Mối quan hệ giữa huyết thanh Bcl-3, Gal-3, TGF- 1 và xơ hóa kẽ thận ở chuột mắc bệnh thận mãn tính

Trừu tượng:

Mục tiêu: Nghiên cứu mối quan hệ giữa Bcl-3, Gal-3, TGF- 1, Bcl-3 trong huyết thanh do adenine gây ra và thậnxơ hóa kẽ ở chuột mắc bệnh thận mãn tính. Phương pháp Hai mươi con chuột đực cấp độ SPF được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng (n=10) và nhóm người mẫu (nhóm CKD, n=10) và nhóm người mẫu được tiêm adenine bằng ống thông còn nhóm đối chứng được được cho một lượng nước muối bằng nhau bằng ống thông, và những con chuột được xử tử lần lượt vào tuần thứ 3 và thứ 6, và máu được để lại để phát hiện urê nitơ, creatinine và Bcl-3, Gal-3, và Thận những thay đổi bệnh lý đã được quan sát bằng nhuộm HE, mức độ nghiêm trọng của xơ hóa mô kẽ bằng nhuộm Masson và biểu hiện của protein -SMA trong các mô thận bằng nhuộm hóa mô miễn dịch. So với nhóm chứng, nồng độ urê máunitơ,creatinine, Bcl{{0}}, Gal-3 và TGF- 1 cao hơn đáng kể trong nhóm CKD tại mọi thời điểm (P＜0.0 5). Diện tích tương đối của các sợi collagen kẽ trong nhóm CKD cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng (P < 0.05). Phân tích tương quan cho thấy mối tương quan thuận giữa nồng độ Bcl-3, Gal-3, TGF- 1 trong máu và diện tích tương đối của xơ hóa mô kẽ thận (rs=0.776, P < 0,001 ; rs=0.58, P < 0,001; rs=0.52, P=0.001).

Kết luận Nồng độ Bcl-3, Gal-3 và TGF- 1 trong huyết thanh tăng đáng kể ở những con chuột có mô hình CKD do adenine gây ra và có mối tương quan chặt chẽ với mức độ nghiêm trọng củaxơ hóa thận, dự kiến ​​​​sẽ là một dấu ấn sinh học mới để đánh giáxơ hóa thận.

từ khóa:bệnh thận mãn tính; xơ hóa mô kẽ; Bcl-3; Cô gái-3; TGF- 1

Bấm vào đây để biết thêm thông tin về cách điều trị Cistanchebệnh thận mãn tính

bệnh thận mãn tính(CKD) là một vấn đề công cộng toàn cầu và tỷ lệ lưu hành của nó đang gia tăng hàng năm [1].bệnh thận mãn tính(CKD) là một vấn đề công cộng toàn cầu và tỷ lệ lưu hành của nó đang gia tăng hàng năm [1]. Ngược lại, rung thận là bệnh lý chính của bệnh thận mạn tiến triển đến giai đoạn cuối. CKD là một thay đổi bệnh lý lớn và là con đường chung để tất cả các loại CKD tiến triển đến giai đoạn cuối. Mức độ nặng nhẹ của xơ hóa thận liên quan mật thiết đến việc lựa chọn phương pháp điều trị và tiên lượng của bệnh nhân. Do đó, việc đánh giá chính xác mức độ xơ hóa thận là rất quan trọng [2]. Vì vậy, đánh giá chính xác mức độ xơ hóa thận là rất quan trọng [2]. Sinh thiết thận là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán xơ hóa thận và có thể hiểu chính xác và trực quan những thay đổi bệnh lý ở thận và xác định mức độ xơ hóa thận. Tuy nhiên, nó là xâm lấn và có một số hạn chế trong việc thực hiện. B siêu âm, CT, MRI và các phương pháp không xâm lấn khác có thể được sử dụng ở một mức độ nào đó để xác định tình trạng xơ hóa thận. Tuy nhiên, các xét nghiệm này chỉ có thể phản ánh gián tiếp quá trình xơ hóa thận thông qua các biến đổi giải phẫu của thận. Tuy nhiên, các xét nghiệm này chỉ phản ánh gián tiếp tình trạng xơ hóa thận thông qua các biến đổi giải phẫu của thận, khó phát hiện và đánh giá mức độ nặng nhẹ ở giai đoạn sớm [3]. Tuy nhiên, các xét nghiệm này chỉ có thể phản ánh gián tiếp quá trình xơ hóa thận thông qua những thay đổi về mặt giải phẫu của thận nên việc phát hiện sớm và xác định mức độ nghiêm trọng của bệnh gặp nhiều khó khăn [3]. Ngược lại, các dấu ấn sinh học có thể đánh giá hoặc đo lường định lượng cả quá trình sinh học và bệnh lý của bệnh. dấu ấn sinh học có thể đánh giá hoặc định lượng các quá trình sinh học và bệnh lý của bệnh, đồng thời đóng vai trò là mục tiêu điều trị bệnh [4]. Các dấu ấn sinh học có thể đánh giá hoặc định lượng các quá trình sinh học và bệnh lý của bệnh, đồng thời đóng vai trò là mục tiêu điều trị bệnh [4]. Một số dấu ấn sinh học đã được xác định để chẩn đoán xơ hóa thận. Tuy nhiên, không có dấu hiệu được chấp nhận rộng rãi để xác định xơ hóa thận. Do đó, điều quan trọng là khám phá và sàng lọc các dấu ấn sinh học có giá trị.

Bcelllymphoma3 (Bcl-3), Bcl-3 ở chuột và Bcl-3 ở chuột đã được xác định là dấu ấn sinh học quan trọng nhất để chẩn đoán bệnh xơ hóa thận. Bcl-3 (Bcl-3) và Galectin-3 (Gal-3) là những dấu ấn thận tiềm năng đầy hứa hẹn trong những năm gần đây. năm, nhưng giá trị của chúng Tuy nhiên, giá trị của nó cần được nghiên cứu thêm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi nhằm mục đích thiết lập một mô hình chuột mắc bệnh CKD do adenine gây ra và điều tra giá trị của Galectin 3. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thiết lập một mô hình chuột mắc bệnh CKD do adenine gây ra và đo nồng độ Bcl-3, Gal trong huyết thanh -3, yếu tố chuyển gen 1 và các dấu ấn sinh học khác ở chuột. Mục đích của nghiên cứu này là thiết lập một mô hình chuột mắc CKD do adenine gây ra và đo nồng độ huyết thanh của Bcl-3, Gal-3, yếu tố tăng trưởng biến đổi- 1 (TGF{{16 }}) và TGF- 1.

(TGF- 1) và phân tích mối quan hệ của chúng với xơ hóa kẽ thận, để khám phá xem liệu chúng có thể là cơ sở để xác định xơ hóa thận hay không. Các mức TGF- 1, Gal-3 và TGF- 1 đã được phân tích để xác định xem chúng có thể là dấu ấn sinh học mới của bệnh xơ hóa thận hay không.

1 Vật liệu và phương pháp

1.1 Động vật thí nghiệm

Hai mươi con chuột SD đực thuộc loại SPF, trọng lượng cơ thể (200 ± 10) g, 8 tuần tuổi, được mua từ Trung tâm Động vật Thực nghiệm của Đại học Y Tây Nam [SCXK (Chuan) 2018-17]. Những con chuột được nhốt và thu thập trong phòng động vật của Trung tâm Nghiên cứu Y học Tích hợp của Bệnh viện Y học Cổ truyền Trung Quốc trực thuộc Đại học Y Tây Nam [SYXK (Chuan) 2018-065]. Thí nghiệm tuân theo nguyên tắc chăm sóc nhân đạo "3R". Ủy ban đạo đức động vật thí nghiệm của Đại học Y khoa Tây Nam đã phê duyệt nghiên cứu (swmu20220018).

1.2 Dụng cụ và thuốc thử chính

Adenine (Sigma, Mỹ); Gal-3 ELISA kit (Jiangsu Enzyme Free Industry Co., Ltd., Trung Quốc), Rat TGF- 1 ELISA kit (Jiangsu Enzyme Free Industry Co.

Ltd., Trung Quốc), bộ ELISA chuột Bcl-3 (Jiangsu Enzyme Free Industry Co., Ltd., Trung Quốc); Dung dịch nhuộm Masson (Hefei Bomei Biotech Co., Ltd., Trung Quốc); -Kháng thể SMA (Wuhan PhD Bioengineering Co., Ltd., China); máy ly tâm cấp đông tốc độ cao (Eppendorf Co. Ltd.

Ltd., Đức); máy phân tích sinh hóa tự động (Siemens, Đức); kính hiển vi paraffin (Thermo, Mỹ); kính hiển vi ánh sáng (Nikon, Nhật Bản); công cụ tiêu chuẩn hóa enzyme (Rayto, RT-6100).

1.3 Phương pháp thí nghiệm

1.3.1 Phân nhóm thử nghiệm và chuẩn bị mô hình Hai mươi con chuột SD đực cấp SPF được chia ngẫu nhiên thành nhóm đối chứng (n=10) và nhóm mô hình (CKD, n=10) sau 1 tuần cho ăn thích nghi. Adenine được hòa tan trong nước cất để tạo huyền phù 2,5%. 250 mg/(kg-d) huyền phù adenine được cung cấp cho nhóm CKD bằng ống thông thường xuyên từ tuần thứ 1 đến tuần thứ 4 và 125 mg/(kg-d) huyền phù adenine được cung cấp cho nhóm đối chứng từ tuần thứ 5 đến tuần thứ 4. tuần thứ 6; cùng một lượng nước muối được cung cấp cho nhóm đối chứng bằng ống thông và cả hai nhóm đều được cho ăn bằng thức ăn chow bình thường. Tất cả chuột được cho ăn và uống tự do, với thời gian nửa sáng nửa tối, và nhiệt độ phòng là 18 độ -25 độ .

1.3.2 Thu thập bệnh phẩm

Những con chuột bị xử tử lần lượt vào cuối tuần thứ 3 và thứ 6, và máu được lấy từ động mạch chủ bụng; các mô thận được cố định trong dung dịch formalin trung tính 10 phần trăm và được tạo thành các phần parafin, và phần còn lại của mô thận được đông lạnh và bảo quản ở 80 độ Phần còn lại của mô thận được đông lạnh và bảo quản ở 80 độ trong tủ lạnh.

1.3.3 Các chỉ số nitơ urê máu, creatinine, Bcl-3, Gal-3 và TGF- 1

Chức năng thận của chuột được đo bằng máy phân tích sinh hóa hoàn toàn tự động. ELISA xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme đã được sử dụng để xác định Bcl-3, Gal-3 và TGF- 1 trong huyết thanh. Lượng Bcl-3, Gal-3 và TGF- 1 được xác định bằng ELISA. Tất cả các bộ dụng cụ được mua từ Jiangsu Enzyme Free Industrial Co. Tất cả các bộ dụng cụ được mua từ Jiangsu Enzyme Free Industrial Co.

1.3.4 Nhuộm HE mô thận Mô thận cố định được khử nước, nhúng, cắt và tẩy sáp.

Các mô thận cố định đã được khử nước, nhúng, cắt và nhúng sáp vào nước

Bảng 1 So sánh chức năng thận giữa hai nhóm chuột (&x±s)

2.2 So sánh nồng độ Bcl-3, Gal-3 và TGF- 1 huyết thanh giữa hai nhóm So với nhóm đối chứng, Bcl-3, Gal-3 trong máu và mức TGF- 1 trong nhóm CKD cao hơn so với nhóm đối chứng. So với nhóm đối chứng, nồng độ Bcl-3, Gal-3 và TGF{{10}} trong máu cao hơn đáng kể ở nhóm CKD tại mọi thời điểm (P < {{14 }}.05). Mức TGF- 1 cao hơn đáng kể trong nhóm CKD (P <0,05); trong nhóm CKD, mức Bcl-3 3cao hơn đáng kể sau 6 tuần so với 3 tuần ở nhóm CKD (P < 0,05). Xem Hình 1

2.3 Nhuộm HE mô thận ở hai nhóm Không có thay đổi bệnh lý rõ ràng ở mô thận của nhóm chứng tại mỗi thời điểm, trong khi mô thận của nhóm CKD được nhìn thấy tại mỗi thời điểm. Không có thay đổi bệnh lý rõ ràng trong các mô thận của nhóm đối chứng tại mỗi thời điểm, trong khi ở nhóm CKD, thận Các tế bào biểu mô thận ở nhóm CKD cho thấy hoại tử thoái hóa, giãn nở, tăng sinh mô kẽ sợi và thâm nhiễm tế bào viêm. Những thay đổi rõ ràng hơn ở tuần thứ 6 so với tuần thứ 3, xem Hình 2

2.4 Nhuộm Masson mô thận và chỉ số rung kẽ của hai nhóm chuột Khoảng kẽ của chuột nhóm chứng vào cuối tuần thứ 3 và tuần thứ 6 Không quan sát thấy sự lắng đọng sợi collagen rõ ràng trong kẽ của chuột đối chứng vào cuối tuần thứ 3 tuần thứ 3 và thứ 6. Sự gia tăng lắng đọng sợi collagen trong kẽ của chuột CKD vào cuối tuần thứ 6 so với cuối tuần thứ 3 （Diện tích tương đối của sợi collagen kẽ trong nhóm CKD cũng cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng . Diện tích tương đối của các sợi collagen kẽ ở nhóm CKD cũng cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng và cao hơn vào cuối tuần thứ 6 so với cuối tuần thứ 3 (P < {{10} }.05). (P<0,05). Xem Hình 3.

Hình 3 Kết quả nhuộm Masson và điểm diện tích tương đối của các sợi collagen trong mô kẽ thận