Mỹ phẩm làm trắng có quy mô thị trường lớn và triển vọng phát triển rộng trong khi các sản phẩm làm trắng của y học cổ truyền Trung Quốc luôn là điểm nóng nghiên cứu. Trong nghiên cứu này, lần đầu tiên chiết xuất hoạt chất làm trắng của Platycodon grandiflorum (PGE) được phân lập và tinh chế, đồng thời làm sáng tỏ cơ chế hoạt động làm trắng và thành phần hóa học của PGE. Tổng cộng có 45 thành phần được xác định thông qua phân tích sắc ký lỏng hiệu năng khối phổ (HPLC-MS), bao gồm arbutin, syringin, axit chlorogen, glycoside E, platycodin D3, baicalin, platycodin D, luteolin. Tỷ lệ nhặt rác của PGE đối với các gốc tự do DPPH và ABTS lần lượt là 98,03% và 84,30%. Tỷ lệ ức chế của PGE đối với tyrosinase lên tới 97,71%. PGE có tác dụng chống viêm đáng kể đối với các đại thực bào RAW264.7 được kích thích bởi lipopolysacarit (LPS) và có tác dụng ức chế đáng kể đối với quá trình tạo tyrosinase và melanin của các tế bào B16F10 được kích thích bởi a-MSH. Kết quả cho thấy PGE đạt được tác dụng làm trắng tổng hợp bằng cách ức chế sự kích hoạt của các gốc oxy tự do trên tyrosinase, tác dụng chống oxy hóa, chống viêm, hoạt động của enzyme và tạo ra hắc tố. Là một chất làm trắng được chiết xuất từ thực vật tự nhiên, PGE có tiềm năng tuyệt vời trong việc nghiên cứu và phát triển mỹ phẩm làm trắng thực vật, tạo nền tảng cho việc phát triển và sử dụng thêm tài nguyên Platycodon grandiflorum, đồng thời cung cấp cơ sở lý thuyết cho sự phát triển của mỹ phẩm làm trắng hữu cơ và xanh.
Theo các nghiên cứu có liên quan,hột cálà một loại thảo mộc phổ biến được mệnh danh là “thần dược kéo dài tuổi thọ”. Thành phần chính của nó làcistanoside, có tác dụng khác nhau nhưchống oxy hóa, achống viêm, và thúc đẩy chức năng miễn dịch. Cơ chế giữa cistanche vàLàm trắng danằm trong tác dụng chống oxy hóa của cistanche glycosides. Melanin trong da người được tạo ra bởi quá trình oxy hóa tyrosine được xúc tác bởityrosinaza, và phản ứng oxy hóa cần có sự tham gia của oxy nên các gốc oxy tự do trong cơ thể trở thành nhân tố quan trọng ảnh hưởng đến quá trình sản sinh melanin. Cistanche chứa cistanoside, một chất chống oxy hóa và có thể làm giảm sự hình thành các gốc tự do trong cơ thể, do đóức chế sản sinh hắc tố.
Để biết thêm thông tin:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Giới thiệu
Trong ngành công nghiệp làm đẹp toàn cầu, có rất nhiều loại mỹ phẩm chức năng làm trắng và thị phần dự kiến sẽ còn mở rộng hơn nữa. Để đáp ứng nhu cầu ngày càng tăng về các chất làm trắng da trong các công thức mỹ phẩm làm trắng và đạt được hiệu quả làm trắng da, ngành công nghiệp mỹ phẩm đã giới thiệu một số chất phụ gia hóa học, bao gồm hydroquinone, cysteine, glutathione, vitamin A và glucocorticoid. Các hợp chất này có tác dụng làm trắng da tốt; tuy nhiên, một số trong số chúng có tác dụng phụ độc hại; ví dụ: "đỗ quyên" gây ra các đốm trắng trên da người dùng,1 "Hydroquinone" có đặc tính gây độc tế bào và gây đột biến,2 "Glucocorticoid" có thể gây viêm da phụ thuộc vào hormone.3 Hiện tại, việc bổ sung các thành phần này (đỗ quyên, hydroquinone, glucocorticoid) ) để mỹ phẩm là không được phép. Tác dụng của sản phẩm không phải là tiêu chuẩn duy nhất mà người tiêu dùng cân nhắc khi mua mỹ phẩm. Trong những năm gần đây, liên tục xảy ra các vấn đề về an toàn sản phẩm mỹ phẩm vì sức khỏe. Các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra rằng các hoạt chất làm trắng chiết xuất từ thảo dược tự nhiên ít độc hại và ít tác dụng phụ hơn rất nhiều. Ngày càng có nhiều người tiêu dùng coi trọng sự an toàn của sản phẩm. Hơn nữa, các sản phẩm xanh, thân thiện với môi trường và hữu cơ đã trở nên phổ biến hơn, thể hiện qua việc quảng bá của nhiều thương hiệu bán hàng trực tiếp. Chính vì vậy, việc nghiên cứu và tìm ra các nguyên liệu dưỡng trắng da an toàn, lành tính đã trở thành xu hướng phát triển hiện đại. Việc áp dụng chiết xuất thảo dược Trung Quốc từ thực vật tự nhiên làm nguyên liệu thô trong mỹ phẩm đã dần trở thành một điểm nóng nghiên cứu trong việc phát triển các sản phẩm làm trắng và chăm sóc da.4
Platycodon grandiflorum, một dược liệu truyền thống của Trung Quốc, đã được sử dụng ở Trung Quốc trong hơn 2000 năm. Ghi chép sớm nhất có thể bắt nguồn từ "Thần nông thảo dược cổ điển".5 Tác dụng dược lý truyền thống của Platycodon grandiose là giảm ho và long đờm. Platycodon grandiflorum chứa saponin, đường, axit phenolic, sterol và polysacarit.6–8 Sự phức tạp và đa dạng của các thành phần hóa học quyết định sự đa dạng trong các hoạt động sinh học của chúng.9 Nghiên cứu dược lý hiện đại đã chỉ ra rằng Platycodon grandiflorum có tác dụng chống viêm, kìm khuẩn, chống - khối u, chống oxy hóa, điều hòa miễn dịch và các tác dụng dược lý khác.10,11 Ở Hàn Quốc và miền bắc Trung Quốc, Platycodon grandiflorum được sử dụng rộng rãi làm nguyên liệu thô trong thực phẩm và mỹ phẩm. Mỹ phẩm làm từ nguyên liệu Platycodon grandiflorumas, chẳng hạn như tinh chất làm trắng, sữa làm trắng và sữa tắm làm trắng, được người tiêu dùng ở Hàn Quốc, Nhật Bản và các nước châu Á khác ưa chuộng.12 Chiết xuất của Platycodon grandiflorum cũng được liệt kê trong danh mục nguyên liệu mỹ phẩm quốc tế danh mục nguyên liệu.13 Tuy nhiên, hoạt chất tẩy trắng và cơ chế tác dụng của Platycodon grandiflorum vẫn chưa rõ ràng và một số nghiên cứu sơ bộ đã được thực hiện về hoạt tính làm trắng của nó. Công XJ và cộng sự. so sánh các hoạt động ức chế tyrosinase của nhiều loại thảo mộc Trung Quốc và thấy rằng Platycodon grandiflorum có tác dụng ức chế mạnh nhất.14 Trên cơ sở này, Xu BJ et al. đã đánh giá tác dụng làm trắng của thành phần hữu hiệu trong Platycodon grandiflorum thông qua thí nghiệm ức chế men tyrosinase và thấy rằng thành phần hữu hiệu trong Platycodon grandiflorum có lẽ là hàm lượng saponin toàn phần.15 Trong nghiên cứu này, để làm rõ hơn hoạt chất làm trắng và cơ chế làm trắng của Platycodon grandiflorum , chúng tôi đã sử dụng chiết xuất hoạt chất làm trắng của Platycodon grandiflorum thu được thông qua phương pháp theo dõi dược lực học làm đối tượng nghiên cứu. Qua nghiên cứu hoạt tính và thành phần, chúng tôi làm rõ thành phần các hoạt chất làm trắng của Platycodon grandiflorum và tìm hiểu cơ chế làm trắng của các hoạt chất làm trắng của Platycodon grandiflorum. Nghiên cứu sẽ cung cấp cơ sở lý thuyết để sử dụng tốt hơn loài Platycodon grandiflorum làm nguyên liệu cho mỹ phẩm làm trắng.
Tác dụng làm trắng da liên quan đến việc giảm sản xuất melanin trong da. Melanin là sắc tố chính để kiểm soát màu sắc của da và tóc. Nó là một hợp chất cao phân tử phân bố rộng rãi trong động vật và thực vật. Khi melanin được sản xuất quá mức, melanin sẽ tích tụ trên da, hình thành các đốm và tàn nhang, nặng có thể dẫn đến ung thư da.16 Vì vậy, để ngăn chặn quá trình hình thành sắc tố da quá mức, cần phải ức chế quá trình sản xuất melanin. Melanocytes nằm ở lớp đáy biểu bì và được kiểm soát bởi tyrosinase. Các loại oxy phản ứng kích hoạt hoạt động tyrosinase và tyrosinase xúc tác 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) để tạo ra DOPA quinone và sau đó xúc tác DOPA quinone để tạo ra melanin thông qua quá trình tự oxy hóa và phản ứng enzyme. Do đó, việc ức chế tyrosinase và tăng sinh melanocyte có thể ức chế đáng kể quá trình sản xuất melanin.17 Hơn nữa, tác dụng chống oxy hóa và chống viêm tốt có thể làm giảm tổn thương do quá trình oxy hóa và viêm da gây ra, làm chậm quá trình lão hóa da, giữ cho da đàn hồi và mịn màng, do đó phát huy tác dụng làm trắng tổng hợp.18,19
Vì vậy, để tìm ra hoạt chất chiết xuất từ Platycodon grandiflorum có hoạt tính làm trắng da, chống oxy hóa và kháng viêm tự nhiên, nghiên cứu này chủ yếu tập trung vào tác dụng của cao chiết Platycodon grandiflorum (PGE) đối với ức chế tyrosinase, ức chế tyrosinase nội bào và ức chế hoạt tính của tế bào. sinh hắc tố. Nghiên cứu nhằm phân tích tác dụng ức chế của PGE đối với hoạt động tyrosinase và tạo hắc tố, đồng thời đánh giá toàn diện tác dụng làm trắng và chăm sóc da của PGE cũng như tác dụng chống oxy hóa và chống viêm của nó. Thành phần hóa học của PGE được xác định và phân tích thông qua sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và sắc ký lỏng (LC)/khối phổ (MS), đồng thời làm rõ hoạt chất làm trắng cụ thể của PGE. Điều quan trọng là phát triển các sản phẩm mới của Platycodon grandiflorum và thúc đẩy sự phát triển của ngành công nghiệp Platycodon grandiflorum.
2. Vật liệu và phương pháp
2.1. Nguyên vật liệu
Axit fomic, metanol, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,20-casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-axit sulfonic) (ABTS ), acetylacetone, NaOH, K2S2O8 và thuốc thử Ehrlich được lấy từ Nhà máy Hóa chất Bắc Kinh. Các sản phẩm tham chiếu Platycodin D, arbutin, platycodin D3, glycoside E, syringin, axit chlorogen, baicalin và luteolin được lấy từ Viện Nhận dạng Sản phẩm Sinh học Dược phẩm Trung Quốc. Acetonitril và metanol tinh khiết sắc ký được lấy từ JT Baker Co., Hoa Kỳ. Tyrosinase, L-tyrosine, natri hyaluronate và hyaluronate được lấy từ Công ty TNHH Công nghệ Solebo Bắc Kinh. 264,7 tế bào gốc và tế bào B16F10 được mua từ Trung tâm Tài nguyên Tế bào của Viện Khoa học Sinh học Thượng Hải, Trung Quốc và được lưu trữ trong phòng thí nghiệm của một trường cao đẳng y tế trực thuộc Đại học Y khoa Trung Quốc Trường Xuân. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), huyết thanh bào thai bò và thuốc kháng sinh (penicillin và streptomycin) được lấy từ Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, bộ ELISA (NO, IL-6, TNF-a) và bộ đếm tế bào-8 (CCK-8) được lấy từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Changchun Baijin Nước tinh khiết được lấy từ Công ty TNHH Thực phẩm Wahaha
2.2. Chuẩn bị chiết xuất hoạt chất làm trắng Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum được cung cấp bởi Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum được nghiền thành bột, đun nóng và tái sử dụng với dung dịch ethanol 95 phần trăm ba lần, mỗi lần 1 giờ. Sau đó, sản phẩm được lọc và dịch lọc được thu hồi và hợp nhất với dịch lọc thu được từ ba lần chiết. Dịch lọc được làm khô và trộn với nước cất để phân giải, và n-butanol (thể tích 1:1) bão hòa với nước được chiết năm lần. Lớp n-butanol được kết hợp, dung dịch n-butanol được loại bỏ và thu được PGE. Tỷ lệ chiết xuất PGE từ Platycodon grandiflorum là 8,9 phần trăm .
2.3. Nuôi cấy tế bào
Tế bào khối u ác tính của chuột B16F10 và tế bào RAW264.7 được nuôi cấy trong DMEM có bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò, 100 U mL―1 penicillin và 100 g mL―1 streptomycin trong không khí được làm ẩm với 5% CO2 ở 37 độ C. Khi các tế bào được phát triển đến trạng thái hợp nhất, chúng được tiêu hóa bởi trypsin và các tế bào được truyền hai ngày một lần. Tất cả các thí nghiệm được thực hiện ba lần và lặp lại ba lần để đảm bảo độ lặp lại.
2.4. Xét nghiệm khả năng sống của tế bào
Để đánh giá mức độ an toàn của PGE, tác động của PGE trên các tế bào B16F10 và RAW264.7 được xác định thông qua phương pháp CCK-8 theo hướng dẫn của nhà sản xuất.20 Đầu tiên, các tế bào B16F10 và tế bào RAW264.7 được nuôi cấy trong {{ 10}}các đĩa giếng ở nồng độ 5 × 103 tế bào mỗi giếng và 1 × 10⒋ tế bào mỗi giếng trong 24 giờ, sau đó được xử lý bằng PGE hoặc DMEM ở các nồng độ khác nhau trong 72 giờ. Sau khi xử lý, 10 mL thuốc thử CCK-8 được thêm vào từng giếng và tế bào được nuôi cấy thêm trong 2 giờ. Độ hấp thụ ở bước sóng 450nm được đo bằng đầu đọc vi bản.
2.5. hoạt động chống oxy hóa
Hoạt tính chống oxy hóa của PGE được xác định thông qua các thử nghiệm nhặt gốc tự do DPPH và ABTS, và axit ascorbic được sử dụng làm chất đối chứng dương tính.21,22 Kết quả được biểu thị bằng tỷ lệ phần trăm ức chế.
Ngoài ra, dung dịch PGE, axit ascorbic và platycodin D với các nồng độ khác nhau ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0 và 1,2 mg mL―1) đã được thêm vào ống nghiệm bị tắc. Sau đó, 2 mL dung dịch DPPH được thêm vào mỗi ống nghiệm; các ống được xoáy, trộn hỗn hợp và để phản ứng trong buồng tối trong 30 phút, và xác định độ hấp thụ A1 ở bước sóng 520 nm. Sau đó, 2 mL metanol được sử dụng làm nhóm đối chứng thay vì dung dịch DPPH để xác định giá trị độ hấp thụ A2. Giá trị độ hấp thụ A0 được xác định bằng cách thay thế dung dịch mẫu bằng 2 mL metanol làm nhóm đối chứng trắng. Điều chỉnh giá trị độ hấp thụ về 0 bằng metanol. Tốc độ nhặt gốc tự do DPPH được tính theo công thức sau:
Để chuẩn bị ABTS cộng với rượu mẹ $, 35,2 mg ABTS và 6,139 mg kali persunfat được trộn với thể tích không đổi là 10 mL. Dung dịch được pha loãng với metanol sau 12–16 giờ phản ứng ở nhiệt độ phòng cho đến khi giá trị hấp thụ của dung dịch ở bước sóng 734 nm là khoảng 7.{{10}} × 0.2. Sau đó, 30 mL dung dịch PGE, axit ascorbic và platycodin D với các nồng độ khác nhau (0.2, 0.4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,2 mg mL―1) được trộn với 220 mL dung dịch ABTS plus c trong đĩa giếng 96-có đánh dấu enzym và độ hấp thụ ở bước sóng 734 nm được đo sau phản ứng trong bóng tối trong 6 phút.
trong đó A0 là độ hấp thụ của mẫu trắng và AS là độ hấp thụ của mẫu cần đo.
2.6. Hoạt động chống viêm do lipopolysacarit gây ra của đại thực bào RAW264.7
Các đại thực bào RAW264.7 trong môi trường 1 mL được cấy vào một đĩa 24-giếng, với 1×104 tế bào trên mỗi giếng và được nuôi cấy qua đêm để các tế bào dính vào thành. Các tế bào được nuôi cấy trong 24 giờ sau khi tiếp xúc với chất chiết xuất lipopolysacarit (LPS) và PGE ở các nồng độ khác nhau (10, 50, 100 mg mL―1). Nồng độ của NO, IL-6 và TNF-a trong phần nổi phía trên tế bào được xác định bằng cách sử dụng bộ ELISA, theo chỉ dẫn của nhà sản xuất.23
2.7. hoạt động tyrosinase
Sử dụng một phương pháp được báo cáo trong tài liệu, với dung dịch đệm phốt phát (25 mmol, pH=6.8), dung dịch chất nền L-tyrosine (0.5 mg mL―1), một loại enzyme tyrosine dung dịch (50 U mL―1) và các dung dịch khác trong các đĩa giếng 96-của hệ thống phản ứng tổng thể 240 mL, cùng với 120 mL dung dịch cơ chất, 40 mL dung dịch đệm phốt phát, 40 mL dung dịch mẫu và máy xay. Sau đó, 40 mL dung dịch enzyme tyrosine được thêm vào hệ thống trên. Phản ứng của nhiệt độ không đổi của bể nước 37 độ C trong 20 phút đã được ghi nhận và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 475 nm.24
Trong đó A là độ hấp thụ của dung dịch mẫu được thay thế bằng dung dịch đệm tương đương, B là độ hấp thụ của dung dịch mẫu, dung dịch tyrosinase được thay thế bằng dung dịch đệm tương đương, C là độ hấp thụ của dung dịch mẫu và D là độ hấp thụ của dung dịch đệm tương đương thay vì dung dịch tyrosinase (Bảng 1).
2.8. Hoạt động ức chế sự hình thành melanin
Các tế bào khối u ác tính B16F10 trong môi trường 1 mL được cấy vào đĩa nuôi cấy giếng 24-, với 1×104 tế bào trên mỗi giếng và được nuôi cấy qua đêm để các tế bào bám vào thành. Các tế bào được nuôi cấy với hormone kích thích a-melanocyte (100 nM a-MSH) trong 48 giờ và được nuôi cấy với các nồng độ PGE và arbutin khác nhau (100, 150, 200 mg mL―1) trong 24, 48 và 72 giờ.
Sau thời gian quản lý, các tế bào được rửa hai lần bằng PBS (pH=7.2) và trộn với 200 mL PBS chứa 1% Triton X-100. Các tế bào đã bị ly giải bằng cách đóng băng và tan băng. Sau khi hệ thống được ly tâm ở tốc độ 12 000 vòng/phút trong 30 phút, phần nổi phía trên được loại bỏ và NaOH 1 M chứa 10 phần trăm dimethyl sulfoxide (300 mL) được thêm vào các hạt tế bào; sau đó phản ứng ở 80 độ trong 2 giờ để phân giải hắc tố trong tế bào.25 Độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm được xác định.
2.9. Hoạt động tyrosinase của tế bào
Các tế bào khối u ác tính B16F10 trong môi trường 1 mL được cấy vào đĩa nuôi cấy giếng 24-, với 1 × 104 tế bào trên mỗi giếng và được nuôi cấy qua đêm để các tế bào bám vào thành. Các tế bào được nuôi cấy với hormone kích thích a-melanocyte (100 nM a-MSH) trong 48 giờ và được nuôi cấy với các nồng độ khác nhau (100, 150, 200 mg mL―1) của PGE và arbutin trong 24, 48 và 72 giờ. Sau thời gian quản lý, các tế bào được rửa hai lần bằng PBS (pH =7.2) và trộn với 200 mL PBS chứa 1% Triton X-100. Các tế bào đã bị ly giải bằng cách đóng băng và tan băng. Sau khi ly tâm ở tốc độ 12 000 vòng/phút trong 30 phút, phần nổi phía trên được đưa vào đĩa giếng 96-, 100 mL mỗi giếng và trộn với 100 mL dung dịch L-DOPA 0,1 phần trăm. Sau khi ủ ở 37 độ trong 2 giờ, độ hấp thụ ở bước sóng 475 nm được xác định ngay lập tức.26
2.10. phân tích thành phần hóa học
2.10.1. Phân tích HPLC.Dung dịch mẫu PGE được phân tích bằng hệ thống HPLC Shimadzu LC{{0}}AHT với đầu dò tán xạ ánh sáng bay hơi ELSD6000 (Alltech CHROM).27 Quá trình phân tách sắc ký được thực hiện trên Sepax Bio -Cột C18 (4,6×250 mm, 5 mm, từ Sepax Technologies, Delaware, USA). Hệ thống pha động bao gồm pha động A (axetonitril) và pha động B (0,1% nước axit formic). Độ dốc dung môi được trình bày trong Bảng 2. Các điều kiện sắc ký như sau: tốc độ dòng chảy là 0,8 mL min―1, nhiệt độ phát hiện tán xạ ánh sáng bay hơi (ELSD) ban đầu là 105×C, tốc độ dòng khí là 2,8 L min― 1, và lượng tiêm là 20 L. Hai mươi lô PGE đã được chuẩn bị.
2.10.2. Phân tích thành phần hóa học PGE qua HPLC kết hợp khối phổ.Công nghệ LC/MS độ phân giải cao Q-Orbitrap được sử dụng kết hợp với khối phổ kế độ phân giải cao Q Exactive trên hệ thống sắc ký RS Ultimate 3000 để phân tích và xác định thành phần hóa học của dung dịch mẫu PGE qua MS.28 Các điều kiện MS như sau: nguồn ion: nguồn ion hóa phun điện; chế độ quét: công tắc quét ion dương và âm; phương pháp phát hiện: khối lượng đầy đủ/dd-MS2; độ phân giải: 70 000 (khối lượng đầy đủ), 17 500 (dd-MS2); phạm vi quét: 150.0–2000.0 m/z; điện áp phun điện: 3,8 kV (dương); nhiệt độ mao dẫn: 300 độ C; khí va chạm: argon có độ tinh khiết cao (độ tinh khiết $99,999 phần trăm); khí vỏ bọc: nitơ (độ tinh khiết $ 99,999 phần trăm, 40 arb); khí phụ trợ: nitơ (độ tinh khiết $99,999 phần trăm, 350 độ); thời gian thu thập dữ liệu: 30,0 phút. Điều kiện sắc ký: cột đồ thị màu: RP-C18 (150× 2,1 mm, 1,8 mm, Welch); Tốc độ dòng chảy: 0,30 mL tối thiểu ― 1; pha nước: dung dịch nước axit formic 0,1 phần trăm; pha hữu cơ: 0,1% axit formic acetonitril; dung dịch rửa kim: metanol; nhiệt độ cột: 35 độ C; thể tích tiêm: 5,00 mL. Độ dốc dung môi được thể hiện trong Bảng 3.
2.11. thống kê dữ liệu
Tất cả các thí nghiệm đã được tiến hành ít nhất ba lần. Dữ liệu được báo cáo là giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn. Các phân tích thống kê được thực hiện bằng SPSS 21.0 và Origin 9.0. Đối với nhiều phép so sánh, dữ liệu được áp dụng ANOVA một chiều (bài hoc của Thổ Nhĩ Kỳ) và thử nghiệm t được ghép nối để xác định ý nghĩa thống kê. p < 0.05 được coi là sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các nhóm.
3. Kết quả
3.1. Ảnh hưởng của PGE đến khả năng tồn tại của các tế bào B16F10 và 264,7 tế bào
Tác động của PGE lên các tế bào u ác tính B16F10 và đại thực bào RAW264.7 được phát hiện thông qua phương pháp CCK-8. Các tế bào được xử lý với các nồng độ PGE khác nhau trong 24 giờ và sau đó được phát hiện bằng phương pháp CCK-8. Các kết quả được biểu thị bằng phần trăm tỷ lệ sống sót so với nhóm đối chứng. Ở nồng độ PGE là 10–100 mg mL―1 (khả năng sống của tế bào: 99,42 ±1,951–107,17 ±2,601 phần trăm ), PGE không biểu hiện gây độc tế bào trên 264,7 tế bào (Hình 1). Tuy nhiên, hoạt động của tế bào giảm đáng kể xảy ra ở nồng độ PGE là 200 mg mL―1 (khả năng sống của tế bào: 74,91 ±1,574 phần trăm ). Do đó, phạm vi liều lượng là 10–100 mg mL―1 (Tỷ lệ chiết xuất PGE trong Platycodon Grandiflorum là 8,9 phần trăm. Nồng độ 10–100 mg mL―1 của PGE tương đương với 0,11–1,12 mg mL―1 của Platycodon Grandiflorum.Thêm 1 mL môi trường chứa thuốc mỗi giếng tương đương với việc thêm 0,11–0,12 mg Platycodon Grandiflorum.) nên được chọn. Ở đây, 10 mg mL―1, 50 mg mL―1 và 100 mg mL―1 (nồng độ của dược liệu thực vật: 0,11 mg mL―1, 0,56 mg mL―1, 1,12 mg mL―1, tương ứng) đã được chọn là nồng độ thấp, trung bình và cao.
Hoạt động của các tế bào B16F10 hơi khác so với 264,7 tế bào. Khi nồng độ PGE là 10–200 mg mL―1 (khả năng sống của tế bào: 99,03 ±1,965 phần trăm –91,48 ±1,382 phần trăm ), hoạt động của các tế bào B16F10 không khác biệt đáng kể so với hoạt động của nhóm đối chứng. Tuy nhiên, khi nồng độ là 250 mg mL―1 (khả năng sống của tế bào: 85,69 ±2,284 phần trăm ), hoạt động của các tế bào B16F10 bắt đầu giảm và hoạt động của tế bào dưới nồng độ PGE là 1000 mg mL―1 (khả năng sống của tế bào: 70,75). phạm vi liều lượng 10–200 m3.337 phần trăm) là thấp nhất. g mL―1 (Tỷ lệ chiết xuất PGE trong Platycodon Grandiflorum là 8,9 phần trăm. Nồng độ 100–200 mg mL―1 của PGE tương đương với 1,12–2,24 mg mL―1 của Platycodon Grandiflorum. Thêm 1 mL chất chứa thuốc môi trường mỗi giếng tương đương với việc bổ sung 1,12–2,24 mg Platycodon Grandiflorum.) nên được chọn. Ở đây, lần lượt là 100 mg mL―1, 150 mg mL―1 và 200 mg mL―1 (nồng độ của dược liệu thực vật: 1,12 mg mL―1, 1,68 mg mL―1 2.24 mg mL―1 ) được chọn lần lượt là nồng độ thấp, trung bình và cao (Hình 2).
3.2. Khả năng chống oxy hóa của PGE
Các xét nghiệm nhặt gốc tự do DPPH và ABTS được sử dụng để đo hoạt tính chống oxy hóa của PGE. Các hoạt động nhặt rác của PGE đối với các gốc DPPH và ABTS được xác định ở các nồng độ PGE khác nhau (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2,5 mg mL― 1). Platycodin D và axit ascorbic được sử dụng làm đối chứng dương tính. Như được hiển thị trong Hình 3, hoạt động nhặt rác của PGE đối với các gốc tự do DPPH và ABTS tăng lên theo cách phụ thuộc vào liều lượng, tương tự như kết quả của nhóm kiểm soát tích cực. Khi nồng độ PGE là 6,25 mg mL― 1, hoạt động nhặt rác đối với gốc DPPH là 98.03 ±0.60 phần trăm , gần giống như hoạt động nhặt rác của axit ascorbic. Hơn nữa, PGE cũng cho thấy hoạt động nhặt rác mạnh đối với gốc ABTS (84,30 ± 0,53 phần trăm ), cao hơn so với nhóm kiểm soát platycodin D.
3.3. Tác dụng giảm PGE đối với phản ứng viêm do LPS kích thích của đại thực bào RAW264.7
Theo kết quả về tác động của PGE đối với hoạt động của đại thực bào RAW264.7 trong Phần 3.1, nồng độ PGE là 10, 50 và 100 mg mL―1 được chọn lần lượt là liều thấp, trung bình và cao để kiểm tra tác động của PGE đối với tình trạng viêm đại thực bào RAW264.7 do LPS kích thích. Như được hiển thị trong Hình 4, liều PGE làm giảm quá trình sản xuất NO trong các đại thực bào RAW264.7 được kích thích bằng LPS một cách phụ thuộc vào liều và làm giảm mức IL-6 và TNF-một yếu tố gây viêm một cách phụ thuộc vào liều.
3.4. Ảnh hưởng của PGE đối với hoạt động tyrosinase của nấm, hàm lượng melanin trong tế bào hắc tố B16F10 và hoạt động tyrosinase nội bào
Như thể hiện trong Hình 5, hoạt tính ức chế tyrosinase của PGE tăng lên đáng kể khi tăng nồng độ dịch chiết. Nồng độ PGE càng cao thì hoạt động ức chế tyrosinase càng mạnh. Các hoạt động ức chế tyrosinase của PGE ở 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 và 3.0 mg mL―1 là 6{ {29}}.29% , 79,32% , 85,14% , 95,23% , 96,43% và 97,71% tương ứng. Tuy nhiên, khi nồng độ PGE là 2,5–3.0 mg mL― 1, hoạt tính ức chế tyrosinase không tăng đáng kể; do đó, không cần thiết phải tiến hành thí nghiệm với nồng độ cao hơn. Trong cùng điều kiện, tỷ lệ ức chế của 3,0 mg mL‵1 PGE (nồng độ dược liệu thực vật: 33,71 mg mL―1) tương tự như của arbutin (3 mg mL―1, 96,97 ±1,849 phần trăm ) và cao hơn tỷ lệ ức chế đó của platycodin D (3 mg mL―1, 81,67 ±2,331 phần trăm ).
Theo tác dụng của PGE đối với hoạt động của tế bào hắc tố B16F10 trong Phần 3.1, nồng độ PGE là 100, 150 và 200 mg mL―1 PGE được chọn là liều thấp, trung bình và cao để kiểm tra tác động của PGE đối với hàm lượng hắc tố và hoạt động tyrosinase của tế bào hắc tố B16F10 được kích thích bởi a-MSH. Như được hiển thị trong Hình 6, hoạt tính tyrosinase của các tế bào B16F10 được kích thích bởi 100 nM a-MSH (nhóm đối chứng) cao hơn đáng kể so với hoạt tính của các tế bào không được kích thích. Với sự gia tăng nồng độ PGE, các hoạt động ức chế sản xuất tyrosinase và melanin trên các tế bào B16F10 tăng lên đáng kể theo cách phụ thuộc vào liều lượng. Với sự gia tăng thời gian quản lý, hoạt động ức chế của PGE trên tế bào B16F10 tyrosinase và sản xuất melanin tăng dần.
Để biết thêm thông tin: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
