Công nghệ chuẩn bị cho hạt Wenyang Tongbian

Tóm tắt:

Khách quanXác định và tối ưu hóa công nghệ bào chế hạt Wenyang Tongbian.

phương phápNước sắc đã được chiết xuất. Hàm lượng glycoside echinacea trong thuốc quân chủ và hợp chất năng suất được sử dụng làm chỉ số. Thử nghiệm trực giao L9 (34) được sử dụng để tối ưu hóa quá trình chiết các hạt Wenyang Tongbian. Quá trình tạo hình tốt nhất được tối ưu hóa dựa trên độ khó tạo hạt, khả năng tạo hạt và năng suất hạt. Kết quả Quá trình chiết tối ưu bao gồm thêm 10 nước và chiết 3 lần, mỗi lần 1 giờ. Quy trình hình thành tốt nhất: loại nguyên liệu phụ wasdextrin, tỷ lệ tá dược 1∶0,9, chất tạo ướt tốt nhất là 85% ethanol. Kết luận Quá trình chiết xuất và đúc khuôn ổn định và hợp lý, đơn giản và khả thi, có khả năng tái tạo tốt, có thể tạo cơ sở cho việc sản xuất công nghiệp hạt Wenyang Tongbian.

Từ khóa: Hạt Wenyang Tongbian; kiểm tra trực giao; khai thác; đúc

CÔNG THỨC THẢO DƯỢC MỚI CHO THẬNTHIẾU DƯƠNG

Dịch vụ hỗ trợ của Wecistanche

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Điện thoại:+86 15292862950

Táo bón thiếu dươngthường gặp ở người già và phụ nữ. Phương pháp điều trị không nên đơn giản là tẩy rửa. Phương pháp Ấm Dương có thể đạt được kết quả tốt [1]. Wenyang Tongbian Granules là một chế phẩm trong bệnh viện được phát triển dựa trên kinh nghiệm lâm sàng của Giáo sư Lin Aizhen của Bệnh viện Y học cổ truyền Trung Quốc tỉnh Hồ Bắc trong điều trị táo bón chức năng ở người cao tuổi. Nó bao gồm Cistanche Deserticola, vỏ quế, xương cựa và Atractylodes macrocephala. Trong công thức, Cistanche Deserticola có tác dụng bổ thận dương, ích tinh huyết, là vị thuốc chủ yếu làm ấm dương; vỏ quế có tác dụng làm ấm kinh mạch, thông huyết, bổ hỏa, bổ dương; xương cựa có tác dụng bổ dương, bổ khí, làm se vết loét và thúc đẩy quá trình tái tạo mô; và Atractylodes macrocephala có tác dụng tăng cường lá lách và bổ sung khí, làm khô ẩm ướt và thúc đẩy lợi tiểu.

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng phenyletanol glycoside là thành phần hoạt chất chính trong Cistanche Deserticola [2]. Trong số đó, echinacoside và verascoside là những thành phần đặc trưng để kiểm soát chất lượng của Cistanche Deserticola theo quy định trong Dược điển Trung Quốc. Lưu Xianhong và cộng sự. [3] đã kết luận thông qua các thử nghiệm in vivo trên người rằng Cistanche Deserticola phù hợp để điều trị táo bón trên lâm sàng và có thể điều trị cả triệu chứng lẫn nguyên nhân gốc rễ. Thành phần hóa học chính của vỏ quế bao gồm dầu dễ bay hơi, polysacarit, flavonoid, v.v. Các nghiên cứu dược lý hiện đại đã chỉ ra rằng vỏ quế có tác dụng dược lý như giãn mạch, chống loét dạ dày và tác dụng kháng khuẩn [4]. Astragalus polysaccharides, flavonoid và astragaloside IV là những thành phần hóa học chính có tác dụng điều hòa miễn dịch [5]. Atractylodes macrocephala có tác dụng tăng cường lá lách và điều hòa các rối loạn hệ thực vật đường ruột và có thể được sử dụng lâm sàng để điều trị rối loạn chức năng đường tiêu hóa [6]. Đơn thuốc ban đầu chủ yếu được sử dụng trong thuốc sắc Trung Quốc, nhưng nó có những nhược điểm như thuốc sắc bất tiện, liều lượng lớn và bất tiện khi mang theo. Để làm cho đơn thuốc kinh nghiệm lâm sàng này được sử dụng rộng rãi trong thực hành lâm sàng, nó đã được phát triển thành dạng hạt. Thí nghiệm này sử dụng hiệu suất hồ và hàm lượng echinacoside, hoạt chất chính trong thuốc chính làm chỉ số, tiếp tục sử dụng quy trình sắc nước truyền thống và sử dụng phương pháp thử trực giao L9 (34) để tối ưu hóa lượng nước thêm vào. , thời gian sắc và thời gian sắc trong quá trình chiết để có được quá trình chiết tốt nhất. Đồng thời, quy trình đúc hạt đã được nghiên cứu để xác định quy trình đúc ổn định và hợp lý, cung cấp tài liệu tham khảo cho việc sản xuất thí điểm, kiểm soát chất lượng và ứng dụng lâm sàng của chế phẩm [7-8].

1 Dụng cụ và thuốc thử

1.1 Dụng cụ

Liên minh e2695sắc ký lỏng hiệu năng cao, 2998 máy dò mảng điốt (Waters, Hoa Kỳ), cân phân tích ES225SMDR 1/100,000 (Precisa, Thụy Sĩ), máy nước siêu tinh khiết UPT-11-10T (Shenzhen UPT Technology Co., Ltd.), Máy làm sạch siêu âm CNC tần số kép KQ-500VDE (Công ty TNHH Thiết bị siêu âm Kunshan).

1.2 Thuốc thử

Rượu Cistanche lát(số lô: 2322050113, sản xuất tại Nội Mông), lát quế (số lô: 2323020103, sản xuất tại Quảng Tây), lát xương rồng (số lô: 2323020105, sản xuất tại Cam Túc), lát Atractylodes macrocephala (số lô: 2322080101, sản xuất tại Chiết Giang) ) (Hubei Chenmei Chinese Medicine Co., Ltd., tất cả các lát cắt đều được xác định là hàng thật bởi Chen Shuhe, dược sĩ trưởng của Viện Y học cổ truyềnY học cổ truyền Trung Quốccủa Bệnh viện Y học cổ truyền Trung Quốc tỉnh Hồ Bắc và đủ điều kiện theo phiên bản 2020 củaTiếng Trung Dược điểnPhần I). Chất tham chiếu Echinacoside(số lô: 111670-201907, độ tinh khiết: 91,8%, Nghiên cứu Thanh tra Thực phẩm và Dược phẩm Trung Quốc).

Dextrin (số lô: 230102), tinh bột ngô (số lô: 221008) (Công ty TNHH Tá dược Dược phẩm Henan Zhenghong), sucrose (số lô: TF28221205), cellulose vi tinh thể (số lô: TF471211001), lactose (số lô: TF463Y230101) (Công ty TNHH Dược phẩm Hồ Nam Jiudian Hongyang).

2 phương pháp và kết quả

2.1 Xác định hàm lượng echinacoside

2.1.1 Điều kiện sắc ký: Agilent 5 TC-C18 (250 nm×4,6 mm, 5 μm) được sử dụng làm cột sắc ký; metanol được sử dụng làm pha động A, dung dịch axit formic 0,1% được sử dụng làm pha động B, rửa giải gradient (0-17 phút, 26,5%A; 17-20 phút, 26,5% → 29,5%A; 20-54 phút,

29,5%A, 54-55 phút, 29,5% → 26,5%A; 55-60phút, 26,5%A); tốc độ dòng chảy 1.0 mL·phút-1; nhiệt độ cột 30 độ; máy dò mảng diode, bước sóng phát hiện 330 nm; thể tích tiêm 10μL; số đĩa lý thuyết được tính toán dựa trên đỉnh echinacoside không được nhỏ hơn 3000[9].

2.1.2 Chuẩn bị dung dịch đối chiếu

Lấy một lượng echinacoside thích hợp, cân chính xác 9,65 mg, cho vào bình định mức 25 mL, thêm 50%

hòa tan metanol và pha loãng đến vạch là dung dịch gốc đối chứng. Dùng pipet lấy chính xác 1 mL dung dịch gốc echinacoside cho vào bình định mức 25 mL, thêm 50% metanol pha loãng đến vạch, lắc đều và chuẩn bị dung dịch đối chiếu chứa 14,17 ug/1 mL [9].

2.1.3 Chuẩn bị dung dịch thử

Lấy khoảng 0,5 g bột nhão khô, nghiền thành bột, cân chính xác, cho vào chai hình nón có nút đậy màu nâu, thêm chính xác 50 mL metanol 50%, đậy kín, lắc đều, cân, xử lý siêu âm trong 40 phút (công suất 250 W, tần số 45 kHz), để nguội, cân lại, thêm 50% metanol để bù khối lượng đã mất, lắc đều, để yên, lấy phần nổi phía trên, lọc và lấy dịch lọc.

2.1.4 Chuẩn bị dung dịch mẫu âm tính

Lấy khoảng 0,5 g bột nhão khô của công thức không có rượu Cistanche và chuẩn bị dung dịch mẫu âm tính theo phương pháp trong "2.1.3".

2.1.5 Kiểm tra tính đặc hiệu

Dùng pipet lấy chính xác dung dịch thử, dung dịch đối chiếu và dung dịch mẫu âm tính tương ứng và đo theo các điều kiện sắc ký trong "2.1.1". Ghi lại sắc ký đồ. Kết quả được thể hiện trong Hình 1. Không có sự can thiệp nào vào mẫu âm tính. Kết quả cho thấy phương pháp có độ đặc hiệu tốt.

Hình 1 Sắc ký đồ riêng của hạt Wenyang Tongbian

2.1.6 Điều tra mối quan hệ tuyến tính

Lấy một lượng echinacoside thích hợp, cân chính xác đến 10,11 mg, cho vào bình định mức 25 mL, thêm metanol 50% để pha loãng thành dãy nồng độ dung dịch đối chiếu và bơm theo điều kiện sắc ký trong "2.1 .1" để xác định giá trị diện tích pic của echinacoside. Vẽ một đường cong chuẩn, với lượng tham chiếu echinacoside được tiêm làm trục hoành (ug, X) và giá trị tích phân diện tích pic là trục tung (Y) và thực hiện hồi quy tuyến tính.

Phương trình hồi quy là Y=1.294×104X - 4.931×104, r=0.9997. Kết quả cho thấy giá trị tích phân diện tích pic của lượng tiêm echinacoside có mối quan hệ tuyến tính tốt giữa 1,4850 và 371,2392 ug.

2.1.7 Kiểm tra độ chính xác

Hút chính xác 10 μL dung dịch đối chiếu (nồng độ khối lượng 37,12 ug·mL－ 1) trong "2.1.6", tiêm 6 lần, ghi lại giá trị diện tích pic của echinacoside tương ứng và tính giá trị RSD là 1,1%, biểu thị rằng thiết bị có độ chính xác tốt.

2.1.8 Kiểm tra độ lặp lại

Lấy cùng loại bột khô đó, nghiền thành bột, cân chính xác 6 phần, mỗi phần khoảng 0,5 g rồi cho vào chai hình nón có nút đậy màu nâu. Trích xuất theo phương pháp ở phần “2.1.3”, xác định hàm lượng và tính toán. Kết quả cho thấy hàm lượng echinacoside trung bình trong mẫu là 1,46 mg·g－1, giá trị RSD là 2,7% cho thấy độ lặp lại của phương pháp này là tốt.

2.1.9 Kiểm tra độ ổn định

Lấy cùng một dung dịch mẫu, rút ​​chính xác 10 μL và tiêm tương ứng trong vòng 0, 2, 4, 8, 12, 18 và 24 giờ. Giá trị RSD diện tích pic là 0,71%, cho thấy dung dịch mẫu có độ ổn định tốt trong vòng 24 giờ.

2.1.10 Kiểm tra phục hồi mẫu

Cân chính xác 6 phần của cùng một mẻ mẫu thử, mỗi phần 0, 24 g và cho vào chai hình nón có nút đậy màu nâu. Theo tỷ lệ khối lượng 1:1 của các thành phần trong mẫu thử, thêm chính xác 0,9 mL chất tham chiếu echinacoside (nồng độ khối lượng là 371,24 ug·mL－ 1) trong mục "2.1.6", Chuẩn bị dung dịch thử theo phương pháp trong “2.1.3”, xác định diện tích pic sắc ký của echinacoside và tính hàm lượng. Kết quả cho thấy tỷ lệ thu hồi trung bình của echinacoside là 101,09% và giá trị RSD là 1,6%.

2.2 Kế hoạch thí nghiệm và các chỉ số đánh giá

Lượng nước thêm vào (A), thời gian chiết (B) và số lần chiết (D) được chọn làm các yếu tố cần nghiên cứu. Ba mức yếu tố được thiết lập theo kết quả của cuộc điều tra một yếu tố trước đó, xem Bảng 1. Bảng thử nghiệm trực giao L9 (34) đã được sử dụng trong thử nghiệm, xem Bảng 2. Thử nghiệm sử dụng hiệu suất hồ và hàm lượng echinacoside làm chỉ số đánh giá để nghiên cứu quá trình khai thác nước tối ưu.

Tab 1 Hệ số và mức độ kiểm tra trực giao

2.2.1 Kiểm tra trực giao

Theo tỷ lệ quy định, cân 18 phần mỗi vị thuốc, mỗi vị 55 g, thực hiện chiết nước sắc theo sơ đồ thiết kế trực giao ở Bảng 2. Mỗi nhóm có 2 phần song song. Nước sắc được lọc qua một 80-màn lưới, dịch lọc được gộp lại, làm nguội, thể tích nước sắc được đo, 50 mL được hút chính xác vào đĩa bay hơi đã được cân không đổi, làm bay hơi đến khô , và làm khô dưới áp suất giảm ở 60 độ để thu được hỗn hợp khô mẫu thử nghiệm trực giao. Tính hiệu suất dán (hiệu suất dán=(khối lượng bột nhão khô × thể tích chất lỏng thuốc) / (50 × trọng lượng miếng thuốc sắc) × 100%). Theo các điều kiện sắc ký trong “2.1.1” và phương pháp trong “2.1.3”, lượng chiết echinacoside trong 9 nhóm dịch chiết thử nghiệm trực giao được xác định tương ứng. Lượng chiết xuất Echinacoside=trọng lượng bột khô × hàm lượng echinacoside / trọng lượng miếng thuốc sắc Cistanche. Điểm toàn diện=hàm lượng echinacoside ` hàm lượng tối đa × 0,5 × 100% + hiệu suất dán ` hiệu suất dán tối đa × 0,5 × 100% [10]. Kết quả được thể hiện ở Bảng 2.

Như được trình bày trong Bảng 3, lấy điểm toàn diện về năng suất bột nhão và hàm lượng echinacoside làm chỉ số đánh giá, giá trị phạm vi R trong bảng cho thấy tác động chính và phụ của từng yếu tố là D > B > A; kết quả phân tích phương sai cho thấy hệ số D (thời gian chiết) có ý nghĩa thống kê (P < 0.05) và mức D3 được chọn; yếu tố A (bổ sung nước) và yếu tố B (thời gian chiết) không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). Xét thấy tỷ lệ hút nước của dược liệu trong chế phẩm này tương đối cao (155%), kết hợp với các yếu tố như nhu cầu thực tế sản xuất nên điều kiện chiết tối ưu được chọn là A2B1D3, tức là thêm 10 lần nước, chiết. 3 lần, mỗi lần 1 giờ.