Tổng Quan Về Thành Phần Phlorotannins Trong Fucales Phần 3
Jun 30, 2023
Glycoside của cistanche cũng có thể làm tăng hoạt động của SOD trong các mô tim và gan, đồng thời làm giảm đáng kể hàm lượng lipofuscin và MDA trong mỗi mô, loại bỏ hiệu quả các gốc oxy phản ứng khác nhau (OH-, H₂O₂, v.v.) và bảo vệ chống lại tổn thương DNA gây ra bởi gốc OH. Cistanche phenylethanoid glycoside có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ, khả năng khử cao hơn vitamin C, cải thiện hoạt động của SOD trong huyền phù tinh trùng, giảm hàm lượng MDA và có tác dụng bảo vệ nhất định đối với chức năng màng tinh trùng. Cistanche polysacarit có thể tăng cường hoạt động của SOD và GSH-Px trong hồng cầu và mô phổi của chuột lão hóa thực nghiệm do D-galactose gây ra, cũng như làm giảm hàm lượng MDA và collagen trong phổi và huyết tương, đồng thời tăng hàm lượng elastin, có tác dụng nhặt rác tốt đối với DPPH, kéo dài thời gian thiếu oxy ở chuột già, cải thiện hoạt động của SOD trong huyết thanh và làm chậm quá trình thoái hóa sinh lý của phổi ở chuột già thực nghiệm. Với sự thoái hóa hình thái tế bào, các thí nghiệm đã chỉ ra rằng Cistanche có khả năng chống oxy hóa tốt và có tiềm năng trở thành dược phẩm ngăn ngừa và điều trị các bệnh lão hóa da. Đồng thời, echinacoside trong Cistanche có khả năng đáng kể trong việc loại bỏ các gốc tự do DPPH và có thể loại bỏ các loại oxy phản ứng và ngăn chặn sự thoái hóa collagen do gốc tự do gây ra, đồng thời cũng có tác dụng sửa chữa tốt đối với tổn thương anion gốc tự do của thymine.
Nhấp vào Tôi có thể mua Cistanche ở đâu
【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
Đối với Eckols, do có sự hiện diện của cấu trúc dibenzodioxin, chúng có thể được phân biệt với các nhóm khác dựa trên các ion phân tử đã khử proton của chúng, thường thấp hơn 2 Da so với các PT khác có DP bằng nhau, đối với mỗi họa tiết dibenzodioxin có trong cấu trúc (Hình 5D). Ví dụ, eckol thể hiện [MH]− tại m/z 371, trong khi trifocal, triphlorethol và fucophlorethol đều có mặt [MH]− tại m/z 373. Đến lượt, vẫy gọi, có hai cấu trúc dibenzodioxin trong xương sống của chúng, biểu hiện [MH]− ở m/z 741, trong khi các đương lượng hexamer của chúng biểu hiện [MH]− ở m/z 745. Điều tương tự cũng áp dụng cho carmalol, về cơ bản là các hội trường chứa cấu trúc dibenzodioxin [120]. Cuối cùng, một số PT có chứa các vòng furan, chẳng hạn như fucofuroeckol và phlorofucofuroeckol, được đặc trưng bởi một ion phân tử bị khử proton, tức là [MH]− thấp hơn 18 Da, so với các chất tương đương không chứa furan của chúng với các DP bằng nhau (ví dụ: cấu trúc fucofuroeckol so với phloroeckol chỉ khác nhau về sự có mặt/không có vòng furan và hiển thị [MH]− tại m/z 496 và 478, tương ứng) [120]. Bảng 3 cho thấy dữ liệu MS được thu thập từ các nghiên cứu khác nhau tập trung vào việc xác định các PT ở Fucales.
Mặc dù những nền tảng này có thể hữu ích để đạt được sự xác định cấu trúc hợp lý của các PT có trọng lượng phân tử thấp, nhưng những khó khăn lớn nảy sinh khi nói đến oligome và polyme có trọng lượng phân tử cao do quá trình đồng phân hóa của chúng tăng theo cấp số nhân và khó có thể có nhiều khả năng sắp xếp và kết hợp phloroglucinol. được làm sáng tỏ bởi MS hoặc MS/MS. Tuy nhiên, trong những trường hợp như vậy, MS vẫn có thể cung cấp thông tin có giá trị về DP của các hợp chất có trong hỗn hợp phlorotannin. Về vấn đề này, thời gian khử hấp thụ/ion hóa laser được hỗ trợ bởi ma trận của chuyến bay MS (MALDI-TOF-MS) tạo thành một phương pháp phù hợp hơn để phân tích các oligome lớn hơn vì nó có thể phát hiện các phân tử có m/z trên giới hạn trên của ESI- BỆNH ĐA XƠ CỨNG. Kỹ thuật này đã được sử dụng để nghiên cứu phần phlorotannin của Sargassum wightii, cho phép xác nhận sự hiện diện của dimer, trimer và hexamer của phloroglucinol [125]. MS có độ phân giải cao (HRMS) là một phương pháp thay thế cũng có thể được sử dụng để phân tích các PT có trọng lượng phân tử cao, dựa trên các ion đa điện tích và những thay đổi trong mẫu đồng vị cộng 1 13C. Nói cách khác, khi một hợp chất được tích điện hai lần hoặc ba lần, nó hiển thị một mẫu đồng vị cộng 1 13C với chênh lệch m/z lần lượt là 0.5 và 0.33 . Trên nguyên tắc này, Stevensz et al. [78] đã có thể lập hồ sơ thành phần PT của P. canaliculata, F. Xoắn ốc, F. vesiculosus và A. nodosum về DP, phát hiện các hợp chất có trọng lượng phân tử lên tới 6000 Da, nếu không thì sẽ vượt quá phạm vi khối lượng của ESI-MS.
Nhìn chung, mặc dù phép đo khối phổ có thể là một kỹ thuật tháo vát để phân tích định tính PT và thậm chí đủ mạnh để đạt được đặc tính hợp lý tốt của các hợp chất có trọng lượng phân tử thấp, nhưng nó không thu được đủ thông tin chi tiết về loại và vị trí liên kết của các dạng đồng phân của hợp chất với DPS cao hơn. Do đó, khi mục tiêu là làm sáng tỏ đầy đủ các đặc điểm cấu trúc của PT, NMR là phương pháp hiệu quả duy nhất có thể đưa ra độ phân giải đủ cho phân tích chuyên sâu như vậy.
5.2.3. NMR
Quang phổ NMR bao gồm phân tích trực tiếp và không phá hủy, có thể hữu ích không chỉ để truy cập nội dung của PT mà còn làm sáng tỏ đầy đủ các đặc điểm cấu trúc của PT. Khi dự kiến dữ liệu định lượng, tín hiệu cộng hưởng 1H NMR của tất cả các hợp chất phenolic có trong chiết xuất tảo được tích hợp và so sánh với tín hiệu của chất chuẩn nội thích hợp; các hợp chất này cần ổn định, trơ về mặt hóa học, có sẵn ở dạng rất tinh khiết và hòa tan hoàn toàn trong cùng (các) dung môi khử màu như mẫu. Nhìn chung, các tác giả đã và đang sử dụng các cách tiếp cận và phương pháp luận khác nhau để định lượng các hợp chất phenolic và/hoặc PT thông qua kỹ thuật này, kể cả trong các mẫu có nguồn gốc từ Fucale.
Trong 2009, Parys et al. lần đầu tiên mô tả việc sử dụng phương pháp định lượng 1H NMR (NMR) để xác định sự biến động hàm lượng phlorotannin của A. nodosum trong năm. Trong nghiên cứu của họ, axit trimesic được sử dụng làm chất chuẩn nội (2,0 mg axit trimesic trong 0,8 mL metanol đã khử màu và 0,2 mL oxit đơteri) và đường chuẩn được tạo ra bằng cách sử dụng phloroglucinol. Mặc dù hàm lượng PT cao hơn được phát hiện bởi qHNMR, so với hàm lượng thu được bằng phương pháp đo màu FC, cả hai phương pháp đều tuân theo cùng một xu hướng biến đổi theo mùa [126]. Điều quan trọng cần lưu ý là, trái ngược với xét nghiệm đo màu, không đặc trưng cho PT hoặc thậm chí cho các hợp chất phenolic, sự tích hợp tín hiệu cộng hưởng của phổ 1H NMR trong qHNMR được so sánh với tín hiệu của chất chuẩn nội. Do những khác biệt cơ bản này, không thể so sánh trực tiếp chính xác giữa cả hai phương pháp [127,128].
Sử dụng một cách tiếp cận khác biệt, Stiger-Pouvreau và đồng nghiệp đã sử dụng kỹ thuật quay góc ma thuật có độ phân giải cao (HR-MAS) để định lượng PT trong tảo nâu, Cystoseira tamariscifolia. Trong nghiên cứu này, NMR trạng thái rắn được sử dụng để phát hiện phloroglucinol (monome) in vivo và 1H qNMR được áp dụng để ước tính định lượng monome (sử dụng trimethylsilyl-propionate –d4 (TSP) làm chất nội chuẩn). Nhóm đơn phloroglucinol ở δ 6,02 ppm, được tích hợp vào ba proton, đã xác nhận sự hiện diện của nó trong mẫu. Độ chính xác của phương pháp này được đánh giá bằng cách sử dụng dung dịch phloroglucinol tiêu chuẩn và kết quả được xác nhận bằng cách so sánh với kết quả của xét nghiệm FC. Cuối cùng, các tác giả tuyên bố rằng phương pháp được trình bày bao gồm một phương pháp sáng tạo và nhanh chóng để định lượng phloroglucinol, có thể áp dụng cho tất cả các loài tảo. Hạn chế duy nhất của phương pháp qNMR nằm ở sự cần thiết của ít nhất một trong số các tín hiệu quang phổ (singlet, doublet, v.v.) được quy rõ ràng cho một và chỉ một hợp chất [129].
Trước đó vào năm 2010, cùng các tác giả đã chứng minh tiềm năng của 1H HR-MAS NMR in-vivo kết hợp với Khối phổ (LC/ESI–MSn ) để quan sát hồ sơ hóa học toàn cầu của năm loài thuộc chi Cystoseira, hiện diện dọc theo bờ biển của Brittany ở Pháp: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis và C. tamariscifolia [130]. Các
mục tiêu chính của công việc của họ là xác định các mẫu Cystoseira và thảo luận về phân loại của chúng. Kết quả đã chứng minh tính hiệu quả của phương pháp được trình bày để phân biệt chủ yếu C. nodicaulis và C. tamariscifolia vì quang phổ của chúng cho thấy sự hiện diện của các tín hiệu đặc trưng, cho phép nhận dạng rõ ràng chúng. Trong trường hợp một nhóm đơn ở mức 2,91 ppm cho lần đầu tiên và lần sau, đỉnh chính xác là 6.00 ppm đã mô tả loài này và chỉ ra khả năng xuất hiện của một phlorotannin đơn giản. Foeniculacea và C. humilis thường được đặc trưng bởi sự xuất hiện của hai thể kép có cường độ bằng nhau ở mức 7,90 và 7,36 ppm. Tuy nhiên, sự phân biệt tuyệt đối giữa hai tín hiệu vẫn không thể. Sự giống nhau của các tín hiệu NMR in-vivo, song song với sự đa dạng hóa học nhẹ giữa các loài của cả hai loài, đã chứng minh cho những kết quả này. Cuối cùng, trong trường hợp của C. baccata, mặc dù thể hiện sự đa dạng hóa học quan trọng nhất, nhiều tín hiệu cho phép sự phân biệt liên tục với các loài khác.
Vào năm 2020, Walsh và đồng nghiệp [131] đã chứng minh khả năng kháng khuẩn của hai chất chiết xuất phlorotannin tinh khiết từ A. nodosum và F. serratus, hai loại rong biển màu nâu vùng triều. Trong nghiên cứu đó, phân tích 1H và 13C NMR không chỉ cho phép ước tính định lượng và định tính tổng số hợp chất phenolic mà còn tiếp cận sự khác biệt trong cấu hình liên kết giữa các chất chiết xuất phenol tinh khiết của cả hai loài. Đối với xét nghiệm FC, lượng hợp chất phenolic toàn phần cao hơn đáng kể được tìm thấy trong A. nodosum so với F. serratus và kết quả đã được xác thực bằng xét nghiệm FC. Ngoài ra, kết quả đạt được khi sử dụng cả xét nghiệm qNMR và FC đã chứng minh sự tồn tại của các biến thể giữa các mẫu được thu thập mỗi tháng và giữa cả hai phương pháp.
Để làm sáng tỏ cấu trúc PT, phân tích NMR 1H và 13C lần đầu tiên được Glombitza và nhóm của ông áp dụng vào những năm 70 khi họ xác định được phloroglucinol trong các loài tảo nâu khác nhau. Độ phức tạp của quang phổ liên quan đến các dẫn xuất này chỉ cho phép xác định các cấu trúc polyphenolic nhỏ hơn. Do đó, vào năm 1974, đây là lần đầu tiên cấu trúc hóa học của bifuhalol và diphlorethol được làm sáng tỏ từ dịch chiết 80% etanol của C. tamariscifolia [132].
Tuy nhiên, kể từ đó, hơn một trăm cấu trúc PT đã được làm sáng tỏ bằng cách sử dụng NMR [133]. Để làm được điều đó, các chất chiết xuất thường được gửi đến bước tiền xử lý bằng hexan hoặc ete dầu mỏ để kết tủa các PT lớn. Ngoài ra, để ngăn ngừa sự mất ổn định của PT, tạo thuận lợi cho phân tích NMR và thay đổi độ phân cực của các hợp chất này, chúng thường được axetyl hóa bằng anhydrit axetic và pyridin, do đó, cho phép tinh chế sắc ký silica pha thường của chúng [119]. Trong phổ 1H NMR của loại hợp chất này, cần lưu ý hai khía cạnh: sự cộng hưởng của các proton thơm xuất hiện giữa δ 6.0 và 7,5 ppm, và các nhóm acetyl xuất hiện dưới dạng các đỉnh nhóm đơn giữa δ 2 và 3 ppm . Đây là một công cụ hữu ích để thiết lập số lượng nhóm hydroxy tự do trong các hợp chất phenol không được bảo vệ ban đầu. Hai loại hệ thống vòng thơm có thể xảy ra được thể hiện trong Hình 6. Môi trường hóa học đặc biệt của hai loại proton (Ha và Hb) làm thay đổi bội số của các tín hiệu quan sát được trong 1H NMR, cũng như sự tích hợp của chúng.
Cùng với phổ 1H NMR, phổ 13C và HSQC, và HMBC NMR, đã được sử dụng để làm rõ cấu trúc của các PT tinh khiết, kể cả trong Fucales. Phương pháp quang phổ tương quan hạt nhân-NMR rất hữu ích để xác định loại PT từ một nền mẫu (monomer, nhiên liệu, chloroethyl, full, fucophloroethol, v.v.) [134]. Các tín hiệu 13C-NMR đặc trưng của các PT được tóm tắt trong Bảng 4. Xuất hiện ở các dịch chuyển hóa học đặc trưng, các cộng hưởng cacbon của một loại cacbon riêng biệt cùng với cường độ của chúng cho phép quy một số tín hiệu cho các loại PT cụ thể, đặc biệt là các phlorethol e Halls. .
Năm 1997 Glombitza et al. [135] đã mô tả sự phân lập và đặc tính của 33 PT từ tảo nâu, Cystophora torulosa. Các lớp PT khác nhau đã được xác định bao gồm phlorethols và hall, fucophlorethols và hydroxyfucophlorethols (ví dụ trong Hình 7). Ngoài ra, về loại thứ hai, bảy hydroxyfucophlorethols mới mang các nhóm hydroxyl bổ sung đã được xác định và đặc trưng (NMR và MS). Như đã đề cập trước đây, để ngăn chặn quá trình oxy hóa và tăng tính ưa ẩm của các dẫn xuất PT được phân lập, các tác giả đã mô tả sự phân lập của chúng là axetat [82].
Koch et al. cũng đã chứng minh ứng dụng của 1H và 13C NMR để mô tả các fuhalolaxetat lớn hơn trong B. bifurcate [136]. Kỹ thuật quang phổ HSQC và HMBC (2D) NMR đã được sử dụng bởi Cérantola et al. để hiển thị sự hiện diện của cấu trúc fucol và fucophlorethol trong chiết xuất của Fucus xoắn ốc [137]. Cách tiếp cận tương tự đã được sử dụng với Halidrys siliquosa, có nhiều ở Brittany. Việc sử dụng 1D và 2D NMR, và phân tích MS cho phép xác định bốn dẫn xuất phenolic: trifuhalol và tetrafuhalol, và lần đầu tiên, diphlorethols và triphlorethols [125]. Bảng 5 tóm tắt các nghiên cứu nêu trên trong đó 1H và 13C NMR đã góp phần làm sáng tỏ cấu trúc của các PT chiết xuất từ tảo thuộc họ Fucales.
【Để biết thêm thông tin:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
