trừu tượng

Bối cảnh: Đã có báo cáo rằng sữa ong chúa sẽ làm giảm quá trình tổng hợp hắc tố và ức chế sự biểu hiện của các protein và gen liên quan đến quá trình tạo hắc tố. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá hoạt động chống tạo hắc tố và giảm sắc tố của 10-hydroxy-2-axit decanoic (10-HDA) từ sữa ong chúa Apis mellifera.

Một số nghiên cứu đã gợi ý rằnghột cácó thể giúp ngăn ngừa lão hóa da bằng cáchgiảm stress oxy hóaVàviêm nhiễm, cả hai đều có thể đóng góp vàonếp nhăn, đốm đenvà các dấu hiệu lão hóa khác. Tuy nhiên, không rõ liệuhột cáCó thểlàm sáng dahoặcgiảm sắc tố. Nói tóm lại, trong khi cistanche có thể có một số tác dụng có lợi cho da, thì vẫn chưa rõ liệu nó có thể được sử dụng như một phương thuốc đáng tin cậy hay không.Làm trắng dađại lý. Tốt nhất bạn nên tham khảo ý kiến ​​bác sĩ da liễu để được tư vấn về các cách chăm sóc da an toàn và hiệu quả.

Bấm vào Cistanche Tubulosa để làm trắng

Để biết thêm thông tin:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

phương pháp:Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá hoạt động làm trắng da của {{0}}}HDA so với những thay đổi trong hoạt động tyrosinase nội bào, hàm lượng melanin và mức độ protein liên quan đến sản xuất melanin trong tế bào khối u ác tính B16F1 sau khi điều trị bằng {{4 }}HDA. Hơn nữa, hiệu quả làm trắng da được đánh giá bằng cách thoa sản phẩm kem chứa 0,5 phần trăm , 1 phần trăm và 2 phần trăm 10-HDA lên da chuột (C57BL/6 J) trong 3 tuần để quan sát tác dụng của DL *-giá trị.

Kết quả:Kết quả cho thấy rằng 10-HDA đã ức chế biểu hiện protein MITF (IC50 0.86 mM) trong các tế bào u ác tính B16F1. Phân tích Western blot cho thấy rằng 10-HDA đã ức chế hoạt động của tyrosinase và sự biểu hiện của protein liên quan đến tyrosinase 1 (TRP-1), TRP-2 và yếu tố phiên mã liên quan đến microphthalmia (MITF) trong các tế bào khối u ác tính B16F1. Ngoài ra, 10-HDA được áp dụng trên da chuột cho thấy chỉ số làm trắng da trung bình (giá trị L) tăng lên đáng kể.

kết luận:Dữ liệu xác thực cho thấy tiềm năng của 10-HDA để sử dụng trong việc ngăn chặn sắc tố da. 10-HDA được đề xuất như một ứng cử viên để ức chế sự hình thành hắc tố, do đó nó có thể được phát triển như một sản phẩm mỹ phẩm chăm sóc da.

từ khóa:Sữa ong chúa, 10-hydroxy-2-axit decanoic, quá trình tạo hắc tố, làm trắng da, ức chế quá trình tạo hắc tố

Lý lịch

Sữa ong chúa (RJ) là chất tiết của ong thợ non (Apis mellifera) được sản xuất bởi tuyến dưới hầu và tuyến hàm dưới, con ong chúa đang phát triển được cho ăn loại sữa ong chúa này suốt đời [1]. RJ cung cấp giá trị dinh dưỡng cao nhờ lượng protein, axit amin tự do, chất béo, vitamin và đường dồi dào [2, 3]. Các protein hoạt tính sinh học của RJ là các protein chính của sữa ong chúa (MRJPs), apisimin và hoàng thảo, đã cho thấy tác dụng điều hòa miễn dịch và kháng khuẩn trong một số nghiên cứu [4–6]. 10-hydroxy-2- axit decanoic (10-HDA) là axit béo chính trong RJ có một số tác dụng có lợi cho sức khỏe con người, đã chứng minh các hoạt động chống khối u, kháng khuẩn và điều hòa miễn dịch [7 –9]. 10-HDA chỉ được tìm thấy trong RJ nên nó đã được sử dụng làm chất đánh dấu chất lượng của các sản phẩm sữa ong chúa [10, 11]. Một số hoạt động dược lý của RJ đã được xác nhận bằng các thí nghiệm trên động vật và các hoạt động dược lý bao gồm chống oxy hóa [12, 13], chống viêm [14], chống khối u [15, 16], chống agenesis [17], kháng khuẩn [18–20], giãn mạch [21, 22], tăng huyết áp [21, 22], chống tăng cholesterol máu [23], bảo vệ thận [24] và tác dụng làm trắng da [25]. Dựa trên giá trị dinh dưỡng và lợi ích của nó đối với sức khỏe con người, ngày càng có nhiều sản phẩm RJ thương mại có sẵn trên thị trường.

Màu da của động vật và con người có liên quan đến hàm lượng sắc tố melanin trong da. Vai trò của melanin là bảo vệ da chống lại tác hại của tia UV, nhưng sự tích tụ quá nhiều melanin gây ra các rối loạn da nghiêm trọng như đổi màu, tăng sắc tố và lão hóa da nhanh [26]. Melanin được tổng hợp trong các tế bào hắc tố nằm ở lớp trong cùng của biểu bì thông qua cơ chế tạo hắc tố [27]. Sự hình thành hắc tố là một con đường sinh tổng hợp phức tạp được kiểm soát bởi tyrosinase, các protein liên quan đến tyrosinase 1 và 2 (TRP-1 và TRP-2) và yếu tố phiên mã liên quan đến microphthalmia (MITF) [28, 29]. Tyrosinase là một loại enzyme giới hạn tỷ lệ để kiểm soát quá trình tổng hợp melanin. Bước đầu tiên của quá trình sản xuất melanin là quá trình hydroxyl hóa L-tyrosine thành L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) và chuyển đổi L-DOPA thành dopaquinone [30]. TRP-2 xúc tác quá trình sản xuất axit 5,6- dihydroxy indole-carboxylic được chuyển đổi từ dopachrom và sản phẩm của axit TRP-2, 5,6- dihydroxy indole carboxylic dưới dạng chất nền cho TRP-1 được chuyển đổi thành indole-5,6-quinone carboxylic acid, cuối cùng dẫn đến sự tổng hợp melanin [31, 32]. Ức chế tổng hợp melanin thông qua quá trình tạo hắc tố bị gián đoạn sẽ là cách chính để ngăn ngừa hoặc cải thiện các rối loạn tăng sắc tố, chẳng hạn như nám và đồi mồi. Do đó, việc tìm kiếm một hợp chất tiềm năng, an toàn và hiệu quả để điều chỉnh giảm các yếu tố đó trong quá trình hình thành hắc tố sẽ rất đáng chú ý trong ngành y tế và mỹ phẩm [25, 33, 34].

Sữa ong chúa đã được chứng minh là có thể làm giảm tổng hợp melanin [22], nhưng hợp chất hoạt động chính hoặc cơ chế làm cơ sở cho các hoạt động này của RJ vẫn chưa được biết. Trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi, chúng tôi đã phát hiện ra rằng 10-HDA có thể ức chế hoạt động của tyrosinase (dữ liệu chưa được công bố). Trong nghiên cứu này, tác dụng ức chế tyrosinase của 10-HDA đã được đánh giá thêm. Các mô hình sinh tổng hợp hắc tố trong ống nghiệm bằng cách sử dụng nuôi cấy tế bào khối u ác tính B16F10 và mô hình động vật của chuột với ứng dụng trên da đều được thực hiện để nghiên cứu tác dụng ức chế tổng hợp hắc tố của 10-HDA.

phương pháp

Điều chế 10-HDA từ sữa ong chúa

Sữa ong chúa được chuẩn bị bởi Fu-Chang Beekeeper ở Hualien, Đài Loan. Ấu trùng 3-ngày tuổi được chuyển vào các cốc chứa tế bào chúa trên khung và mỗi khung chứa 30 cốc chúa. Các khung được chuyển vào tổ ong và RJ được thu thập sau 72 giờ sau khi chuyển ấu trùng. Mỗi tổ chứa khoảng 25,000 ong mật [35]. Các mẫu RJ đã thu thập được giữ ở −20 độ cho đến khi phân tích thêm. Sữa ong chúa (40 g) được hồi lưu bằng metanol (400 mL × 4 × 30 phút), và phần nổi phía trên được thu hoạch bằng cách ly tâm ở 4500 xg trong 30 phút. Cô phần nổi phía trên dưới áp suất giảm để thu được dịch chiết thô (10,76 g) có tên là RJM. RJM huyền phù trong metanol được tinh chế bằng sắc ký cột silica gel (SiO2 CC) và sau đó rửa giải bằng chloroform và metanol gradient (300:1 đến 1:1) để thu được mười phần được phân tích bằng TLC. Phân số 4 và 5 hiển thị các điểm quan trọng, và do đó chúng được tinh chế và phân tích thêm. Phần 4 và 5 được tinh chế nhiều lần bằng SiO2 CC (rửa giải bằng chloroform/metanol, tỷ lệ 300:1 đến 1:1) và tiếp tục được kết tinh bằng axeton để thu được 10-hydroxy-2-axit decanoic ({{32} } HDA). Cấu trúc hóa học của sản phẩm tinh khiết được xác nhận bằng phân tích phổ khối NMR và GC. 10-Phân tích định lượng HDA được xác định bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với hệ thống bơm Waters 1525 được trang bị máy dò Water 2489, cột RP-8 GP250 (4,6 mm) và cột Waters Bộ lấy mẫu tự động 717plus. Pha động là dung dịch metanol (60:40 v/v với nước siêu tinh khiết và nước khử ion) được điều chỉnh bằng axit photphoric đến pH 2,5, lọc qua màng (0,45 μm) và khử khí trong 5 phút. Tốc độ dòng pha động được điều chỉnh thành 1,0 mL/phút và quá trình phát hiện được thực hiện ở bước sóng 225 nm. Hàm lượng 10HDA trong mẫu tinh khiết cuối cùng là 90 phần trăm , được sử dụng để phân tích thêm.

Nuôi cấy tế bào và 10-phương pháp điều trị HDA

Các tế bào khối u ác tính B16F10 (số BCRC: 60.031) được nuôi cấy trong môi trường Eagle đã được sửa đổi (DMEM) của Dulbecco được bổ sung 10 phần trăm (v/v) huyết thanh bào thai bò ở 37 độ trong tủ ấm được làm ẩm, kiểm soát CO2-(5 phần trăm ) . Các tế bào được cấy với mật độ tế bào thích hợp trong giếng 24-hoặc đĩa giếng 6-. Sau 1 ngày ủ, các tế bào được xử lý với các nồng độ khác nhau của 10-HDA. Phương tiện đã được sử dụng trong nhóm kiểm soát thay vì 10-HDA. Sau đó, các tế bào được thu hoạch và sử dụng cho các thử nghiệm khác nhau.

Đo khả năng sống của tế bào

Khả năng sống của tế bào được đo bằng xét nghiệm {{0}}(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5 -diphenyltetrazolium bromide (MTT) theo phương pháp được báo cáo bởi Carmichael et al. [36]. Các tế bào khối u ác tính B16F10 được nuôi cấy trong DMEM chứa 10% FBS và 1% L-glutamine (4 mM) trong tủ ấm 5% CO2 ở 37 độ . Các tế bào nuôi cấy (1 × 104 tế bào/giếng) được cấy vào đĩa giếng 96-, 10-HDA (hòa tan trong dimethyl sulfoxide (DMSO)) được pha loãng bởi môi trường ở nồng độ 1, 0,5, 0,1 mM và axit kojic 1 mM đã được thêm vào giếng. Phương tiện đã được sử dụng làm trống. Sau 24-giờ ủ ở 37 độ dưới 5 phần trăm CO2, môi trường được lấy ra khỏi từng giếng, sau đó các giếng được rửa bằng PBS (dung dịch muối đệm phốt phát 1 M) hai lần. 200 ul dung dịch MTT (2 mg/ml) được thêm vào mỗi giếng. Phản ứng kết thúc bằng cách thêm 100 μL DMSO sau 4-h ủ. Độ hấp thụ của mỗi giếng được đo ở bước sóng 540 nm bằng máy đọc xét nghiệm miễn dịch (BIO-TEK, Winooski, VT) [20–23]. Khả năng tồn tại của tế bào được xác định theo phương trình sau: Khả năng tồn tại của tế bào ( phần trăm )=[(AB)/ C] × 100 phần trăm , A: thể tích hấp thụ mẫu, B: thể tích hấp thụ mẫu trắng, C: thể tích hấp thụ kiểm soát.

Đo hàm lượng melanin trong tế bào

Hàm lượng melanin nội bào của các tế bào u ác tính B16F10 được đo bằng phương pháp sửa đổi được mô tả bởi Bilodeau và cộng sự, [37]. Vào cuối quá trình nuôi cấy tế bào khối u ác tính B16F10, các tế bào được thu hoạch và rửa bằng PBS. Các tế bào thu hoạch được ly giải trong dung dịch đệm ly giải lạnh (20 mM natri photphat (pH 6,8), 1% Triton X-100, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 1 mM axit Ethylenediaminetetraacetic (EDTA)). Sau khi ly tâm ở 15,000×g trong 30 phút, các viên này được hòa tan trong NaOH 1 N chứa 20 phần trăm DMSO trong 1 giờ ở 60 độ . Hàm lượng protein trong phần nổi phía trên được xác định bằng cách sử dụng xét nghiệm Bradford. Độ hấp thụ ở bước sóng 405 nm được đo và hàm lượng melanin được tính theo tiêu chuẩn đã biết của melanin tổng hợp. Mức độ hắc tố ( phần trăm )=[(AB)/ C] × 100 phần trăm ; A: thể tích độ hấp thụ của mẫu; B: thể tích mẫu trắng hấp thụ; C: kiểm soát khối lượng hấp thụ.

Đo lường hoạt động tyrosinase của tế bào

Thử nghiệm hoạt tính tyrosinase được thực hiện theo phương pháp được mô tả trước đây bởi Martinez-Esparza và cộng sự, [38], với một chút sửa đổi. Các tế bào u ác tính B16F10 được ly giải trong 20 mM natri photphat (pH 6,8), 1% Triton X-100 và 1 mM phenylmethane sulfonyl fluoride hoặc PMSF, rồi ly tâm ở tốc độ 14,000 vòng/phút trong 15 phút. Hàm lượng protein của từng chất nổi trên bề mặt được xác định bằng cách sử dụng xét nghiệm Bradford với Albumin huyết thanh bò (BSA) làm tiêu chuẩn protein. Hoạt tính tyrosinase được xác định trong hỗn hợp phản ứng (1 mL) chứa dung dịch đệm phốt phát 50 mM (pH 6,8), DOPA 2 mM L và 300 protein nổi phía trên xấu. Sau khi ủ ở 37 độ trong 15 phút, độ hấp thụ ở bước sóng 475nm được đo bằng đầu đọc vi bản. Hoạt tính tyrosinase ( phần trăm )=[(AB)/ C] × 100 phần trăm ; A: thể tích độ hấp thụ của mẫu; B: thể tích mẫu trắng hấp thụ; C: kiểm soát khối lượng hấp thụ.

phân tích Western blot

Các tế bào được rửa 3 lần trong PBS lạnh băng và được ly giải trong dung dịch đệm RIPA (pH 7,4, 50 mM tris, 0,1 phần trăm SDS, 50 mM NaCl, 1 phần trăm NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/mL aprotinin và 10 ug/mL leupeptin). Một lượng dịch ly giải được sử dụng để xác định hàm lượng protein bằng phương pháp xét nghiệm Bradford sử dụng albumin huyết thanh bò làm chất chuẩn. Các protein (40 ug) được phân tách trên điện di gel polyacrylamide 10% SDS và được làm mờ trên màng hybond-C Extra nitrocellulose (Amersham Bioscience, UK). Các màng này được khóa bằng sữa không béo 5% trong dung dịch muối đệm Tris (TBS) chứa 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 và 150 mM NaCl trong 30 phút. MITF, tyrosinase, dopachrom tautomerase 2 (TRP-2), TRP-1 và -actin (dưới dạng kiểm soát nội bộ) lần lượt được phát hiện bằng cách sử dụng kháng thể đa dòng của thỏ. Các màng này được tiếp tục ủ với kháng thể thứ cấp đa dòng của dê với IgG-H&L (HRP) của thỏ. Sau đó, tất cả các kháng thể liên kết được phát hiện bằng cách sử dụng Chất nền phát quang hóa học Super Signal® West Pico (ECL) (Thermo Science). Cường độ tín hiệu của từng dải được định lượng bằng hệ thống đo mật độ Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal mui xe II (Bio-Rad) được trang bị bộ tích hợp và được chuẩn hóa với điều khiển bên trong.

Xác định hoạt động khử sắc tố ở chuột

Hoạt động khử sắc tố đã được thử nghiệm thông qua hệ thống mô hình chuột bằng giao thức đã sửa đổi của Tai et al. [39]. Nghiên cứu đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức của Đại học Quốc gia Formosa (số phê duyệt: 10,401). Chuột đen cái 5 tuần tuổi (C57BL/6 J), nặng từ 20 đến 25 g, được mua từ Trung tâm Phòng thí nghiệm Động vật Quốc gia, Đài Bắc. Xuyên suốt tất cả các thí nghiệm, động vật được nhốt trong phòng máy lạnh với nhiệt độ không đổi (25 độ ± 2 độ) và được duy trì trong chu kỳ 12 giờ sáng: tối. Các con vật được thích nghi trong 7 ngày trước khi thí nghiệm. Sau khi cạo lông, các con vật được 1-nghỉ ngơi trong ngày. Các mẫu gel chứa 10-HDA đã được chuẩn bị bằng cách phân tán thuốc trong Vaseline. Tổng cộng có bốn mươi con chuột được chia đều thành năm nhóm và mỗi nhóm được bôi hai lần mỗi ngày với 0,1 g Vaseline (đối chứng), 1% axit kojic trong Vaseline, 0,5% , 1% hoặc 2% 10-HDA trong Vaseline . Các ứng dụng tiếp tục trong 3 tuần và chỉ số làm trắng da (giá trị L) được đo trên cùng một vùng da mỗi ngày bằng DermaLab® Combo (Công nghệ Cotex, Đan Mạch), là một công cụ đo màu sử dụng màu trắng cường độ cao. LED làm nguồn sáng. Thiết bị so màu được kết nối với máy tính [40]. Chúng tôi chỉ xem xét tham số L và giá trị L là độ sáng tương đối, từ màu đen toàn phần (L=0) đến màu trắng toàn phần (L=100). Chỉ số làm trắng da ban đầu L-value được thử nghiệm trên da của từng con chuột trước khi được bôi các chất thử nghiệm.

Phân tích thống kê

Tất cả các kết quả trong nghiên cứu này được phân tích bằng quy trình mô hình tuyến tính chung có sẵn từ gói phần mềm Hệ thống phân tích thống kê phiên bản 9.1 (Viện hệ thống phân tích thống kê, 2002). Thử nghiệm đa phạm vi của Duncan [41] được sử dụng để phát hiện sự khác biệt giữa các phương pháp điều trị. Mỗi thí nghiệm được tiến hành trong ba lần.

Kết quả

Ảnh hưởng của 10-HDA đối với khả năng tồn tại của tế bào khối u ác tính B16F1

Liều tối ưu từ xét nghiệm khả năng sống của tế bào bằng MTT trong các tế bào u ác tính B16F1 được trình bày trong Hình 1. Nó cho thấy rõ ràng rằng 10-HDA không gây độc tế bào đối với các tế bào u ác tính B16F1 ở nồng độ 0.1, { {8}}.5 và 1 mM, đồng thời axit kojic không gây độc tế bào đối với các tế bào khối u ác tính ở nồng độ 1 mM. Khả năng tồn tại của tế bào giảm đáng kể (giảm 20 phần trăm) trong các tế bào khối u ác tính tiếp xúc với 1,5 mM 10-HDA (P < 0.05) (dữ liệu không được hiển thị) và 5 mM axit kojic. Do đó, các nồng độ 0,1, 0,5, 1 mM của 10-HDA và 1 mM axit kojic đã được áp dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

Ức chế hoạt động tyrosinase và tổng hợp hắc tố trong các tế bào khối u ác tính B16F10 bởi 10-HDA

Axit Kojic là một chất chống tạo hắc tố hiệu quả và nổi tiếng và đã được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực trong nghiên cứu này. 10-HDA đáng kể (p < 0.05) ức chế quá trình tổng hợp hắc tố và hoạt động tyrosinase so với việc kiểm soát các tế bào u ác tính B16F1 không được điều trị. Ở liều 1 mM, 10- HDA làm giảm 28 ± 2,4% hoạt tính tyrosinase của tế bào (P < 0.01) và 40.4 ± 3 .0 giảm phần trăm tổng hợp hắc tố trong tế bào (P < 0,001), trong khi axit kojic (1 mM) cũng làm giảm đáng kể hoạt động tyrosinase và tổng hợp hắc tố lần lượt là 14,4 ± 3,7 phần trăm (P < 0,05) và 19,3 ± 1,5 phần trăm (P < 0,001), tương ứng (Hình 2 và 3).

Ức chế biểu hiện protein tyrosinase, TRP-1 và TRP-2 trong các tế bào khối u ác tính B16F10 bằng 10-HDA

Để điều tra xem 10-HDA có thể ảnh hưởng đến sự biểu hiện protein tạo hắc tố hay không, phân tích phương pháp làm mờ vết rạn da phương Tây được thực hiện bằng cách sử dụng dịch ly giải tế bào u ác tính B16F10 được xử lý bằng 10-HDA (Hình 4). 10-HDA ức chế đáng kể các biểu thức tyrosinase, TRP-1 và TRP-2 trong các tế bào u ác tính B16F1 so với các biểu hiện của các tế bào không được điều trị (Hình 4b–d). -actin, một loại protein vệ sinh được sử dụng như một biện pháp kiểm soát nội bộ, không cho thấy sự thay đổi nào. 10-HDA đã ức chế mức độ biểu hiện protein của các enzym tạo hắc tố tương tự như axit kojic.

Tác dụng ức chế của 10-HDA đối với mức protein liên quan đến các yếu tố tạo hắc tố trong tế bào B16F10

Trong quá trình tạo hắc tố ở tế bào động vật có vú, MITF đóng vai trò điều hòa chính trong quá trình tổng hợp con đường TRP, bao gồm TYR, TRP{{0}} và TRP-2 [25, 26]. Ảnh hưởng của 10-HDA đối với biểu thức MITF được đánh giá bằng phương pháp Western blot. Các tế bào u ác tính B16F1{{10}} đã tiếp xúc với các nồng độ khác nhau của 10- HDA (0,1, 0,5 và 1 mM), dẫn đến sự điều chỉnh giảm biểu hiện MITF bởi 10-HAD ( Hình 4e). Giá trị IC50 để 10-khử HDA của biểu thức MITF được ước tính là 0.86 mM. Các kết quả hiện tại cho thấy rằng mức protein MITF bị giảm bởi 10-HDA. Hiệu ứng giảm sắc tố của 10-HDA có thể là kết quả của việc giảm biểu hiện gen MITF, sau đó sẽ ức chế biểu hiện protein và gen của tyrosinase, TRP-1 và TRP-2.

Đánh giá hoạt động giảm sắc tố của 10-HDA in vivo qua chuột

Để suy đoán liều dùng cho người, chúng tôi đã sử dụng chuột làm mô hình động vật để điều tra hoạt động khử sắc tố của {{0}}HDA. Sau khi cạo lông, chuột được điều trị bằng 1% axit kojic trong Vaseline, 0.5% , 1% hoặc 2% 10-HDA trong Vaseline và chỉ số làm sáng da được đo và ghi lại. Đối với nghiên cứu in vivo này, chúng tôi đã sử dụng axit kojic như một biện pháp kiểm soát tích cực. Axit Kojic được sử dụng rộng rãi như một tác nhân trị liệu làm mất sắc tố da trên khắp thế giới. Sau tuần điều trị đầu tiên, mức độ làm trắng da tăng lên đáng kể ở những con chuột được điều trị bằng 10- HDA, so với đối chứng và sự gia tăng này tiếp tục cho đến khi kết thúc thí nghiệm. Hoạt động làm mất sắc tố của 0.5, 1 và 2 phần trăm 10-HDA tương đương với hoạt động của 1 phần trăm axit kojic. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng 10-HDA có thể thúc đẩy đáng kể quá trình làm trắng da trên da chuột ở nồng độ thấp nhất là 0,5 phần trăm (Hình 5). Do đó, 10-HDA dường như là một ứng cử viên sáng giá với vai trò là chất làm trắng da để điều trị chứng tăng sắc tố da.

Cuộc thảo luận

Quá trình tổng hợp hắc tố được kiểm soát bởi chuỗi enzyme phức tạp của tyrosinase, TRP1 và TRP2. Mức độ ức chế gen và protein liên quan đến quá trình tạo hắc tố đóng vai trò quan trọng đối với hiệu quả của chất làm giảm sắc tố, thường được sử dụng trong điều trị chứng tăng sắc tố da hoặc các sản phẩm mỹ phẩm [28]. Để làm sáng tỏ tác dụng ức chế thực sự của 10-HDA đối với quá trình tạo hắc tố, hàm lượng hắc tố và hoạt tính tyrosinase nội bào của các tế bào B16F10 đã được thử nghiệm ở cùng một khoảng nồng độ. Các kết quả trong hình. 2 và 3 chỉ ra rằng 10-HDA thể hiện hoạt tính ức chế quá trình tổng hợp hắc tố trong tế bào B16F10 cao hơn so với axit kojic. Dữ liệu tiết lộ rằng 10- HDA ngăn chặn quá trình tạo hắc tố trong các tế bào ung thư hắc tố B16F10.

Sự hình thành hắc tố bị chi phối ít nhất bởi ba loại protein điều hòa, tyrosinase, TRP1 và TRP2 trong các tế bào hắc tố của động vật có vú [29]. Các biểu hiện của TRP-1, TRP-2 và MITF đều bị ức chế trong các tế bào u ác tính B16F10, được xử lý bằng 10-HDA. MITF là một yếu tố phiên mã chính để điều chỉnh sự biểu hiện của các enzym tạo hắc tố, chẳng hạn như tyrosinase, TRP-1 và TRP-2 [42, 43]. Theo dữ liệu Western blot của chúng tôi (Hình 4), các tế bào động vật có vú được xử lý bằng 10-HDA sẽ làm giảm biểu hiện của tất cả các enzym giới hạn tốc độ, bao gồm tyrosinase, TRP-1 và TRP-2 và ngăn chặn sự tích tụ bất thường của hắc tố trong quá trình tạo hắc tố. Những dữ liệu này gợi ý rằng 10- HDA có thể ức chế quá trình tạo hắc tố bằng cách ức chế biểu hiện MITF. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chứng minh rằng 10-HDA ức chế quá trình tạo hắc tố bằng cách điều chỉnh quá mức protein MITF, tyrosinase và quá trình sản xuất hắc tố. Con đường ức chế của 10-HDA trên biểu hiện MITF khác với các chất ức chế quá trình tạo hắc tố khác, chẳng hạn như axit kojic, arbutin và axit ascorbic, không ảnh hưởng đến biểu hiện MITF [44, 45]. Điều này cho thấy rằng 10-HDA có tiềm năng tuyệt vời để sử dụng như một chất làm trắng da tự nhiên và an toàn cho mỹ phẩm chức năng [46].

Khối u ác tính, một loại ung thư da phát sinh từ sự chuyển đổi ác tính của các tế bào hắc tố. Các khối u ác tính phát sinh ở da, bề mặt niêm mạc và da bị tổn thương mãn tính do ánh nắng mặt trời là do kích hoạt quá mức BRAF và NRAS [47], mất locus CDKN2A [48], biểu hiện quá mức MITF [49], Kit kích hoạt quá mức [50 ], kích hoạt quá mức mGluR1 [51, 52]…et al. Trong nghiên cứu này, 10-HDA có thể ức chế sự biểu hiện MITF trong các tế bào khối u ác tính B16F10. Điều này cho thấy rằng 10-HDA có tiềm năng trở thành thành phần cho thuốc ngoài da hoặc thuốc chống ung thư đối với khối u ác tính.

RJ đã được sử dụng cho nhiều chế phẩm da liễu bao gồm làm mới da, tái tạo da, trẻ hóa, chữa lành vết bỏng hoặc chữa lành vết thương [53, 54]. Hơn nữa, đã có báo cáo rằng một số axit béo không bão hòa trong RJ có thể ức chế quá trình tổng hợp melanin và hoạt động của tyrosinase, dẫn đến sự điều hòa giảm quá trình hình thành hắc tố [55], và chúng tôi đã chứng minh rằng hiệu ứng giảm sắc tố của RJ có thể là kết quả của sự hiện diện của {{3 }}HDA. Do da chuột tương tự như da người nên chúng tôi đã sử dụng chuột làm mô hình động vật in vivo để kiểm tra hoạt động khử sắc tố của 10-HAD. Như được hiển thị trong Hình 5, chỉ số làm trắng da của màu da tăng đáng kể ở những con chuột được điều trị bằng 10-HAD, so với đối chứng. Ngoài ra, Koya-Miyata et al. đã đánh giá hoạt động thúc đẩy sản xuất collagen của 10-HDA trong các dòng tế bào nguyên bào sợi tạo ra yếu tố tăng trưởng chuyển dạng- 1 (TGF- 1), đây là yếu tố quan trọng để sản xuất collagen [55] . Do đó, 10-HDA dường như là một hợp chất tự nhiên rất hứa hẹn để tái tạo da và điều trị chứng tăng sắc tố da.

Phần kết luận

10-HDA không chỉ ức chế hoạt động tyrosinase mà còn ức chế các biểu hiện enzyme tạo hắc tố, bao gồm tyrosinase, TRP-1 và TRP-2, bằng cách ức chế MITF trong các tế bào u ác tính B16F10. Do đó, sắc tố melanin bị giảm trong các tế bào ung thư hắc tố B16F10. Hơn nữa, mô hình động vật in vivo cho thấy hoạt động khử sắc tố của 10-HDA trong ứng dụng tại chỗ. Những kết quả này gợi ý rằng 10-HDA có một ứng cử viên có thể là chất ức chế quá trình tạo hắc tố tự nhiên và an toàn cho ngành mỹ phẩm, trong đó việc tìm kiếm một hợp chất tự nhiên và hiệu quả là một trong những mục tiêu rất quan trọng để phát triển một sản phẩm chăm sóc da tốt hơn .

Các từ viết tắt

10-HDA: 10-hydroxy-2-axit decanoic; BSA: Albumin huyết thanh bò; DMEM: Môi trường Eagle sửa đổi của Dulbecco; DMSO: Dimetyl sulfoxit; EDTA: Axit ethylenediaminetetraacetic; L-DOPA: L-3,4- dihydroxyphenylalanine; MITF: yếu tố phiên mã liên quan đến microphthalmia; MRJP: protein sữa ong chúa chính; MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromua; PBS: dung dịch muối đệm phốt phát; PMSF: phenylmethane sulfonyl florua hoặc phenylmetylsulfonyl florua; TLC: sắc ký lớp mỏng; TRP-1: protein liên quan đến tyrosinase 1; TRP- 2: protein liên quan đến tyrosinase 2

Sự nhìn nhận

Chúng tôi cảm ơn cô Li-Yu Lee của Fu-Chang Beekeeper đã chuẩn bị sữa ong chúa

Kinh phí

Công trình này được hỗ trợ bởi một khoản trợ cấp từ Bộ Khoa học và Công nghệ, Đài Loan, ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 đến CC Bành).

Sự sẵn có của dữ liệu và tài liệu

Tất cả dữ liệu được tạo hoặc phân tích trong quá trình nghiên cứu này được bao gồm trong bài báo đã xuất bản này và các tệp thông tin bổ sung của nó.

Tác giả đóng góp

ĐCSTQ đã hình thành và thiết kế các thí nghiệm. HZS và IPL đã thực hiện các thí nghiệm. ĐCSTQ và PCK đã phân tích dữ liệu. Thuốc thử/vật liệu/công cụ phân tích do CCP, PCK và JCL đóng góp. ĐCSTQ và IPL đã viết và sửa đổi bài báo. Tất cả các tác giả đã phê duyệt phiên bản cuối cùng của bản thảo.

Thông tin tác giả

ĐCSTQ, Tiến sĩ Công nghệ Sinh học, phó giáo sư tại Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Formosa. HZS, Thạc sĩ Công nghệ Sinh học, tốt nghiệp Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Formosa. IPL, Tiến sĩ Công nghệ Sinh học, Trưởng phòng Nghiên cứu và Phát triển, Công ty TNHH Challenge Bioproducts. PCK, Tiến sĩ hóa học, phó giáo sư tại Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Formosa. JCL, Tổng Giám đốc tại Honey Bee Town Co., Ltd.

Phê duyệt đạo đức

Tất cả các thí nghiệm trên động vật đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức của Đại học Quốc gia Formosa (Số phê duyệt: 10.401) và tuân thủ Hướng dẫn về Chăm sóc và Sử dụng Động vật trong Phòng thí nghiệm.

Đồng ý xuất bản

Không áp dụng trong phần này. Bài viết này không phải là một nghiên cứu lâm sàng liên quan đến người tham gia và bản thảo này không chứa bất kỳ dữ liệu lâm sàng cá nhân nào.

Lợi ích cạnh tranh

Nhiều tác giả tuyên bố rằng họ không có hứng thú với việc cạnh tranh

Ghi chú của nhà xuất bản

Springer Nature vẫn giữ thái độ trung lập về các tuyên bố về quyền tài phán trong các bản đồ đã xuất bản và các tổ chức liên kết.

chi tiết tác giả

1 Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Formosa, Hồ Vĩ, Vân Lâm, Đài Loan. 2 Phòng Nghiên cứu và Phát triển, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Đài Loan. 3 Công ty TNHH Honey Bee Town, Số77-2 Hoa Tây, 970 Thành phố Hoa Liên, Đài Loan.

Nhận: ngày 9 tháng 3 năm 2017 Chấp nhận: ngày 21 tháng 7 năm 2017

Xuất bản trực tuyến: 09 tháng 8 năm 2017

Người giới thiệu

1. Chen C, Chen S. Những thay đổi về thành phần protein và tính ổn định khi bảo quản của Sữa ong chúa trong các điều kiện khác nhau. Hóa chất thực phẩm 1995;54:195–200.

2. Takenaka T. Thành phần hóa học của sữa ong chúa. Khoa học ong mật. 1982;3:69–74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. Một họ các protein sữa ong chúa chính của ong mật Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998;54:1020–30.

4. Okamoto I, Taniguchi Y, Kunikita T, Kohno K, Iwaki K, Ikeda M. Protein sữa ong chúa chính 3 điều chỉnh các phản ứng miễn dịch trong ống nghiệm và trong cơ thể sống. Khoa học đời sống 2003;1:2029–45.

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. Một loại protein kháng khuẩn mạnh trong sữa ong chúa. Hóa chất sinh học J. 1990;265:11333–7.

6. Bilikova J, Hanes J, Nordhoff E, Saenger W, Klaudiny J, Simuth J. Apisimin, một peptide giàu serine-valine mới từ sữa ong chúa (Apis Mellifera L.): tinh chế và đặc tính phân tử. Thư tháng 2. 2002;528:125–9.

7. Townsend GF, Brown WH, Felauer EE, Hazlett B. Các nghiên cứu về hoạt tính chống khối u trong ống nghiệm của các axit béo. IV. Các este của axit có liên quan chặt chẽ với 10- hydroxy-2-axit decanoic từ sữa ong chúa chống lại bệnh bạch cầu ở chuột có thể cấy ghép. Can J Biochem Physiol. 1961;39:1765–70.

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Hydroxy-2Δ-decanoic acid, một loại kháng sinh có trong sữa ong chúa. Khoa học. 1959;130:452–3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. Các axit béo được phân lập từ sữa ong chúa điều chỉnh phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào đuôi gai trong ống nghiệm. Int Immunopharmacol. 2007;7:1211–20.

10. Thợ dệt N, Luật JH. Tính không đồng nhất của axit béo từ sữa ong chúa. Thiên nhiên. 1960;188:938–9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. Đánh giá (E)-10-axit enoic hydroxit như một thông số về độ tươi của sữa ong chúa. Hóa chất thực phẩm 2003;80:85–9.

12. Takeshi N, Reiji I. Chuẩn bị và các tính chất chức năng của chiết xuất nước và chiết xuất kiềm của sữa ong chúa. Hóa chất thực phẩm 2004;84:181–6.

13. Takeshi N, Mizuho S, Rriji I, Hachiro I, Nobutaka S. Các hoạt động chống oxy hóa của một số loại mật ong thương mại, sữa ong chúa và keo ong. Hóa chất thực phẩm 2001;75: 237–40.

14. Martos MV, Navajas YR, López JF. Thuộc tính chức năng của mật ong, keo ong và sữa ong chúa. Khoa học thực phẩm J. 2008;73:117–24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. Các sản phẩm từ ong ngăn chặn sự hình thành mạch do VEGF gây ra trong các tế bào nội mô tĩnh mạch rốn của con người. BMC bổ sung thay thế Med. 2009;9:1–10.

16. Tamura T, Fujii A, Kuboyama N. Tác dụng chống khối u của sữa ong chúa (RJ). Nippon Yakurigaku Zasshi. 1987;89:73–80.

17. Park HM, Cho MH, Cho Y, Kim SY. Sữa ong chúa làm tăng sản xuất collagen ở da chuột sau khi cắt bỏ buồng trứng. Thực phẩm J Med. 2012;15:568–75. doi:10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Các sản phẩm của Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. Bee ngăn chặn sự hình thành mạch do VEGF gây ra trong các tế bào nội mô tĩnh mạch rốn của con người. BMC bổ sung thay thế Med. 2009;6:489–94.

19. Tseng JM, Huang JR, Huang HC, Tzen JTC, Chou WM, Peng CC. Tạo điều kiện thuận lợi cho việc sản xuất peptide kháng khuẩn-Royalisin và kháng thể của nó thông qua hệ thống cơ thể dầu nhân tạo. Chương trình công nghệ sinh học 2011;27:153–61.

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. Mối quan hệ về cấu trúc và hoạt động kháng khuẩn của hoàng hóa, một peptide kháng khuẩn từ sữa ong chúa của Apis Mellifera. peptit. 2015;68:190–6.

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. Nghiên cứu về chất giống insulin và chất ức chế men chuyển angiotensin trong sữa ong chúa. Mitsubachi Kagaku. 1998;19:9–14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. Các nghiên cứu sinh hóa về yếu tố giãn mạch trong sữa ong chúa. Yakugaku Zasshi. 1978;98:139–45. 23. Vittek J. Tác dụng của sữa ong chúa đối với lipid huyết thanh ở động vật thí nghiệm và người bị xơ vữa động mạch. Kinh nghiệm. 1995;51:927–35.

24. Ibrahim A, Eldaim MA, Abdel-Daim MM. Tác dụng bảo vệ thận của mật ong và sữa ong chúa đối với độc tính cisplatin cận mãn tính ở chuột. công nghệ tế bào học. 2016;68:1039–48.

25. Han SM, Yeo JH, Cho YH, Pak SC. Sữa ong chúa làm giảm tổng hợp Melanin thông qua điều chỉnh giảm biểu hiện Tyrosinase. Là J Chin Med. 2011; 39:1253–60.

26. Gilchrest BA, Eller MS. DNA photodamage kích thích sự hình thành hắc tố và các phản ứng bảo vệ ánh sáng khác. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999;4:35–40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. Con đường truyền tín hiệu trong Melanogenesis. Int J Mol Khoa học. 2016;17:1144. doi:10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, Listening VJ. Điều chế biểu hiện protein melanogen trong quá trình chuyển đổi từ EU sang pheomelanogenesis. Khoa học tế bào J. 1995;108:2301–9.

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. Điều chỉnh giảm tyrosinase, TRP-1, TRP-2 và MITF biểu hiện bằng bánh ép cam quýt trong khối u ác tính B16 F10 ở chuột. Châu Á Pac J Trop Biomed. 2013;3: 617–22.

30. Land EJ, Ito S, Wakamatsu K, Riley PA. Hằng số tốc độ cho hai bước hóa học đầu tiên của eumelanogenesis. Tế bào sắc tố Res. 2003;16:487–93.

31. Yen FL, Wang MC, Liang CJ, Ko HH, Lee CW. (Các) chất ức chế tạo hắc tố từ chiết xuất Phyla nodiflora. Thuốc bổ sung thay thế dựa trên Evid 2012; ID: 867494. doi 10.1155/2012/867494.

32. Tachibana M. MITF: dòng chảy cho tế bào sắc tố. Tế bào sắc tố Res. 2000;3:230–40.

33. Jung SO, Kim DH, Son JH, Nam KC, Ahn DU, Jo CR. Đặc tính chức năng của phosvitin lòng đỏ trứng như một chất ức chế sự hình thành hắc tố. Hóa chất thực phẩm 2012;135: 993–8.

34. Yeon HK, Youn OJ, Cho CW, Son DW, Park SJ, Rho JH, Sang YC. Tác dụng ức chế của axit Cinnamic đối với quá trình sinh tổng hợp melanin trong da. Dược phẩm sinh học Bull. 2008;31:946–8.

35. Liu JR, Yang YC, Shi LS, Peng CC. Đặc tính chống oxy hóa của sữa ong chúa liên quan đến tuổi ấu trùng và thời điểm thu hoạch. Hóa chất thực phẩm nông nghiệp J. 2007;56: 11447–52.

36. Carmichael J, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB. Đánh giá xét nghiệm đo màu bán tự động dựa trên tetrazolium: đánh giá xét nghiệm độ nhạy hóa học. Ung thư Res. 1987;47:936–42.

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 kích thích biểu hiện gen tyrosinase và quá trình tạo hắc tố trong các tế bào hắc tố đã biệt hóa. Tế bào sắc tố Res. 2001;14:328–36.

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. Cơ chế ức chế quá trình tạo hắc tố bằng yếu tố hoại tử khối u-alpha trong các tế bào u ác tính của chuột B16/F10. Hóa chất Eur J. 1998;255:139–46.

39. Ding HY, Chang TS, Shen HC, Tai SK. Các chất ức chế tyrosinase ở chuột từ Cynanchum Bungei và đánh giá hoạt động giảm sắc tố in vitro và in vivo. Exp Da liễu. 2011;20:720–4.

40. Takiwaki H, Serup J. Đo các thông số màu sắc của các mảng vảy nến bằng phép đo quang phổ phản xạ dải hẹp và phép đo màu ba kích thích. Dược phẩm da. 1994;7:145–50.

41. Montgomery DC. Thí nghiệm với một yếu tố duy nhất: Phân tích phương sai. Trong Thiết kế và Phân tích Thí nghiệm. Montgomery, DC, Eds., John Wiley và các con trai, New York, 1991; 75–77.

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM. MITF làm trung gian biểu hiện protein kinase Cb do cAMP gây ra trong tế bào hắc tố ở người. Biochem J. 2006;395:571–8.

43. Goding CR. Mitf từ mào thần kinh đến khối u ác tính: truyền tín hiệu và phiên mã trong dòng tế bào hắc tố. Nhà phát triển gen 2000;14:1712–28.

44. Kim DS, Park SH, Kwon SB, Li K, Youn SW, Park KC. (-)-Epigallocatechin-3- gallate và hinokitiol làm giảm quá trình tổng hợp hắc tố thông qua việc giảm sản xuất MITF. Arch Pharm Res. 2004;27:334–9.

45. Choi YK, RhoYK, Yoo KH, Lim YY, Li K, Kim BJ. Tác dụng của vitamin C so với vitamin tổng hợp đối với quá trình tạo hắc tố: Nghiên cứu so sánh in vitro và in vivo. Thực tập sinh J Dermatol. 2011;49:218–26.

46. ​​Dynek JN, Chan SM, Liu J, Zha J, Fairbrother WJ, Vucic D. Yếu tố phiên mã liên quan đến Microphthalmia là một chất điều hòa phiên mã quan trọng của chất ức chế khối u ác tính của quá trình chết theo chương trình ở khối u ác tính. Ung thư Res. 2008;68:3124–32.

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC. Tập hợp khác biệt của sự thay đổi di truyền trong khối u ác tính. N Engl J Med. 2005;353(20):2135–47.

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. Germline xuất huyết xóa locus CDKN2A–CDKN2B ở một bệnh nhân mắc hội chứng Li–Fraumeni. y học bộ gen npj. 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML, Czyz M. MITF trong khối u ác tính: cơ chế đằng sau biểu hiện và hoạt động của nó. Tế bào Mol Cuộc sống Khoa học. 2015;72:1249–60. doi:10.1007/s00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francone TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. Đột biến L576P KIT ở khối u ác tính ở hậu môn tương quan với biểu hiện protein KIT và nhạy cảm với sự ức chế kinase cụ thể. Ung thư Int J. 2007;121:257–64.

51. Abdel-Daim M, Funasaka Y, Komoto M, Nakagawa Y, Yanagita E, et al. Dược động học của phân nhóm thụ thể glutamate metabotropic 1 và sự hình thành khối u ác tính in vivo. J Dermatol. 2010;37:635–46.

52. Ohtani Y, Harada T, Funasaka Y, Nakao K, Takahara C, et al. Phân nhóm thụ thể metabotropic glutamate-1 rất cần thiết cho sự phát triển in vivo của khối u ác tính. gen gây ung thư. 2008;27:7162–70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. Sữa ong chúa giúp tăng cường sự di chuyển của các nguyên bào sợi ở da người và làm thay đổi mức cholesterol và sphinganine trong mô hình chữa lành vết thương trong ống nghiệm. Thực hành Nutr Res. 2010;4:362–8.

54. Fujii A, Kobayashi S, Kuboyama N, Furukawa Y, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto H, Tamura T. Tăng cường chữa lành vết thương bằng sữa ong chúa (RJ) ở chuột mắc bệnh tiểu đường do streptozotocin. Jpn J Dược phẩm. 1990;53:331–7.

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. Xác định yếu tố thúc đẩy sản xuất collagen từ chiết xuất sữa ong chúa và cơ chế có thể có của nó. Công nghệ sinh học Biosci Biochem. 2004;68:767–73.

Để biết thêm thông tin: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501