Phần 1|Sự biến đổi di truyền liên quan đến Angiopoietin huyết tương -2 trong sự phát triển của các kiểu hình phụ bị thương thận cấp tính
Mar 03, 2022
Pavan K. Bhatraju1,2 *, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 và Mark M. Wurfel1,2
trừu tượng
Tiểu sử:Trước đây chúng tôi đã xác định được hainhọnquả thậnvết thương(AKI) kiểu hình phụ (AKI-SP1 và AKI-SP2) với các nguy cơ khác nhau về kết quả lâm sàng kém và đáp ứng với liệu pháp vận mạch. Các dấu ấn sinh học huyết tương của rối loạn chức năng nội mô (thụ thể yếu tố hoại tử khối u -1, angiopoietin -1 và 2) đã phân biệt các kiểu hình phụ AKI.
Tuy nhiên, người ta vẫn chưa biết liệu những dấu ấn sinh học này chỉ đơn giản là chất đánh dấu hay chất trung gian nhân quả trong sự phát triển của các kiểu hình phụ AKI.
Phương pháp:Chúng tôi đã kiểm tra các mối liên hệ giữa các đa hình đơn nucleotide trongAngiopoietin -1, Angiopoietin -2,vàThụ thể yếu tố hoại tử khối u 1Agen và AKI- SP2 ở 421 đối tượng bị bệnh nặng có nguồn gốc châu Âu. Các đa hình nucleotide đơn có hiệu suất hàng đầu (FDR <0. 05)="" đã="" được="" kiểm="" tra="" về="" sự="" biểu="" hiện="" cis-dấu="" ấn="" sinh="" học="" và="" liệu="" nguy="" cơ="" di="" truyền="" đối="" với="" aki-sp2="" có="" được="" điều="" hòa="" thông="" qua="" các="" dấu="" ấn="" sinh="" học="" lưu="" hành="" hay="" không.="" chúng="" tôi="" cũng="" đã="" hoàn="" thành="" các="" nghiên="" cứu="" trong="" ống="" nghiệm="" bằng="" cách="" sử="" dụng="" các="" tế="" bào="" nội="" mô="" vi="" mạch="" thận="" của="" con="" người.="" cuối="" cùng,="" chúng="" tôi="" tính="" toán="" độ="" thanh="" thải="" qua="" thận="" của="" các="" dấu="" ấn="" sinh="" học="" trong="" huyết="" tương="" bằng="" cách="" sử="" dụng="" 20="" lần="" lấy="" nước="" tiểu="" theo="" thời="" gian="" khác="">
Kết quả:Một biến thể di truyền, rs2920656C> T, gầnANGPT2có liên quan đến việc giảm nguy cơ mắc AKI-SP2 (tỷ lệ chênh lệch, 0. 45; 95% CI, 0. 31 - 0. 66; FDR đã điều chỉnh=0. 003 ) và giảm angiopoietin huyết tương -2 (p = 0. 002). Phân tích suy luận nhân quả cho thấy rằng đối với mỗi alen phụ (T), nguy cơ phát triển AKI-SP2 giảm 16%. Angiopoietin huyết tương -2 làm trung gian 41,5 phần trăm nguy cơ liên quan đến rs2920656 đối với AKI-SP2. Tế bào nội mô vi mạch ở thận của con người mang alen T của rs2920656 tạo ra mức độ angiopoietin thấp hơn về mặt số lượng -2 mặc dù điều này không có ý nghĩa thống kê (p = 0. 07). Cuối cùng, các phân tích đã chứng minh rằng angiopoietin -2 thực sự được xóa bỏ ở những đối tượng bị bệnh nặng.
Sự kết luận:Phân tích trung gian di truyền cung cấp bằng chứng hỗ trợ rằng angiopoietin -2 đóng một vai trò nhân quả trong nguy cơ đối với AKI-SP2.
Từ khóa: Chấn thương thận cấp tính, Di truyền, Nội mô
Vui lòng liên lạc để biết thêm thông tin:emily.li@wecistanche.com
Cistanche Desticola ngăn ngừa bệnh thận, bấm vào đây để lấy mẫu
Tiểu sử
Nhọnquả thậnvết thương(AKI) ảnh hưởng đến 40-60 phần trăm bệnh nhân được điều trị tại đơn vị chăm sóc đặc biệt (ICU) và góp phần vào các kết quả kém ngắn hạn và dài hạn. Các nghiên cứu di truyền cho đến nay đã tập trung vào mối liên quan giữa các biến thể di truyền và nguy cơ mắc bệnh AKI so sánh các trường hợp (AKI) với các trường hợp chứng (không có AKI). Tuy nhiên, khuôn khổ này có thể bị hạn chế vì các trường hợpNhọnquả thậnvết thươngrất không đồng nhất với các chất kết tủa và cấu hình logic sinh học khác nhau. Việc kết hợp các bệnh nhân AKI như vậy để tối đa hóa kích thước mẫu có thể dẫn đến pha loãng các tín hiệu thống kê di truyền có thể chỉ có trong một tập hợp con khác biệt về mặt sinh lý bệnh của quần thể AKI. Một hạn chế khác là AKI ở những người bị bệnh nặng thường là biến chứng của những lời xúc phạm nghiêm trọng, chẳng hạn như nhiễm trùng huyết, phẫu thuật, sốc, viêm phổi và chấn thương. Việc sử dụng các điều khiển mà không phát triểnNhọnquả thậnvết thươngcó thể có vấn đề. Các đối chứng mang biến thể di truyền nguy cơ cao có thể không phát triển AKI nếu chúng không bị xúc phạm cấp tính tương tự như các trường hợp, và do đó sẽ được phân loại là không thuộc trường hợp, làm suy giảm bất kỳ tín hiệu liên quan tiềm năng nào. Việc sử dụng các kiểu hình phụ AKI khác biệt về mặt sinh học trong các nghiên cứu liên kết di truyền đã khắc phục được những hạn chế trước đây trong việc xác định kiểu hình AKI bằng cách tập trung đặc biệt vào quần thể AKI và bằng cách so sánh hai kiểu hình phụ khác biệt về mặt sinh học.
Gần đây, chúng tôi đã xác định được hai kiểu hình phụ AKI (AKI-SP1 và AKI-SP2) bằng cách áp dụng phương pháp phân tích lớp tiềm ẩn cho một bảng gồm 29 biến số lâm sàng và dấu ấn sinh học trong hai quần thể AKI bị bệnh nghiêm trọng độc lập. Đáng chú ý, AKI-SP2 có liên quan đến kết quả bệnh viện tồi tệ hơn (ví dụ: tử vong, mới lọc máu và thận không hồi phục 7- ngày) so với AKI-SP1. Tiếp theo, chúng tôi xác định các kiểu hình phụ AKI này trong một thử nghiệm đối chứng ngẫu nhiên đa trung tâm đã hoàn thành trước đó, Vasopressin so với Truyền Norepinephrine ở Bệnh nhân Sốc nhiễm trùng (VASST). Thử nghiệm VASST nghiên cứu liệu việc lựa chọn liệu pháp vận mạch có cải thiện tỷ lệ tử vong ở những đối tượng bị sốc nhiễm trùng hay không. Trong khi quần thể AKI trong thử nghiệm lâm sàng không có sự khác biệt về tỷ lệ tử vong khi điều trị bằng thuốc vận mạch, AKI-SP1 có lợi ích về tỷ lệ tử vong với vasopressin so với AKI-SP2 không có sự khác biệt về tỷ lệ tử vong. Theo hiểu biết của chúng tôi, đây là ví dụ đầu tiên về việc xác định các nhóm phụ AKI đáp ứng điều trị ở những người bệnh nặng.
Đáng chú ý, không có biến đơn lẻ nào tốt hơn về mặt thống kê so với các biến khác để xác định AKI-SP2 (Bảng 1). Ngược lại, mô hình ba biến số, sử dụng angiopoietin huyết tương -2 (ANG -2), angiopoietin -1 (ANG -1) và thụ thể yếu tố hoại tử khối u hòa tan {{8 }} (sTNFR -1), có hiệu suất dự đoán tối ưu để phân biệtNhọnquả thậnvết thươngkiểu hình phụ (thống kê C 0. 93). ANG thấp hơn -2, sTNFR thấp hơn -1 và ANG cao hơn -1 có liên quan đến nguy cơ mắc AKI-SP2 thấp hơn. Các nghiên cứu trên mô hình động vật của AKI đã chỉ ra rằng những dấu ấn sinh học huyết tương này có liên quan đến
sinh lý bệnh và mức độ nghiêm trọng của AKI. Tuy nhiên, người ta vẫn chưa biết liệu những dấu ấn sinh học huyết tương này có đóng vai trò nhân quả trong sự phát triển của bệnh lâm sàng hay không.Nhọnquả thậnvết thươngcác kiểu hình phụ. Việc xác định các dấu hiệu nhân quả có thể thông báo cho các mục tiêu phát triển thuốc để ngăn ngừa hoặc điều trị sự phát triển củaNhọnquả thậnvết thươngở người bệnh nặng và có thể hỗ trợ phân tầng nguy cơ của bệnh nhân.
Phân tích trung gian di truyền là một trong số các phương pháp tiếp cận suy luận nhân quả có thể xác định cơ chế tiềm ẩn mà một biến độc lập (ví dụ: biến thể di truyền) ảnh hưởng đến kết quả (ví dụ, kiểu hình phụ AKI) thông qua một trung gian giải thích (ví dụ: dấu ấn sinh học của rối loạn chức năng nội mô) . Cách tiếp cận này đã được áp dụng rộng rãi trong dữ liệu lâm sàng để hiểu cơ chế nhân quả của sự dễ mắc. Chúng tôi đã giả thuyết rằng các locus tính trạng định lượng cis (QTL) trongANGPT1, ANGPT2 và TNFRSF1Agen ảnh hưởng đến sự phát triển của các kiểu hình phụ AKI bằng cách điều chỉnh mức độ lưu hành của các dấu hiệu sinh học tương ứng của chúng (ANG -1, ANG -2 hoặc sTNFR -1).
Phương pháp
Nghiên cứu quần thể
Trước đây, chúng tôi đã báo cáo việc xác định các kiểu hình phụ AKI bằng cách sử dụng thuần tập ICU được thu thập một cách khách quan: xác định Đa hình Nucleotide Đơn (SNP) Có khuynh hướng dẫn đến Nguy cơ Chấn thương Phổi Cấp tính Thay đổi (iSPAAR). Quần thể iSPAAR là một nghiên cứu bệnh chứng trên toàn bộ bộ gen về nguy cơ mắc hội chứng suy hô hấp cấp tính (ARDS) bao gồm những bệnh nhân có và không mắc ARDS. Dân số iSPAAR bao gồm các đối tượng từ các thử nghiệm đối chứng ngẫu nhiên đã hoàn thành trước đó và từ một nhóm thuần tập ICU được đăng ký tiền cứu. Chi tiết về thiết kế nghiên cứu cho từng đối tượng đăng ký tham gia iSPAAR đã được mô tả trước đây; Albuterol để điều trị chấn thương phổi cấp tính (ALTA), Thử nghiệm điều trị chất lỏng và ống thông (FACTT), axit béo omega -3 trong đường ruột, axit gamma-linolenic và bổ sung chất chống oxy hóa trong tổn thương phổi cấp tính (OMEGA)
và Dịch tễ học phân tử của bệnh suy hô hấp cấp tính (MEA) tại Bệnh viện Đa khoa Massachusetts. Trong iSPAAR, ghi danh nghiên cứu diễn ra 48 giờ sau khi ICU nhập học. Tại thời điểm ghi danh nghiên cứu, DNA và huyết tương được thu thập để phân tích kiểu gen và dấu ấn sinh học, sau đóNhọnquả thậnvết thươngsự chứng minh. AKI được định nghĩa là sự gia tăng creatinine huyết thanh (SCr) Lớn hơn hoặc bằng 0. 3 mg / dl hoặc 50 phần trăm so với SCr "cơ bản". SCr cơ sở được định nghĩa là giá trị thấp nhất trước khi đăng ký học. AKI cũng được xác định bằng cách sử dụng tiêu chí lượng nước tiểu đã sửa đổi (lượng nước tiểu hàng ngày thay vì 6 giờ một lần).
Để xác định độ thanh thải ở thận của các dấu ấn sinh học trong huyết tương, chúng tôi đã đăng ký một nhóm nghiên cứu tiềm năng trong các đơn vị chăm sóc đặc biệt về y tế và phẫu thuật Harborview, Bệnh hiểm nghèoNhọnquả thậnvết thươngNhóm thuần tập (CIA). Các đối tượng đủ điều kiện đăng ký nếu họ đáp ứng 2 trong 4 tiêu chí về hội chứng phản ứng viêm toàn thân, có nghi ngờ nhiễm trùng trên lâm sàng và đặt ống thông tiểu tại chỗ. Quá trình thu thập nước tiểu theo thời gian đã được hoàn thành kéo dài ít nhất 2–4 giờ và các mẫu huyết tương EDTA được thu thập vào đầu và cuối của quá trình thu thập nước tiểu theo thời gian. Giải phóng mặt bằng được tính bằng công thức Giải phóng mặt bằng(X) = U(X) * V/ P(X), ở đâuU(X) đại diện cho nồng độ chất tan trong nước tiểuX, V cho biết lượng nước tiểu trong khoảng thời gian thu thập 2 - 4- h vàP (X) đại diện cho nồng độ trung bình trong huyết tương của chất tanX từ các lần lấy máu ban đầu và cuối cùng.
Chiến lược định kiểu gen
Định kiểu gen được thực hiện ở 421 bệnh nhân có nguồn gốc Châu Âu bằng cách sử dụng nền tảng Illumina 66 0 (Illumina, San Diego, CA). Dữ liệu kiểu gen được kiểm soát chất lượng bằng cách sử dụng bộ lọc tỷ lệ cuộc gọi mẫu> 0. 97, tần số alen phụ (MAF)> 0. 01 và tỷ lệ cuộc gọi SNP> 0,95. Sau khi kiểm soát chất lượng, 238 SNPs ± 50 kilobase củaANGPT1, ANGPT2,vàTNFRSF1Ađã được tìm thấy. Sau khi mất cân bằng liên kết (LD), việc cắt tỉa một r2trong tổng số {{0}}. 8, 48 SNP đã bị xóa dẫn đến tổng số 190 SNP được sử dụng trong các thử nghiệm liên kết. Quá trình nạp được thực hiện bằng bảng tham chiếu Dự án 1000 bộ gen sử dụng IMPUTE2 v2.3.0.
Đánh giá protein huyết tương
Các dấu ấn sinh học huyết tương và nước tiểu được đo bằng xét nghiệm miễn dịch điện hóa phát quang (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD), như đã mô tả trước đây. Máu được lấy trong các ống vô trùng được xử lý bằng EDTA, nước tiểu được thu thập trong các thùng chứa vô trùng và cả hai đều được ly tâm ngay lập tức. Huyết tương và nước tiểu sau đó được phân tách và đông lạnh ở - 80 độ. Các mẫu được lưu trữ trong các khoảng thời gian khác nhau nhưng chúng được rã đông trong một mẻ duy nhất và chỉ một lần để chạy các phép đo dấu ấn sinh học cho nghiên cứu này. Tất cả các phép đo dấu ấn sinh học được thực hiện thành bản sao tại Phòng thí nghiệm Nghiên cứu Phổi ở Harbour-view.
Trong phân tích Silico
Để kiểm tra SNPs cho sự biểu hiện của các hiệu ứng QTL, chúng tôi đã truy vấn Cổng biểu hiện kiểu gen-mô (GTEx).
Nuôi cấy tế bào
Tế bào nội mô vi mạch ở thận của con người (HKME Cs) được tinh lọc từ thận của thai nhi sau những lần gián đoạn mang thai tự nguyện từ 1 0 0 đến 135 ngày sau khi thụ thai. Bệnh nhân đã nhận được sự đồng ý được thông báo cho việc sử dụng các mô bào thai. Sau đó, chúng tôi chọn ngẫu nhiên 9 HKMEC của các nhà tài trợ khác nhau, rã đông và mạ nửa triệu tế bào trong bình T25 phủ 0,2% gelatin và duy trì trong môi trường cơ bản EBM -2 có chứa 1% kháng sinh-antimycotic (Life Technologies), 10% FBS, 100 ug / mL ECGS, 50 ug / mL Heparin và 20 ng / mL VEGF (R&D), trong 48 giờ cho đến khi hợp lưu. Ở 48 giờ, chúng tôi đã tinh chế DNA bộ gen từ HKMEC và thu thập các chất nổi của tế bào. Chúng tôi đã tạo kiểu gen thành công tế bào từ 8 người hiến tặng.
Phân tích thống kê
Các biến nhân khẩu học của bệnh nhân được báo cáo dưới dạng trung bình cộng / - độ lệch tiêu chuẩn hoặc dưới dạng trung vị và phần tư. Đầu tiên, chúng tôi sử dụng hồi quy logistic để kiểm tra mối liên hệ giữa 19 0 SNP và sự phát triển của AKI-SP2 so với AKI-SP1 bằng cách sử dụng mô hình di truyền cộng (Golden Helix, MT). Mô hình của chúng tôi được sử dụng cho các biến số sau: tuổi, giới tính, nhiễm trùng huyết và năm thành phần chính đầu tiên. Phương pháp Eigenstrat v4.2 được sử dụng để tính toán các thành phần chính và năm thành phần hàng đầu được bao gồm dưới dạng hiệp biến. Tỷ lệ cược (OR) được báo cáo với khoảng tin cậy 95 phần trăm. Đối với phân tích giữa các biến thể di truyền và kiểu hình phụ AKI, chúng tôi đã sửa chữa cho nhiều lần so sánh bằng cách sử dụng ngưỡng tỷ lệ phát hiện sai của Benjamini-Hochberg (FDR) <0,10, ước="" tính="" rằng="" ít="" hơn="" 10="" phần="" trăm="" các="" liên="" kết="" có="" giá="" trị="" fdr="" bằng="" hoặc="" thấp="" hơn="" mức="" này="" là="" dương="" tính="" giả="" [31].="" trong="" một="" phân="" tích="" độ="" nhạy,="" một="" kiểu="" gen="" được="" quy="" định="" đã="" được="" sử="" dụng="" để="" xác="" định="" snps="" bổ="" sung="" liên="" quan="" đến="">
Thứ hai, chúng tôi đã sử dụng hồi quy tuyến tính điều chỉnh cho tuổi, giới tính và nhiễm trùng huyết để xác định mối liên hệ giữa SNP hoạt động hàng đầu và nhật ký2chuyển đổi nồng độ dấu ấn sinh học. Thứ ba, chúng tôi đã hoàn thành một phân tích suy luận nhân quả để kiểm tra mối liên hệ giữa các biến thể di truyền và AKI-SP2 và khả năng trung gian của mối liên kết theo nồng độ dấu ấn sinh học trong huyết tương. Phân tích dàn xếp được thực hiện bằng cách sử dụng triển khai phi tuyến tính của mô hình phương trình cấu trúc được thực hiện trong gói dàn xếp cho STATA [32, 33]. Chi tiết bổ sung về phân tích suy luận nhân quả được cung cấp trong phần bổ sung trực tuyến. Thứ tư, chúng tôi xác định mối liên quan giữa các biến thể di truyền và mức độ nghiêm trọng của AKI, được đo bằng creatinine huyết thanh tối đa, thông qua hồi quy logistic. Các chi tiết bổ sung về vật liệu và phương pháp được cung cấp trong phần bổ sung trực tuyến. Trong phân tích, chúng tôi đã đánh giá 190 SNP và sử dụnggiá trị ptrong tổng số 0. 05 / 190 =2. 6 × 10− 4. Cho rằng khoảng 4 0 phần trăm bệnh nhân ICU phát triển AKI và tỷ lệ kiểm soát dự kiến (AKI- SP1) so với trường hợp (AKI-SP2) là 1,5, cỡ mẫu dự kiến là 421 và MAF ít nhất là { {16}}. 30, chúng tôi sẽ có 81 phần trăm sức mạnh để phát hiện rủi ro tương đối từ 1,5 trở lên [34]. Các phân tích đã được hoàn thành bằng STATA (Phiên bản 15) và Goldenhelix (Phiên bản 4.0). Tất cả các nghiên cứu đã được phê duyệt bởi Bộ phận Đối tượng Con người tại Đại học Washington. Sự đồng ý bằng văn bản được thông báo đã nhận được từ tất cả các đối tượng đăng ký.
Kết quả
Đặc điểm của quần thể Trong số 425 bệnh nhân từ nhóm thuần tập xác nhận trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi, 421 người có sẵn dữ liệu về kiểu gen. Nhân khẩu học và các đặc điểm lâm sàng cơ bản được mô tả trong Bảng 1. Tất cả các đối tượng đều có nguồn gốc Châu Âu. Tổng cộng 267 (63%) được phân loại là AKI-SP1 và 154 (37%) là AKI-SP2. Các đối tượng phát triển AKI-SP2 có mức độ nghiêm trọng của bệnh cao hơn khi trình bày (trung bình là sinh lý cấp tính và điểm đánh giá sức khỏe mãn tính (APACHE) III, 111 ± 26 so với 74 ± 24), có nhiều khả năng bị nhiễm trùng huyết (84% so với 66%), và có nhiều khả năng được điều trị bằng thuốc vận mạch (79% so với 42%) so với AKI-SP1.
Biến thể di truyền gần ANGPT2, rs2920656, được liên kết với AKI-SP2
Trong số 19 0 SNP ± 5 0 kilobase của gen, 72 ở gần ANGPT1, 1 0 0 gần ANGPT2 và 18 ở gần gen TNFRSF1A. Chúng tôi đã xác định một SNP đáp ứng FDR <0,05 có="" liên="" quan="" đến="" aki-sp2="" so="" với="" aki-sp1="" (bảng="" 2="" và="" hình="" 1).="" không="" có="" mối="" liên="" quan="" đáng="" kể="" nào="" được="" quan="" sát="" thấy="" với="" snp="" trong="" hoặc="" gần="" angpt1="" hoặc="" tnfrsf1a="" (bảng="" s2="" và="" s3).="" snp="" thể="" hiện="" mối="" liên="" hệ="" mạnh="" nhất="" với="" rủi="" ro="" đối="" với="" aki-sp2="" là="" rs2920656="" (or,="" 0,45;="" 95%="" ci,="" 0,31–0,66;="" p=""><1,4 ×="" 10−="" 5;="" fdr="0." 003).="" snp="" hướng="" nội="" này="" là="" ≈="" 30="" kb="" xuống="" vị="" trí="" 3="" ′="" của="" angp="" t2="" và="" được="" giải="" thích="" khoảng="" 3="" phần="" trăm="" phương="" sai="">
sự phát triển của AKI-SP2 (R2). Bởi vì chỉ có một số ít đối tượng là đồng hợp tử rs292 0 656 (n=26), chúng tôi cũng đã kiểm tra mối liên hệ giữa rs292 0 656 và AKI-SP2 trong một mô hình di truyền trội, cho kết quả phù hợp kết quả (OR, 0. 42; 95 phần trăm CI, 0,28–0,64; p <1,4 ×="" 10−="" 6).="" chúng="" tôi="" cũng="" đã="" kiểm="" tra="" các="" liên="" kết="" bổ="" sung,="" có="" khả="" năng="" mạnh="" hơn="" trong="" locus="" angpt2="" bằng="" cách="" sử="" dụng="" các="" kiểu="" gen="" được="" cho="" là="" nhưng="" không="" tìm="" thấy="" bất="" kỳ="" liên="" kết="" nào="" mạnh="" hơn="" so="" với="" liên="" kết="" được="" quan="" sát="" với="" rs2920656="" (bảng="" s4).="" trong="" một="" phân="" tích="" độ="" nhạy,="" chúng="" tôi="" đã="" kiểm="" tra="" xem="" liệu="" có="" bao="" gồm="" các="" bệnh="" nhân="" bị="" bệnh="" nặng="" mà="">Nhọnquả thậnvết thươngsẽ ảnh hưởng đến sự liên kết di truyền. Chúng tôi đã nhóm các bệnh nhân không có AKI và AKI-SP1 lại với nhau và xác định xem rs292 0 656 có còn liên quan chặt chẽ đến việc giảm nguy cơ mắc AKI-SP2 hay không. Trong phân tích này, 839 bệnh nhân không có AKI hoặc AKI-SP1 và 154 có AKI-SP2. Nguy cơ phát triển AKI-SP2 một lần nữa đã giảm đáng kể khi có ít nhất một alen T cho rs292 0 656 (OR 0. 31; 95% CI, 0. 19–0,52; p <0,001) (bảng="" s5).="" trong="" một="" phân="" tích="" độ="" nhạy="" khác,="" chúng="" tôi="" đã="" kiểm="" tra="" xem="" rs2920656="" có="" liên="" quan="" đến="" việc="" giảm="" nguy="" cơ="" mắc="" aki-sp2="" trong="" mỗi="" nghiên="" cứu="" trong="" số="" bốn="" nghiên="" cứu="" khác="" nhau="" được="" bao="" gồm="" trong="" ispaar="" hay="" không.="" trong="" mỗi="" thử="" nghiệm="" đối="" chứng="" ngẫu="" nhiên="" (alta,="" factt,="" và="" omega)="" và="" nhóm="" thuần="" tập="" tiền="" cứu="" icu="" (mea),="" ước="" tính="" điểm="" phù="" hợp="" với="" alen="" phụ="" của="" rs2920656="" cho="" thấy="" giảm="" nguy="" cơ="" phát="" triển="" aki-sp2="" (bảng="" s6="" ).="" do="" đó,="" rs2920656="" đã="" được="" phân="" tích="" thêm="" để="" xác="" định="" mối="" liên="" quan="" với="" nồng="" độ="" dấu="" ấn="" sinh="" học="" trong="" huyết="">
Alen T của rs2920656 có liên quan đến giảm ANG huyết tương -2
Tiếp theo, chúng tôi phân tích mối liên hệ giữa rs292 0 656 và nồng độ ANG -2 trong huyết tương. Điều chỉnh theo tuổi, giới tính và nhiễm trùng huyết, mỗi bản sao của alen T của rs292 0 656 có liên quan đến việc giảm nồng độ ANG trong huyết tương log2 -2 (= - 0,09; 95 phần trăm CI {{9} } .15, - 0,04; P=0. 002). Các đối tượng đồng hợp tử về alen C cho thấy nồng độ ANG trong huyết tương cao nhất -2 (40,683 pg / ml; khoảng tứ phân vị (IQR) 19, 374-73, 205), trong khi các đối tượng đồng hợp tử về alen T có nồng độ thấp nhất nồng độ ANG -2 trong huyết tương (28,308 pg / ml (IQR 14, 340-42, 944). Ngoài ra, trong số 100 SNP được thử nghiệm gần vùng gen ANGP T2, rs29206565 liên kết mạnh nhất với ANG huyết tương -2 nồng độ (Hình 2).
Phân tích dàn xếp cho thấy ANG -2 là quan hệ nhân quả trong sự phát triển của AKI-SP2
Chúng tôi đã kiểm tra bằng chứng cho thấy mối liên quan giữa rs292 0 656 và nguy cơ đối với AKI-SP2 được trung gian thông qua nồng độ ANG -2 trong huyết tương (Hình 3). Tổng ảnh hưởng của rs292 0 656 lên AKI-SP2 là tổng số=- 0. 16 trên mỗi alen (95 phần trăm CI -0. 24, - 0 .1 0, p=1. 0 × 10− 4), cho thấy rằng đối với mỗi alen phụ (alen T) của biến thể di truyền, nguy cơ phát triển AKI-SP2 giảm 16%. Phân tích trung gian nhân quả đã phát hiện ra ảnh hưởng gián tiếp đáng kể đối với rs2920656 trên AKI-SP2 được trung gian thông qua nồng độ ANG -2 trong huyết tương (gián tiếp, - 0,07 mỗi alen; 95 phần trăm CI -0. 11, - 0,03; p { {34}}. 001), có nghĩa là tỷ lệ ảnh hưởng giữa rs2920656 và AKI-SP2 được trung gian bởi nồng độ ANG -2 là 41,5 phần trăm.
Alen T của rs2920656 có liên quan đến việc giảm mức độ nghiêm trọng của AKI sau 7 ngày
Tiếp theo, chúng tôi kiểm tra sự liên kết của rs292 0 656 với các tiêu chí truyền thống về mức độ nghiêm trọng của AKI, chẳng hạn như creatinine huyết thanh tối đa và sự gia tăng creatinine huyết thanh trong vòng 7 ngày sau khi đăng ký nghiên cứu. Trong một mô hình di truyền trội, alen T của rs292 0 656 có liên quan đến việc giảm creatinin huyết thanh - 0. 44 mg / dL (95% CI, - {15}}. 77 , - 0. 1 0), p=0. 01) sau khi điều chỉnh theo tuổi, giới tính, chỉ số khối cơ thể và tình trạng nhiễm trùng huyết. Alen phụ của rs2920656 cũng có liên quan đến việc giảm mức tăng creatinin huyết thanh giữa thời điểm ban đầu và ngày thứ 7 (= - 0,25, 95% CI, - 0,46, - 0,03; p=0. 03)
Alen T của rs2920656 được liên kết với ANG -2 thấp hơn trong nuôi cấy tế bào
Chúng tôi đã tiến hành các thí nghiệm trong ống nghiệm và trong các phân tích silico để xác định ý nghĩa chức năng của rs2920656. Của 8 bào thai người khác nhauquả thậnkhăn giấymẫu, 2 là CC, 5 là CT và 1 là TT cho rs2920656. Trong một mô hình di truyền trội, nồng độ ANG -2 cao nhất về mặt số lượng trong tế bào nội mô từ người cho đồng hợp tử với alen C và thấp hơn ở người mang alen T, p=0. 07 (Hình 4). Trong cơ sở dữ liệu dự án GTEx, rs2920656 không liên quan đến biểu hiện gen ANGPT2. Tuy nhiên, hai SNP khác (rs41311412 và rs2515591) ở mức LD vừa phải (r 2=0. 23 và D '= 0. 86) với rs2920656 có liên quan đến biểu hiện gen ANGPT2 giảm (p=4. 1 × 10− 5) trong động mạch chày, một mô rất giàu tế bào nội mô (Bảng S7).
ANG huyết tương -2 được thận loại bỏ tối thiểu Để xác định xem liệu sự khác biệt vềquả thậnhàm sốcó thể ảnh hưởng đến nồng độ ANG {{0}} trong huyết tương, chúng tôi đã đo độ thanh thải ANG -2 ở thận ở những đối tượng bị bệnh nặng có và không có AKI. Trong 2 0 bộ sưu tập mẫu nước tiểu theo thời gian khác nhau với mẫu huyết tương được kết dính, creatinine huyết thanh trung bình là 0. {4}} mg / dL với phạm vi liên phân vị (IQR) từ 0,69 đến 1,45 mg / dL. Nồng độ trung bình ANG -2 trong huyết tương là 10,261 pg / mL (IQR 6210–19,115 pg / mL). Ngược lại, nồng độ ANG -2 trong nước tiểu thấp hơn 50- lần với mức trung bình là 206 pg / mL (IQR 11–839 pg / mL). Độ thanh thải ANG -2 được tính toán ở thận là <1 ml="" phút="" đối="" với="" tất="" cả="" các="" lần="" lấy="" nước="" tiểu="" theo="" thời="" gian,="" cho="" thấy="" rằng="" nồng="" độ="" ang="" -2="" trong="" huyết="" tương="" không="" tăng="" lên="" chỉ="" đơn="" giản="" là="" một="" chức="" năng="" làm="" trầm="" trọng="" thêm="" aki="" (bảng="">
