Đi vi mô trong bệnh thận Leptospirosis Ⅱ

4. Phản ứng miễn dịch của vật chủ đối với Leptospira spp.

Con đường chính của Leptospira là xâm nhập trực tiếp vào màng nhầy hoặc da hở qua máu, mô, nước tiểu hoặc nước bị ô nhiễm, lan truyền khắp hệ thống tuần hoàn và phổ biến vào một số cơ quan, chẳng hạn như cơ thể.gan, phổi và ống lượn gần củanephron ở thận, nơi nó có thể nhân lên và tồn tại trong một tháng [51]. Trong giai đoạn đầu của nhiễm trùng,phản ứng miễn dịch bẩm sinhđóng vai trò cơ bản như là tuyến phòng thủ đầu tiên trong bệnh leptospirosis, ảnh hưởng đến phản ứng củathụ thể nhận dạng mẫu, thực bào đại thực bào, cảm ứng ngoại bàotích lũy bạch cầu trung tính, Vàsự can thiệp của hệ thống bổ thể [52].

Cácphản ứng miễn dịchở con người đóng vai trò thiết yếu trongsự phát triển của các dấu hiệu lâm sàng, cũng như các yếu tố độc lực của một số chủng gây bệnh. Hầu hết bệnh leptospirosis ở người đều không có triệu chứng hoặc ở mức độ nhẹ, và chỉ 10% trường hợp phát triển thành dạng nặng với suy đa cơ quan và tăng tỷ lệ tử vong liên quan đến bệnh.cơn bão cytokinevà tình trạng tê liệt miễn dịch. Các loài gây bệnh kích thích phản ứng dịch thể trong giai đoạn nhiễm khuẩn huyết, mặc dù hành vi tiếp theo củaphản ứng miễn dịchKhông rõ ràng. Trong các nghiên cứu trên bệnh nhân có nhiều biểu hiện lâm sàng của bệnh leptospirosis, mức độ nghiêm trọng của bệnh cảnh lâm sàng có liên quan đến nhiều nồng độ cytokine huyết thanh khác nhau, chẳng hạn như TNF-, IL-10 và IL-6 [53], nhưng kết luận này vẫn còn gây tranh cãi [54]. Những tình trạng này đã dẫn đến sự quan tâm ngày càng tăng trong việc tìm hiểu phản ứng miễn dịch nói chung và các sự kiện sinh học xảy ra trong quá trình lây nhiễm.

MẤT BAO LÂU ĐỂ CISTANCHE CÓ HOẠT ĐỘNG?

4.1. Leptospira và hệ thống bổ sung

Hoạt động phân giải protein của protease Leptospiral chống lại ma trận ngoại bào cho phép nhiễm trùng xâm nhập vào dòng tuần hoàn. Hệ thống bổ sung trong hệ tuần hoàn là một trong những cơ chế chính của phản ứng miễn dịch bẩm sinh đối với Leptospira gây bệnh. Tuy nhiên, Leptospira đã phát triển các chiến lược để thoát khỏi sự tấn công của hệ thống bổ sung bằng cách liên kết các protein với các phân tử bổ sung và tạo ra các protease, chẳng hạn như thermolysin, một enzyme metallicoproteinase trung tính chịu nhiệt ảnh hưởng đến chuỗi protein C3. Các chủng gây bệnh liên kết với yếu tố H (FH), protein liên quan đến yếu tố bổ sung H 1 (FHR-1), protein giống yếu tố H 1 (FHL-1) và protein liên kết C4b (C4BP), tất cả trong số đó chịu trách nhiệm ức chế hệ thống bổ thể [55]. Có ba chiến lược chính để lẩn tránh bổ thể của Leptospira gây bệnh [55,56] thông qua sự can thiệp của các chất điều hòa bổ sung của vật chủ, protease của vật chủ và protease của vi khuẩn. Đối với các chất điều hòa bổ sung, Leptospira sử dụng Yếu tố H (FH; chất điều hòa con đường bổ sung thay thế) và protein liên kết C4 (C4BP; chất điều hòa các con đường bổ sung cổ điển và lectin) để đẩy nhanh quá trình phân hủy của các men chuyển đổi C3 và cũng đóng vai trò là đồng yếu tố cho Yếu tố I để phân cắt C3b và C4b [57,58]. Protein leptospiral (LcpA), cùng với vitronectin (Vn; chất điều hòa con đường cuối cùng) liên kết với C9 và ức chế quá trình trùng hợp của nó [59], do đó có khả năng ngăn chặn sự hình thành phức hợp kích hoạt màng (MAC) [60]. Ngoài ra, Leptospira gây bệnh liên kết với một số protease của vật chủ, chẳng hạn như chất kích hoạt plasminogen loại Urokinase (uPA), tạo ra plasmin hoạt động [61] (một protease serine) để tiêu hóa C3b, C4b và C5 trên bề mặt Leptospira [62]. Hơn nữa, metallicoprotease và thermolysin, Leptospira protease nội sinh, có thể phân cắt và làm bất hoạt một số protein bổ sung (C2, C3, C4 và Yếu tố B) [60]. Sự kết hợp của các chất điều hòa bổ thể, từ vật chủ và Leptospira gây bệnh, tạo điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn xâm nhập vào các cơ quan đích của vật chủ [63].

4.2. Leptospira và bạch cầu trung tính

Trong quá trình lây nhiễm, loài Leptospira gây bệnh sẽ kích hoạt mạnh mẽ bạch cầu trung tính và phản ứng viêm. Bạch cầu trung tính rất quan trọng trong việc kiểm soát vi sinh vật, nhưng chúng cũng góp phần gây tổn thương mô ở vật chủ. Người ta đã chứng minh rằng mức độ tích lũy bạch cầu trung tính ngoại bào thấp do hoạt động của bạch cầu trung tính thấp trong tuần hoàn làm tăng bệnh leptospira trong máu, cho thấy rằng sự hình thành nội mạch của việc tuyển dụng bạch cầu trung tính có thể rất quan trọng trong việc ngăn chặn sự lây lan sớm của Leptospira gây bệnh [64].

4.3. Leptospira và đại thực bào

Trong giai đoạn đầu của nhiễm trùng Leptospira, đại thực bào đóng vai trò quan trọng trong việc loại bỏ xoắn khuẩn. Cơ chế tác động này cùng với phản ứng cytokine hiệu quả có liên quan đến việc kiểm soát thực bào và sự lây lan của nhiễm trùng, mặc dù Leptospira spp. đã được chứng minh là có khả năng gây ra apoptosis trong các đại thực bào thông qua con đường Fas/FasL-caspase-8/-3 và tạo điều kiện cho chúng tồn tại và tăng sinh trong vật chủ do giải phóng apoptosis và endnuclease cảm ứng bởi yếu tố ty thể trong các tế bào bị nhiễm bệnh. đại thực bào [65]. Nghiên cứu gần đây đã được tiến hành trên hệ vi phiên mã của đại thực bào bị nhiễm Leptospira để xác định các cơ chế biểu sinh, chẳng hạn như sự điều hòa sau phiên mã của RNA. Các đại thực bào bị nhiễm Leptospira đã chỉ ra rằng microRNA (miRNA) được điều hòa bởi nhiễm trùng xoắn khuẩn, chứng minh rằng quy định này cực kỳ quan trọng trong phản ứng của các tế bào hệ thống miễn dịch này trong nhiễm trùng Leptospira [66]. Trong các đại thực bào ở người, việc kích hoạt tình trạng viêm qua trung gian các loại oxy phản ứng và cathepsin B lysosomal được tạo ra do nhiễm trùng Leptospira có hàm lượng NLRP3 và IL-18 nổi bật, tạo điều kiện thuận lợi cho việc sản xuất IL-1 và dẫn đến mức độ cao khả năng thực bào và mô hình hóa nhanh chóng một số cytokine có liên quan đến khả năng kháng bệnh leptospirosis [67].

4.4. Phản ứng hài hước với Leptospira

Phản ứng dịch thể đặc hiệu chống lại Leptospira được đặc trưng bởi việc sản xuất kháng thể IgM và IgG vào ngày thứ ba kể từ khi khởi phát triệu chứng. Ngoài ra, việc sản xuất IgA đã được báo cáo từ ngày đầu tiên đến tháng thứ chín sau nhiễm trùng; trên thực tế, sự gia tăng IgM đã được sử dụng như một biện pháp thay thế trong chẩn đoán sớm bệnh leptospirosis [68]. Tác động của phản ứng dịch thể ở người mắc bệnh leptospirosis cho phép chẩn đoán huyết thanh học được thực hiện sau khi nhiễm trùng tự nhiên [69]. Khía cạnh quan trọng nhất của phản ứng dịch thể trong nhiễm trùng Leptospira có thể là sự hình thành các kháng thể bảo vệ. Vắc-xin hiện có cho bệnh leptospirosis bao gồm các chế phẩm tế bào hoàn chỉnh và có những hạn chế, chẳng hạn như hiệu quả thấp, nhiều tác dụng phụ, khả năng tạo trí nhớ miễn dịch thấp và thiếu khả năng bảo vệ chéo đối với sự khác biệt giữa các huyết thanh. Vì vậy, việc phát triển các loại vắc xin mới là cần thiết để kiểm soát dịch bệnh và nghiên cứu hiện đang được tiến hành để sản xuất vắc xin từ miễn dịch di truyền [70]. OMP của Leptospira được coi là một kháng nguyên, có khả năng sinh miễn dịch tốt hơn đối với tế bào lympho B, bao gồm các epitop cấu trúc OmpL187- 98, OmpL1173-191, OmpL1297-320, LipL4130-48, LipL{ {9}} và LipL41263-282 [71]. Những epitope này là những ứng cử viên đầy hứa hẹn cho việc phát triển một loại vắc xin phổ quát.

4.5. Phản ứng miễn dịch thích ứng với Leptospira: Tế bào T và Cytokine

Các loài Leptospira gây bệnh gây ra phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào lympho T và B, kèm theo sự biểu hiện của các cytokine có thể liên quan đến biểu đồ trọng lực. Kích hoạt tế bào T trong quá trình nhiễm Leptospira khởi đầu phản ứng viêm, chủ yếu thông qua sản xuất cytokine. Điều này rất quan trọng trong việc loại bỏ sớm nhiễm trùng, nhưng việc sản xuất không kiểm soát được các cytokine gây viêm cũng có thể dẫn đến sản xuất quá mức cytokine, sau đó là tình trạng tê liệt miễn dịch, có thể dẫn đến nhiễm trùng huyết và suy đa cơ quan. Tế bào lympho T tạo ra IL-1, IL-6, IL-12, interferon (IFN)- và TNF-, có chức năng như chất hấp dẫn hóa học để thu hút bạch cầu tại vị trí nhiễm trùng. Điều thú vị là, trong ex vivo, các tế bào δ T ngây thơ tăng sinh trong môi trường nuôi cấy tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) được kích thích bằng kháng nguyên của Leptospira cùng với việc sản xuất cả IL-17 và IFN [72]. Hơn nữa, trong khi những con chuột hoang dã bị nhiễm bệnh leptospirosis thể hiện mức độ cao hơn của nhiều cytokine, bao gồm IL-4, IL-10 và IL-13 so với những con chuột không bị nhiễm bệnh, bệnh mãn tính ở chuột do Leptospira gây ra viêm thận (Daf{16}}/- chuột) cho thấy biểu hiện cao hơn của Actin cơ trơn, IL-10, IL-13, nhưng không có sự khác biệt giữa IL-12 và IL{{21} } cấp độ [73]. Do đó, Daf1 và IL{24}} có thể đóng một vai trò bảo vệ quan trọng trong sự tiến triển của CKD vì mối liên hệ giữa CKD ở chuột do Leptospira gây ra với bệnh xơ thận [72,73]. Tuy nhiên, giả thuyết về phản ứng chọn lọc của cytokine trong quá trình tiến triển của bệnh cho đến nay vẫn chưa có kết luận thuyết phục đối với bệnh leptospirosis ở người. Ở những bệnh nhân mắc bệnh leptospirosis nặng và liên quan đến phổi, nồng độ IL-6, CXCL8 và IL-10 tăng cao khi so sánh với những bệnh nhân mắc bệnh leptospirosis nhẹ [53]. Nồng độ cytokine cao này ở bệnh nhân mắc bệnh leptospirosis làm nổi bật vai trò chính của chúng trong việc phát triển bệnh leptospirosis nặng.

Ở những bệnh nhân bị nhiễm trùng nặng, các tế bào lympho T CD4+ có đặc tính gây viêm và sản xuất IL-2 và IFN- được tìm thấy trong khi CD4+ CD25 sản xuất IL-10 cao hầu như vắng bóng. Sự điều hòa đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào lympho T dường như không ngăn ngừa được tổn thương mô do phản ứng viêm với Leptospira gây ra. Trong tế bào lympho T CD4+ của người mắc bệnh leptospirosis nặng, việc sản xuất TNF- và các cytokine gây viêm khác cao hơn so với những tế bào mắc bệnh ở dạng nhẹ, điều này cho thấy rằng các cytokine này có thể được sử dụng làm dấu hiệu của bệnh. mức độ nghiêm trọng trong giai đoạn miễn dịch của nhiễm trùng [74]. Việc sản xuất IL{12}} có liên quan đến nguy cơ tử vong ở người mắc bệnh leptospirosis; tuy nhiên, một nghiên cứu được thực hiện trên những người bị phơi nhiễm và không có triệu chứng đã liên kết việc sản xuất cytokine này với việc kiểm soát phản ứng viêm và khả năng sống sót [74]. Trong quá trình nhiễm trùng Leptospira, các chất trung gian gây viêm và hoạt động của một số tế bào bạch cầu, chẳng hạn như tế bào lympho T, được điều hòa nhanh chóng ở những người kháng thuốc, trái ngược với những gì xảy ra ở những người mắc bệnh leptospirosis nặng [75].

Tóm lại, phản ứng miễn dịch đối với nhiễm trùng Leptospira chưa được hiểu đầy đủ do hành vi lâm sàng của bệnh nhân mắc bệnh leptospirosis, những người tương tác với các yếu tố độc lực khác nhau của bộ gen vi khuẩn, mang lại cho Leptospira khả năng gây bệnh vững chắc.

5. Biểu hiện lâm sàng

Các biểu hiện lâm sàng của bệnh leptospirosis rất đa dạng, từ các triệu chứng nhẹ, không đặc hiệu, chẳng hạn như các triệu chứng giống cúm (sốt, đau cơ và nhức đầu), đến các triệu chứng nghiêm trọng cùng với tổn thương cơ quan giai đoạn cuối (ví dụ, AKI, suy gan cấp tính). và chảy máu tạng, còn được gọi là hội chứng Weil), ho ra máu cấp tính do xuất huyết phổi, lú lẫn cấp tính do viêm màng não vô khuẩn và suy tim cấp tính do viêm cơ tim cấp tính hoặc bán cấp [7]. Theo đó, ba dấu hiệu nghi ngờ nhiễm leptospirosis bao gồm (i)bệnh sốt cấp tính, (ii) vàng da và (iii)chấn thương thận cấp tính[12]. Các dấu hiệu dự đoán của một dạng bệnh leptospirosis nghiêm trọng là đau cơ nặng lúc khởi phát, xu hướng chảy máu nghiêm trọng và vàng da rõ rệt. Điều thú vị là sự hiện diện của hoặc tồn tại từ trướcbệnh thận mãn tính(kích thước thận nhỏ) hoặc thận to, tắc nghẽn và vô niệu có liên quan đến kết quả tồi tệ nhất [12]. Vì vậy, những bệnh nhân mắc bệnh thận liên quan đến bệnh leptospirosis cần được điều trị kịp thời.

6. Chẩn đoán

6.1. Chẩn đoán lâm sàng

Chẩn đoán bệnh leptospirosis dựa trên tiền sử phơi nhiễm, các yếu tố nguy cơ và biểu hiện lâm sàng. Mức độ nghi ngờ cao có thể tránh được tổn thương nội tạng sau này. Tuy nhiên, các triệu chứng của bệnh leptospirosis thường bị nhầm lẫn với các nguyên nhân khác của hội chứng sốt cấp tính, chẳng hạn như nhiễm sốt xuất huyết, sốt rét, viêm gan và bệnh tự miễn đang hoạt động. Việc thiếu các dấu hiệu bệnh lý của bệnh leptospirosis có nghĩa là chẩn đoán tạm thời dựa trên việc đánh giá sốt và đau cơ ở bệnh nhân từ vùng lưu hành bệnh. Vì lý do này, việc chẩn đoán bệnh leptospirosis trong phòng thí nghiệm là cần thiết.

6.2. Phòng thí nghiệm chẩn đoán

Leptospirosis rất khó chẩn đoán trong phòng thí nghiệm, đặc biệt là trong giai đoạn cấp tính. Nó có thể được thực hiện bằng cách xác định trực tiếp xoắn khuẩn hoặc các thành phần của chúng trong dịch cơ thể hoặc mô, phân lập leptospires trong nuôi cấy hoặc phát hiện các kháng thể đặc biệt trong các giai đoạn lâm sàng khác nhau. Leptospirosis khó phân biệt với các bệnh như sốt rét, sốt xuất huyết, rickettsia, cúm, viêm gan và sốt vàng da vì biểu hiện lâm sàng mơ hồ của nó. Do đó, các xét nghiệm trong phòng thí nghiệm là cần thiết để xác nhận chẩn đoán. Việc phát hiện các kháng thể chống lại leptospires, chính leptospires hoặc axit deoxyribonucleic của chúng là cơ sở cho các xét nghiệm (DNA) này. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm hiện tại bao gồm cả nhận dạng trực tiếp (phát hiện xoắn khuẩn Leptospira hoặc DNA trong mẫu hoặc phân lập sinh vật từ mẫu vật) và phát hiện gián tiếp (chẩn đoán huyết thanh hoặc huyết thanh học để xác định nhiễm trùng Leptospiral, dựa trên việc phát hiện các kháng thể đặc hiệu chống lại nhiều loại khác nhau). Kháng nguyên Leptospiral) (Bảng 1).

6.2.1. Kiểm tra bằng kính hiển vi trực tiếp, nuôi cấy và phát hiện kháng nguyên

Leptospires là các xoắn ốc mỏng, sáng, chuyển động tích cực với tốc độ quay nhanh (chuyển động co giật) đặc trưng dưới kính hiển vi trường tối thông thường (DFM) và cần khoảng 10 leptospires/mL để phát hiện một tế bào trên mỗi trường. Với thời gian lây nhiễm kéo dài thêm một tuần, có khoảng 10% tỷ lệ DFM đã chết (từ 100 đến 90%). Để tăng cường độ nhạy, một số phương pháp nhuộm đặc biệt; Warthin– Nhuộm bạc Starry [76] và nhuộm miễn dịch (hóa mô miễn dịch, miễn dịch huỳnh quang, bắt giữ kháng nguyên từ tính miễn dịch và nhuộm immunoperoxidase [77]) đòi hỏi các kháng thể chính đặc hiệu serovar (ở dạng phân lập hoặc kết hợp).

Bảng 1. Các xét nghiệm trong phòng thí nghiệm để chẩn đoán bệnh leptospirosis.

LAMP, khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp; PCR, phản ứng chuỗi polymerase; NGS, giải trình tự thế hệ tiếp theo; IHA, ngưng kết hồng cầu gián tiếp; ELISA, xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme; IgM, globulin miễn dịch M; MAT, xét nghiệm ngưng kết vĩ mô; MCAT, xét nghiệm ngưng kết vi nang; DNA, axit deoxyribonucleic; DFM, kính hiển vi trường tối

Song song đó, có thể nuôi cấy Leptospira từ máu, nước tiểu, dịch não tủy và mô sinh thiết trong vài ngày đầu đến 10 ngày sau khi xuất hiện các triệu chứng bệnh (giai đoạn bệnh leptospirosis). Vì chúng phát triển chậm (thời gian nhân đôi từ 6–8 giờ), khó mọc và dễ bị nhiễm bẩn nên mẫu nuôi cấy phải được lưu giữ ít nhất 3–4 tháng trước khi loại bỏ vì âm tính) với độ nhạy chỉ 23% nhưng cần thiết. để kiểm tra độ nhạy cảm của thuốc [6]. Như vậy, môi trường EMJH (Ellinghausen–McCullough–Johnson–Harris) (phức hợp albumin oleic) bao gồm albumin huyết thanh bò (phần V), Tween 80, ammonium chloride thiamine, monopotassium phosphate, disodium phosphate, và các chất dinh dưỡng khác nhau [78] là chủ yếu. được sử dụng phổ biến, trong khi môi trường T80/40/LH chuyên dụng hơn (polysorbate 40, lactalbumin hydrolysate, superoxide effutase và huyết thanh thỏ) lại cần thiết cho một số huyết thanh [79]. Để phân lập ban đầu một số lượng lớn và đa dạng các loài leptospires gây bệnh khó tính, Hornsby–Alt–Nally (HAN), dường như là một môi trường tốt [80].

Việc phát hiện kháng nguyên Leptospiral bằng immunoperoxidase, miễn dịch huỳnh quang hoặc hệ thống bắt giữ kháng nguyên miễn dịch từ tính đã được phát triển cho các mẫu có lượng vi khuẩn thấp hoặc kính hiển vi trường tối không thể được sử dụng nhưng không được thực hiện thường xuyên do hạn chế về kháng thể chính [77]. Ngược lại, nhận dạng axit nucleic bằng kỹ thuật khuếch đại DNA mới; Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) (tức là Nested-PCR, PCR định lượng [qPCR]), khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng (LAMP) và giải trình tự thế hệ tiếp theo (NGS) rất có giá trị để chẩn đoán phòng thí nghiệm sớm và chính xác, đặc biệt là với Phân lập Leptospira bằng cách cấy vào môi trường sinh học và lai DNA (đầu dò DNA) [81,82]. Nhiều mục tiêu Leptospiral (chẳng hạn như RNA ribosome 16S) hoặc DNA có thể được khuếch đại để chẩn đoán [83] và PCR thời gian thực (RT-PCR) nhạy hơn và đặc hiệu hơn PCR tiêu chuẩn [84]. Bởi vì một số mồi RT-PCR có thể liên kết với một vị trí không đặc hiệu, dẫn đến kết quả dương tính giả, nên hầu hết các xét nghiệm PCR ghép kênh thời gian thực gần đây đã được phát triển bằng cách sử dụng hai bộ mồi [85]. Nested PCR cũng giúp phát hiện các vị trí DNA cụ thể và nhạy cảm hơn bằng các bộ mồi bổ sung [86,87]. Tuy nhiên, xu hướng chẩn đoán bệnh leptospirosis hiện nay là sử dụng cả kỹ thuật huyết thanh học và phân tử, chẳng hạn như PCR và ELISA (dễ dàng hơn MAT huyết thanh tiêu chuẩn vàng), đối với các quốc gia có nguồn lực hạn chế [88,89]. Ngoài ra, kỹ thuật LAMP [90] để phát hiện gen 16S rRNA (rrs), là một kỹ thuật hiệu quả về mặt chi phí, nhanh chóng và hiệu suất cao để phát hiện các leptospires gây bệnh trong nước tiểu. Hiện tại, NGS là phương pháp độc lập dựa trên nuôi cấy chính xác nhất dựa trên phân tích bộ gen cốt lõi trong dịch cơ thể (máu và nước tiểu) [91] và hướng đi trong tương lai của các xét nghiệm bệnh leptospirosis sẽ là tiến tới phân loại phân tử của leptospires, khắc phục hạn chế của nuôi cấy phân lập leptospires từ các mẫu lâm sàng. Do đó, giá trị của PCR trong chẩn đoán lâm sàng bệnh leptospirosis là đặc biệt tốt và một số kỹ thuật hiện đại đang xuất hiện.

6.2.2. Phát hiện kháng thể chống Leptospira

Một số chẩn đoán huyết thanh học được sử dụng; ví dụ: xét nghiệm kháng thể đặc hiệu cho giống (ngưng kết hồng cầu gián tiếp [IHA], xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme [ELISA], Lepto Dri Dot [ngưng kết latex], ngưng kết vi nang [MCAT]) và xét nghiệm kháng thể đặc hiệu với huyết thanh (xét nghiệm ngưng kết vi mô [ MAT]) [92,93]. Do đó, tiêu chí chẩn đoán của MAT là (i) hiệu giá tăng gấp bốn lần trong huyết thanh cặp đôi (chuyển đổi huyết thanh của nhiễm trùng hiện tại) hoặc (ii) hiệu giá cao duy nhất (Lớn hơn hoặc bằng 1:400 hoặc 1:800, cao hơn trong dịch bệnh) khu vực) (huyết thanh dương tính) (kháng thể có thể tồn tại một thời gian sau khi bị nhiễm trùng hoặc phản ứng chéo với các bệnh khác). Ngoài ra, MAT yêu cầu một bảng điều khiển trực tiếp của tất cả các biến thể huyết thanh Leptospira trong khu vực, với một bảng gồm các biến thể huyết thanh được tiêu chuẩn hóa tại địa phương [93,94] theo Tổ chức Thú y Thế giới (19 kháng nguyên đại diện cho 15 nhóm huyết thanh) [95]. Vì kháng thể có thể được phát hiện sau 5–7 ngày sau nhiễm trùng, xét nghiệm MAT có thể âm tính (hiệu giá < 1:50) trong vài ngày đầu nhiễm bệnh. Chẩn đoán bệnh leptospirosis có thể được thực hiện bằng mẫu nước tiểu [96] sử dụng cả xét nghiệm huyết thanh và phát hiện phân tử (16S rRNA), đặc biệt ở những bệnh nhân mới bị nhiễm trùng (MAT Lớn hơn hoặc bằng 1:800 hoặc ELISA IgM dương tính hoặc cả hai) [97] .

Với nguồn lực hạn chế, điểm dự đoán lâm sàng [98] dựa trên lịch sử lâm sàng có liên quan và các xét nghiệm trong phòng thí nghiệm có liên quan với điểm số theo bảy khía cạnh như sau: hạ huyết áp (3), vàng da (2), đau cơ (2), AKI (1.5) , huyết sắc tố thấp (3), hạ kali máu kèm hạ natri máu (3) và tăng bạch cầu trung tính (1) được đề xuất (điểm tóm tắt ngưỡng là 4 có diện tích dưới đường cong đặc tính vận hành máy thu {{10}}.78 ( CI 95% 0,68–0,89) để chẩn đoán bệnh leptospirosis [77]). Điểm xác suất Thái-Lepto khi nhập viện này có thể là một công cụ chẩn đoán để chẩn đoán sớm bệnh leptospirosis ở những bệnh nhân có nghi ngờ lâm sàng nghiêm trọng về căn bệnh này.