Sự kích hoạt TLR9 gây ra quá trình glycosyl hóa IgA không ổn định thông qua APRIL- và IL -6 - các con đường trung gian trong bệnh thận IgA

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yuko Makita1, Hitoshi Suzuki1, Toshiki Kano1, Akiko Takahata1, Bruce A. Julian2,3, Jan Novak3 và Yusuke Suzuki1

TỪ KHÓA: THÁNG 4; IgA1 thiếu galactose; Bệnh thận IgA; IL -6; phức hợp miễn dịch

IgA1 thiếu galactose (Gd-IgA1) đóng một vai trò quan trọng trong sự phát triển củaBệnh thận IgA(IgAN). Tuy nhiên, các cơ chế gây bệnh thúc đẩy sản xuất Gd-IgA1 vẫn chưa được làm sáng tỏ đầy đủ. Kích hoạt miễn dịch bẩm sinh thông qua thụ thể Toll-like 9 (TLR9) được biết là có liên quan đến sản xuất Gd-IgA1. Phối tử gây tăng sinh (APRIL) và IL -6 cũng được biết là có tác dụng tăng cường tổng hợp Gd-IgA1 trong IgAN. Với điều này làm cơ sở, chúng tôi đã nghiên cứu cách thức hoạt hóa TLR9 trong các tế bào tiết IgA dẫn đến sản xuất quá mức IgA sinh thận ở chuột ddY nhạy cảm với IgAN và trong các tế bào tiết 1- IgA ở người. Tiêm các phối tử TLR9 CpG-oligonucleotide làm tăng sản xuất phức hợp miễn dịch IgA được glycosyl hóa và IgG-IgA không bình thường ở chuột ddY, đến lượt nó lại trầm trọng hơnchấn thương thận. Những con chuột được kích thích bằng CpG-oligonucleotide có nồng độ APRIL trong huyết thanh tương quan với nồng độ của phức hợp miễn dịch IgA và IgG-IgA được glycosyl hóa không bình thường. Trong ống nghiệm,Kích hoạt TLR9tăng cường sản xuất IgA sinh thận cũng như APRIL và IL -6 trong tế bào lách của chuột ddY và trong tế bào tiết IgA 1- của người. Tuy nhiên, sự đánh sập siRNA của APRIL đã triệt tiêu hoàn toàn việc sản xuất quá mức Gd-IgA1 do IL -6 gây ra. Trung hòa IL -6 làm giảm sản xuất quá mức Gd-IgA1 do CpG-oligonucleotide gây ra. Hơn nữa, con đường APRIL và IL -6 mỗi con đường TLR qua trung gian độc lập 9- gây ra sản xuất quá mức Gd-IgA1. Do đó, kích hoạt TLR9 tăng cường sự tổng hợp IgA được glycosyl hóa không bình thường, trong mô hình chuột IgAN, làm tăng thêm tổn thương thận. Do đó, APRIL và IL -6 hiệp đồng cũng như độc lập, tăng cường tổng hợp Gd-IgA1.

Tuyên bố dịch

Liệu pháp điều trị bệnh cụ thể nhắm mục tiêu IgA1 thiếu galactose có thể tạo thành một phương pháp điều trị trong tương laiBệnh thận IgA. Kết quả từ nghiên cứu này, đã chứng minh sự tham gia của phối tử gây tăng sinh (APRIL) và interleukin -6 (IL -6) trong việc sản xuất quá mức IgA không được glycosyl hóa, hỗ trợ lý do để nhắm mục tiêu APRIL và IL { {3}} trong bệnh thận IgA (IgAN). Trên thực tế, một nghiên cứu gần đây đã chứng minh tác dụng tích cực của kháng thể đơn dòng kháng APRIL trong IgAN của chuột, 1 và một nghiên cứu lâm sàng với kháng thể trung hòa APRIL hiện đang được tiến hành ở những bệnh nhân có IgAN.

Bệnh thận IgA (IgAN), bệnh viêm cầu thận nguyên phát phổ biến nhất, 2 gây ra bệnh thận giai đoạn cuối ở 20% đến 40% bệnh nhân trong vòng 20 năm sau khi khởi phát bệnh này.3 Mặc dù cơ chế bệnh sinh của IgAN vẫn chưa được làm sáng tỏ đầy đủ, theo từng giai đoạn Đái máu đại thể đồng thời với nhiễm trùng đường hô hấp trên cho thấy hệ thống miễn dịch niêm mạc đóng một vai trò quan trọng trong các biểu hiện lâm sàng của IgAN.4

Cistanchetubulosangăn cảnquả thậndịch bệnh, bấm vào đây để lấy mẫu

Sự glycosyl hóa không bình thường của IgAlà trung tâm trong cơ chế bệnh sinh của IgAN. IgA cầu thận ở những bệnh nhân có IgAN bị hạn chế ở phân lớp IgA1 và được làm giàu cho các phân tử có một số O-glycans vùng bản lề thiếu galactose (IgA1 thiếu galactose [Gd-IgA1]). 5,6 Hơn nữa, nồng độ Gd trong huyết thanh -IgA1 và IgA 1- chứaphức hợp miễn dịch(IC) với các tự kháng thể đặc hiệu Gd-IgA1 tăng cao ở bệnh nhân IgAN.7–9 Tuy nhiên, cơ chế sản xuất Gd-IgA1 vẫn chưa được hiểu đầy đủ.

Chúng tôi đã sử dụng mô hình chuột ddY nhạy cảm với IgAN trong nghiên cứu này. Chuột ddY phát triển các tổn thương cầu thận bắt chước IgAN ở người.10 Mặc dù chuột không có phân tử IgA với O-glycans điển hình cho IgA1 ở người, IgAN của người và mô hình chuột ddY dễ mắc bệnh IgAN này có chung một số đặc điểm bệnh cụ thể, chẳng hạn như tăng huyết thanh của IgA không được glycosyl hóa và IC IgG-IgA. IC chứa IgA và IgA với sự lắng đọng ở thận và tổn thương cầu thận sau đó. 12 con chuột ddY có biểu hiện protein niệu và viêm cầu thận tăng sinh trung bì với sự đồng lắng đọng của IgA và C3 trong cầu thận. Một nghiên cứu liên kết toàn bộ bộ gen đã xác định các locus ứng viên có liên quan đến sự tiến triển của IgAN ở chuột ddY.13 Các locus bao gồm các gen có chức năng tương tự như các gen liên quan đến IgAN ở người.14,15 Những phát hiện này cho thấy IgAN ở chuột ddY và ở người có thể bị ảnh hưởng ít nhất một phần bởi các gen nhạy cảm giống nhau. Mặc dù các đặc điểm phân tử của IgA ở mu và IgA1 ở người khác nhau, nhưng IgA được glycosyl hóa không bình thường có xu hướng tạo thành các IC IgA và IgG-IgA cao phân tử, sau đó thúc đẩy sự tiến triển của tổn thương thận trong mô hình ddY của IgAN, cũng như IgAN ở người. Do đó, mô hình chuột ddY có một số đặc điểm chung với IgAN của người và có thể là một công cụ hữu ích để phân tích các đặc điểm di truyền bệnh khác nhau của IgAN.

Các thụ thể giống Toll (TLR) là các phân tử quan trọng trong hệ thống miễn dịch bẩm sinh và có liên quan đến quá trình sinh bệnh của IgAN.16–20 Các kháng nguyên ngoại sinh có nguồn gốc từ mầm bệnh kích hoạt con đường tín hiệu TLR 9- MyD88.21 Quá trình này dẫn đến tăng đáng kể sự tổng hợp các cytokine gây viêm, chẳng hạn như interferon loại 1 và interleukin -6 (IL -6). 22 Gần đây, chúng tôi đã chứng minh rằng sự hoạt hóa TLR9 trầm trọng hơnchấn thương thậnở chuột ddY nhạy cảm với IgAN, với sự gia tăng nồng độ IgA và IgG-IgA IC trong huyết thanh.16 Hơn nữa, các đa hình TLR9 cụ thể có liên quan đến sự tiến triển của bệnh ở những bệnh nhân có IgAN.16 Mức huyết thanh của yếu tố hoại tử khối u-a và IL {{ 6}} tăng cao ở bệnh nhân có IgAN.23 Hơn nữa, IL -6 và IL -4 làm tăng sản xuất IgA1 và làm nổi bật mức độ thiếu hụt galactose, tăng tổng hợp Gd-IgA1 bởi IgA {{13} } tiết ra các dòng tế bào từ bệnh nhân có IgAN.24 Những phát hiện này cho thấy IL -6 có thể là chất trung gian chính của quá trình này.24,25.

Gen của phối tử yếu tố hoại tử khối u Thành viên siêu họ 13 (TNFSF13) mã hóa phối tử gây tăng sinh (APRIL) là một cytokine trung tâm cho sự trưởng thành và tồn tại của tế bào B. 26 APRIL chia sẻ một số thụ thể tín hiệu quan trọng cho sự phát triển của tế bào B với một tế bào khác TNF phối tử siêu họ, yếu tố kích hoạt tế bào B (BAFF). BAFF cũng tham gia vào quá trình trưởng thành ái lực của tế bào B. Một nghiên cứu về mối liên kết trên toàn bộ bộ gen đã xác định TNFSF13 là một trong những gen ứng cử viên liên quan đến IgAN.27 Thật vậy, ở những bệnh nhân có IgAN, nồng độ APRIL trong huyết thanh tăng lên28 và mức độ này có liên quan đến tiên lượng thận.28

Để hiểu rõ hơn về các cơ chế cơ bản liên quan đến việc sản xuất quá mức IgA không được glycosyl hóa thông qua sự hoạt hóa TLR9 bởi phối tử CpG oligodeoxynucleotide (ODN), chúng tôi đã sử dụng chuột ddY nhạy cảm với IgAN và tế bào tiết IgA 1- của người.

KẾT QUẢ

Việc kích hoạt TLR9 làm trầm trọng thêm tình trạng tổn thương thận ở chuột ddY thông qua việc tăng sản xuất IgA gây độc cho thận

TLR9 có thể được kích hoạt bởi các phối tử tương ứng, chẳng hạn như CpG-ODN. Để kiểm tra ảnh hưởng của việc kích hoạt TLR9 trong mô hình IgAN ở chuột, chúng tôi đã sử dụng tiêm phối tử ở chuột ddY nhạy cảm với IgAN. Những con chuột được tiêm CpG-ODN đã phát triển tăng sinh trung bì và mở rộng chất nền ngoại bào (Hình 1a). Điểm mô học thận dựa trên sự tăng sinh trung bì và sự mở rộng ma trận trung gian ở những con chuột được tiêm CpG-ODN cao hơn đáng kể so với những con chuột đối chứng (P <0. 0="" 1;="" hình="" 1a).="" nồng="" độ="" albumin="" trong="" nước="" tiểu="" của="" những="" con="" chuột="" được="" tiêm="" cpg-odn="" đã="" tăng="" lên="" đáng="" kể="" so="" với="" những="" con="" chuột="" đối="" chứng="" (p=""><0. {{2="" 0}}="" 1;="" hình="" 1a).="" chỉ="" những="" con="" chuột="" được="" tiêm="" cpg-odn="" mới="" phát="" triển="" lắng="" đọng="" iga,="" igg="" và="" bổ="" thể="" c3="" ở="" trung="" bì="" (hình="" 1b).="" những="" con="" chuột="" được="" tiêm="" cpg-odn="" cho="" thấy="" nồng="" độ="" iga="" (p=""><0,01) và="" igg="" (p=""><0,01) trong="" huyết="" thanh="" cao="" hơn="" đáng="" kể="" so="" với="" những="" con="" chuột="" đối="" chứng="" (hình="" 1c).="" iga="" huyết="" thanh="" từ="" chuột="" được="" tiêm="" cpg-odn="" chuột="" có="" phản="" ứng="" thấp="" hơn="" với="" ricinus="" communis="" agglutinin-i="" (rca-i)="" và="" sambucus="" nigra="" agglutinin="" lectin="" so="" với="" chuột="" đối="" chứng="" (hình="" 1c),="" cho="" thấy="" hàm="" lượng="" galactose="" và="" axit="" sialic="" trên="" n="" thấp="" hơn="" -glycan="" của="" iga="" chuột.="" hơn="" nữa,="" nồng="" độ="" ic="" igg-iga="" trong="" huyết="" thanh="" ở="" chuột="" được="" tiêm="" cpg-odn="" cao="" hơn="" đáng="" kể="" so="" với="" ở="" chuột="" đối="" chứng="" (p=""><0,05; hình="" 1c).="" những="" phát="" hiện="" này="" chỉ="" ra="">Kích hoạt TLR9bởi CpG-ODN dẫn đến sản xuất quá mức IgA được glycosyl hóa không bình thường và IC IgG-IgA, dẫn đếnphức hợp miễn dịchlắng đọng và tổn thương thận.

Tế bào B và tế bào đuôi gai tham gia vào các phản ứng CpG-ODN

Chúng tôi đã điều tra xem loại tế bào nào có liên quan đến việc sản xuất quá mức IgA được glycosyl hóa không bình thường để phản ứng với CpG-ODN. Tế bào B và tế bào đuôi gai (DC) được phân lập từ lá lách của chuột ddY bằng cách sử dụng kháng thể chống chuột CD19 và CD11c bằng cách phân loại tế bào kích hoạt huỳnh quang FL tương ứng. Kích thích CpG-ODN của các tế bào B bị cô lập gây ra sản xuất quá mức IgA. Ngoài ra, CpG-ODN làm tăng đáng kể việc sản xuất IgA khi tế bào B được đồng nuôi cấy với các DC (Hình S1 bổ sung). Những kết quả này gợi ý rằng CpG-ODN đã trực tiếp kích hoạt các tế bào B và DCS tăng cường sản xuất IgA hơn nữa khi kích hoạt TLR9.

Sản xuất quá mức APRIL tăng cường tổng hợp các IC IgA và IgG-IgA glycosyl hóa không bình thường

Chúng tôi đã đánh giá xem liệu APRIL và / hoặc BAFF có tham gia vào quá trình tổng hợp IgA gây bệnh thận do kích hoạt TLR9 hay không. Tiêm CpG-ODN trên chuột ddY làm tăng đáng kể nồng độ APRIL và BAFF trong huyết thanh (Hình 2a). Mức độ biểu hiện của APRIL trong tế bào lách tương quan với việc sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường và sự hình thành IC IgG-IgA (Hình 2b). Mức độ biểu hiện của BAFF trong tế bào lách tương quan với việc sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường nhưng không liên quan đến sự hình thành IC IgG-IgA (Hình 2b). Hơn nữa, nồng độ APRIL nhưng không BAFF trong huyết thanh tương quan đáng kể với nồng độ huyết thanh cao của IgA glycosyl hóa không bình thường và IgG-IgA IC ở chuột được tiêm CpG-ODN (Hình 2c). Những phát hiện này cho thấy rằng cả APRIL và BAFF đều có thể tham gia vào việc sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường, mặc dù APRIL có thể tham gia nhiều hơn vào việc sản xuất IC IgG-IgA.

Hình 1|Kích thích CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) sản xuất IgA gây bệnh thận. Tiêm CpG-ODN làm tăng nồng độ phức hợp miễn dịch IgA được glycosyl hóa bất thường và IgG-IgA trong máu (IC) và làm trầm trọng thêm tình trạng tổn thương thận ở chuột ddY. (a) chuột ddY trước khi phát triểnBệnh thận IgA(IgAN) được tiêm CpG-ODN ba lần mỗi tuần trong 12 tuần. Trong phân tích mô học các tổn thương cầu thận, những con chuột được tiêm CpG-ODN cho thấy sự tăng sinh tế bào trung bì và mở rộng chất nền ngoại bào. Bảng bên phải hiển thị việc đánh giá tổn thương thận bằng cách tính điểm bán định lượng. Điểm mô học thận, được đánh giá bằng tỷ lệ phần trăm các cầu thận có các tổn thương nói trên, cho thấy tổn thương thận ở chuột được tiêm CpG-ODN trầm trọng hơn. Nồng độ albumin trong nước tiểu ở những con chuột được tiêm CpG-ODN đã tăng lên đáng kể so với những con chuột đối chứng. Các thanh ở bảng dưới cùng ¼ nghĩa là ± SEM. (b) Phân tích hóa mô miễn dịch của lắng đọng IgA, IgG và C3 ở cầu thận. Chỉ những con chuột được tiêm CpG-ODN mới phát triển các lắng đọng IgA, IgG và C3 ở trung bì. (c) Mức độ huyết thanh của IC IgA, IgG và IgG-IgA đã tăng lên đáng kể sau khi điều trị CpG-ODN trong 12 tuần. IgA huyết thanh ở chuột được tiêm CpG-ODN cho thấy khả năng phản ứng thấp hơn đáng kể với lectin Ricinus communis agglutinin-I (RCA-I) và Sambucus nigra agglutinin (SNA) so với IgA ở chuột đối chứng. Những kết quả này chỉ ra rằng việc tiêm CpG-ODN làm tăng nồng độ IgA bị glycosyl hóa trong huyết thanh. Các điểm cá nhân được hiển thị. * P <0. 0="" 5,="" **="" p=""><0,01. od,="" mật="" độ="" quang="" học.="" để="" tối="" ưu="" hóa="" việc="" xem="" hình="" ảnh="" này,="" vui="" lòng="" xem="" phiên="" bản="" trực="" tuyến="" của="" bài="" viết="" này="" tại="">

Hình 2|Mối tương quan giữa việc sản xuất quá mức phối tử gây tăng sinh (APRIL) và IgA bị glycosyl hóa không bình thường ở chuột được tiêm CpG-oligodeoxynucleotide (ODN). (a) Tiêm ddY chuột với CpG-ODN làm tăng nồng độ huyết thanh của yếu tố kích hoạt tế bào B (BAFF) và APRIL. (b) Mức độ biểu hiện của BAFF trong toàn bộ tế bào lách tương quan với việc giảm phản ứng với lectin Ricinus communis agglutinin-I (RCA-I) nhưng không tương quan với sự hình thành phức hợp miễn dịch IgG-IgA (IC). Trong khi đó, mức độ biểu hiện của APRIL có liên quan đến việc sản xuất IgA được glycosyl hóa bất thường và sự hình thành IC IgG-IgA. (c) Ở những con chuột được tiêm CpG-ODN, nồng độ APRIL trong huyết thanh có liên quan đến việc giảm phản ứng của IgA với lectin RCA-I và tăng nồng độ IgG-IgA IC. Nồng độ BAFF trong huyết thanh không tương quan với việc sản xuất IgA glycosyl hóa và sự hình thành IC IgG-IgA. Thanh có nghĩa là - SEM. * P <0. 05.="" od,="" mật="" độ="" quang="">

IL -6 gây ra sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường

Nồng độ IL {{0}} trong huyết thanh ở chuột được tiêm CpG-ODN cao hơn đáng kể so với chuột đối chứng (P <0,05; hình="" 3a).="" sử="" dụng="" tế="" bào="" lách="" của="" những="" con="" chuột="" ddy="" nhạy="" cảm="" với="" igan,="" chúng="" tôi="" đã="" kiểm="" tra="" xem="" liệu="" tlr="" 9-="" gây="" ra="" kích="" hoạt="" tế="" bào="" và="" sản="" xuất="" quá="" mức="" iga="" bị="" glycosyl="" hóa="" không="" bình="" thường="" có="" phải="" qua="" trung="" gian="" il="" -6="" hay="" không.="" kích="" thích="" cpg-odn="" tăng="" cường="" sản="" xuất="" il="" -6="" bởi="" các="" tế="" bào="" lách="" trong="" ống="" nghiệm.="" việc="" bổ="" sung="" il="" -6="" vào="" môi="" trường="" nuôi="" cấy="" tế="" bào="" lách="" làm="" tăng="" sản="" xuất="" iga.="" hơn="" nữa,="" il="" -6="" tăng="" cường="" tổng="" hợp="" iga="" được="" glycosyl="" hóa="" không="" bình="" thường="" và="" sự="" hình="" thành="" ic="" igg-iga="" và="" tăng="" sản="" xuất="" april="" (hình="" 3a).="" il="" -6="" -="" kháng="" thể="" trung="" hòa="" làm="" giảm="" tổng="" số="" iga="" gây="" ra="" cpg-odn,="" sản="" xuất="" iga="" không="" được="" glycosyl="" hóa="" bất="" thường="" và="" hình="" thành="" ic="" igg-iga="" (hình="" 3b).="" những="" phát="" hiện="" này="" chỉ="" ra="" rằng="" kích="" hoạt="" tlr9,="" ít="" nhất="" một="" phần,="" được="" thực="" hiện="" bởi="" il="" -="" 6.="" hơn="" nữa,="" (các)="" con="" đường="" trung="" gian="" tlr="" 9-="" khác="" có="" thể="" tham="" gia="" vào="" việc="" sản="" xuất="" iga="" được="" glycosyl="" hóa="" không="" bình="">

cistanchecó thể cải thiệnquả thậnhàm số

APRIL và IL -6 tăng cường tổng hợp Gd-IgA1 trong tế bào tiết IgA {3}} của người

Chúng tôi đã kiểm tra thêm xem liệu APRIL và IL -6 có phổ biến đối với các chất trung gian chính giúp tăng cường sản xuất IgA gây bệnh thận trong các tế bào tiết 1- IgA của người hay không. Việc bổ sung CpG-ODN giúp tăng cường sự gia tăng IL -6, biểu hiện của APRIL, sản xuất protein APRIL và sản xuất IgA và Gd-IgA1 (Hình 4a). Kích thích với IL -6 và với APRIL tăng cường sản xuất IgA và Gd-IgA1 (Hình 4b, c). Tác động của kích thích CpG-ODN lên việc sản xuất IgA và Gd-IgA1 đã bị giảm một phần bởi các kháng thể trung hòa IL -6- (Hình 4d). Hơn nữa, APRIL nhỏ, can thiệp (si) RNA cũng làm giảm sản xuất IgA và Gd-IgA1 do kích thích IL -6 (Hình 4b), cho thấy rằng APRIL và IL -6 đồng thời thúc đẩy sự tạo ra Gd -GA1.

THẢO LUẬN

IgA trung gian trong IgAN của người không bao gồm phân lớp IgA1 có biểu hiện O-glycosyl hóa bất thường. 29,30 IgA1 ở người có vùng bản lề với O-glycans không có ở IgA của chuột. sự tăng cao của IgA không được glycosyl hóa và IC chứa IgA.

Một số nghiên cứu đã chỉ ra sự kích hoạt TLR9 trong sự tiến triển của IgAN.17–19 Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chỉ ra rằng sự kích hoạt TLR9 bằng cách tiêm ip CpG-ODN ở chuột ddY làm trầm trọng thêm chấn thương thận kèm theo lắng đọng IgA và IgG ở cầu thận, có thể là do tăng nồng độ trong huyết thanh của IgA được glycosyl hóa bất thường và IgG-IgA IC. Hơn nữa, chúng tôi cho thấy rằng sự hoạt hóa TLR9 có liên quan đến quá trình tổng hợp Gd-IgA1 trong các dòng tế bào tiết 1- IgA của người.

Hình 3|Ảnh hưởng của CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) và interleukin (IL) -6 trên tế bào lách nuôi cấy của chuột ddY. (a) Mức IL -6 trong huyết thanh ở chuột được tiêm CpG-ODN cao hơn đáng kể so với chuột đối chứng. Kích thích CpG-ODN làm tăng sản xuất IL -6 của tế bào lách của chuột ddY trong nuôi cấy. Việc ủ tế bào lách của chuột ddY với IL tái tổ hợp -6 làm tăng sản xuất IgA toàn phần và IgA không được glycosyl hóa, dẫn đến sự hình thành phức hợp miễn dịch IgG-IgA (IC). IL tái tổ hợp -6 làm tăng sản xuất quá mức của phối tử gây tăng sinh (APRIL). (b) Tế bào lách trong nuôi cấy được kích thích bằng CpG-ODN khi có hoặc không có IL -6 - kháng thể trung hòa. Kháng thể kháng IL -6 làm giảm sản xuất IgA toàn phần và IgA được glycosyl hóa không bình thường và do đó, làm giảm sự hình thành IC IgG-IgA do CpG-ODN gây ra. Thanh ¼ nghĩa là ± SEM. * P <0. 0="" 5,="" **="" p=""><0,01. od,="" mật="" độ="" quang="" học;="" pbs,="" dung="" dịch="" muối="" đệm="" phosphat;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" agglutinin-i;="" sna,="" sambucus="" nigra="">

Hình 4|Ảnh hưởng của việc bổ sung CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) hoặc phối tử gây tăng sinh (APRIL) trên các dòng tế bào tiết IgA 1- của người trên IgA1, IgA1 thiếu galactose (Gd-IgA1) và interleukin (IL) {{ 9}} sản xuất. (a) Bổ sung CpG-ODN tăng cường sản xuất IL -6. CpG-ODN tăng cường biểu hiện gen của APRIL. Phân tích Western blot đã chứng minh rằng CpG-ODN làm tăng mức độ protein của APRIL. Kết quả được đánh giá bằng phương pháp đo mật độ. Kích thích với CpG-ODN tạo ra IgA và Gd-IgA1. b. (c) Tế bào sản xuất IgA {{2 {{3 0}}}} được kích thích bằng APRIL tái tổ hợp tạo ra nhiều IgA và Gd-IgA1 hơn. (d) Tế bào tiết IgA 1- được ủ với kháng thể kháng IL -6 sau khi kích thích CpG-ODN. Việc tăng cường sản xuất IgA và Gd-IgA1 do CpG-ODN gây ra đã bị giảm bởi kháng thể kháng IL -6 và bằng cách loại bỏ siRNA của APRIL. Thanh ¼ nghĩa là ± SEM. * P <0,05, **="" p=""><0,01. gadph,="" glyceraldehyd="" -3-="" phosphat="" dehydrogenase;="" pbs,="" dung="" dịch="" muối="" đệm="">

Chúng tôi đã đánh giá cơ chế mà quá trình kích hoạt TLR9 làm trung gian cho việc tăng cường sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường. BAFF và APRIL được biết đến với vai trò của chúng trong sự tồn tại và biệt hóa của tế bào B. McCarthy và cộng sự.33 đã chứng minh rằng những con chuột chuyển gen biểu hiện quá mức BAFF phát triển lắng đọng IgA ở trung bì với tổn thương thận và các bất thường về tiết niệu.33 Gần đây chúng tôi đã chứng minh rằng biểu hiện gen của APRIL tăng cao ở các trung tâm mầm amiđan của bệnh nhân có IgAN. Hơn nữa, sự biểu hiện quá mức của APRIL ở các trung tâm mầm amiđan tương quan với nồng độ Gd-IgA1 trong huyết thanh và mức độ nghiêm trọng của bệnh ở bệnh nhân IgAN.34 Những phát hiện này cho thấy rằng cả BAFF và APRIL đều có thể tham gia vào quá trình sinh bệnh của IgAN. Tuy nhiên, mối liên quan giữa kích hoạt BAFF / APRIL và TLR9 là không rõ ràng. Trong nghiên cứu này, kích hoạt TLR9 làm tăng biểu hiện gen và nồng độ APRIL trong huyết thanh. Mức độ huyết thanh của IgA không được glycosyl hóa tương quan với mức độ biểu hiện của BAFF và APRIL trong tế bào lách. Tuy nhiên, nồng độ IgG-IgA IC trong huyết thanh tương quan với mức độ biểu hiện của APRIL chứ không phải BAFF. Hơn nữa, nồng độ APRIL trong huyết thanh có liên quan đến việc sản xuất quá mức IgA được glycosyl hóa bất thường và IC IgG-IgA ở chuột đã được kích hoạt TLR 9-. Trong các tế bào tiết IgA 1-, sự kích hoạt TLR9 cũng gây ra sự sản xuất quá mức Gd-IgA1 qua APRIL. Những kết quả này gợi ý rằng APRIL đóng một vai trò quan trọng trong TLR 9- gây ra sự sản xuất quá mức IgA do nephritogenic và sự hình thành IC IgG-IgA.

Cần làm rõ phản ứng theo loại tế bào để xác định vai trò của các tế bào B, T và DC. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã đánh giá vai trò của các tế bào B và các DC plasmacytoid. TLR9 được biểu hiện bởi DC, tế bào B và đại thực bào chứ không phải tế bào T.35–37 Sự đóng góp của BAFF / APRIL đối với phản ứng kháng thể không phụ thuộc vào tế bào T đã được biết. IgA được glycosyl hóa không bình thường và hình thành IC IgG-IgA qua APRIL theo cách thức không phụ thuộc vào tế bào T. Chúng tôi cũng sử dụng các dòng tế bào tiết IgA 1- của người được nhân bản và cho thấy rằng quá trình kích hoạt TLR9 tăng cường sản xuất Gd-IgA1 thông qua APRIL và IL -6, cho thấy rằng quá trình này không phụ thuộc vào tế bào T. Hơn nữa, chúng tôi đã đánh giá vai trò của các tế bào B và DC. Chúng tôi cho thấy rằng CpG-ODN đặc hiệu cho tế bào B và DC làm tăng sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường trong toàn bộ tế bào lách. Hơn nữa, chúng tôi đã nghiên cứu xem liệu kích thích CpG-ODN in vitro có thể tăng cường sản xuất IgA hay không. Kích thích CpG-ODN của các tế bào B bị cô lập gây ra sản xuất quá mức IgA. Ngoài ra, CpG-ODN làm tăng đáng kể việc sản xuất IgA khi tế bào B được nuôi cấy với DC (Hình S1 bổ sung). Những kết quả này cho thấy rằng việc kích hoạt CpG-ODN dẫn đến kết quả lớn hơnSản xuất IgA và glycosyl hóa không ổn địnhđược trung gian bởi TLR9 theo cách không phụ thuộc vào tế bào T.

IL -6 được biết là làm nổi bật sự gia tăng của các tế bào sản xuất globulin miễn dịch và sự biệt hóa cuối cùng của các tế bào huyết tương.40–42 Hơn nữa, IL -6 cũng có thể là một cytokine ứng viên chính để biệt hóa tế bào trợ giúp nang T .43,44 Tế bào trợ giúp nang trứng T cần thiết cho sự trưởng thành ái lực của tế bào B, tái tổ hợp chuyển đổi lớp, và tạo tế bào B nhớ và tế bào plasma trong trung tâm mầm.43,44 Trong mô hình chuột lupus, IL -6 sự thiếu hụt ngăn cản sự phân hóa tế bào trợ giúp nang T và sự mở rộng tế bào B ở trung tâm mầm, dẫn đến giảm sản xuất tự kháng thể.45 Nghiên cứu này đã làm rõ rằng kích hoạt TLR9 bởi CpG-ODN tăng cường sản xuất IL -6 trong tế bào lách của IgAN của chuột. IL -6 gây ra sản xuất quá mức IgA được glycosyl hóa không bình thường và IC IgG-IgA trong mô hình IgAN của chuột. Trong các tế bào tiết 1- IgA của người, chúng tôi xác nhận rằng IL -6 tăng cường sản xuất Gd-IgA1.24 Phát hiện của chúng tôi cho thấy IL -6 có thể là một trong những phân tử chính gây ra sản xuất quá mức IgA gây bệnh thận qua trung gian kích hoạt TLR9.

APRIL đóng một vai trò quan trọng trong chuyển đổi lớp IgA và biệt hóa plasmacytoid. 46,47 IL -6 thúc đẩy sự biệt hóa cuối cùng của tế bào B thành tế bào huyết tương tiết IgA.41,42 Nghiên cứu hiện tại đã chứng minh rằng IL {{7} } kích thích gây ra việc sản xuất APRIL. Sau đó, chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng có mối liên quan giữa APRIL và IL -6 qua trung gian hoạt hóa TLR9 gây ra sự sản sinh IgA bị glycosyl hóa không bình thường. Chúng tôi nhận thấy rằng IL -6 - kháng thể trung hòa không ngăn chặn hoàn toàn việc sản xuất quá mức Gd-IgA1 do CpG-ODN gây ra và rằng việc loại bỏ siRNA của APRIL làm giảm sản xuất quá mức Gd-IgA1 do IL -6 gây ra. Những dữ liệu này gợi ý rằng APRIL và IL -6 đã hiệp đồng thúc đẩy sản xuất Gd-IgA1 qua trung gian kích hoạt TLR9. Hơn nữa, cả IL -6 - kháng thể trung hòa và siRNA của APRIL đều làm giảm sản xuất IgA và Gd-IgA1 nhiều hơn IL -6 - kháng thể trung hòa đơn lẻ. Do đó, con đường kích hoạt TLR9 liên quan đến tác dụng hiệp đồng IL -6 và APRIL trên sản xuất kháng thể và glycosyl hóa (Hình 5). Các nghiên cứu gần đây cũng đã chỉ ra rằng IL -6, kết hợp với APRIL, gây ra sự tạo ra và tồn tại của tế bào huyết tương.48,49 Tuy nhiên, các nghiên cứu trong tương lai là cần thiết để làm rõ các con đường tín hiệu gian bào giữa APRIL và IL -6 trong sự sản xuất IgA của thận.

cistanchevìquả thậnsự nhiễm trùng

Tóm lại là,Kích hoạt TLR9làm trầm trọng thêm tình trạng tổn thương thận ở mô hình IgAN ở chó bằng cách tăng cường sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường và sự hình thành IC IgG-IgA. Trong quá trình này, việc sản xuất quá mức APRIL và IL -6 do kích hoạt TLR9 gây ra đã tăng cường sản xuất IgA gây bệnh thận. Ngoài ra, nghiên cứu này đã làm rõ rằng APRIL và IL -6 hoạt động hiệp đồng, cũng như độc lập, để tạo ra IgA không được glycosyl hóa. Những phát hiện này có thể thông báo cho sự phát triển trong tương lai của các phương pháp điều trị mới cho IgAN.

Hình 5|Vai trò hiệp đồng giữa thụ thể Toll-like 9 (TLR9), phối tử gây tăng sinh (APRIL) và interleukin (IL) -6 trong các tế bào sản xuất IgA trong bệnh thận IgA (IgAN). Kích hoạt TLR9 đã tạo ra APRIL và IL -6, dẫn đến

sản xuất quá mức IgA được glycosyl hóa không bình thường. APRIL và IL -6 có chức năng hiệp đồng để thúc đẩy quá trình tạo IgA được glycosyl hóa không bình thường. Ngoài việc APRIL tạo ra IL -6, như đã báo cáo trước đây, IL -6 cũng có thể tăng cường tổng hợp APRIL. Hơn nữa, APRIL và IL -6 thúc đẩy độc lập việc sản xuất IgA được glycosyl hóa không bình thường. NF-kB, hệ số hạt nhân-kB.

PHƯƠNG PHÁP

Động vật và giao thức thử nghiệm

Chuột ddY nhạy cảm với IgAN là một mô hình IgAN tự phát đã biết với tần suất và mức độ tổn thương cầu thận thay đổi bắt chước IgAN của người. 10 Chuột ddY được chia thành 3 nhóm dựa trên biểu hiện củatổn thương thận: chuột khởi phát sớm hoặc muộn và chuột chết lặng. Bệnh khởi phát sớm ở chuột ddY biểu hiện với protein niệu và lắng đọng IgA ở cầu thận sau 20 tuần tuổi.13 Vì vậy, chúng tôi sử dụng ddY chuột trong vòng 18 tuần tuổi để đánh giá liệu sự hoạt hóa TLR9 có làm trầm trọng thêm IgAN trong mô hình này hay không. Tổng cộng 30 con chuột ddY cái (SLC Japan, Shizuoka, Japan) đã được duy trì tại cơ sở động vật của Đại học Juntendo, Tokyo, Nhật Bản. Những con chuột được cho ăn thường xuyên (Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan) và water ad libitum và được nuôi trong một căn phòng cụ thể không có mầm bệnh. Quy trình thử nghiệm đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đánh giá Đạo đức cho Thử nghiệm Động vật của Khoa Y Đại học Juntendo. Ở 6 tuần tuổi, những con chuột được chia ngẫu nhiên thành 2 nhóm. Một nhóm được tiêm CpG-ODN ip 3 lần mỗi tuần trong 12 tuần; nhóm thứ hai (đối chứng) được tiêm không-CpG-ODN. CpG-ODN và không-CpG-ODN được tổng hợp hóa học (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Kanagawa, Nhật Bản). Các chuỗi của ODN là TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG hoặc TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCCCC (50/30) cho CpG hoặc không phải CpG ODN, tương ứng.

Xác định IgA, IgG, IgG-IgA IC và IgA được glycosyl hóa không bình thường trong huyết thanh chó

Các mẫu máu được thu thập từ tĩnh mạch nhị đầu. IgA, IgG và IgG-IgA IC huyết thanh được đo bằng xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym sandwich (ELISA; Phòng thí nghiệm Bethyl, Montgomery, TX) bằng cách sử dụng phương pháp đã sửa đổi dựa trên báo cáo trước đây của chúng tôi. 5 0 Các xét nghiệm liên kết Lectin là được sử dụng để truy cập glycoform của IgA. RCA-I được đánh dấu sinh học (Phòng thí nghiệm Vector, Burlingame, CA) và lectin vỏ cây Sambucus nigra (Phòng thí nghiệm Vector) đã nhận ra galactose và axit sialic gắn với galactose (chủ yếu ở liên kết a2,6), tương ứng, được sử dụng trong thử nghiệm này.51 Huyết thanh pha loãng đã được bổ sung với 100 ng IgA mỗi giếng. Các đĩa microtiter phủ 1 mg / ml IgA chống chuột dê (100 ml / giếng) để định lượng IgA huyết thanh được ủ với các mẫu này, và sau đó thêm Sambucus nigra agglutinin hoặc RCA-I đã được đánh dấu sinh học. Liên hợp peroxidase Avidin-cải ngựa (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) đã được áp dụng. Mức độ huyết thanh của IgA liên kết với glycosyl hóa không bình thường được biểu thị bằng đơn vị (1 đơn vị là mật độ quang 1,0 đo ở 490 nm). Nồng độ APRIL và BAFF trong huyết thanh được đo bằng bộ APRIL ELISA trên chuột (MyBioSource, San Diego, CA) và bộ BAFF ELISA trên chuột (R&D Systems, Minneapolis, MN), theo giao thức của nhà sản xuất.

Xét nghiệm Gd-IgA1 do tế bào tiết 1- IgA của người tạo ra

Một ELISA sandwich cho Gd-IgA1 được xây dựng bằng cách sử dụng kháng thể đặc hiệu Gd-IgA1 (IBL, Nhật Bản). 52 Kháng thể đặc hiệu Gd-IgA1 (7,5 mg / ml) được pha loãng trong dung dịch muối đệm phosphat được phủ lên đĩa ELISA cho 18 giờ ở nhiệt độ phòng. Mẫu được áp dụng và ủ trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Các đĩa được rửa sạch và ủ trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng với 1: 1000- peroxidase hạt cải ngựa được pha loãng với IgA1 kháng người liên hợp của chuột, một kháng thể đơn dòng đặc hiệu chuỗi 1- (Southern Biotech, Birmingham, AL). Sau khi rửa, các tấm được phát triển bằng dung dịch SIG-MAFAST o-phenylenediamine (Sigma-Aldrich), và phản ứng được dừng lại bằng cách thêm axit sulfuric 1 M (Wako, Osaka, Nhật Bản). Các mức Gd-IgA1 được ngoại suy bằng cách tham chiếu đến đường cong chuẩn (4- tham số logistic phù hợp) của mật độ quang ở 490 nm và được biểu thị bằng đơn vị. Gd-IgA1 được tạo ra bằng enzym từ IgA152 huyết tương người được pha loãng theo trình tự (1,37–1000 ng / ml) để tạo ra đường cong chuẩn. Trong nghiên cứu này, 1 đơn vị được xác định là 1 ng / mL của Gd-IgA1.52 chuẩn

Đánh giá tổn thương thận ở chuột ddY

Thậnwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50% của 20 tiểu cầu thận) .13,53,54 Tổng điểm tối đa cho mỗi phần là 9. Các mẫu thận cho miễn dịch huỳnh quang được ngâm trong hợp chất ở nhiệt độ cắt tối ưu (Sakura Finetek Japan Co., Tokyo, Japan) và được bảo quản ở –80 độ Các mẫu vật được cắt thành các đoạn dày 3- mm, cố định bằng axeton ở –20 độ trong 5 phút, rửa bằng dung dịch muối đệm phosphat, được chặn bằng chất chặn (DS Pharma Biomedical Co., Osaka, Nhật Bản) ở nhiệt độ phòng trong 30 phút, và sau đó được ủ ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ với các kháng thể chính sau đây: IgA dê chống chuột, IgG dê liên hợp Alexa và kháng C3 chuột (Phòng thí nghiệm Bethyl). Sau 3 lần rửa nữa bằng dung dịch nước muối có đệm photphat, các phiến kính được gắn với giá đỡ (Dako, Tokyo, Nhật Bản). Các mẫu được phân tích và chụp ảnh bằng kính hiển vi laser đồng tiêu (Tập đoàn Olympus, Tokyo, Nhật Bản).

Phản ứng chuỗi polymerase định lượng thời gian thực

RNA từ tế bào lá lách được chiết xuất bằng dung dịch Torizol (Invitrogen, Tokyo, Nhật Bản) và được tinh chế bằng RNeasy Mini Kit (74106; Qiagen, Valencia, CA). Phản ứng chuỗi polymerase định lượng thời gian thực được thực hiện bằng cách sử dụng hệ thống phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực của Applied Biosystems 7500 sử dụng SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Tokyo, Japan) và các loại mồi cụ thể: mồi thuận TLR9 chuột TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, mồi ngược TGCAGTCCAGGCCATGA; chuột MyD88 mồi thuận GCACCTGTGTCTGGTCCATT, mồi ngược CTGTTGGA CACCTGGAGACA; và gen giữ nhà glyceraldehyde -3- phosphate dehydrogenase mồi thuận CATTGTGGAAG GGCTCATGA, mồi ngược TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Các điều kiện khuếch đại như sau: làm nóng trước ở 95 độ trong 20 giây và sau đó 40 chu kỳ biến tính ở 95 độ trong 3 giây, ủ và kéo dài ở 60 độ trong 30 giây. Các xét nghiệm biểu hiện gen TaqMan dành riêng cho người Homo sapiens (Life Technologies, Carlsbad, CA) đã được mua cho đoạn mồi của APRIL, Hs 00601664_ g1, Mm 03809849- s1 và BAFF, Mm 01168134- m1 . Các điều kiện chu kỳ của phản ứng chuỗi polymerase TaqMan như sau: gia nhiệt trước ở 95 độ trong 20 giây và sau đó 40 chu kỳ biến tính ở 95 độ trong 3 giây, ủ và kéo dài ở 60 độ trong 30 giây

Nghiên cứu in vitro với tế bào lách của chuột ddY

Tế bào lách được nuôi cấy trong môi trường Roswell Park Memorial Institute – 1640 bổ sung 20% ​​huyết thanh thai nhi, 100 mg / ml streptomycin, và 100 U / ml penicillin. Các tế bào hồng cầu được ly giải trong Red Blood Lysing Buffer (R7757; Sigma-Aldrich) ở nhiệt độ phòng trong 1 phút, tiếp theo là rửa trong môi trường Roswell Park Memorial Institute – 1640. 50 Cấy tế bào được giữ trong tủ ấm được làm ẩm ở 37 độ với 5 phần trăm CO2. Lớp C CpG-ODN (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG) được sử dụng làm phối tử TLR9. Kháng thể IL -6 tái tổ hợp, kháng thể kháng IL -6 và kiểm soát isotype IgG1 của chuột thu được từ Hệ thống R&D. Tế bào được nuôi cấy với nồng độ CpG-ODN trung bình hoặc theo khuyến nghị, 10 ng / ml IL -6 tái tổ hợp và 100 ng / ml kháng thể kháng IL6. IgA, IgA được glycosyl hóa không bình thường, IgG-IgA IC và APRIL do tế bào lách tạo ra được đo bằng ELISA sau 72- giờ ủ trong ống nghiệm.

Nghiên cứu trong ống nghiệm với các dòng tế bào tiết IgA 1- ở người

Tế bào B từ máu của một người khỏe mạnh được bất tử với vi rút Epstein-Barr, được phân dòng để tạo ra dòng tế bào tiết IgA 1- và được nuôi cấy như mô tả.9 Hơn nữa, chúng tôi đã xác nhận sự biểu hiện của các thụ thể APRIL / BAFF và IL -6. Tế bào được nuôi cấy trong môi trường Roswell Park Memorial Institute – 1640 được bổ sung 20% ​​huyết thanh bê thai, streptomycin và penicillin trong tủ ấm được làm ẩm ở 37 độ với 5% CO2. Loại B CpG-ODN (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) được sử dụng làm phối tử TLR9. IL -6 tái tổ hợp, kháng thể APRIL tái tổ hợp, kháng thể kháng IL -6 và kháng thể kiểm soát IgG của dê được thu nhận từ Hệ thống R&D. Tế bào được nuôi cấy với nồng độ CpG-ODN trung bình hoặc theo khuyến nghị, 50 ng / ml IL -6 tái tổ hợp, 40 ng / ml APRIL tái tổ hợp và 100 ng / ml kháng thể kháng IL -6 trong 72 giờ

Thấm phương tây

Chất nổi từ tế bào tiết IgA 1- được phân tách bằng điện di trên gel natri dodecyl sulfat-polyacrylamide trong điều kiện khử bằng cách sử dụng gel phiến gradient từ 5% đến 15%. Gel được chuyển sang màng polyvinylidene difluoride và được ủ với các kháng thể đặc hiệu cho APRIL (Abcam Inc., Cambridge, MA) và glyceraldehyde -3- phosphate dehydrogenase (Abcam Inc). Các khối được hình dung bằng phát quang hóa học sử dụng phát quang hóa học tăng cường (GE Healthcare, Tokyo, Nhật Bản) và máy dò phát quang (Konica Minolta Healthcare, Tokyo, Nhật Bản). Kết quả được đánh giá bằng phương pháp đo mật độ.

APRIL siRNA đánh sập

Tế bào tiết IgA 1- của người được nuôi cấy trong đĩa nuôi cấy 24- giếng và được truyền bằng siRNA đặc hiệu APRIL (GS8741, Qiagen) hoặc kiểm soát không nhắm mục tiêu siRNA (GS10673, Qiagen) bằng cách sử dụng quy trình truyền nhiễm theo hướng dẫn của nhà sản xuất . Sau khi ủ trong 24 giờ, các tế bào được ủ với 50 ng / ml IL -6 (Hệ thống R&D) tái tổ hợp trong 72 giờ. Sau khi ủ, tế bào và dịch nổi được thu hoạch để đo IgA và Gd-IgA1.

Phân tích thống kê

Mối tương quan giữa các tham số khác nhau được phân tích bằng cách sử dụng phân tích phương sai. Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SD hoặc giá trị trung vị. Giá trị P <{{0}}. 05="" được="" coi="" là="" có="" ý="" nghĩa="" thống="" kê.="" tất="" cả="" các="" phân="" tích="" thống="" kê="" được="" thực="" hiện="" bằng="" graphpad="" prism="" phiên="" bản="" 6.0="" cho="" windows="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="">

cistanchevìquả thậntriệu chứng bệnh

TIẾT LỘ

Tất cả các tác giả tuyên bố không có lợi ích cạnh tranh.

SỰ NHÌN NHẬN

Nghiên cứu này được hỗ trợ một phần bởi Khoản tài trợ JSPS KAKENHI số 18K08252 và Dự án Nghiên cứu Thực tiễn về Bệnh thận của Cơ quan Nghiên cứu và Phát triển Y tế Nhật Bản, AMED. JN và BAJ đã được hỗ trợ một phần bởi các khoản tài trợ của Viện Y tế Quốc gia DK078244 và DK082753. Chúng tôi cảm ơn bà Terumi Shibata vì sự hỗ trợ kỹ thuật tuyệt vời của bà. Chúng tôi cũng cảm ơn cô Takako Ikegami và cô Tomomi Ikeda (Phòng Nghiên cứu Phân tử và Sinh hóa, Khoa Y khoa Đại học Juntendo) và Cô Tamami Sakanishi (Khoa Sinh học Tế bào, Khoa Y sau Đại học Juntendo) vì sự hỗ trợ kỹ thuật tuyệt vời của họ .

TÀI LIỆU BỔ SUNG

Tệp bổ sung (PDF)

Hình S1. CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) –các tế bào B được kích hoạt và tế bào đuôi gai (DC) tiếp tục tăng cường sản xuất IgA. Tế bào B và tế bào DC được phân lập từ lá lách của chuột ddY. Kích thích CpG-ODN làm tăng sản xuất IgA trong các tế bào B cô lập. Sự gia tăng này được tăng cường hơn nữa bằng cách đồng nuôi cấy tế bào B với DC. * P <0. 05.="" các="" phương="" pháp="" chi="" tiết="" được="" cung="" cấp="" trong="" phương="" pháp="" bổ="" sung.="" phương="" pháp="" bổ="">

NGƯỜI GIỚI THIỆU

1. Myette JR, Kano T, Suzuki H, et al. Kháng thể nhắm mục tiêu A Proliferation Inducing Ligand (APRIL) là phương pháp điều trị an toàn và hiệu quả đối với bệnh thận IgA ở chuột. Thận Int. 2019; 96: 104–116.

2. Levy M, Berger J. Quan điểm trên toàn thế giới về bệnh thận IgA. Am J Kidney Dis. Năm 1988; 12: 340–347.

3. D'Amico G. Bệnh viêm cầu thận phổ biến nhất trên thế giới: bệnh thận IgA. QJ Med. Năm 1987; 64: 709–727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE, et al. Nghiên cứu tuần tự hệ thống IgA trong bệnh thận IgA tái phát. Thận Int. Năm 1986; 30: 924–931.

5. Wyatt RJ, Julian BA. Bệnh thận IgA. N Engl J Med. 2013; 368: 2402–2414.

6. Suzuki H, Yasutake J, Makita Y, et al. Bệnh thận IgA và viêm mạch IgA kèm theo viêm thận có đặc điểm chung liên quan đến cơ chế bệnh sinh định hướng IgA 1- do thiếu galactose. Thận Int. 2018; 93: 700–705.

7. Glassock RJ. Phân tích hoạt động của kháng thể trong bệnh thận IgA. J Clin Đầu tư. 2009; 119: 1450–1452.

8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY, et al. Bệnh nhân bị bệnh thận IgA có nồng độ IgA1 huyết thanh do thiếu galactose tăng lên. Thận Int. 2007; 71: 1148–1154.

9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Hall S, et al. Các dòng tế bào tiết ra IgA 1- từ bệnh nhân bị bệnh thận IgA tạo ra IgA1 được glycosyl hóa không bình thường. J Clin Đầu tư. 2008; 118: 629–639.

10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K, et al. Sự lắng đọng IgA cầu thận tự phát ở chuột ddY: một mô hình động vật của bệnh viêm thận IgA. Thận Int. Năm 1985; 27: 756–761.

11. Okazaki K, Suzuki Y, Otsuji M, et al. Phát triển mô hình bệnh thận IgA khởi phát sớm. J Am Soc Nephrol. 2012; 23: 1364–1374.

12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H, et al. Sự phát triển của immunoglobulin Một bệnh thận- giống như một bệnh ở chuột thiếu beta -1, 4- galactosyltransferase-I. Là J Pathol. 2007; 170: 447–456.

13. Suzuki H, Suzuki Y, Yamanaka T, et al. Quét toàn bộ bộ gen trong một mô hình bệnh thận IgA mới xác định vị trí nhạy cảm trên nhiễm sắc thể số 10 của chuột, trong một vùng tổng hợp với IGAN1 của người trên nhiễm sắc thể 6q 22-23. J Am Soc Nephrol. 2005; 16: 1289–1299.

14. Takei T, Iida A, Nitta K, và cộng sự. Mối liên quan giữa đa hình nucleotide đơn trong gen selectin và immunoglobulin A bệnh thận. Là J Hum Genet. Năm 2002; 70: 781–786.

15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F, et al. Bệnh thận IgA, nguyên nhân phổ biến nhất của viêm cầu thận, có liên quan đến 6q 22-23. Nat Genet. 2000; 26: 354–357.

16. Suzuki H, Suzuki Y, Narita I, et al. Thụ thể giống Toll 9 ảnh hưởng đến mức độ nghiêm trọng của bệnh thận IgA. J Am Soc Nephrol. 2008; 19: 2384–2395.

17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Những thay đổi về IgA1 huyết thanh do thiếu galactose trong huyết thanh trong bệnh thận IgA sau khi cắt amidan và điều trị bằng steroid. PLoS Một. 2014; 9: e89707.

18. Sato D, Suzuki Y, Kano T, và cộng sự. Biểu hiện TLR9 của amiđan và hiệu quả của việc cắt amiđan bằng liệu pháp xung steroid ở bệnh nhân bệnh thận IgA. Ghép số Nephrol. 2012; 27: 1090–1097.

19. Coppo R, Camilla R, Amore A, et al. Biểu hiện của thụ thể giống Toll 4 được tăng lên trong các tế bào đơn nhân đang lưu hành của bệnh nhân mắc bệnh thận immunoglobulin A. Clin Exp Immunol. 2010; 159: 73–81.

20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Kẽm trong chế độ ăn uống là một chất điều chỉnh môi trường quan trọng trong sự tiến triển của bệnh thận IgA. PLoS Một. 2014; 9: e90558.

21. Kawai T, Akira S. Báo hiệu cho NF-kappaB bằng các thụ thể giống như Toll. Xu hướng Mol Med. 2007; 13: 460–469.

22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K, et al. IkappaBNS ức chế sự cảm ứng của một tập hợp con các gen phụ thuộc vào thụ thể giống Toll và hạn chế quá trình viêm nhiễm. Miễn dịch. 2006; 24: 41–51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G, et al. Mất cân bằng các cytokine tiền viêm trong huyết thanh và các thụ thể hòa tan của chúng: một vai trò giả định trong sự tiến triển của bệnh thận IgA vô căn (IgAN) và viêm thận ban xuất huyết Henoch Schönlein, và mục tiêu tiềm năng của liệu pháp immunoglobulin? Clin Exp Immunol. 1998; 114: 468–476.

24. Suzuki H, Raska M, Yamada K, và cộng sự. Cytokine làm thay đổi quá trình glycosyl hóa IgA1 O bằng cách làm rối loạn điều hòa các enzym C1GalT1 và ST6GalNAc-II. J Biol Chem. 2014; 289: 5330–5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M, et al. Sự ức chế tín hiệu STAT3 làm giảm sản xuất tự kháng nguyên IgA1 trong bệnh thận IgA. Kidney Int Rep. 2017; 2: 1194–1207.

26. Schneider P, MacKay F, Steiner V, và cộng sự. BAFF, một phối tử mới của họ yếu tố hoại tử khối u, kích thích sự phát triển của tế bào B. J Exp Med. 1999; 189: 1747–1756.

27. Kiryluk K, Li Y, Scolari F, et al. Việc phát hiện ra các locus nguy cơ mới đối với bệnh thận IgA liên quan đến các gen liên quan đến khả năng miễn dịch chống lại các tác nhân gây bệnh đường ruột. Nat Genet. 2014; 46: 1187–1196.

28. Han SS, Yang SH, Choi M, et al. Vai trò của thành viên siêu họ 13 TNF trong sự tiến triển của bệnh thận IgA. J Am Soc Nephrol. 2016; 27: 3430– 3439.

29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M, et al. Khối phổ chứng minh sự glycosyl hóa dưới O của IgA1 cầu thận trong bệnh thận IgA. Thận Int. 2001; 59: 1077–1085.

30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE, et al. IgA1 trung tâm trong bệnh thận IgA thể hiện quá trình O-glycosyl hóa không bình thường: quan sát ở ba bệnh nhân. Thận Int. 2001; 60: 969–973.

31. Hiki Y. Các oligosaccharid liên kết O của vùng bản lề IgA1: vai trò của cấu trúc không ổn định của nó trong sự xuất hiện và / hoặc tiến triển của bệnh thận IgA. Clin Exp Nephrol. 2009; 13: 415–423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z, và cộng sự. Vai trò của quá trình glycosyl hóa không bình thường của các phân tử IgA1 trong cơ chế bệnh sinh của bệnh thận IgA. Máy ép máu thận Res. 2008; 31: 29–37.

33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C, và cộng sự. Những con chuột biểu hiện quá mức BAFF phát triển bệnh thận liên quan đến IgA phụ thuộc vào flflora. J Clin Đầu tư. 2011; 121: 3991–4002.

34. Muto M, Manfroi B, Suzuki H, et al. Kích thích thụ thể giống Toll 9 gây ra biểu hiện sai lệch của phối tử gây tăng sinh bởi các tế bào trung tâm mầm amiđan B trong bệnh thận IgA. J Am Soc Nephrol. 2017; 28: 1227–1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A, và cộng sự. Tín hiệu TLR9 sau khi chuyển vị từ ER sang CpG DNA trong lysosome. Nat Immunol. 2004; 5: 190–198.

36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S, và cộng sự. Biểu hiện định lượng của mRNA thụ thể giống số điện thoại 1-10 trong các tập hợp con tế bào của tế bào đơn nhân máu ngoại vi của con người và nhạy cảm với các oligodeoxynucleotide CpG. J Immunol. 2002; 168: 4531–4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S, et al. Các tập hợp con của tiền chất tế bào đuôi gai của người biểu hiện các thụ thể giống số khác nhau và phản ứng với các kháng nguyên vi sinh vật khác nhau. J Exp Med. 2001; 194: 863 - 869.

38. He B, Xu W, Santini PA, et al. Vi khuẩn đường ruột kích hoạt chuyển đổi lớp immunoglobulin A (2) không phụ thuộc vào tế bào T bằng cách gây ra sự tiết cytokine của tế bào biểu mô APRIL. Miễn dịch. 2007; 26: 812–826.

39. Mackay F, Schneider P. Bẻ khóa mã BAFF. Nat Rev Immunol. 2009; 9: 491–502.

40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. IL -6 là đồng yếu tố mạnh của IL -1 trong tổng hợp IgM và của IL -5 trong tổng hợp IgA. J Immunol. Năm 1989; 143: 2230–2235.

41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F, và cộng sự. Tổng hợp interleukin và IgA. Interleukin 6 của người và chuột gây ra sự bài tiết IgA với tốc độ cao trong các tế bào B cam kết với IgA. J Exp Med. Năm 1989; 169: 2133–2148.

42. Ramsay AJ, Chồng AJ, Ramshaw IA, et al. Vai trò của interleukin -6 trong phản ứng kháng thể IgA niêm mạc in vivo. Khoa học. Năm 1994; 264: 561– 563.

43. Nurieva RI, Chung Y, Martinez GJ, et al. Bcl6 làm trung gian cho sự phát triển của tế bào trợ giúp nang T. Khoa học. 2009; 325: 1001–1005.

44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG, et al. In vivo điều hòa sự phát triển tế bào trợ giúp nang Bcl6 và T. J Immunol. 2010; 185: 313–326.

45. Jain S, Park G, Sproule TJ, et al. Interleukin 6 làm tăng nhanh tỷ lệ tử vong bằng cách thúc đẩy sự tiến triển của bệnh giống lupus ban đỏ hệ thống của chuột BXSB.Yaa. PLoS Một. 2016; 11: e0153059.

46. ​​Litinskiy MB, Nardelli B, Hilbert DM, et al. DCs gây ra sự chuyển đổi lớp globulin miễn dịch độc lập CD 40- qua BLyS và APRIL. Nat Immunol. Năm 2002; 3: 822–829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S, và cộng sự. TACI và BAFF-R làm trung gian chuyển đổi isotype trong các tế bào B. J Exp Med. 2005; 201: 35–39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N, và cộng sự. IL -6 hỗ trợ tạo ra các tế bào huyết tương sống lâu của con người kết hợp với APRIL hoặc các yếu tố hòa tan trong tế bào mô đệm. Bệnh bạch cầu. 2014; 28: 1647–1656.

49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G, et al. Bạch cầu ái toan cần thiết để duy trì các tế bào huyết tương trong tủy xương. Nat Immunol. 2011; 12: 151–159.

50. Suzuki H, Suzuki Y, Aizawa M, et al. Sự phân cực Th1 trong bệnh thận IgA ở chuột do các tế bào có nguồn gốc từ tủy xương chỉ đạo. Thận Int. 2007; 72: 319–327.

51. Chintalacharuvu SR, Emancipator SN. Quá trình glycosyl hóa IgA được tạo ra bởi các tế bào B của chuột bị thay đổi bởi các cytokine Th2. J Immunol. 1997; 159: 2327– 2333.

52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Phương pháp mới lạ không phụ thuộc vào lectin để phát hiện IgA1 thiếu galactose trong bệnh thận IgA. Ghép số Nephrol. 2015; 30: 1315–1321.

53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y, et al. Điểm cầu thận như một yếu tố tiên lượng trong bệnh thận IgA: tính hữu ích và hạn chế của nó. Clin Nephrol. 1998; 49: 1–8.

54. Ballardie FW, Roberts IS. Thử nghiệm tiền cứu có kiểm soát đối với prednisolon và các chất độc tế bào trong bệnh thận IgA tiến triển. J Am Soc Nephrol. 2002; 13: 142–148.