Xác định mục tiêu dược lý và phân tích hiệu quả của Phenylethanoid Glycoside từ cây mã đề Herba dựa trên chiến lược "đánh bắt mục tiêu"

Trừu tượng:

Mục tiêu Cistanches Herba là một loại thuốc bổ y học cổ truyền Trung Quốc với một số tác dụng điều trị bao gồmbổ thận âm, chống sa sút trí tuệ, chống lão hóa, và rthư giãn ruột. Phenylethanoid glycoside(Phys) là những thành phần hiệu quả chính trong C. tubulosa. Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu sâu hơn về cơ chế dược lý phân tử do thành phần phức tạp và cơ chế tác dụng đa dạng của nó trongtiến sĩcho đến bây giờ. Mục đích của nghiên cứu này là điều tra các nhóm protein mục tiêu và các cơ chế liên quan liên quan đếnPhGs trong tổn thương tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ. Phương pháp Mô hình tắc động mạch não giữa (MCAO) được thiết lập trên chuột và tác dụng bảo vệ của PhG đối vớichấn thương do thiếu máu nãođã được xác định. Một loại hạt rắn có bề mặt được liên kết chéo với PhG đã được chuẩn bị để thu giữ các protein mục tiêu từ dịch ly giải mô não. Các protein mục tiêu được xác định thêm bằng LC-MS/MS. Kết quảPhGs ức chế đáng kể các tổn thương do thiếu máu cục bộ nãobằng cách giảm kích thước thiếu máu cục bộ và điểm hành vi của chuột và tăng mức SOD trong mô não chuột. Mười tám protein mục tiêu đã được xác định dựa trên chiến lược "đánh bắt mục tiêu" và được chia thành 9 loại theo chức năng sinh học của chúng, bao gồmchống oxy hóa, kênh ion, điều hòa miễn dịch, sự sống của tế bàovàkhung tế bào, v.v. Kết luận Những phát hiện này cho thấy các cơ chế dược lý tiềm năng của PhGs trongchống sa sút trí tuệ, sự mệt mỏi giảm nhẹ, chống khối u, điều hòa miễn dịch, v.v., và cũng trình bày một công nghệ đầy hứa hẹn chođiều tra các cơ chế dược lý phức tạpcủa y học cổ truyền Trung Quốc.

từ khóa:Rễ Herba; phenylethanoid glycoside; bảo vệ thần kinh; xác định mục tiêu;hiệu quả truyền thống;chống oxy hóa;điều hòa miễn dịch; chống sa sút trí tuệ; chống ung thư

Bấm vào đây để biết thêm chi tiết về cách Cistanche có tác dụng chống lão hóa

Cistanches Herba là thân thịt khô có vảy của Cistanche Deserticola YC Ma hoặc C. tubulosa (Schenk) Wight, một loại cây thuộc họ Cistanche. Nó có một lịch sử ứng dụng lâu dài ở Trung Quốc như một loại thuốc truyền thống bổ dưỡng của Trung Quốc. Cistanche chủ yếu có chức năng bổ thận và cường dương, tăng cường chức năng tình dục và điều trị chứng đau thắt lưng và đầu gối, táo bón và mệt mỏi [1]. Ngoài ra, các nghiên cứu dược lý hiện đại đã chỉ ra rằng Cistanche còn có nhiều tác dụng dược lý khác nhau như chống oxy hóa, chống lão hóa, cải thiện trí nhớ, chống bệnh Parkinson, điều hòa miễn dịch, bảo vệ gan và điều trị thiếu máu cơ tim [2-4]. Tuy nhiên, do các thành phần của Cistanche Deserticola rất phức tạp nên cơ sở sinh học phân tử về tác dụng chữa bệnh của nó vẫn chưa rõ ràng, vì vậy cần tiến hành các thí nghiệm dược lý liên quan để thảo luận sâu hơn. benzen

Ethanol glycoside là cơ sở vật chất cốt lõi cho hoạt động dược lý của Cistanche Deserticola [5-6], nhưng vẫn còn ít nghiên cứu về cơ chế dược lý của nó. Xét thấy đích là cơ sở sinh học then chốt để các phân tử thuốc phát huy vai trò điều trị bệnh, nghiên cứu này, từ góc độ làm sáng tỏ đích thuốc, đã nghiên cứu sâu về đích (nhóm) glycosid phenylethanol của Cistanche Deserticola, và dựa trên về chức năng sinh học của đối tượng. Phân tích cơ chế dược lý phân tử của nó, và sau đó giải thích thịt

Hiệu quả truyền thống của cistanche.

Xét về các đặc tính tác dụng đa thành phần và đa mục tiêu của y học cổ truyền Trung Quốc, trong nghiên cứu này, glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola được liên kết với bề mặt của các vi cầu ma trận pha rắn thông qua liên kết hóa học, và sau đó các vi cầu này được sử dụng để đặc biệt nắm bắt các glycoside tương ứng từ lysate mô não. Protein mục tiêu (nhóm) được xác định bằng phép đo khối phổ có độ phân giải cao. Bằng cách phân loại các chức năng sinh học của các mục tiêu (nhóm) đã phát hiện, các cơ chế phân tử của các chức năng sinh học khác nhau của glycoside phenylethanol trong Cistanche Deserticola đã được tiết lộ một cách có hệ thống. Chiến lược nghiên cứu

Nó không chỉ cung cấp một phương tiện kỹ thuật mới để khám phá nhóm mục tiêu của hệ thống y học cổ truyền Trung Quốc phức tạp trong tương lai, mà còn đóng một vai trò quan trọng trong việc thúc đẩy sự hiểu biết sâu sắc về cơ chế hoạt động độc đáo của y học cổ truyền Trung Quốc.

1 chất liệu

1.1 Tế bào và động vật

Các tế bào thần kinh đệm SHSY5Y được mua từ Trung tâm Tế bào của Viện Khoa học Y khoa Trung Quốc. Chuột SD đực loại sạch, nặng 250-280 g, được mua từ Công ty TNHH Công nghệ Động vật Thử nghiệm Bắc Kinh Weitong Lihua, số giấy phép động vật SCXK (Bắc Kinh) 2012-0001.

1.2 Thuốc và thuốc thử

Các glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola được cung cấp bởi nhóm nghiên cứu của Giáo sư Tu Pengfei, Trường Dược, Đại học Bắc Kinh, với tỷ lệ khối lượng là 90,70 %; môi trường DMEM nhiều đường được mua từ Macgene; huyết thanh bào thai bò được mua từ PAN Biotech; Kháng thể superoxide dismutase (SOD) và kháng thể thứ cấp của thỏ sinh học được dán nhãn Primer được mua từ Abcam, Hoa Kỳ.

1.3 Dụng cụ

Hệ thống khối phổ song song sắc ký lỏng hai chiều (nano-LC-MS/MS), bao gồm máy sắc ký lỏng EASY-nLC-II và máy quang phổ khối song song bẫy ion LTQ-Orbitrap (Thermo Fisher Khoa học, Hoa Kỳ); Cột sắc ký lỏng mao quản RP-C18AQ (100 μm×15cm, Michrom Bioresources, USA); máy sấy đông lạnh FDU-1100 (Eyela, Nhật Bản); Đầu đọc vi bản Sunrise-Basic (Tecan, Mỹ); Hệ thống tạo ảnh gel GelLogic 2200PRO (Kodak, Mỹ) ); Máy lắc bàn TS-92 (Qi Limbe

Công ty TNHH Chế tạo Dụng cụ Seoul); tủ ấm tế bào (Công ty Sanyo, Nhật Bản); Bể cách thủy nhiệt độ ổn định TW20 (Công ty Julabo, CHLB Đức); TDL-5-Máy ly tâm tốc độ thấp (Nhà máy thiết bị khoa học Anting Thượng Hải); Kính hiển vi để bàn DXS-3 (Công ty TNHH dụng cụ quang học Lun của Hiệp hội Thượng Hải); MB102 hằng số

Bồn tắm kim loại ấm (Hangzhou Bioer Technology Co., Ltd.).

2 phương pháp

2.1 Nuôi cấy và xử lý tế bào

Các tế bào SHSY5Y được cấy truyền trong môi trường DMEM có hàm lượng glucose cao (chứa 10% huyết thanh bào thai bò, penicillin 100 U/L và streptomycin 100 ug/L), 2 ngày một lần. Thu thập khoảng 1×107 tế bào, thêm dịch ly giải tế bào (Tris, pH 7.4, 150 mmol/LNaCl, 1 phần trăm NP-40, chất ức chế protease cocktail), ngâm nước đá trong 30 phút, ly tâm ở 4 độ , {{16 } } r/min Sau 20 phút, lấy phần nổi phía trên và để dành.

2.2 Chuẩn bị tắc động mạch não giữa chuột (MCAO) bằng phương pháp khâu

Đối với mô hình, 24 con chuột SD loại sạch được chia ngẫu nhiên thành nhóm phẫu thuật giả (Sham), nhóm mô hình tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ não và nhóm glycoside phenylethanol (50 mg/kg) [7-8], với 8 con chuột trong mỗi nhóm. Mô hình tổn thương tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ ở chuột được thực hiện như sau. Tách động mạch cảnh chung bên phải (CCA), động mạch cảnh trong (ICA) và động mạch cảnh ngoài (ECA), thắt và cắt bỏ ECA, kẹp ICA, rạch một đường trong ECA và chèn một sợi nylon để chặn động mạch cảnh. thiếu máu cục bộ động mạch não giữa. Đồng thời, những con chuột trong nhóm quản lý đã nhận được ig phenylethanol glycoside [9] và nhóm người mẫu nhận được ig nước muối bình thường. 1,5 giờ sau

Đạt được tái tưới máu. Sau 24 giờ, hành vi của động vật trong mỗi nhóm được quan sát và ghi điểm. Khi cho điểm, 3 người thực nghiệm cho điểm động vật thí nghiệm theo phương pháp mù đơn, kết quả cho điểm của 3 nhóm được tính trung bình để phân tích thống kê.

Tiêu chuẩn chấm điểm của Longa là: bình thường, không có triệu chứng tổn thương thần kinh, 0 điểm; thiểu năng thần kinh nhẹ, không thể duỗi hết chân trước bên trái, 1 điểm; suy giảm thần kinh trung bình, quay sang bên không thiếu máu khi đi bộ, 2 điểm; Suy nhược thần kinh nghiêm trọng, đi lại về bên không thiếu máu cục bộ, 3 điểm;

Không thể tự đi lại, bất tỉnh, 4 điểm. Cuối cùng, não của những con chuột bị chặt đầu và nhuộm bằng 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC).

Quét và tính giá trị vùng thiếu máu não tương đối.

2 phương pháp

2.1 Nuôi cấy và xử lý tế bào

Các tế bào SHSY5Y được cấy truyền trong môi trường DMEM có hàm lượng glucose cao (chứa 10% huyết thanh bào thai bò, penicillin 100 U/L và streptomycin 100 ug/L), 2 ngày một lần. Thu thập khoảng 1×107 tế bào, thêm dịch ly giải tế bào (Tris, pH 7.4, 150 mmol/LNaCl, 1 phần trăm NP-40, chất ức chế protease cocktail), ngâm nước đá trong 30 phút, ly tâm ở 4 độ , {{16 } } r/min Sau 20 phút, lấy phần nổi phía trên và để dành.

2.2 Chuẩn bị tắc động mạch não giữa chuột (MCAO) bằng phương pháp khâu

Đối với mô hình, 24 con chuột SD loại sạch được chia ngẫu nhiên thành nhóm phẫu thuật giả (Sham), nhóm mô hình tổn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ não và nhóm glycoside phenylethanol (50 mg/kg) [7-8], với 8 con chuột trong mỗi nhóm. Mô hình tổn thương tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ ở chuột được thực hiện như sau. Tách động mạch cảnh chung bên phải (CCA), động mạch cảnh trong (ICA) và động mạch cảnh ngoài (ECA), thắt và cắt bỏ ECA, kẹp ICA, rạch một đường trong ECA và chèn một sợi nylon để chặn động mạch cảnh. thiếu máu cục bộ động mạch não giữa. Đồng thời, những con chuột trong nhóm quản lý đã nhận được ig phenylethanol glycoside [9] và nhóm người mẫu nhận được ig nước muối bình thường. 1,5 giờ sau

Đạt được tái tưới máu. Sau 24 giờ, hành vi của động vật trong mỗi nhóm được quan sát và ghi điểm. Khi cho điểm, 3 người thực nghiệm cho điểm động vật thí nghiệm theo phương pháp mù đơn, kết quả cho điểm của 3 nhóm được tính trung bình để phân tích thống kê.

Tiêu chuẩn chấm điểm của Longa là: bình thường, không có triệu chứng tổn thương thần kinh, 0 điểm; thiểu năng thần kinh nhẹ, không thể duỗi hết chân trước bên trái, 1 điểm; suy giảm thần kinh trung bình, quay sang bên không thiếu máu khi đi bộ, 2 điểm; Suy nhược thần kinh nghiêm trọng, đi lại về bên không thiếu máu cục bộ, 3 điểm;

Không thể tự đi lại, bất tỉnh, 4 điểm. Cuối cùng, não của những con chuột bị chặt đầu và nhuộm bằng 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC).

Quét và tính giá trị vùng thiếu máu não tương đối.

2.3 Phương pháp hóa mô miễn dịch phát hiện mức độ biểu hiện của SOD trong mô não chuột

Các mô não chuột cố định trong 4% paraformaldehyde được nhúng trong paraffin, được cắt ở kích thước 5 μm và được khử paraffin. Việc thu hồi kháng nguyên được thực hiện với dung dịch đệm natri citrate trong 10 phút, được xử lý bằng 3% hydro peroxide trong 15 phút và rửa 3 lần bằng PBS. Thêm huyết thanh dê 10 phần trăm để ngăn chặn trong 30 phút, thêm từng giọt kháng thể SOD pha loãng (1:100) và ủ qua đêm ở 4 độ. Rửa bằng PBS 3 lần, thêm kháng thể thứ cấp đánh dấu biotin (1:100) và ủ ở nhiệt độ phòng trong 30 phút, rửa bằng PBS 3 lần; sau đó thêm từng giọt phức hợp ABC, ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng và rửa bằng PBS 3 lần. Thêm từng giọt dung dịch tạo màu diaminobenzidine (DAB),

Ủ trong 5-10 phút, rửa hoàn toàn bằng nước cất sau khi hiện màu, nhuộm bằng hematoxylin, khử nước, làm trong suốt và cuối cùng bịt kín bằng kẹo cao su trung tính và quan sát dưới kính hiển vi [10].

2.4 Thành phần hóa học của phenylethanol glycoside liên kết với bề mặt của các vi cầu pha rắn

Các vi cầu pha rắn agarose biến đổi nhóm epoxy được sử dụng trong thí nghiệm này là các vi cầu SepharoseTM 6B được kích hoạt bằng Epoxy có bán trên thị trường, được mua từ GE Healthcare. Kích thước hạt là 45-165 μm, với kích thước hạt trung bình là 90 μm. Các vi cầu có độ ổn định tốt ở pH 2-14 và các vi cầu

Bề mặt được liên kết với các nhóm epoxy thông qua 1,4-bis(2,3-epoxypropenyl)-butyl làm nhánh liên kết và các nhóm epoxy có thể liên kết hóa học với cacbohydrat để cố định chúng vào bề mặt của các vi cầu. Trong quá trình thử nghiệm, 500 μL vi cầu pha rắn agarose biến đổi nhóm epoxy được trộn với 500 μL dung dịch phenylethanol glycoside (50 mg/mL) và hỗn hợp này được cho vào ống EP 1,5 mL. Thêm một lượng thích hợp dung dịch NaOH bão hòa vào hỗn hợp để điều chỉnh pH đến 8. Hỗn hợp được lắc qua đêm ở 37 độ trên máy lắc nhiệt độ không đổi. Ly tâm với tốc độ 3 000 vòng/phút trong 2 phút, loại bỏ phần nổi phía trên và rửa các hạt vi cầu pha rắn lặp đi lặp lại 5 lần bằng chất rửa giải (PBS chứa 0,1 phần trăm Triton X-100) cho đến khi phần nổi phía trên không màu. Các kính hiển vi pha rắn được lưu trữ ở 4 độ trong bóng tối. Hình thái bề mặt của các hạt vi cầu có thể được xác nhận bằng cách quan sát bằng kính hiển vi.

2.5 Tăng sinh và xác định các nhóm đích phenylethanol glycoside

Trộn các vi cầu pha rắn agarose với phenylethanol glycoside trên bề mặt và dịch ly giải tế bào SHSY5Y, ủ ở 4 độ qua đêm, 10mL dịch rửa giải (Tris, pH 7.4, 150 mmol/L NaCl, 1% TritonX100, chất ức chế protease cocktail) rửa các vi cầu 5 lần. Thêm 500 μL dung dịch đệm và đun sôi trong 5 phút. Hệ thống đun sôi được ly tâm trong 2 phút và phần nổi phía trên được thu thập để điện di trên gel SDS-PAGE. Tất cả các dải protein mục tiêu được hiển thị bằng cách nhuộm bạc và được xác định bằng phép đo khối phổ có độ phân giải cao để xác định tính chất và tên của từng protein mục tiêu.

2.6 Xác định protein mục tiêu bằng phép đo khối phổ có độ phân giải cao

Sau khi nhuộm bạc, các dải protein được cắt bỏ và các mẫu peptide hỗn hợp thu được sau quá trình phân giải protein trong gel, được lọc qua màng vi xốp 0.22 μm và được phân tích bằng phép đo khối phổ song song sắc ký lỏng hai chiều ) để nhận biết từng peptit. Rút 10 μL dung dịch mẫu và thêm vào cột Captrap Peptide. Sau khi rửa giải và loại bỏ tạp chất, nó đi vào cột sắc ký lỏng mao quản RP-C18AQ để tách gradient. Pha động là 0.1 phần trăm dung dịch nước axit formic (A)-0.1 phần trăm axit formic acetonitril (B) và các điều kiện rửa giải gradient là 0~45 phút, 2 phần trăm ~35 phần trăm B; 45~50 phút, 35% ~95% B; 50~60 phút, 95 phần trăm B. Tốc độ dòng thể tích là 300 nL/phút.

Chế độ ion dương được sử dụng để thu thập dữ liệu, điện áp phun điện là 1,8 kV, chế độ quét khối phổ là quét toàn bộ và phạm vi quét được đặt thành m/z 350-2000. Quá trình quét MS/MS sau đó được thực hiện trên 15 đỉnh cường độ cao nhất thu được ở chế độ quét toàn bộ. Phần mềm truy xuất SEQUEST có trong nền tảng phần mềm phân tích proteomics Thermo Proteome Discoverer (1.4) đã được sử dụng để tìm kiếm và so khớp dấu vân tay khối peptit (PMF) hoặc dữ liệu peptit MS/MS thu được do phân mảnh do va chạm (CID). Số vị trí trypsin hóa bị mất giới hạn ở 2. Quá trình oxy hóa methionine được chọn làm biến đổi thay đổi ( cộng với 15 995) ​​và cysteine ​​ureidomethylation làm biến đổi cố định ( cộng với 57 021).

3 Kết quả và phân tích

3.1 Tác dụng của glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola đối với tổn thương tái tưới máu não do thiếu máu cục bộ ở chuột

Thí nghiệm MCAO được sử dụng để quan sát tác dụng cải thiện của phenylethanol glycoside của Cistanche Deserticola đối với quá trình bệnh lý thiếu máu não ở chuột. Kết quả cho thấy glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola có thể làm giảm hiệu quả vùng thiếu máu não do thiếu máu cục bộ ở chuột và tăng diện tích vùng sống sót của tế bào thần kinh bình thường trong não (Hình 1-A, B). Ngoài ra, glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola có thể cải thiện hiệu quả tình trạng thiếu hụt hành vi thần kinh của chuột do thiếu máu cục bộ gây ra, cải thiện khả năng hành vi của chuột sau thiếu máu cục bộ (Hình 1-C) và tăng biểu hiện của SOD trong mô não chuột.

mức (Hình 1-D). Nó cho thấy rằng phenylethanol glycoside của Cistanche Deserticola có tác dụng chống thiếu máu cục bộ và bảo vệ não tốt.

3.2 Làm giàu và xác định các nhóm mục tiêu của phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola

Để tiếp tục khám phá cơ chế tác dụng bảo vệ của phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola, các vi cầu pha rắn agarose biến tính với phenylethanol glycoside đã được chế tạo thành công trong thí nghiệm này. Từ hình thức bên ngoài, màu sắc của các vi cầu được biến đổi bởi glycoside phenylethanol rõ ràng là tối đi, cho thấy rằng các glycoside phenylethanol đã được ghép với bề mặt của các vi cầu; Ngoài ra, dưới kính hiển vi, có thể thấy rằng hình dạng của các hạt vi cầu không thay đổi đáng kể, cho thấy quá trình liên kết hóa học không ảnh hưởng đến bề mặt của các hạt vi cầu. đến các đặc tính bề mặt của các vi cầu (Hình 2-A). Sử dụng công nghệ "câu cá bằng lưỡi câu" của mục tiêu phân tử, mục tiêu được làm giàu từ dịch ly giải của tế bào thần kinh thông qua các phân tử phenylethanol glycoside trên bề mặt của kính hiển vi pha rắn, sau đó protein mục tiêu bị bắt giữ sẽ được điện di trên gel SDS-PAGE và bạc nhuộm , và tổng cộng 18 dải protein chính đã được tìm thấy. Tất cả các dải protein được xác định bằng phép đo khối phổ có độ phân giải cao LC-MS/MS để xác định tên và đặc tính của các protein mục tiêu liên kết tiềm năng (Hình 2-B).

**P < 0.01 so với nhóm mô hình A-hình ảnh đại diện của các lát não được nhuộm bởi TTC B-phân tích thống kê về kích thước thiếu máu não C-phân tích thống kê điểm số hành vi của chuột Mức độ D-SOD được phát hiện bằng phương pháp nhuộm hóa mô miễn dịch ở chuột mô não

Hình 1 Tác dụng của PhG đối với tổn thương do thiếu máu cục bộ-tái tưới máu não ở chuột (× 200)

Ảnh vi mô A của các hạt sepharose liên hợp với PhGs (thanh ＝ 50 μm) Điện di trên gel B cho các mục tiêu được kết hợp với PhGs

Hình 2 Làm giàu và xác định các nhóm mục tiêu kết hợp với PhGs

3.4 Diễn giải tác dụng dược lý hiện đại của glycoside phenylethanol từ Cistanche Deserticola

Hiệu quả truyền thống của một loại thuốc có thể tương quan và được giải thích bằng chức năng sinh học của mục tiêu thuốc. Kết quả của thí nghiệm này cho thấy ATP synthase, adenylate kinase, triosephosphate isomerase, ATP-citrate synthase và các protein khác liên quan đến tổng hợp ATP tham gia vào quá trình chuyển hóa năng lượng của cơ thể, trong khi lactate dehydrogenase (LDH) tham gia vào quá trình chuyển hóa lactic. axit trong cơ thể, và người ta suy đoán rằng các protein như vậy Mục tiêu có thể liên quan đến hiệu quả của Cistanche Deserticola trong điều trị yếu cơ và xương, đau nhức thắt lưng và đầu gối, v.v. [11].

Ngoài ra, kênh kali bị kiểm soát điện áp có liên quan đến sự truyền tín hiệu thần kinh và các protein liên quan đến khung tế bào của nó như actin, tubulin và septin có thể tham gia vào việc duy trì tính toàn vẹn của các khớp thần kinh và chức năng truyền tín hiệu, nghĩa là nó có một vai trò thúc đẩy trí thông minh và chống mất trí nhớ của cistanche. Có một mối tương quan nhất định giữa hiệu quả. Các protein mục tiêu như IMPDH2[12] và Lysozyme C[13] có thể liên quan đến việc điều chỉnh khả năng miễn dịch của con người và khả năng chống nhiễm trùng vi khuẩn. Các protein liên quan đến chất chống oxy hóa như PRDX1[14] và PRDX4[15] có thể tham gia vào quá trình giữ ẩm và các chức năng liên quan khác của Cistanche Deserticola bằng cách loại bỏ các loại oxy phản ứng (ROS) trong cơ thể. Tất nhiên, mối tương quan giữa các chức năng mục tiêu này và tác dụng dược lý vẫn cần được kiểm chứng thêm bằng các thí nghiệm sau này.

4. Thảo luận

Đích thuốc là cơ sở sinh học ban đầu và trực tiếp nhất để các phân tử thuốc phát huy tác dụng chữa bệnh của chúng. Do đó, việc phát hiện ra các mục tiêu của thuốc có ý nghĩa định hướng chính để làm sáng tỏ cơ chế tác dụng của thuốc [16]. Sau khi thực hành lâm sàng lâu dài, y học cổ truyền Trung Quốc có tác dụng chữa bệnh rõ ràng, nhưng do thành phần phức tạp nên không có phương pháp hiệu quả nào để đánh giá cơ chế hoạt động của nó một cách toàn diện và khách quan. Thí nghiệm này bắt đầu bằng việc tìm ra mục tiêu của thuốc, trước tiên là xác định nhóm mục tiêu của hệ thống phức tạp của y học cổ truyền Trung Quốc, sau đó thông qua

Theo các chức năng sinh học của các mục tiêu khác nhau trong nhóm mục tiêu, các mục tiêu được chia thành các nhóm nhỏ tương ứng và các tác dụng khác nhau của y học cổ truyền Trung Quốc được giải thích theo ý nghĩa sinh học của các nhóm mục tiêu khác nhau. Ưu điểm của chiến lược nghiên cứu này là nó có thể đơn giản hóa rất nhiều khó khăn trong nghiên cứu về cơ chế hoạt động của các thành phần phức tạp trong y học cổ truyền Trung Quốc. Tức là cơ chế hoạt động của y học cổ truyền Trung Quốc được giải thích trực tiếp từ nguồn của mục tiêu, quá trình “móc nối” và xác định mục tiêu không bị yếu tố con người làm xáo trộn, kết quả đánh giá khách quan và chân thực hơn[ 17].

Cistanche Deserticola là một loại thuốc bổ truyền thống nổi tiếng của Trung Quốc, có tác dụng bổ thận dương, dưỡng tinh và huyết, làm ẩm ruột và nhuận tràng, v.v., và được xếp vào loại thượng phẩm trong “Thần Nông Dược liệu”. Các nghiên cứu gần đây đã phát hiện ra rằng glycoside phenylethanol trong Cistanche Deserticola có tác dụng bảo vệ thần kinh rõ ràng, có thể cải thiện khả năng học tập và trí nhớ, chống lại chứng mất trí nhớ do tuổi già và chống lại bệnh Parkinson. Trong số đó, glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola đã được phát triển thành một loại thuốc tăng cường trí não mới, tổng số glycoside của Cistanche Deserticola, đã được phê duyệt để đưa ra thị trường vào năm 2005 (Z20050216)[18].

Tuy nhiên, cơ chế bảo vệ thần kinh của các hoạt chất phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola vẫn chưa rõ ràng. Nghiên cứu này phát hiện ra rằng các nhóm mục tiêu được điều chỉnh bởi phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola chủ yếu liên quan đến các hoạt động sinh lý của ba loại tế bào thần kinh. Loại đầu tiên là chuyển hóa năng lượng của tế bào, đặc biệt là các loại enzyme khác nhau liên quan đến quá trình tổng hợp và chuyển hóa ATP. Vì hoạt động của các tế bào thần kinh phụ thuộc nhiều vào việc cung cấp năng lượng, nên glycoside phenylethanoid của Cistanche Deserticola có thể cải thiện quá trình tổng hợp ATP trong tế bào thần kinh, sau đó tăng nguồn cung cấp năng lượng trong tế bào thần kinh, đồng thời thúc đẩy sự sống sót và biệt hóa của tế bào thần kinh và các hoạt động sống khác.

Ngoài ra, loại mục tiêu thứ hai được điều chỉnh bởi glycoside phenylethanol của Cistanche Deserticola liên quan đến việc điều chỉnh cân bằng nội môi protein trong tế bào, đặc biệt là các mục tiêu protein sốc nhiệt, có thể duy trì và thúc đẩy sự phục hồi của các protein bị gấp sai trong các tế bào thần kinh về cấu trúc không gian và sinh lý bình thường của chúng. chức năng, và sau đó cải thiện sức sống của các tế bào thần kinh bị hư hỏng. Loại mục tiêu thứ ba được điều chỉnh bởi phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola có liên quan đến khung tế bào, bởi vì sự phát triển khớp thần kinh và tái tạo tế bào thần kinh có liên quan nhiều đến protein tế bào, do đó, người ta suy đoán rằng phenylethanol glycoside từ Cistanche Deserticola có thể thúc đẩy sự phát triển của dây thần kinh tế bào bằng cách tác động lên các protein tế bào. Sự phát triển và kết nối của các khớp thần kinh góp phần hình thành mạng lưới thần kinh trong não và phục hồi trí nhớ, nhưng những suy luận này cần được kiểm chứng thêm bằng các thí nghiệm tiếp theo.

Nghiên cứu này cung cấp một lời giải thích khoa học và toàn diện hơn về hiệu quả bảo vệ thần kinh của phenylethanol glycoside của Cistanche Deserticola trong điều trị thiếu máu não cục bộ từ nguồn đích, điều này có ý nghĩa to lớn đối với việc phát hiện ra các mục tiêu thuốc bảo vệ thần kinh mới, đồng thời cung cấp hướng dẫn cho ứng dụng lâm sàng trong tương lai của Cistanche Deserticola. Thuốc chính xác cung cấp cơ sở cho các thí nghiệm dược lý cơ bản.