 phút (4 độ ) và phần nổi phía trên được thu thập để thẩm tách ở 3 độ trong 3 ngày bằng màng 3500 Da để loại bỏ các chất phân tử nhỏ và được đông khô.

Hàm lượng carbohydrate được kiểm tra bằng phương pháp axit sunfuric phenol với glucose làm chất chuẩn của đường chuẩn.

cistanche tubulosa

Phép đo SEC-MALLS-RI

Sắc ký loại trừ kích thước (Waters, USA) kết hợp với máy dò tán xạ ánh sáng laser đa góc (Wyatt, USA) và máy dò chiết suất (Waters, USA) (SEC-MALLS-RI) được sử dụng để phát hiện trọng lượng phân tử trung bình có trọng số của polysacarit. SEC-MALLS-RI được thực hiện với cột Phenomenex Polysep-GFC-Tuyến tính (8 mm×3{{10}}0 mm); các mẫu (2 mg/mL) được hòa tan bằng pha động, bao gồm natri clorua 0,1 M. Thể tích tiêm là 100 mL và đồng hồ được đặt ở mức 0,7 mL/phút.

Xét nghiệm ức chế tyrosinase của nấm

Sự ức chế tyrosinase của nấm (19) đã được thực hiện như đã báo cáo trước đây với các sửa đổi. Tóm lại, 25 mL axit Kojic (kiểm soát dương tính) hoặc các dung dịch mẫu (25 mL 10 mM L-tyrosine, 25 mL 0.5 mM L-DOPA và 875 mL 50 mM dung dịch đệm phốt phát (pH 6,5)) được trộn lẫn. Sau đó, 38 mL 2100 U/mL nấm tyrosinase đã được thêm vào và xoáy. Sau 0,5-h ủ ở 37 độ , độ hấp thụ được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 475 nm (Thermo Fisher, Hoa Kỳ). Phần trăm ức chế hoạt động tyrosinase được tính theo công thức sau: phần trăm ức chế tyrosinase=[(A-control – A-sample) / A-control] ×100, trong đó A-control biểu thị độ hấp thụ ở bước sóng 475 nm mà không có mẫu và mẫu A đại diện cho độ hấp thụ ở bước sóng 475nm với mẫu.

Nuôi cấy tế bào và xét nghiệm khả năng sống

Các tế bào khối u ác tính Murine B16F10 được mua từ Hóa sinh và Sinh học Tế bào (Trung Quốc). Các tế bào được duy trì trong môi trường Modified Eagle Medium (DMEM) của Dulbecco được bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò (FBS), 100 mg/mL streptomycin và 100 IU/mL penicillin ở 37 độ trong môi trường ẩm có chứa 5% CO2. Các tế bào được gieo vào các đĩa nuôi cấy và được bổ sung các nồng độ mẫu khác nhau và hormone kích thích a-melanocyte (a-MSH) trong 72 giờ để đo hoạt tính tyrosinase nội bào và định lượng hàm lượng melanin.

Thử nghiệm 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) được thực hiện để kiểm tra khả năng sống của tế bào (20). Tóm lại, 96-các đĩa giếng đã được cấy tế bào khối u ác tính B16F10 của chuột. Thể tích 50 mL MTT 2 mg/ml được chuyển vào từng giếng sau khi xử lý với 100 mL nồng độ mẫu khác nhau trong 24 giờ. Sau 4-h ủ, phản ứng kết thúc và dimethyl sulfoxide được thêm vào để hòa tan chất không hòa tan thu được. Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 590nm bằng đầu đọc vi bản.

Đo hàm lượng melanin

Việc phát hiện hàm lượng melanin được thực hiện bằng một phương pháp được sửa đổi một chút (21). Sau khi rửa bằng PBS có đá, các tế bào khối u ác tính (2 × 104 tế bào mỗi giếng) được cấy vào đĩa giếng 96-và được ủ ở 37 độ trong 48 giờ. Sau đó, 100 mL NaOH (1N) được thêm vào từng giếng để hòa tan các tế bào khối u ác tính ở 80 độ trong 30 phút. Dịch ly giải được ly tâm ở tốc độ 15,000 g trong 15 phút (4 độ ). Sau đó, độ hấp thụ được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 405 nm. Tất cả các thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần.

Xét nghiệm hoạt động tyrosinase nội bào

Xét nghiệm hoạt động tyrosinase nội bào được thực hiện theo tài liệu trước đó với những sửa đổi nhỏ (22). Tóm lại, các tế bào khối u ác tính được ly giải bằng dung dịch đệm ly giải (1 mM PMSF, 1 phần trăm Triton X-100, 20 mM natri photphat) bằng cách làm đông-tan. Sau khi ly tâm dịch ly giải ở 15,000 g trong 10 phút (4 độ ), hàm lượng protein của phần nổi phía trên được xác định bằng xét nghiệm axit bicinchoninic (BCA). Protein nổi phía trên (10 mg) được chuyển vào 100 mL hỗn hợp phản ứng (0,1 phần trăm L-DOPA và đệm phốt phát 0,1 M). Sau 60 phút ủ ở 37 độ, hoạt tính tyrosinase được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 450 nm. Tất cả các thí nghiệm đã được thực hiện trong ba lần.

Sắt sắt làm giảm điện năng

Thử nghiệm năng lượng khử sắt sắt được thực hiện theo một phương pháp đã được công bố trước đó với những sửa đổi nhỏ (23). Các nồng độ khác nhau của mẫu (2 mL) hoặc Vc (đối chứng dương tính) được trộn với 2 mL kali ferricyanua (1 phần trăm , W/V) và 2 mL dung dịch đệm phốt phát (0.2 M, pH 6,8). Sau khi ủ ở 50 độ trong 30 phút, 2 mL axit trichloroacetic (10 phần trăm , W/V) được chuyển vào hỗn hợp phản ứng và ly tâm ở 4000 g trong 15 phút (22 độ). Phần nổi phía trên (2 mL) được trộn với hỗn hợp chứa 2 mL nước cất và 0,4 mL FeCl3 (0,1 phần trăm , W/V). Sau 10 phút ủ ở 37 độ, độ hấp thụ được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 700 nm.

Thử nghiệm hoạt động nhặt gốc tự do DPPH

Thử nghiệm hoạt động nhặt rác DPPH đã được thực hiện như đã báo cáo trước đây với một số sửa đổi (24). Tóm lại, 2 mL mẫu được thêm vào 2 mL 0.1 mM DPPH và xoáy. Sau 30 phút ủ trong bóng tối, độ hấp thụ được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 517 nm.

Phân tích biểu hiện protein của Western blot

cistanche supplement whitening

Sau khi xử lý với các nồng độ ECPS khác nhau trong 72 giờ, các tế bào được rửa bằng PBS và được ly giải trong dung dịch đệm RIPA (150 mM NaCl trong 50 mM pH 8.0 Tris-HCl , 0.5% natri deoxycholate, 1,0% nondiet P-40 và 0,1% natri dodecyl sulfat). Sau khi ly tâm ở 10,000 g trong 25 phút (4 độ ), phần nổi phía trên của dung dịch ly giải được thu lại. Các protein được xử lý với 12% SDS-PAGE và sau đó được chuyển sang màng polyvinylidene Diflorua. Quá trình tạo khối được thực hiện trong dung dịch muối đệm Tris với Tween-20 và sữa bột gầy 2 phần trăm (TBST), sau đó ủ trong 12 giờ ở 4 độ . Các kháng thể chính được sử dụng là: kháng actin (1:5000), kháng TRP-1 (1:500), kháng tyrosinase (1:500) và kháng MITF (1:1000). Các kháng thể sơ cấp đã được loại bỏ và màng được làm sạch hai lần bằng TBST. Sau đó, các màng có kháng thể thứ cấp kết hợp với peroxidase cải ngựa (Santa Cruz, Hoa Kỳ) được ủ trong 60 phút ở nhiệt độ phòng. Các dải protein được rửa lại bằng TBST và hiển thị bằng bộ ECL (Amersham Pharmacia Biotech, USA) bằng hệ thống hình ảnh UVP (UVP, USA).

Phân tích thống kê

Tất cả các kết quả được báo cáo là phương tiện ± SD và các thí nghiệm được nhân rộng ba lần. So sánh giữa các nhóm được ước tính bằng ANOVA, sau đó là thử nghiệm của Dunnett. So sánh đơn lẻ giữa hai nhóm được thực hiện bằng bài kiểm tra t của Sinh viên. Tất cả các phân tích thống kê được thực hiện bằng phần mềm SPSS (phiên bản 16.0). Po0.05 thường được coi là có ý nghĩa thống kê.

Kết quả

Mw và tổng số polysacarit của ECPS và CPS

Tổng hàm lượng polysacarit của ECPS và CPS được đo bằng xét nghiệm axit phenol-sunfuric lần lượt là 89,17 và 90,26 phần trăm. Trong khi đó, Mw của ECPS và CPS được đo bằng SEC-MALLS-RI. Mw của ECPS là 211,7 kDa, thấp hơn CPS (434,6 kDa). Hình 1A cho thấy cường độ tương đối (RI) đối với ECPS và CPS; sau khi thủy phân bằng mannose bằng enzym, thời gian lưu đỉnh của ECPS dài hơn so với CPS. Như được hiển thị trong Hình 1B, các phân số trọng lượng khác nhau của polysacarit được mô tả là hàm của khối lượng phân tử đối với các mẫu. Sự phân bố khối lượng mol của polysacarit thay đổi đáng kể khi thủy phân bằng enzym. Phần trọng lượng chênh lệch của ECPS ở vùng Mw thấp tăng lên, điều này cho thấy rằng CPS đã bị phân hủy bằng enzym thành polysacarit Mw thấp.

rou cong rong benefits

Hoạt động chống oxy hóa của polysaccharid

Khả năng nhặt gốc tự do DPPH của ECPS và CPS được báo cáo trong Hình 2A. Các hoạt động nhặt gốc tự do của các mẫu polysacarit và Vc thể hiện một hoạt động phụ thuộc vào liều lượng. Trong nghiên cứu hiện tại, khả năng nhặt gốc tự do của CPS thấp hơn so với ECPS. Tuy nhiên, cả hai đều thể hiện tác dụng nhặt gốc tự do thấp hơn so với mẫu dương tính. Giá trị IC50 của ECPS và CPS lần lượt là 0.39 và 0.51 mg/mL. Như được hiển thị trong Hình 2B, tổng hoạt tính chống oxy hóa có thể được đánh giá bằng cách kiểm tra khả năng khử sắt của sắt. Nồng độ thay đổi từ 0,1 đến 1 mg/mL; cả hai mẫu polysacarit và Vc đều thể hiện hoạt tính chống oxy hóa theo cách phụ thuộc vào liều lượng. Hơn nữa, giá trị độ hấp thụ của ECPS luôn cao hơn CPS ở cùng nồng độ.

Ảnh hưởng của ECPS và CPS đối với hoạt động tyrosinase của nấm và khả năng sống của tế bào

Như thể hiện trong Hình 2C, hoạt tính ức chế tyrosinase của polysacarit (0.1B1 mg/mL) thể hiện mối quan hệ phụ thuộc vào liều lượng. Hơn nữa, tác dụng ức chế của ECPS luôn cao hơn CPS ở cùng nồng độ. Thử nghiệm MTT được thực hiện để đánh giá tác động gây độc tế bào của ECPS và CPS trong các tế bào u ác tính B16F10. Như được hiển thị trong Hình 2D, không có thay đổi đáng kể nào về khả năng tồn tại của tế bào B16F10 với các nồng độ khác nhau (0B320 mg/mL) của ECPS và CPS. Dựa trên những kết quả này, chúng tôi đã sử dụng các phạm vi nồng độ này trong

nghiên cứu thêm.

cistanche for sale

Ảnh hưởng của ECPS và CPS đối với hoạt động tyrosinase nội bào và hàm lượng melanin

Để so sánh tác động của ECPS và CPS đối với hoạt động của tyrosinase nội bào và quá trình tạo hắc tố trong mô hình tế bào u ác tính B16F10, hiệu lực ức chế của ECPS và CPS đối với hàm lượng melanin và hoạt động tyrosinase trong B16F1 được kích thích bằng a-MSH{{ 16}} ô đã được kiểm tra. Như được hiển thị trong Hình 3, hàm lượng melanin và hoạt tính tyrosinase của các tế bào B16F10 tăng đáng kể khi so sánh với các tế bào B16F10 chưa được kích thích (Po 0.01). Ở nồng độ 40 mg/mL (ECPS) và 160 mg/mL (CPS), sự gia tăng hàm lượng melanin có thể được giảm thiểu theo cách phụ thuộc vào liều lượng ( P <0,01 và P <0,05). Tương tự, điều trị bằng ECPS (40 mg/mL) và CPS (160 mg/mL) đã ức chế hoạt động tyrosinase của các tế bào B16F10 (Po 0,01 và Po0,05). Hơn nữa, ECPS thể hiện hoạt tính ức chế tyrosinase đối với quá trình tạo hắc tố cao hơn so với CPS. ECPS (160 và 320 mg/mL) có tác dụng chống lại sự hình thành hắc tố so với đối chứng dương tính (axit Kojic), được sử dụng rộng rãi như một hợp chất hoạt tính sinh học làm trắng da.

how to take rou cong rong

Ảnh hưởng của ECPS đến mức protein tyrosinase, MITF và TRP-1 trong các tế bào B16F10

Như được hiển thị trong Hình 4, ECPS làm giảm đáng kể mức độ biểu hiện protein tyrosinase, MITF và TRP-1 trong các tế bào B16F10 theo cách phụ thuộc vào liều lượng (Po0.05 và Po0. 01). Những kết quả này cho thấy rằng ECPS đã ức chế sự biểu hiện của tyrosinase bằng cách điều chỉnh giảm biểu hiện protein của TRP-1 và MITF.

Cuộc thảo luận

Các polysacarit tự nhiên từ C. chinensis đã nhận được sự chú ý do tác dụng tốt của chúng trong việc ức chế tyrosinase, loại bỏ gốc tự do và bảo vệ da (25–27). Tuy nhiên, có rất ít nghiên cứu tập trung vào hoạt động chống tạo hắc tố của quá trình biến đổi polysaccharid bằng enzym. Nghiên cứu trước đây đã chứng minh rằng các polysacarit bị phân hủy do quá trình thủy phân bằng enzym thể hiện tác dụng loại bỏ gốc tự do vượt trội (28). Hơn nữa, các hoạt động sinh học của polysacarit có liên quan chặt chẽ với sự phân bố Mw của chúng. Về mặt lý thuyết, các polysacarit có Mw thấp hoạt động mạnh hơn các polysacarit có Mw cao do đặc tính thâm nhập cao của chúng trên màng tế bào (29,30). Tuy nhiên, tác dụng chống tạo hắc bào của ECPS trên các tế bào B16F10 vẫn chưa được nghiên cứu. Polysacarit Mw thấp được điều chế bằng cách thủy phân enzyme với mannose.

Stress oxy hóa có thể tạo ra quá nhiều gốc tự do và dẫn đến tổn thương oxy hóa. Các nghiên cứu trước đây đã chứng minh rằng bệnh về da có liên quan mật thiết đến sự tích tụ của các gốc tự do (31). Hơn nữa, các gốc tự do quá mức đóng một vai trò quan trọng trong việc ngăn chặn quá trình tạo hắc tố của các tế bào khối u ác tính và sự phát triển của các tế bào hắc tố (32). Tyrosinase là một loại enzyme oxy hóa đa chức năng có chứa đồng và rất quan trọng trong việc thúc đẩy quá trình sinh tổng hợp melanin (33). Tuy nhiên, sắc tố da và các bệnh về da khác nhau có liên quan mật thiết đến sự tích tụ hắc tố và gây ra các vấn đề nghiêm trọng về mặt thẩm mỹ (34).

Các hoạt chất có khả năng chống oxy hóa và chống tyrosinase có thể bảo vệ da và ức chế quá trình hình thành hắc tố (35). Kết quả của chúng tôi đã chứng minh rằng Mw thấp hơn của các polysacarit biến đổi enzyme thể hiện các hoạt động chống oxy hóa và chống tyrosinase vượt trội so với các polysacarit ban đầu trong ống nghiệm. Sự cải thiện này là do diện tích bề mặt lớn hơn và khả năng hòa tan trong nước tốt hơn, điều này phù hợp với một nghiên cứu trước đây (17) cho thấy rằng polysacarit bị phân hủy từ Sargassum fusiforme có hoạt tính chống tyrosinase và hoạt tính chống oxy hóa vượt trội so với polysacarit ban đầu.

cistanche reddit whitening

Các tế bào hắc tố bình thường nằm ở phần tiếp giáp của lớp biểu bì và trung bì của da và tạo ra hắc tố, được chuyển đến tế bào sừng (36). Trong nghiên cứu hiện tại, các tế bào u ác tính B16F10 ở chuột đã được sử dụng vì chúng có cơ chế tạo hắc tố, được biết là có tyrosinase nội bào và có thể tạo ra hắc tố, có liên quan đến kích thích a-MSH và quá trình tạo hắc tố (37). Hoạt tính tyrosinase, hàm lượng melanin và khả năng tồn tại của tế bào là các xét nghiệm in vitro được sử dụng để sàng lọc quá trình tạo tế bào già trong nghiên cứu hiện tại. CPS và ECPS thể hiện tác dụng ức chế phụ thuộc vào liều lượng đối với hoạt động tyrosinase và sự tổng hợp hắc tố trong các tế bào B16F10. ECPS cho thấy tác dụng chống tổng hợp melanin và chống tyrosinase mạnh hơn.
Protein liên quan đến tyrosinase-1 (TRP-1) và tyrosinase đóng một vai trò quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp melanin và quá trình hình thành hắc tố (38). MITF là một yếu tố phiên mã tế bào của gen tyrosinase, tham gia vào quá trình tạo hắc tố. Thông thường, việc kích hoạt TRP-1 và tyrosinase giúp tăng cường biểu hiện protein MITF và gây ra sự gia tăng tổng hợp melanin (39). Do đó, các chất làm trắng da có thể có đặc tính ức chế đường truyền tín hiệu liên quan đến việc kích hoạt TYP-1 hoặc tyrosinase. Do đó, chúng tôi đã nghiên cứu tác động của ECPS đối với các biểu hiện protein TRP-1, tyrosinase tế bào và MITF để nghiên cứu các cơ chế ức chế hoạt động tyrosinase và quá trình tạo hắc tố. Kết quả của xét nghiệm Western blot cho thấy ECPS ngăn chặn sự biểu hiện của TRP-1, tyrosinase và MITF trong các tế bào B16F10 và ngụ ý rằng ECPS làm giảm sự hình thành hắc tố bằng cách điều chỉnh giảm biểu hiện tyrosinase, MITF và TRP-1 trong các tế bào khối u ác tính B16F10. Kết quả từ một nghiên cứu trước đây cho thấy dịch chiết từ hạt Cuscuta japonica đã ức chế đáng kể quá trình tổng hợp melanin do a-MSH gây ra và hoạt động tyrosinase bằng cách ức chế quá trình phosphoryl hóa p38 MAPK, ức chế mức cAMP và sau đó làm giảm biểu hiện của TRP và MITF (40) .
Tóm lại, polysacarit biến đổi enzym sở hữu tác dụng chống oxy hóa và chống tạo hắc tố vượt trội so với polysacarit ban đầu. Hơn nữa, tác dụng chống tạo hắc tố này của ECPS được trung gian bởi sự ức chế biểu hiện TRP-1, tyrosinase và MITF trong các tế bào B16F10 của chuột. ECPS có thể được áp dụng để sử dụng trong các lĩnh vực mỹ phẩm và sản phẩm y tế.

Sự nhìn nhận

Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ khoa học tự nhiên quốc gia Trung Quốc (cấp số 81373640).

Người giới thiệu

1. Riley PA. Melanogenogen và khối u ác tính. Nghiên cứu tế bào sắc tố 2003; 16: 548–552, doi: 10.1034/j.1600-0749. 2003.00069.x.
2. Ortonne JP, Bissett DL. Thông tin chi tiết mới nhất về tình trạng tăng sắc tố da. J Investig Dermatol Symp Proc 2008; 13:10–14, doi:10.1038/jidsymp.2008.7.
3. Arung ET, Kuspradini H, Kusuma IW, Shimizu K, Kondo R. Xác thực lá Eupatorium triplinerve Vahl, một loại thảo mộc chăm sóc da từ Đông Kalimantan, Sử dụng Xét nghiệm Sinh tổng hợp Melanin. J Acuunct Meridian Stud 2012; 5:87–92, doi: 10.1016/ j.jams.2012.01.003.
4. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jiménez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T, et al. Protein liên quan đến Tyrosinase 1 (TRP1) hoạt động như một DHICA oxidase trong quá trình sinh tổng hợp melanin. EMBO J 1994; 13:5818–5825.
5. Costin GE, VJ điều trần. Sắc tố da người: tế bào hắc tố điều chỉnh màu da để đáp ứng với căng thẳng. FASEB J 2007; 21: 976–994, doi: 10.1096/fj.06-6649rev.
6. Galván I, Alonso-Alvarez C. Một chất chống oxy hóa nội bào xác định biểu hiện của tín hiệu dựa trên melanin ở chim. PLoS One 2008; 3: e3335, doi: 10.1371/journal.pone. 0003335.
7. Yang J, Wang Y, Bao Y, Guo J. Tổng số flflavone từ Semen auscultate đảo ngược tình trạng giảm mức testosterone và biểu hiện của gen thụ thể androgen ở chuột bị thiếu thận-dương. J Ethnopharmacol 2008; 119:166–171, doi: 10.1016/j.jep.2008.06.027.
8. Donnapee S, Li J, Yang X, Ge AH, Donkor PO, Gao XM, et al. Cuscuta chinensis Lam.: Một đánh giá có hệ thống về dân tộc học, hóa thực vật và dược lý của một loại thuốc thảo dược truyền thống quan trọng. J Ethnopharmacol 2014; 157: 292–308, doi: 10.1016/j.jep.2014.09.032.
9. Nisa M, Akbar S, Tariq M, Hussain Z. Tác dụng của chiết xuất nước Cuscuta chinensis đối với 7,12-dimethylbenz[a]anthracene gây ra u nhú trên da và ung thư biểu mô ở chuột. J Ethnophar macol 1986; 18:21–31, doi: 10.1016/0378-8741(86)90040-1.
10. Wang TJ, An J, Chen XH, Deng QD, Yang L. Đánh giá tác dụng của hạt Cuscuta chinensis đối với sự hình thành hắc tố: So sánh các phần nước và ethanol in vitro và in vivo. J Ethnopharmacol 2014; 154: 240–248, doi: 10.1016/j.jep. 2014.04.016.
11. Sun SL, Guo L, Ren YC, Wang B, Li RH, Qi YS, et al. Tác dụng chống chết tế bào của polysacarit được phân lập từ hạt Cuscuta chinensis Lam đối với tế bào cơ tim ở chuột già. Đại diện Mol Biol 2014; 41: 6117–6124, doi: 10.1007/s11033- 014-3490-1.
12. Wang Z, Fang JN, Ge DL, Li XY. Đặc tính hóa học và các hoạt động miễn dịch của một polysacarit có tính axit được phân lập từ hạt của Cuscuta chinensis Lam. Acta Pharmacol Sin 2000; 21:1136–1140.
13. Yang S, Xu X, Xu H, Xu S, Lin Q, Jia Z, et al. Thanh lọc, đặc tính hóa và tác dụng sinh học của việc đảo ngược sự thiếu hụt thận-dương của polysacarit từ cơ Semen. Carbonhydr Polym 2017; 175: 249–256, doi: 10.1016/j.carbpol. 2017.07.077.
14. Katayama S, Nishio T, Nishimura H, Saeki H. Các đặc tính điều hòa miễn dịch của chiết xuất polysacarit có độ nhớt cao từ tảo Gagome (Kjellmaniella crassifolia). Thực phẩm dinh dưỡng thực vật cho con người 2012; 67: 76–81, doi: 10.1007/s11130-011- 0271-z.
15. Pengzhan Y, Ning L, Xiguang L, Gefei Z, Quanbin Z, Pengcheng L. Tác dụng chống tăng lipid máu của các polysacarit sunfat có trọng lượng phân tử khác nhau từ Ulva pertusa (Chlorophyta). Dược phẩm Res 2003; 48: 543–549, doi: 10.1016/ S1043-6618(03)00215-9.
16. Jiang Y, Qi X, Gao K, Liu W, Li N, Cheng N, et al. Mối quan hệ giữa trọng lượng phân tử, thành phần monosacarit và hoạt động sinh học miễn dịch của polysacarit Astragalus. Glycoconj J 2016; 33: 755–761, doi: 10.1007/ s10719-016-9669-z.
17. Chen BJ, Shi MJ, Cui S, Hao SX, Hider RC, Zhou T. Cải thiện hoạt động chống oxy hóa và chống tyrosinase của polysacarit từ Sargassum fusiforme bằng cách phân hủy. Int J Biol Macromol 2016; 92: 715–722, doi: 10.1016/j.ijbiomac. 2016.07.082.
18. BV McCleary. Sửa đổi enzyme của polysacarit thực vật. Int J Biol Macromol 1986; 8: 349–354, doi: 10.1016/ 0141-8130(86)90054-1.
19. Baurin N, Arnoult E, Scior T, Do QT, Bernard P. Sàng lọc sơ bộ một số loài thực vật nhiệt đới cho hoạt tính kháng tyrosinase. J Ethnopharmacol 2002; 82: 155–158, doi: 10.1016/S0378- 8741(02)00174-5.
20. Mosmann T. Xét nghiệm đo màu nhanh cho sự phát triển và sống sót của tế bào: Ứng dụng cho xét nghiệm tăng sinh và độc tính tế bào. Phương pháp miễn dịch J 1983; 65: 55–63, doi: 10.1016/0022- 1759(83)90303-4.
21. Hosoi J, Abe E, Suda T, Kuroki T. Điều chỉnh quá trình tổng hợp hắc tố của các tế bào khối u ác tính ở chuột B16 bằng 1 alpha, 25-dihydroxy vitamin D3 và axit retinoic. Ung thư Res 1985; 45:1474–1478.
22. Wang HM, Chen CY, Wen ZH. Xác định các chất ức chế sinh hắc tố từ Cinnamomum subavenium bằng các hệ thống sàng lọc in vitro và in vivo bằng cách nhắm mục tiêu tyrosinase của con người. Exp Dermatol 2011; 20: 242–248, doi: 10.1111/j.1600-0625. 2010.01161.x.

23. Berker KI, Güc ¸lü K, Tor I˙, Apak R. Đánh giá so sánh các thử nghiệm khả năng chống oxy hóa dựa trên năng lượng làm giảm Fe(III) với sự có mặt của phenanthroline, bat-ho-phenanthroline, tripyridyltriazine (FRAP) và ferricyanide thuốc thử. Talanta 2007; 72: 1157-1165, doi: 10.1016/j.talanta.2007.01.019.

24. Parejo I, Codina C, Petrakis C, Kefalas P. Đánh giá hoạt động nhặt rác được đánh giá bởi quá trình phát quang hóa luminol do Co(II)/EDTA gây ra và DPPH ● (2,2-diphenyl-1 picryl hydroxyl ) xét nghiệm gốc tự do. J Pharmacol Toxicol Methods 2000; 44: 507–512, doi: 10.1016/S1056-8719(01)00110-1.

25. Rout S, Banerjee R. Các đặc tính ức chế gốc tự do, chống glycation và tyrosinase của một phần polysacarit được phân lập từ vỏ của Punica granatum. nguồn sinh học
Công nghệ 2007; 98:3159–3163, doi:10.1016/j.biortech.2006. 10.011.
26. Yu P và Sun H. Tinh chế fucoidan từ polysacarit tảo bẹ và động học ức chế tyrosinase của nó. Polyme cacbohydrat 2014; 99: 278-283, doi: 10.1016/ j.carbpol.2013.08.033.
27. Wei X, Liu Y, Xiao J, Wang Y. Tác dụng bảo vệ của polysacarit và polyphenol trong trà đối với da. Hóa chất Thực phẩm Nông nghiệp J 2009; 57: 7757–7762, doi: 10.1021/jf901340f.
28. Xu J, Xu LL, Zhou QW, Hao SX, Zhou T, Xie HJ. Tăng cường hoạt động chống oxy hóa trong ống nghiệm của polysacarit từ Enteromorpha prolifera bằng cách phân hủy enzyme. J Food Biochem 2016; 40:275–283, doi:10.1111/jfbc.12218.
29. Zhou J, Hu N, Wu Yl, Pan Yj, Sun CR. Các nghiên cứu sơ bộ về đặc tính hóa học và đặc tính chống oxy hóa của các polysacarit có tính axit từ Sargassum fusiforme. J Chiết Giang Đại học Khoa học B 2008; 9: 721–727, doi: 10.1631/jus. B0820025.
30. Wu Q, Zheng C, Ning ZX, Yang B. Biến đổi các polysacarit trọng lượng phân tử thấp từ Tremella fuciformis và hoạt tính chống oxy hóa của chúng trong ống nghiệm. Int J Mol Khoa học 2007; 8: 670–679, doi 10.3390/i8070670.
31. Yasui H, Sakurai H. Sự tạo ra các loại oxy phản ứng phụ thuộc vào độ tuổi trên da của những con chuột trụi lông sống tiếp xúc với tia UVA. Exp Dermatol 2003; 12: 655–661, doi: 10.1034/ j.1600-0625.2003.00033.x.
32. Yamakoshi J, Otsuka F, Sano A, Tokutake S, Saito M, Kikuchi M, et al. Tác dụng làm sáng da do tia cực tím gây ra trên da chuột lang bằng cách uống chiết xuất giàu proanthocyanidin từ hạt nho. Tế bào sắc tố Res 2003; 16: 629–638, doi: 10.1046/j.1600-0749. 2003.00093.x.
33. Strothkamp KG, Jolley RL, Mason HS. Cấu trúc bậc bốn của tyrosinase nấm. Biochem Biophys Res Common 1976; 70: 519–524, doi 10.1016/0006-291X(76)91077-9.
34. Parvez S, Kang M, Chung HS, Bae H. Các chất ức chế tyrosinase tự nhiên: cơ chế và ứng dụng trong các ngành công nghiệp chăm sóc sức khỏe da, mỹ phẩm và nông nghiệp. Phytother Res 2007; 21:805–816, doi:10.1002/ptr.2184.

35. Perluigi M, De Marco F, Foppoli C, Coccia R, Blarzino C, Luisa Marcante M, et al. Tyrosinase bảo vệ các tế bào hắc tố của con người khỏi các hợp chất tạo ra ROS. Biochem Biophys Res Common 2003; 305: 250–256, doi: 10.1016/S0006- 291X(03)00751-4.

36. Hirobe T. Sự tăng sinh và biệt hóa của tế bào hắc tố được điều hòa như thế nào? Tế bào sắc tố Melanoma Res 2011; 24: 462–478, doi: 10.1111/j.1755-148X.2011.00845.x.
37. Buscà R, Ballotti R. Cyclic AMP một sứ giả quan trọng trong việc điều chỉnh sắc tố da. tế bào sắc tố Res 2000; 13: 60–69, doi: 10.1034/j.1600-0749.2000.130203.x.
38. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Sắc tố melanin ở da động vật có vú và sự điều hòa nội tiết tố của nó. Vật lý trị liệu Rev 2004; 84: 1155–1228, doi: 10.1152/physrev. 00044.2003.
39. Shibahara S, Yasumoto KI, Amae S, Udono T, Watanabe KI, Saito H, et al. Điều chỉnh biểu hiện gen đặc hiệu của tế bào sắc tố bằng MITF. tế bào sắc tố Res 2000; 13: 98-102, doi: 10.1034/j.1600-0749.13.s8.18.x.
40. Jang JY, Kim HN, Kim YR, Choi YH, Kim BW, Shin HK, et al. Một phần nước từ hạt Cuscuta japonica ngăn chặn sự tổng hợp hắc tố thông qua ức chế con đường truyền tín hiệu protein kinase hoạt hóa bằng mitogen p38 trong các tế bào B16F10. J Ethnopharmacol 2012; 141: 338–344, doi: 10.1016/j.jep. 2012.02.043.
Bạn cũng có thể thích