Phần 1: Ảnh hưởng của Isorhamnetin đối với bệnh tiểu đường và các biến chứng liên quan của nó: Đánh giá về các nghiên cứu trong ống nghiệm và trong Vivo và phân tích bảng điểm bài học về con đường phân tử liên quan

Để biết thêm thông tin. tiếp xúctina.xiang@wecistanche.com

trừu tượng: Bệnh tiểu đườngbệnh đái tháo đường, đặc biệt là týp 2 (T2DM), là một vấn đề sức khỏe cộng đồng lớn trên toàn cầu. DM được đặc trưng bởi mức độ cao của glycemia và insulin máu do suy giảm bài tiết insulin và độ nhạy insulin của tế bào, được gọi là kháng insulin. Bệnh đái tháo đường típ 2 gây ra nhiều biến chứng nghiêm trọng như bệnh thận, bệnh thần kinh và bệnh võng mạc gây tổn thương oxy hóa tế bào ở các mô bên trong khác nhau, đặc biệt là tuyến tụy, tim, mô mỡ, gan và thận. Các chất chiết xuất từ ​​thực vật và các chất phytochemical có hoạt tính sinh học của chúng đang được quan tâm như là những lựa chọn thay thế điều trị và phòng ngừa mới cho bệnh đái tháo đường típ 2 và các biến chứng liên quan của nó. Về vấn đề này, isorhamnetin, một loại thực vậtflavonoid, từ lâu đã được nghiên cứu về tác dụng chống bệnh tiểu đường tiềm ẩn. Tổng quan này mô tả tác động của nó đối với việc giảm các rối loạn liên quan đến bệnh tiểu đường bằng cách giảm mức độ glucose, cải thiện tình trạng oxy hóa, giảm viêm và điều chỉnh chuyển hóa lipid và biệt hóa tế bào mỡ bằng cách điều chỉnh các đường truyền tín hiệu liên quan được báo cáo trong các nghiên cứu in vitro và in vivo. Ngoài ra, chúng tôi bao gồm một phân tích phiên mã toàn bộ bộ gen hậu kỳ về các hoạt động sinh học của isorhamnetin bằng cách sử dụng một công cụ dựa trên tế bào gốc.

Từ khóa: isorhamnetin; quercetin; các hoạt động sinh học; Bệnh tiểu đường; con đường phân tử; microarray

Bấm vào đây để tìm hiểu thêm địa chỉ liên hệ

1. Giới thiệu

Cây đã được sử dụng làm thuốc truyền thống ở hầu hết các châu lục trên thế giới từ thời cổ đại. Nghiên cứu khoa học về lý do sử dụng thuốc của chúng đã dẫn đến việc khám phá các phân tử hoạt tính sinh học. Thực vật ưa ẩm phát triển trong điều kiện môi trường khắc nghiệt được coi là một nguồn tiềm năng tốt của các phân tử hoạt tính sinh học được quan tâm. Trên thực tế, những hạn chế về môi trường này là nguồn gốc của quá trình chuyển hóa oxy bị rối loạn, dẫn đến stress oxy hóa do gia tăng các loại oxy phản ứng (ROS) [1,2]. Một số thực vật, chẳng hạn như halophytes, có mộtchất chống oxy hóahệ thống để loại bỏ các hợp chất có hại. Trong số các phân tử hoạt tính sinh học được quan tâm, có các hợp chất phenolic. Một số nghiên cứu đã đánh giá cao thực vật giàu polyphenol có hoặc không có điều kiện hạn chế trong phòng thí nghiệm [3-10]. Một số tác dụng sinh học được cho là do chiết xuất giàu polyphenol, chẳng hạn như các hoạt động chống viêm và chống ung thư [11-13]. Các nghiên cứu khác cho thấy tác dụng chống oxy hóa, kháng khuẩn [8, 14-16] cũng như chống béo phì, chống tiểu đường và chống nhiễm mỡ gan [17-19] của isorhamnetin. Trong số các polyphenol này,flavonoidĐược phân biệt. Nhóm này bao gồm một số phân nhóm, chẳng hạn như flavonols. Isorhamnetin là một trong những hợp chất chính của flavonols. Isorhamnetin là một flavone monomethoxy hoặc flavonol O-methyl hóa từ nhóm flavonoid. Nó làquercetintrong đó một nhóm metoxy thay thế nhóm hydroxy ở vị trí 3 '. Một số dẫn xuất isorhamnetin có trong tự nhiên, chẳng hạn như isorhamnetin 3- O - - d-glucopyranoside, isorhamnetin 3- O-neohesperidoside và isorhamnetin 3- O-rutinoside từ Calendula officinalis L . [20]. Isorhamnetin thể hiện các đặc tính sinh học quan trọng như tác dụng chống oxy hóa [21], chống ung thư [22], kháng khuẩn [23], kháng vi rút [24], chống viêm và chống tiểu đường [21, 25-33].

Trong tổng quan này, trọng tâm đầu tiên là nguồn gốc, cấu trúc hóa học, phân lập và phương pháp chiết xuất, cũng như khía cạnh hóa thực vật của isorhamnetin. Sau đó, trong phần thứ hai, chúng tôi tập trung vào việc mô tả các tác dụng chống tiểu đường tiềm ẩn của flavonol này thông qua việc giảm các rối loạn liên quan đến bệnh tiểu đường bằng cách giảm nồng độ glucose, cải thiện tình trạng oxy hóa, giảm viêm và điều chỉnh chuyển hóa lipid và biệt hóa tế bào mỡ. Cuối cùng, chúng tôi thực hiện một phân tích thứ cấp về dữ liệu microarray toàn bộ bộ gen đã được công bố trước đây của chúng tôi để khám phá các hoạt tính sinh học liên quan đến bệnh tiểu đường của isorhamnetin trong một công cụ dựa trên tế bào gốc. Chúng tôi cũng nhằm mục đích làm nổi bật tác động của phân tử này đối với việc điều chỉnh các con đường tín hiệu liên quan bằng cách báo cáo các nghiên cứu in vitro và in vivo được sử dụng trong lĩnh vực nghiên cứu này. Trong bài đánh giá này, chúng tôi đã chỉ ra các đặc điểm hoạt động chống tiểu đường của isorhamnetin so vớiquercetinđược coi là chất chuyển hóa của isorhamnetin và là chất tham khảo quan trọng trong điều trị tự nhiên bệnh tiểu đường.

2. Tổng quan chung về các phân tử hoạt tính sinh học trong các polyphenol và Flavonoid cụ thể

2.1. Căng thẳng oxy hóa như là nguồn gốc của các phân tử hoạt tính sinh học trong thực vật

Một số loài thực vật có thể chịu nhiều điều kiện môi trường khác nhau (độ mặn, hạn hán, tia UV, kim loại nặng, nhiệt độ khắc nghiệt, thiếu chất dinh dưỡng, ô nhiễm không khí và sự tấn công của mầm bệnh). Những hạn chế này là nguồn gốc của sự rối loạn chức năng chuyển hóa oxy, tạo ra stress oxy hóa bằng cách tăng các loại oxy phản ứng (ROS). Phân tử oxy (O2) đóng một vai trò quan trọng đối với các sinh vật quang hợp. Ban đầu, ở thực vật bậc cao và tảo, sự trao đổi khí liên quan đến các điện tử xảy ra trong lục lạp bằng cách thu giữ carbon dioxide trong ngày và tạo ra oxy. Sự trao đổi khí này liên quan đến các điện tử. Thật vậy, trong trường hợp môi trường bị hạn chế nghiêm trọng, một phần lớn oxy không bị khử và do đó có thể tạo ra ROS trong một số bào quan từ tế bào thực vật [1,2] do sự mất cân bằng trong hoạt động thích hợp của lục lạp và sự chuyển electron [ 1]. Hơn nữa, dưới các hạn chế về môi trường được đề cập ở trên, nhiều ROS được tạo ra, chẳng hạn như gốc hydroxyl (OH), gốc anion superoxide (O, -), gốc alkoxyl và peroxyl (RO: và RO2, tương ứng), hydrogen peroxide (H2O2, ), gốc hypoclorit (-OCl), oxy đơn (O2), gốc oxit nitric (NO) và các peroxit lipid khác (chẳng hạn như malondialdehyde và 4- hydroxynonenal) [2,34,35]. Đôi khi, ROS có thể có vai trò trong tín hiệu tế bào trong hành vi sinh lý của thực vật, ví dụ như trong quá trình sinh trưởng và phát triển của hạt, phát triển các mô và chuyển từ tăng sinh tế bào sang kéo dài tế bào trong giai đoạn biệt hóa trước đó [36] . Ở mức độ cao, các phân tử này gây ra tổn thương phân tử như peroxy hóa lipid của màng, biến đổi protein và DNA, và làm chết tế bào [1,35,37]. Một số thực vật, chẳng hạn như halophytes, có khả năng thích nghi tốt với những điều kiện này thông qua một hệ thống chống oxy hóa mạnh mẽ. Halophytes được biết đến là nguồn cung cấp các chất chuyển hóa thứ cấp như polyphenol [3-10]. Các tác giả này chỉ ra rằng trong điều kiện khắc nghiệt, polyphenol được tổng hợp để đóng một vai trò quan trọng trong việc bảo vệ chống lại tổn thương oxy hóa do căng thẳng. Quá trình sinh tổng hợp, hàm lượng và hoạt động của các hợp chất phenolic này là chức năng của một số thông số bên ngoài (ánh sáng, nhiệt độ, độ mặn và độ khô) và nội tại (kiểu gen, cơ quan và giai đoạn phát triển) ảnh hưởng đến hàm lượng và sự phân bố của chúng trong thực vật [ 8,38,39]. Ví dụ, ở Pyracantha coccinea, một số flavonoid như flavanones, flavon, và flavonols có trong chồi trong giai đoạn sinh dưỡng và trong rễ chỉ trong giai đoạn sinh sản 40]. Mặt khác, một số tác giả đã chỉ ra rằng các hợp chất phenolic này có các đặc tính sinh học khác như các hoạt động chống viêm và chống ung thư [11-13]. Các nghiên cứu khác cho thấy tác dụng chống oxy hóa, kháng khuẩn [8, 14-16] cũng như chống bệnh tiểu đường [18,41,42] của chiết xuất phenolic.

2.2. Phân loại chất chống oxy hóa tự nhiên

Hệ thống chống oxy hóa có thể được phân loại theo bản chất của các thành phần này thành các hợp chất enzym hoặc không enzym. Đầu tiên bao gồm superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase và glutathione reductase [1, 3542-44]. Các gen liên quan đến các enzym này cho thấy tầm quan trọng của chúng trong quá trình suy giảm sinh lý sau thu hoạch của rễ lưu trữ và phản ứng với căng thẳng thẩm thấu và axit abscisic cũng như nhiễm Xanthomonas axonopodis [44]. Nhóm thứ hai chủ yếu chứa các hợp chất phenolic, carotenoit, vitamin và osmolytes [1]. Các hợp chất phenolic được đặc trưng bởi sự hiện diện của một hoặc nhiều vòng benzen và khác nhau về độ phức tạp của phân tử cơ sở, số lượng và vị trí của hydroxyl, và mức độ trùng hợp. Các hợp chất này là chất chuyển hóa thứ cấp được chia thành ba nhóm lớn: axit phenolic (dẫn xuất của axit benzoic và axit cinnamic), flavonoid (flavonoid, flavonols, flavanones, flavon, anthocyanins), và tannin (tannin thủy phân và proanthocyanidins). Ngoài các phân tử này, stilbenes, lignans và coumarin cũng được phân biệt [45].

2.3. Nguồn gốc và cấu trúc sinh hóa của Flavonoid, cụ thể là Isorhamnetin

Các hợp chất phenolic là chất chuyển hóa thứ cấp phổ biến trong thực vật. Những hợp chất này có vòng thơm với một hoặc nhiều nhóm hydroxyl (OH) và chứa các phân tử khác nhau, từ axit phenolic đơn giản đến các hợp chất trùng hợp như tannin. Quá trình tổng hợp các hợp chất phenolic là một quá trình phức tạp trải qua nhiều giai đoạn. Các hợp chất phenolic là các phân tử hoạt tính sinh học với hai con đường nguồn gốc: một bên là axit shikimic và một bên là các phân tử phenylpropanoid. Quá trình sinh tổng hợp các flavonoid như isorhamnetin dựa trên những con đường này. Trên thực tế, một mặt, shikimate tạo ra khung cơ bản của polyphenol có một hoặc nhiều vòng benzen (C6) mang một hoặc nhiều chức năng hydroxyl. Mặt khác, có sự tổng hợp của bazơ C 6- C3 được tạo thành do sự ngưng tụ của phenylalanin thành axit cinnamic (Hình 1) [46].

Chính xác hơn, axit shikimic là cơ sở của một số phản ứng, đại diện cho bộ xương của các axit amin thơm, là chất khởi đầu của các hợp chất phenolic. Bước đầu tiên bao gồm sự kết hợp của hai phân tử: phosphoenolpyruvate và erythrose 4- phosphate, sau bốn phản ứng, chúng sẽ dẫn đến việc hình thành bộ xương đầu tiên của phenol: shikimate hoặc axit shikimic (CHoOs). Điều này sau đó trình bày vòng đầu tiên, đặc trưng cho phenol có hai nhóm hydroxyl. Shikimate trải qua sáu phản ứng kết thúc bằng axit amin đầu tiên: phenylalanin. Nhờ hai enzym quan trọng, phenylalanin amoniac-lyase (PAL) và cinnamate -4- hydroxylase (C4H), phenylalanin liên tiếp tạo thành cinnamate và p-coumarate..Trong bước này, mức độ hoạt động của PAL có thể điều chỉnh định lượng sự tích tụ của các hợp chất phenolic. Phân tử p-coumarate là nguồn gốc của các dẫn xuất coumarin. Con đường tổng hợp các phân tử phenylpropanoid được đặc trưng bởi sự hiện diện của một enzym quan trọng được gọi là 4- coumarate CoA ligase (4CL), xúc tác khi có mặt chức năng thiol của coenzyme A (CoA) p-coumaric axit thành 4- coumaroyl CoA (C30Ha2N-O18P, S). Vòng A thơm của flavonoid cung cấp từ sự ngưng tụ của ba phân tử malonyl-CoA (-C6).

Sau đó, 4- coumaroyl CoA tạo ra chalcone naringenin, giải thích mối liên hệ giữa vòng thơm B và vòng 3C của chalcone (C 6- C 3-). Chalcone là yếu tố chính trong chủ đề này vì nó là tiền chất của tất cả các flavonoid dựa trên khung mười lăm carbon bao gồm hai vòng benzen. Sau đó, chalcone được chuyển đổi thành naringenin (còn gọi là flavanone hoặc trihydroxy flavone) nhờ tác dụng của chalcone isomerase (CHI). Một mặt, các flavon như apigenin, acacetin, chrysin hoặc luteolin được tổng hợp từ naringenin với sự hiện diện của flavone synthase (FNS) Mặt khác, các hợp chất flavonols và axit succinic khác nhau được sản xuất từ ​​naringenin với sự hiện diện của hai enzym; flavanone 3- dioxygenase (F3D) và flavonol synthase (FS). Ngoài các dẫn xuất flavonol, các hợp chất khác, chẳng hạn như kaempferol, myricetin và quercetin, cũng được sản xuất. Bằng cách chuyển nhóm methyl từ S-adenosyl-L-methionine, isorhamnetin được tạo ra với sự có mặt của flavone 3'-O-methyltransferase (FMT) [47,48]. Sau đó, isorhamnetin là một flavone monomethoxy hoặc flavonol O-methyl hóa từ nhóm flavonoid. Nó là quercetin (tiền chất) trong đó nhóm hydroxy ở vị trí 3 'được thay thế bằng nhóm methoxy. Một số dẫn xuất isorhamnetin có trong tự nhiên, chẳng hạn như isorhamnetin 3- O - - d-glucopyranoside, isorhamnetin 3- O-neohesperidoside và isorhamnetin 3- O-rutinoside từ Calendula officinalis L . [20].

Trên thực tế, flavonoid được coi là một trong những nhóm quan trọng nhất của họ polyphenol. Chúng có cấu trúc dựa trên loại diphenyl propan với hai vòng benzen (vòng A và B, xem Hình 2) được liên kết bởi một chuỗi ba cacbon tạo thành một vòng pyran khép kín (vòng C). Do đó, cấu trúc của chúng được gọi là C 6- C 3- C6. Vị trí O-glycosyl hóa là C7 trong flavon, isoflavone, flavanones và flavonols, và C3 trong flavonols và anthocyanidins. Vị trí C-glycosyl hóa là C6 và C8 trong flavon [49]. Ngoài ra, tầm quan trọng của vai trò chống oxy hóa của các hợp chất phenolic có liên quan đến mức độ hydroxyl hóa của phân tử. Flavonoid bao gồm isoflavone, flavon, flavanones, glycoside và flavonols của chúng là isorhamnetin, còn được đặt tên là 3'-methoxy quercetin và 3- methyl quercetin [50]. Ở thực vật, một loại enzyme, glycosyltransferase phụ thuộc UDP, chịu trách nhiệm tạo ra dạng glycoside của isorhamnetin (isorhamnetin 3- O-glucoside). Enzyme này sử dụng đường nucleotide diphosphate, thường là uridine diphosphate (UDP) -sugar, để chuyển nhóm methyl vào chu trình và liên kết chức năng glycoside với isorhamnetin [51].

2.4 Phân lập và phân tích Ilsorhamnetin có nguồn gốc từ cây thuốc

Sự phân bố của isorhamnetin trong cây thuốc rất rộng và các phương pháp chiết xuất và phân tích rất đa dạng. Các dẫn xuất isorhamnetin được đặc biệt quan tâm. Các nhóm hydroxyl và metyl giúp xác định đặc tính của chúng. Một số phương pháp được sử dụng để chiết xuất isorhamnetin, trong số đó dựa trên phân đoạn, sử dụng phương pháp đo hóa học, enzyme và chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn (SFE-CO2). Thứ nhất, quá trình chưng cất phân đoạn có thể được sử dụng để đơn giản hóa quá trình chiết bằng cách loại bỏ tất cả dầu và các chất màu ưa béo khỏi các mẫu chứa lipid. Mẫu đã khử chất béo cũng được làm nóng trước khi ngâm trong hỗn hợp metanol và nước. Sau đó, sắc ký có thể được sử dụng để phân tích các hợp chất phenolic, đặc biệt là flavonoid [49]. Đối với các hợp chất cuối cùng này, LC-MS được sử dụng và cả ion hóa tia điện (ESI) và ion hóa hóa học áp suất khí quyển thường được áp dụng, và độ nhạy tốt nhất đối với flavonoid thường đạt được ở chế độ ion âm [49]. Ví dụ, hóa thực vật của các phân đoạn thực vật Calligonum Azel Maire, được thu thập từ sa mạc Tunisia, đã được đánh giá và một phương pháp sắc ký lỏng hiệu suất cực cao kết hợp với thời gian tăng gấp bốn lần khối phổ bay UHPLC-ESI-QTOF đã được sử dụng để xác định phenol trong số đó là flavon và flavanol, là những hợp chất phenolic phổ biến nhất được xác định [52]. Cụ thể hơn, sự hiện diện của isorhamnetin glucoside và isorhamnetin glucosyl-rhamnoside đã được xác nhận là các hợp chất chính trong lá của cây halophyte Mesembryanthemum edule ăn được sử dụng công nghệ LC / ESI-MS / MS [3]. Công trình này được tiếp nối bởi những người khác đã sử dụng LC-ESI-TOF-MS để mô tả nhiều polyphenol; trong số đó, các flavonoid đã được xác định từ các bộ phận trên không của giai đoạn nở hoa hoàn toàn của halophytes như Arthrocnemum indicum [5], Tamarix gallica [16], Glaucium flavum [13], và Salsola kali [8]. Tương tự như các công trình cuối cùng, việc phân tích LC-ESI-TOF-MS và GC-MS của thảo dược Artemisia đã được thực hiện để xác định các phenol, chẳng hạn như flavon, flavonols và flavonoid alkaloid [7]. Một nghiên cứu khác được thực hiện trên Pancratium maritimum và phân tích bằng HPLC-DAD-ESI / MS cho thấy sự hiện diện của flavonoid bao gồm flavonol như isorhamnetin với các liên hợp pentoxit và hexoside của chúng như isorhamnetin di-hexoside [53].

Là một hợp chất không béo, flavonols có thể được phân lập bằng hexan. Sau đó, một dung môi phân cực như etanol có thể được sử dụng. Một nghiên cứu trên Limoniastrum guyonianum sử dụng HPLC cho thấy sự hiện diện của nhiều phenol, trong số đó có isorhamnetin -3- O-rutinoside [54].

Khác xa với chiết xuất phenolic, các hợp chất phenolic cũng được tìm thấy trong các loại dầu như dầu ô liu [55]. Các hợp chất này có khả năng bảo vệ dầu chống lại quá trình oxy hóa và nâng cao giá trị dinh dưỡng của dầu. Isorhamnetin, như một hợp chất phenol, cũng đã được phát hiện trong chiết xuất dầu từ hạt thì là đen Tunisia (Nigella sativa L.) thu được với dung môi màu xanh lục như 2- metyl tetrahydrofuran (MeTHF) như một chất thay thế cho dầu mỏ hoặc hexan -dung môi gốc để chiết xuất các hợp chất phenolic làm giàu dầu [1 0]. Sự hiện diện của isorhamnetin đã được phê duyệt bởi phân tích HPLC. Các phân tích sử dụng Sắc ký lỏng với Máy dò mảng Diode (LC-DAD) cho thấy một lượng isorhamnetin cao nằm trong khoảng từ 6,3 đến 6,6 （ug / g dầu） sau ​​khi chiết xuất dầu từ thì là đen bằng MeTHF và hexan, tương ứng. Ngoài ra, sử dụng cộng hưởng từ hạt nhân H (HNMR) và cộng hưởng từ hạt nhân C (CNMR), một số flavonol glycoside như kaempferol -3- O-rutinoside (nicotiflorin) và isorhamnetin -3- O-rutinoside (tự ái) được đặc trưng từ các bộ phận trên không của Pencedanum aucheri Boiss được thu thập ở thành phố Marivan, tỉnh Kurdistan, Iran [56]. Phương pháp NMR phát hiện đặc tính mà một số hạt nhân nguyên tử của hợp chất tương tác với từ trường. Tính chất này, là tạo ra cộng hưởng từ ở một tần số nhất định, cung cấp thông tin về cấu trúc của phân tử. Thứ hai, các mô hình toán học được chọn để đánh giá hiệu quả chiết xuất flavonol, đặc biệt là để hiểu cách tốt nhất để thu được isorhamnetin -3- O-rutinoside [20]. Một phân tích giai thừa đa biến được thực hiện bằng cách sử dụng hoa Calendula officinalis. Các mô hình tuyến tính, bậc hai, khối đầy đủ và khối đặc biệt đã được phân tích. Khối đầy đủ cuối cùng là khối thích hợp nhất, cho phép hiệu suất cao hơn trong việc chiết xuất isorhamnetin -3- O-rutinoside thêm 60%. Đối với nghiên cứu này, các enzym, Rapides Maxi Fruit và Viscozyme được sử dụng trong một số yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hoạt động của enzym trong điều kiện CO2 siêu tới hạn như áp suất, nhiệt độ, pH, thời gian và dung dịch etanol trong nước. Cuối cùng, phương pháp chiết chất lỏng siêu tới hạn đã được sử dụng để chiết xuất các hợp chất phenolic như flavonols. Nhiều năm trước, quy trình chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn lần đầu tiên được sử dụng trên vỏ cây Bạch đàn, sử dụng CO2 tinh khiết và biến tính với nước, ethyl acetate và ethanol [57]. Các tác giả đã chỉ ra rằng CO2 siêu tới hạn kết hợp với etanol có thể chiết xuất một lượng đáng kể các hợp chất phenol, bao gồm isorhamnetin. Định lượng HPLC-MS xác định một số flavonols, chẳng hạn như isorhamnetin-hexoside (0,26 gg-I của đường ngoài) và isorhamnetin đơn giản (14,29 mg: gI của dịch chiết). Ethanol được sử dụng làm đồng dung môi. Việc định lượng được thực hiện bằng phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao được trang bị một máy dò mảng điốt quang. Isorhamnetin 3- O-glucosyl-rhamnosyl-rhamnoside, isorhamnetin 3- O-glucosyl-rhamnosyl-pentoxide, isorhamnetin 3- O-glucosyl-rhamnoside và isorhamnetin 3- O-glucosyl -pentoxide là những flavonols dồi dào nhất được chiết xuất từ ​​chất chiết xuất siêu tới hạn của O. ficus-indica. Như đã đề cập trước đây, sắc ký lỏng cao áp hay HPLC là một phương pháp thường được sử dụng để phân tích các hợp chất phenolic. Trong nước ép táo và nước ép lê, isorhamnetin 3- O-glucoside đã được phát hiện. Trên thực tế, việc tách glycoside flavonol trong chiết xuất táo "Brettacher" bằng HPLC và phép đo khối phổ cho thấy sự hiện diện của hai dạng glycoside như isorhamnetin 3- O-glucose và isorhamnetin 3- O-galactoside [ 58].