Tương tác giữa chất chống oxy hóa polyphenolic Quercetin và Naringenin quyết định Hành vi hóa học và sinh học liên quan đến oxy hóa khử đặc biệt của hỗn hợp của chúng Phần 2

Xin vui lòng liên hệoscar.xiao@wecistanche.comđể biết thêm thông tin

Q ở nồng độ lên tới 1 μM cũng có xu hướng làm giảm sự biểu hiện của ALOX12 và MT3 (0. 05<><0.09) as="" well="" as="" sod2="" and=""><><0.09).the latter="" gene="" codes="" for="" a="" protein="" that="" belongs="" to="" the="" family="" of="" thioredoxins="" and="" acts="" as="" an="" endogenous="" antioxidant="" facilitating="" the="" reduction="" of="" other="" proteins8.in="" contrast,="" to="" n-,o="" at="" 1="" um="" up-regulated="" gtf2i=""><0.05).the other="" genes="" whose="" expression="" was="" significantly="" elevated="" by="" q="" at="" l="" μm="" were="" gsr,="" hspa1a,="" ptgsi,="" and="" txnrd1;="" all="" play="" key="" roles="" in="" building="" cellular="" defenses="" against="" oxidants.="" up-regulation="" of="" gsr="" is="" crucial="" for="" maintaining="" redox="">cân bằng nội môitrong tế bào vì protein được mã hóa duy trì mức độ cao của glutathione đã giảm trong tế bào39. Đổi lại, HSPAlA chaperone là cần thiết để sửa bất kỳ sự sắp xếp sai nào xảy ra, cũng như những lỗi do tiếp xúc vớichất chống oxy hóa. Chất sau có thể chuyển cân bằng oxy hóa khử sang trạng thái giảm, dẫn đến khả năng giảm các cầu nối disulfua đếnsulfhydryl

nhóm và do đó thay đổi cấu trúc protein và do đó hoạt động 0. Gen PTGS1 mã hóa một protein là một thành viên thú y khác của họ enzyme chống oxy hóa, cụ thể là prostaglandin synthase -241, gen thứ tư được đề cập-TXNRD {{4 }} mã cho men khử thioredoxin giữ thioredoxin (TXN) ở trạng thái giảm2.

Vui lòng bấm vào đây để biết thêm

Tương tự với 1 μM, Q ở nồng độ cao hơn （10 μM） cũng làm giảm biểu hiện TXN （p<0.05） and="" sod2=""><><0.09). furthermore,="" a="" drop="" in="" expression="" was="" observed="" for="" sod1=""><><0.09). the="" investigated="" flavonol="" at="" 10μm="" influenced="" the="" expression="" of="" also="" 4="" genes="" up-regulated="" by="" its="" lower="" concentration∶="" gsr,="" hspa1a,="" ptgs1,="" and="" txnrd2=""><0.05). the="" additional="" up-regulated="" genes="" by="" the="" higher="" q="" concentration="" included="" gstz1="" and="" stk25=""><0.05) as="" well="" as="" gpx4="" and="" sirt2=""><><0.09). the="" protein="" encoded="" by="" gstz1="" is="" a="" member="" of="" the="" glutathione="" s-transferase="" family="" that="" are="" key="" enzymes="" implicated="" in="" the="" detoxification="" of="" electrophilic="" molecules="" by="" conjugation="" with="" gsh4,="" while="" stk25="" codes="" for="" serine/threonine="" kinase="" 25,="" a="" protein="" activated="" by="" oxidative="" stress="" that="" induces="" apoptotic="" cell="" death.="" in="" turn,="" gpx4="" codes="" for="" glutathione="" peroxidase="" 4,="" which="" supports="" the="" antioxidant="" barrier="" of="" the="" cell="" by="" catalyzing="" the="" reduction="" of="" peroxides="" by="" glutathione="" the="" up-regulation="" of="" sirt2,="" encoding="" nad-dependent="" protein="">deacetylase, loại bỏ các lysine bên trong, ví dụ như histone hoặc các yếu tố phiên mã, đóng một vai trò trong việc điều chỉnh các quá trình sinh học quan trọng, chẳng hạn như kiểm soát chu kỳ tế bào, sự khác biệt của tế bào hoặc tính toàn vẹn của bộ gen, 46.

Cistanche có thể cải thiện khả năng miễn dịch

Hỗn hợp aglycones ở l μM làm giảm sự biểu hiện của APOE, CCL5, MT3 và MSRA đến mức đạt được ý nghĩa thống kê (p<0.05). the="" apolipoprotein="" encoded="" by="" apoe="" is="" a="" core="" component="" of="" plasma="" lipoproteins="" and="" is="" involved="" in="" their="" production,="" conversion,="" and="" clearance47.="" the="" protein="" encoded="" by="" msra="" carries="" out="" the="">có menkhử methionine sulfoxide thành methionine, do đó protein này có chức năng sửa chữa các protein bị hư hỏng do oxy hóa để khôi phục hoạt tính sinh học8. Hỗn hợp QN ở 10 μM, tương tự với liều thấp hơn, làm giảm biểu hiện của APOE, MT3 và MSRA (p<0.05). however="" at="" a="" higher="" concentration.="" the="" set="" of="" down-regulated="" genes="" was="" extended="" to="" incorporate="" cygb="" and=""><0.05). the="" latter="" gene="" sepp1="" encodes="" selenoprotein="" p="" the="" extracellular="">glycoproteincó vai trò chống oxy hóa và dường như liên kết với các tế bào nội mô49. Hỗn hợp chỉ QN làm tăng nhẹ sự biểu hiện của gen PRDX5 mã cho một thành viên của họ peroxiredoxin của các enzym chống oxy hóa, có vai trò là khử hydro peroxit và alkylhydroperoxit50.

Thảo luận

Cơ sở khoa học của các quan sát dịch tễ học cho thấy toàn bộ trái cây và rau quả có hiệu quả hơn trong việc ngăn ngừa các bệnh mãn tính không lây nhiễm so với các hợp chất hoạt tính sinh học được phân lập từ chúng còn chưa được hiểu rõ. Khái niệm sức mạnh tổng hợp thực phẩm, giả định ảnh hưởng của phụ gia hoặc thậm chí hiệp đồng của các thành phần thực phẩm khác nhau đối với sức khỏe con người, đã được đề xuất như một lời giải thích khả thi. Tuy nhiên, lý do như vậy đã bị phá hoại ở một mức độ nào đó bởi nghiên cứu trước đây của chúng tôi, trong đó chúng tôi so sánh hoạt tính sinh học của các loại rau có sắc tố khác nhau (cải cúc) cũng như các loại trái cây mọng, có chứa anthocyanins màu trắng và không tìm thấy mô hình hoạt động nào có thể được quy cho các giống màu, với ngoại lệ của hoạt động chống oxy hóa cao hơn trong các thử nghiệm hóa học51. Các hiệu ứng logic sinh học cũng không phù hợp với các hiệu ứng của cyanidin -3- O-glucoside cô lập được khảo sát ở nồng độ xảy ra trong nguyên liệu thực vật được nghiên cứu12. Các nghiên cứu cơ học sâu hơn về hoàn nguyên ca cao cũng không cho thấy tác dụng sinh học cộng / hiệp đồng của hỗn hợp các thành phần như dự đoán của khái niệm sức mạnh tổng hợp thực phẩm, mà là hoạt tính sinh học bị thay đổi hoàn toàn3. Các hỗn hợp sau đó của polyphenol cacao dường như hoạt động như những chất mới. Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng sự tương tác giữa các thành phần riêng lẻ trong hỗn hợp có thể tạo ra một thực thể mới hiển thị các đặc tính hóa lý đã được sửa đổi dẫn đến các hoạt động sinh học mới. Thật vậy, sự đa dạng của các tương tác có thể có giữa các polyphenol (hydro, n, kỵ nước, chelat, cộng hóa trị và tĩnh điện), được phát hiện trong quá trình nghiên cứu về ứng dụng của chúng làm chất ổn định của các hạt nano tự lắp ráp, đã được chứng minh là tạo ra một loạt cấu trúc khác nhau về chức năng. Người ta cũng quan sát thấy rằng những chất phytochemical này thường tạo ra nhiều hơn một loại lực hấp dẫn ổn định. Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã tìm hiểu tác động của việc thường xuyên cạnh tranh tương tác trong một hỗn hợp chỉ gồm hai chất chống oxy hóa polyphenolic tác động đến các hoạt động liên quan đến oxy hóa khử của nó như thế nào so với các thành phần riêng lẻ.

Chuỗi thí nghiệm đầu tiên tập trung vào xác định hóa học và điện hóa các thông số đặc trưng cho quá trình oxy hóa của flavonoid hỗn hợp và 1: 1 (đại diện của nhóm flavonol và flavanone), riêng biệt ở dạng aglycone (Q N-) và glycoside (R, N cộng) . Mối tương quan giữa các kết quả của các phép đo này được cho trong Hình 8. Các đánh giá ban đầu được thực hiện bởi thử nghiệm lô DPPH phổ biến nhất cho thấy rằng mặc dù cả hai flavanones (N-, N cộng) dường như là chất chống oxy hóa rất yếu, chúng làm tăng hoạt tính chống oxy hóa của hỗn hợp, cả QN và RN plus, theo cách hiệp đồng (Hình. 2A). DPVanalysis đã cung cấp một lời giải thích sâu hơn về hiệu ứng này và chỉ ra tác động quyết định của động học của phản ứng. Hóa ra, các flavanones được nghiên cứu dễ dàng giải phóng các điện tử theo giá trị cao của tham số nhiệt động lực học E, (Hình 2C). Tuy nhiên, động học của quá trình này quá chậm để có thể quan sát được bằng các thử nghiệm DPPH và PT. Các flavanol, chất chống oxy hóa mạnh trong thử nghiệm DPPH và PT, thể hiện trong DPV các đặc tính ngược lại - nhiệt động học không thuận lợi cho sự giải phóng điện tử, nhưng tốc độ quá trình oxy hóa cao. Việc so sánh cấu trúc của các gốc trung gian cho thấy rằng gốc flavonol semiquinone bền hơn gốc phenoxyl flavanone do một số cơ chế ổn định (Hình 1). Do đó, sự ổn định của chất trung gian gốc có tầm quan trọng thiết yếu đối với động học của phản ứng oxy hóa và do đó, đối với hoạt tính khử của các hợp chất được khảo sát.

Hoạt tính chống oxy hóa cuối cùng của các hỗn hợp được nghiên cứu được phóng đại thông qua các yếu tố nhiệt động lực học, tác động thuận lợi đến quá trình oxy hóa, sau đó cải thiện động học phản ứng (Hình 2B-F). Cơ chế chi tiết hơn của sự tăng cường này hiện vẫn chưa được giải thích, hầu hết có lẽ nó liên quan đến các tương tác flavonol / flavanone cụ thể. Sự tăng cường này được quan sát thấy không chỉ trong ống nghiệm mà còn dưới các thế ngoại bào như được chứng minh bằng xét nghiệm CAA, trong đó hoạt động chống oxy hóa của cả hỗn hợp, ON và RN cộng, hoạt động chống oxy hóa thay thế hoạt động chống oxy hóa của các thành phần riêng lẻ (Hình 4). Phần hóa học của các cuộc điều tra của chúng tôi cho thấy sự khác biệt trong hoạt động chống oxy hóa giữa các hợp chất riêng lẻ và hỗn hợp của chúng. Người ta có thể

chỉ ra tầm quan trọng của động học của phản ứng oxy hóa đối với hoạt động chống oxy hóa tổng thể và gợi ý rằng tương tác giữa các thành phần riêng lẻ ảnh hưởng đến tính chất oxy hóa khử của hỗn hợp. Ít nhất phải đúng trong trường hợp này khi sự hiện diện của flavonols (Q, R) trong hỗn hợp làm tăng khả năng tặng electron của flavanones (N-, N cộng).

Phần tiếp theo của nghiên cứu tập trung vào việc so sánh các đặc tính sinh học liên quan đến oxy hóa khử được thể hiện bởi các flavonoid riêng lẻ (O, R, N-, N plus) và hỗn hợp của chúng (ON- và RN plus). Tế bào ung thư ruột kết ở người HT29 được dùng làm mô hình nghiên cứu dinh dưỡng cho đường tiêu hóa ở người3, tuy nhiên, trong nghiên cứu này, một số diễn giải dữ liệu cũng đề cập đến bản chất ung thư của dòng tế bào này. Ngày nay nó đã được chấp nhận rộng rãi, rằng sự cân bằng oxy hóa khử là rất quan trọng cho sự tồn tại và chức năng của tế bào; do đó, việc tiếp xúc với các chất chống oxy hóa ngoại sinh cũng như ROS có thể điều chỉnh nhiều quá trình tế bào. Khi giảm căng thẳng, lượng ROS không đủ có thể làm thay đổi tín hiệu tế bào thông qua các con đường phụ thuộc oxy hóa khử6. Mặt khác, sự dư thừa ROS dẫn đến stress oxy hóa và tăng nguy cơ oxy hóa gây hại cho các thành phần tế bào. Điểm khởi đầu sinh học của nghiên cứu này là đánh giá tác động của các chất chống oxy hóa, riêng lẻ và trong hỗn hợp, đối với sự phát triển của tế bào; hoạt động phụ thuộc vào cân bằng nội môi oxy hóa khử của tế bào, vì nồng độ ROS thích hợp là chìa khóa để kích hoạt tín hiệu kích hoạt tăng sinh tế bào. Kết quả của thử nghiệm khả năng sống sót của tế bào MTT cho thấy sự khác biệt đáng kể giữa các phương pháp điều trị. Các hợp chất tinh khiết không ảnh hưởng đáng kể đến sự tăng sinh tế bào so với các tế bào đối chứng không được xử lý; sự phát triển của tế bào đạt mức không đổi ở phạm vi nồng độ rộng. Ngược lại, cả hai hỗn hợp (QN-, RN cộng) đều kích thích đáng kể sự tăng sinh tế bào. Tác động thứ hai này có thể không nhất thiết chỉ liên quan đến đặc tính chống oxy hóa của hỗn hợp, bởi vì kết quả xét nghiệm CAA đối với O tương tự như kết quả đối với hỗn hợp ON. Tuy nhiên, các hỗn hợp, chứ không phải các thành phần riêng lẻ, dường như đã hỗ trợ các tế bào HT29 tốt hơn để đối phó với ứng suất oxy hóa còn lại, ví dụ bằng cách khôi phục trạng thái oxy hóa khử tối ưu; hiệu quả được quan sát trước đây đối với các chất chống oxy hóa mạnh như catechins55. Mặc dù sự gia tăng hiệp đồng của hoạt động chống oxy hóa được quan sát thấy đối với các hỗn hợp có thể được coi là một tác dụng có lợi, thực tế là sự kết hợp của các chất chống oxy hóa như vậy kích thích sự phát triển của tế bào ung thư là không mong muốn. Ưu và nhược điểm của chất chống oxy hóa và ROS trong ung thư đã là chủ đề tranh luận trong một thời gian và dẫn đến kết luận rằng chất chống oxy hóa có thể thúc đẩy ung thư thông qua các cơ chế phức tạp56 cũng được trình bày ở đây.

Một phát hiện thú vị khác là các tác dụng không mong muốn của các phương pháp điều trị, chẳng hạn như hoạt tính pro-oxy hóa của N được tiết lộ bởi xét nghiệm CAA cũng như độc tính di truyền của Q được quan sát trong xét nghiệm sao chổi đã được làm dịu đi đối với các hỗn hợp. Thử nghiệm sau đó cho thấy tổn thương DNA do nồng độ cao nhất được nghiên cứu (100 uM) của O nguyên chất đã giảm xuống mức kiểm soát đối với nồng độ đẳng cực của hỗn hợp QN- (Hình 5) có thể liên quan đến hoạt động chống oxy hóa được cải thiện của ON -quan sát trong các bài kiểm tra điện hóa. Trong trường hợp đánh giá hoạt động chống oxy hóa tế bào, aglycones thể hiện các đặc tính chống oxy hóa (O) hoặc prooxidant (N-) rõ ràng hơn so với glycoside tương ứng (Hình 4). N- ở nồng độ sinh lý không ghi đè khả năng đệm oxy hóa khử của tế bào HT29 không độc, trong khi ở nồng độ cao hơn nồng độ được tìm thấy trong huyết tương người thể hiện tác dụng oxy hóa ủng hộ phụ thuộc nồng độ giảm theo thời gian tiếp xúc. Nói chung, aglycones đã giảm tác động ban đầu của chúng đối với tình trạng oxy hóa khử của tế bào theo thời gian (Hình 4). Cả hai hỗn hợp đều thể hiện hoạt tính chống oxy hóa tăng cường, dường như không bị ảnh hưởng bởi hiệu ứng oxy hóa ủng hộ đối với các hợp chất riêng lẻ.

Tác động khác biệt của hỗn hợp so với các thành phần riêng lẻ cũng được thấy trong phiên bản biểu sinh của thử nghiệm sao chổi được sử dụng để theo dõi những thay đổi trong quá trình methyl hóa DNA. Các flavonoid riêng lẻ cho thấy xu hướng giảm sự methyl hóa DNA toàn cầu theo cách phụ thuộc vào nồng độ, ngoại trừ R, không ảnh hưởng đến sự biến đổi biểu sinh này (Hình 6). Cả hai hỗn hợp cũng làm giảm mức độ methyl hóa DNA toàn cầu, nhưng không nhận thấy mối tương quan với nồng độ. Điều đáng lưu ý là không chỉ trạng thái oxy hóa khử có thể đóng một vai trò trong việc kết hợp polyphenol, trong trường hợp methyl hóa DNA, mà tác động của các flavonoid đã nghiên cứu dường như không liên quan đến đặc tính khử của chúng. Quá trình khử metyl hoạt động được biết là bao gồm quá trình oxy hóa lặp đi lặp lại của nhóm metyl trong 5- metylcytosine thành cacboxy form5758, do đó, các chất chống oxy hóa sẽ ngăn chặn quá trình này. Trong các thí nghiệm của chúng tôi, chúng tôi đã quan sát thấy tác động ngược lại. Do đó, ở đây rất có thể có một cơ chế khác đã tham gia, đó là sự ức chế DNA methyltransferase (DNMT1) - enzyme xúc tác việc chuyển các nhóm methyl đến các cấu trúc dinucleotide CpG trong DNA. Sự phong tỏa duy trì mô hình methyl hóa dẫn đến quá trình khử methyl thụ động qua các vòng sao chép DNA liên tiếp. Kết quả của chúng tôi phù hợp với các nghiên cứu khác đã chứng minh sự ức chế DNMT1 bằng quercetin9. Ngoài ra, một số flavanones, bao gồm N-đã được chứng minh là có khả năng ức chế hoạt động của DNMT1 trong chiết xuất nhân của tế bào ung thư biểu mô tế bào vảy thực quản ở người {-510. Nghiên cứu của chúng tôi cũng cho thấy rằng trộn Q với N-gây ra sự giảm đáng kể mức độ methyl hóa DNA ở tất cả các nồng độ được thử nghiệm của hỗn hợp này. Một kết quả tương tự đã được quan sát đối với RN plus; tuy nhiên, quá trình hypomethyl hóa DNA xảy ra ở một mức độ thấp hơn. Tất cả những quan sát này có thể được quan tâm theo quan điểm điều trị Mô hình methyl hóa DNA trong bệnh ung thư được đặc trưng bởi một mặt là sự mất methyl hóa toàn cầu tại các cơ quan gen và các vùng liên gen dẫn đến sự suy giảm tính ổn định của bộ gen!, Mặt khác, bởi hypermethyl hóa các vùng giàu CpG trong các promoter và làm im lặng phiên mã biểu hiện của các gen ức chế khối u (TSGs)! Do đó, quá trình hypomethyl hóa DNA gây ra bởi polyphenol có thể khôi phục lại sự biểu hiện của các gen TSGs im lặng và cũng làm tăng dần sự bất ổn định của hệ gen ung thư đến mức dẫn đến chết tế bào.

Các hiệu ứng tế bào được mô tả của polyphenol được nghiên cứu cho thấy rằng không chỉ hàm lượng, thành phần hoặc sinh khả dụng mà còn cả sự tương tác giữa các thành phần điều biến điện hóa cũng như các đặc tính sinh học của hỗn hợp. Kết luận này cũng được hỗ trợ một cách sinh động bởi hoạt động cuối cùng được phân tích trong nghiên cứu này, tức là, điều chế sự biểu hiện của một phổ rộng các gen liên quan đến khả năng bảo vệ chống oxy hóa và phản ứng với stress oxy hóa. Biểu đồ Venn (Hình 7C) tóm tắt tác động của các aglycones flavonoid được khảo sát đối với việc điều chỉnh biểu hiện gen. Trong trường hợp các hợp chất tinh khiết (O, N-) ở 1 uM, chỉ có một gen (GTFZI) được tìm thấy bị ảnh hưởng bởi cả hai flavonoid. Tuy nhiên, N-gây ra sự điều hòa giảm của gen này, trong khi Q tăng sự biểu hiện của nó. Tác động này không được duy trì ở nồng độ cao hơn của các hợp chất tinh khiết cũng như không thấy đối với hỗn hợp của chúng ở bất kỳ liều lượng nào. N và hỗn hợp QN cũng quy định hai gen khác, CCL5 và MT3, ở l μM và ba gen bao gồm CYGB, MT3 và MSRA ở 10uM. Đáng ngạc nhiên nhất là không tìm thấy điểm tương đồng nào về quy định biểu hiện gen giữa Q và QN-cũng như giữa Q, N-và QN-ở bất kỳ nồng độ nào được khảo sát. Hơn nữa, hỗn hợp QN-đã thay đổi đáng kể sự biểu hiện của ba gen khác (điều hòa giảm APOE và SEPPI, điều hòa tăng PRDX5) mà hoạt động phiên mã không bị ảnh hưởng bởi bất kỳ thành phần riêng lẻ nào. Kết luận, nghiên cứu của chúng tôi chứng minh rằng các đặc tính sinh học của hỗn hợp polyphenol không chỉ là sự kết hợp của các hoạt động tăng cường hoặc suy yếu được thể hiện bởi các thành phần riêng lẻ. Những quan sát này chỉ ra rằng hoạt tính sinh học của các chất phytochemical trong hỗn hợp phải là kết quả của sự tương tác giữa các thành phần dẫn đến sự xuất hiện của một chất mới với các đặc tính hóa học và sinh học mới khó dự đoán, các kết quả xác định được thực hiện trong nghiên cứu của chúng tôi không chỉ hỗ trợ , nhưng trên thực tế, mở rộng ý tưởng về khái niệm sức mạnh tổng hợp thực phẩm nhấn mạnh thực tế là ngay cả những thay đổi nhỏ trong thành phần của hỗn hợp các chất hóa thực vật trong thực phẩm (có thể cũng là thành phần thực phẩm có nguồn gốc khác) tạo ra một thực thể mới mà tác động đến sức khỏe con người có thể không nhất thiết giống như vậy của các thành phần riêng lẻ. Khái niệm này làm suy yếu cách thiết kế các chất bổ sung chế độ ăn uống hiện tại, dựa trên các tuyên bố về sức khỏe được thiết lập từ nghiên cứu về các hợp chất cô lập. Từ quan điểm phòng ngừa hóa học trong chế độ ăn uống, nghiên cứu được trình bày giải thích tại sao cách tiếp cận hiện tại nhấn mạnh việc sử dụng các thành phần thực phẩm hoạt tính sinh học biệt lập không thể phù hợp với các quan sát dịch tễ học được thực hiện đối với toàn bộ thực phẩm mà mọi người ăn. Nếu thực phẩm bổ sung mang lại lợi ích sức khỏe lâu dài thực sự cho các cá nhân, điều quan trọng là sự kết hợp của các tác nhân giả định được nghiên cứu cùng nhau và trong bối cảnh sinh học.

Nguyên liệu và phương pháp

Hóa chất, thuốc thử. Các hợp chất hoạt tính sinh học sau đây đã được sử dụng cho nghiên cứu: quercetin (Q), rutin (R), naringin (N cộng), và naringenin (N-) từ Sigma-Aldrich (Mỹ). Metanol cấp phân tích và metanol từ POCH (Ba Lan) cũng như DMSO từ Sigma-Aldrich (Mỹ) đã được sử dụng. Hệ thống QPLUS185 của Millipore (Mỹ) được sử dụng để lọc nước. Để đánh giá hoạt tính chống oxy hóa bằng phép đo quang phổ, 1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH) từ Sigma-Aldrich (Hoa Kỳ) đã được áp dụng. 0. Đệm natri photphat 1 M được điều chế bằng cách hòa tan Na, HPO12H , O và NaH, PO2H, O (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) trong nước khử ion được sử dụng trong các nghiên cứu điện hóa. Điện cực làm việc và tế bào điện hóa được làm sạch bằng dung dịch thuốc tím 10 mM (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) trong 95% H, SO, (y / y) (POCH, Ba Lan). Điện cực so sánh được bảo quản trong KCl 3 M (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ) hòa tan trong nước khử ion. Tất cả các thuốc thử được sử dụng trong nuôi cấy tế bào (PBS, môi trường 5A của McCoy, trypsin, huyết thanh bò thai, kháng sinh) được mua từ Sigma-Aldrich (Mỹ). Dung dịch PBS được chuẩn bị bằng cách hòa tan một viên trong 200 mL nước tinh khiết, Thiazolyl xanh tetrazolium bromide (MTT) từ Sigma-Aldrich (Mỹ) đã được áp dụng trong thử nghiệm MTT. Thử nghiệm chất chống oxy hóa tế bào OxiSelect

Kit được mua từ Cell Biolabs, Inc. (Mỹ). Các thuốc thử sau đây được sử dụng để thử nghiệm sao chổi: axit clohydric (HCl), agarose có điểm nóng chảy thấp (LMP agarose), natri clorua (NaCl, natri hydroxit (NaOH), axit etylendiamintetraacetic (EDTA), 2- amino {{1 }} (hydroxymethyl) -1, 3- propanediol (Trizma-Base), vết gel axit nucleic Sybr Green I và Triton X -100 từ Sigma-Aldrich (Hoa Kỳ) cũng như nấu chảy bình thường agarose điểm (NMP agarose) từ Bioline (Anh). Ngoài ra, trong thử nghiệm sao chổi nhạy cảm với methyl hóa, proteinase K (Merck, Hoa Kỳ), enzym giới hạn (HpalI / MspI) và đệm Tango (Promega, Vương quốc Anh) đã được áp dụng. OIAshredder , RNeasy Mini Kit, RNase-Free DNase set, RT² First Strand Kit, RT²SybrGreen qPCR Mastermix, RT2Profiler PCR Arrays for Oxidative Stress (PAHS 0065) from Qiagen (Germany) đã được sử dụng trong nghiên cứu bộ gen.

Đây là bài viết được trích từwww.nature.com/scientificreports