Nghiên cứu can thiệp của Phenylethyl Alcohol GlycosidesinCistanche trên mô hình động vật mắc hội chứng tiền mãn kinh Ⅱ

Thí nghiệm 1 Điều chế Cistanche phenylethanoid glycoside 1 Nguồn dược liệu

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, số lô: 20130501.

2 thuốc thử

95% ethanol (cấp y tế); Nhựa hấp phụ vĩ mô AB-8, Viện nghiên cứu hóa chất tốt đẹp Quảng Phúc Thiên Tân, số lô: 20130618.

Chất tham chiếu Echinacoside do Viện Kiểm soát Dược phẩm và Sản phẩm Sinh học Trung Quốc cung cấp, số lô: 111670-200503.3

MẤT BAO LÂU ĐỂ CISTANCHE CÓ HOẠT ĐỘNG?

Phương pháp chuẩn bị

Tài liệu tham khảo được thực hiện theo phương pháp tài liệu [19] và được thực hiện dưới sự hướng dẫn của Giáo sư Feng Suxiang từ Khoa Phân tích Thuốc của Trường Cao đẳng Y học Cổ truyền Trung Quốc Hà Nam.xay cistanchethành bột thô, thêm 10 lần lượng etanol 70% để hồi lưu và chiết hai lần, mỗi lần 1,5 giờ, kết hợp hai dịch chiết cồn, cô đặc dưới áp suất giảm cho đến khi không còn mùi rượu và phân tán dùng nước cất (nồng độ 0,5g dược liệu/ml) làm dung dịch mẫu. Đi qua nhựa AB-8 (cột thuốc: nhựa là 1:10), nạp mẫu theo dòng và để yên trong 5 giờ cho đến khi được hấp phụ hoàn toàn. Đầu tiên, rửa bằng 10 lần thể tích cột bằng nước cất, loại bỏ nước và sau đó sử dụng thể tích cột gấp 10 lần. Dùng etanol 10% để loại bỏ tạp chất, cuối cùng rửa giải với thể tích cột gấp 7 lần thể tích cột etanol 60%. Thu lấy dịch rửa giải và làm bay hơi đến khô để thu được bột. 4 Lựa chọn bước sóng đo

Đo chính xác {{0}},5 mL dung dịch đối chiếu, thêm 1 mL dung dịch natri nitrit 5%, lắc đều và để yên trong 6 phút; thêm 1 ml dung dịch nhôm nitrat 10%, lắc đều và để yên trong 6 phút; thêm 10 ml dung dịch natri hydroxit 10%, pha loãng thành 25 ml bằng nước, lắc đều và để yên trong 18 phút để dùng làm dung dịch đối chiếu. 0,5mlCistanche phenyletanol glycosideDung dịch được chuẩn bị tương tự như dung dịch thử. Sử dụng mẫu song song mà không thêm chất đối chiếu và kiểm tra dung dịch dưới dạng mẫu trắng và chuẩn bị dung dịch mẫu trắng theo cách tương tự. Trên máy quang phổ UV, thực hiện quét toàn bộ bước sóng trên ba dung dịch trên trong phạm vi bước sóng 200-800nm. Cả chất đối chiếu và dung dịch thử đều có đỉnh hấp thụ cực đại ở 507nm, do đó 507nm được xác định là bước sóng hấp thụ.

Sau khi hiện màu của mẫu Cistanche phenyletanol glycoside + hiện màu của chất đối chiếu quýt Echinacea (so sánh xếp chồng), xem Hình 1.

Hình 1 Sau khi phát triển màu của mẫu glycoside Cistanche phenylethanoid + sau khi phát triển màu của chất đối chiếu cam quýt Echinacea Hình 5 Phương pháp phát hiện hàm lượng

Đo chính xác 1 mL dung dịch cần thử, thêm 1 mL dung dịch natri nitrit 5%, lắc đều và để yên trong 6 phút; thêm 1 ml dung dịch nhôm nitrat 10%, lắc đều và để yên trong 6 phút; thêm 10% natri hydroxit Dung dịch này là 10 ml, pha loãng thành 25 ml với nước, lắc đều và để yên trong 18 phút. Sử dụng mẫu song song mà không thêm dung dịch mẫu làm mẫu trắng và chuẩn bị dung dịch mẫu trắng theo cách tương tự. Đo bằng máy quang phổ UV ở bước sóng 507nm. 6 Đánh giá phương pháp luận

6.1 Chuẩn bị dung dịch đối chiếu và dung dịch mẫu

Chuẩn bị dung dịch đối chiếu: Cân chính xác 3.06 mg chất chuẩn đối chiếu echinacoside đã được sấy khô đến khối lượng không đổi, cho vào bình định mức 25mL, thêm dung dịch 70% để hòa tan và pha loãng đến vạch, lắc đều và đặt sang một bên. Nồng độ chuẩn là 0,1224 mg/ml.

Chuẩn bị dung dịch mẫu: Cân chính xác 5 mg dung dịchCistanche phenylethanoid glycoside trích xuấtvào bình định mức 10 ml, hòa tan bằng etanol 70% và pha loãng đến vạch.

6.2 Xây dựng đường chuẩn

Vẽ chính xác {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 mL dung dịch đối chiếu, hiện màu và pha loãng đến thể tích theo phương pháp trong 4.2 và đo giá trị độ hấp thụ ở bước sóng 507 nm. Sử dụng nồng độ so với độ hấp thụ để tạo đường cong hồi quy, phương trình hồi quy là: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) và phạm vi tuyến tính là 4.{{ 23}}.4ug/ml.

6.3 Thử độ chụm

Lấy dung dịch mẫu và đo song song sáu lần theo mục "Phương pháp xác định hàm lượng". Tính độ lệch chuẩn tương đối của độ hấp thụ. Độ hấp thụ lần lượt là {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297. Độ hấp thụ trung bình=0,298, RSD=0,330% (n =6).

6.4 Kiểm tra độ ổn định

Lấy một lượng dung dịch mẫu thích hợp và theo mục "Phương pháp xác định hàm lượng", đo các giá trị độ hấp thụ tại {{0}}, 15, 30, 50 và 6{11}} phút sau khi dung dịch có màu hoàn toàn và tính độ lệch chuẩn tương đối. Độ hấp thụ lần lượt là 0.304, 0,303, 0,300 và 0,296. , 0,295, 0,295, độ hấp thụ trung bình=0,299, RSD=1,362% (n=5).

6.5 Thử nghiệm độ lặp lại

Lấy mẫu, chuẩn bị 6 dung dịch mẫu theo mục "Chuẩn bị dung dịch mẫu" và đo giá trị độ hấp thụ theo mục "Phương pháp xác định hàm lượng" và tính toán hàm lượng. Hàm lượng lần lượt là 65,2%, 65,6%, 66,7%, 67,2% và 66,5%. , 65,8%, nội dung trung bình 66,2%, RSD=1.142% (n=6).

6.6 Thử nghiệm thu hồi mẫu

Lấy chính xác 0,5 mL dung dịch mẫu có hàm lượng đã biết, tổng cộng có 9 phần và thêm lần lượt 200, 250 và 300 ul dung dịch chuẩn. Đo và tính tỷ lệ thu hồi và độ lệch chuẩn tương đối của Cistanche phenyletanol glycoside. Tỷ lệ thu hồi lần lượt là 101,45% và 99,26%. , 98,94%, 101,83%, 99,05%, 99,47%, 98,72%, 99,17%, 100,64%, tỷ lệ thu hồi trung bình là 99,84%, RSD=1.164% (n{28}}).

7 Xác định hàm lượng mẫu

Bảng 1 Kết quả xác định hàm lượng phenylethanoid glycoside ở Cistanche