Cảm ứng miễn dịch được đào tạo ngoại vi trong tuyến tụy kích hoạt hoạt động chống khối u để kiểm soát sự tiến triển của ung thư tuyến tụy Phần 1

Bất chấp sự thành công đáng kể của liệu pháp miễn dịch trong nhiều loại ung thư, ung thư biểu mô tuyến tụy vẫn chưa được hưởng lợi. Các tế bào miễn dịch bẩm sinh rất quan trọng đối với giám sát miễn dịch chống khối u và các nghiên cứu gần đây đã tiết lộ rằng những quần thể này sở hữu một dạng trí nhớ, được gọi là khả năng miễn dịch bẩm sinh được đào tạo, xảy ra thông qua quá trình tái lập trình phiên mã, biểu sinh và chuyển hóa.

Ở đây, chúng tôi chứng minh rằng hạt có nguồn gốc từ nấm men -glucan, một chất kích thích khả năng miễn dịch đã được huấn luyện, vận chuyển đến tuyến tụy, gây ra một dòng bạch cầu đơn nhân/đại thực bào phụ thuộc CCR2-đến tuyến tụy để biểu hiện các đặc điểm của khả năng miễn dịch đã được huấn luyện. Các tế bào này có thể được kích hoạt khi tiếp xúc với các tế bào khối u và các yếu tố có nguồn gốc từ khối u, đồng thời cho thấy khả năng gây độc tế bào tăng cường đối với các tế bào khối u tuyến tụy. Trong các mô hình chỉnh hình của ung thư biểu mô tuyến tụy, những con chuột được điều trị bằng -glucan cho thấy gánh nặng khối u giảm đáng kể và kéo dài thời gian sống sót, điều này còn được tăng cường hơn nữa khi kết hợp với liệu pháp miễn dịch. Những phát hiện này đặc trưng cho các cơ chế năng động và nội địa hóa của khả năng miễn dịch được đào tạo ngoại vi và xác định một ứng dụng của khả năng miễn dịch được đào tạo đối với bệnh ung thư.

Khả năng miễn dịch có nhiều chức năng, chẳng hạn như loại bỏ các tế bào cũ và bị hư hỏng: Hệ thống miễn dịch cũng có thể loại bỏ các tế bào cũ và bị hư hại, bao gồm cả các tế bào khối u, để bảo vệ cơ thể khỏi bệnh tật. Nó cũng có thể duy trì sự cân bằng cơ thể: hệ thống miễn dịch cũng có thể cân bằng môi trường bên trong cơ thể, duy trì sự cân bằng giữa các tế bào miễn dịch và tránh sự xuất hiện của các bệnh như phản ứng thái quá hoặc suy giảm miễn dịch, vì vậy khả năng miễn dịch rất quan trọng đối với cơ thể con người.

Đồng thời, chúng tôi thấy rằng Cistanche Deserticola cũng có thể cải thiện khả năng miễn dịch. Cistanche rất giàu nhiều loại hoạt chất sinh học, chẳng hạn như polysacarit, flavonoid, sterol, v.v. Những thành phần này có thể kích thích hoạt động của các tế bào miễn dịch trong cơ thể, tăng cường khả năng miễn dịch tế bào và miễn dịch dịch thể, đồng thời ức chế sự phát triển và sinh sản của vi rút và vi rút. vi khuẩn. Nâng cao sức đề kháng và khả năng miễn dịch của cơ thể. Ngoài ra, Cistanche còn có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm và an thần, có thể giúp giảm mệt mỏi về thể chất và loại bỏ căng thẳng để tăng cường khả năng miễn dịch.

Nhấn vào đây để biết chất bổ sung cistanche Deserticola

Chẩn đoán ung thư biểu mô tuyến tụy (PDAC) là một chẩn đoán tàn khốc, chỉ có 10 phần trăm bệnh nhân sống sót sau 5 năm qua1. Mặc dù tỷ lệ sống sót kể từ năm 2014 đã tăng từ 6 lên 10 phần trăm, ung thư tuyến tụy vẫn là vật liệu chịu lửa đối với phần lớn các phương pháp điều trị hiện có.

Ngoài ra, khi nhân khẩu học của Hoa Kỳ thay đổi, người ta dự đoán rằng ung thư tuyến tụy sẽ trở thành nguyên nhân hàng đầu thứ hai gây tử vong liên quan đến ung thư vào năm 2030 và do đó đưa ra một thách thức đáng kể trong tương lai cho các bác sĩ lâm sàng2. Ung thư tuyến tụy đặc biệt nguy hiểm vì ở giai đoạn đầu hiếm khi có triệu chứng lâm sàng, dẫn đến 75–80% bệnh nhân được chẩn đoán là bệnh tiến triển nặng, không thể cắt bỏ3,4. Ngay cả ở những bệnh nhân đủ điều kiện để cắt bỏ, tỷ lệ sống 5-năm chỉ là 20–25 phần trăm 4. Hơn nữa, ung thư tuyến tụy ít đáp ứng với các liệu pháp miễn dịch vốn đã cho thấy hiệu quả rõ rệt ở các khối u rắn khác5–9. Các thử nghiệm lâm sàng Giai đoạn I và II sử dụng các chất ức chế CTLA-4 và PD-1 đơn lẻ và kết hợp được coi là không hiệu quả trong điều trị PDAC, điều này có thể được giải thích là do bản chất không sinh miễn dịch của PDAC10– 12.

Một thách thức lớn đối với việc áp dụng thành công liệu pháp miễn dịch trong PDAC là vượt qua môi trường vi mô khối u tuyến tụy ức chế miễn dịch (TME). PDAC được đặc trưng bởi một chất nền giải mô tạo khối u dày đặc, sự phong phú của các tập hợp tế bào ức chế miễn dịch trong chất nền này, chẳng hạn như các đại thực bào liên quan đến khối u (TAM), các tế bào T điều tiết (T-reg) và các tế bào ức chế có nguồn gốc từ myeloid (MDSCs) , sự thiếu hụt các tế bào miễn dịch chống khối u được kích hoạt và tình trạng tăng sinh mạch dẫn đến môi trường vi mô thiếu oxy13–16. Những điều kiện này kết hợp với nhau khiến cho việc cung cấp hiệu quả các liệu pháp miễn dịch đến tuyến tụy và để các liệu pháp này kích hoạt thành công các phản ứng miễn dịch chống khối u nếu chúng đến đó là một thách thức đặc biệt. Do đó, các phương pháp trị liệu mới là rất cần thiết, không chỉ nhắm mục tiêu cụ thể vào tuyến tụy mà còn có thể xâm nhập vào lớp mô giải mô dày đặc và có khả năng kích hoạt các phản ứng miễn dịch chống khối u mạnh mẽ mặc dù TME ức chế miễn dịch.

Khả năng miễn dịch bẩm sinh được đào tạo là một chương trình cổ xưa về mặt tiến hóa của trí nhớ miễn dịch gần đây đã được nghiên cứu khoa học chuyên sâu. Các tế bào miễn dịch bẩm sinh được đào tạo đã được chứng minh là trải qua quá trình tái lập trình phiên mã, biểu sinh và chuyển hóa khi tiếp xúc với các kích thích ban đầu cụ thể và khi các tế bào miễn dịch bẩm sinh này tiếp xúc lại với một kích thích khác loại thứ cấp, chúng được "huấn luyện" để phản ứng nhanh hơn với kích thích đó. biểu hiện trong phản ứng viêm tăng cường17–19. Nhiều chất sinh học có thể tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo bao gồm vắc-xin Bacillus Calmette-Guérin (BCG) và hợp chất tự nhiên -glucan. Mặc dù hầu hết các nghiên cứu về khả năng miễn dịch được đào tạo tập trung vào mầm bệnh như vi khuẩn và vi rút như một tác nhân kích thích thứ cấp, các nghiên cứu mới cho thấy các tế bào khối u cũng có thể kích hoạt lại các tế bào miễn dịch được đào tạo. Tất cả các nghiên cứu cho đến nay đều sử dụng các mô hình ung thư dưới da, do đó, người ta không biết liệu sự hiện diện của các tế bào miễn dịch bẩm sinh đã được đào tạo có thể tạo ra tác dụng chống khối u đối với các khối u trong các cơ quan rắn, chẳng hạn như ung thư tuyến tụy20,21 hay không.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi bất ngờ phát hiện ra rằng các hạt -glucan được tiêm trong màng bụng (IP) được tiêm vào tuyến tụy chiếm tỷ lệ lớn. Việc vận chuyển trực tiếp -glucan đến tuyến tụy làm nổi bật một con đường chưa được kiểm chứng trước đây để tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo ngoại vi. Ngoài ra, chúng tôi đã thử nghiệm giả thuyết rằng việc buôn bán này có thể dẫn đến việc tạo ra khả năng miễn dịch chống khối u chống lại ung thư tuyến tụy. Do sự thất bại của phần lớn các phương pháp trị liệu và liệu pháp miễn dịch đơn thuần và kết hợp để điều trị PDAC và khó khăn trong việc nhắm mục tiêu các phương pháp trị liệu này vào tuyến tụy, những phát hiện của chúng tôi mang đến một bước đột phá tiềm năng trong việc không chỉ nhắm mục tiêu trực tiếp vào tuyến tụy mà còn trong việc tuyển dụng thuốc chống khối u, các tế bào miễn dịch bẩm sinh đối với PDAC TME lạnh miễn dịch.

Kết quả

Các hạt có nguồn gốc từ nấm men -glucan được ưu tiên vận chuyển đến tuyến tụy.

Đã có tài liệu rõ ràng rằng việc sử dụng -glucans từ vi khuẩn và nấm làm tăng số lượng và tần số của các tế bào tiền thân tạo máu và các tế bào tiền thân đa tiềm năng thiên về dòng tủy, mà cuối cùng có chức năng như một bước quan trọng trong việc tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo trung ương và ngoại biên22 . Tuy nhiên, nó vẫn chưa được chứng minh chính xác nơi mà -glucan vận chuyển sau khi dùng để có những hiệu ứng này.

Trong các nghiên cứu này, toàn bộ các hạt -Glucan (WGP) có nguồn gốc từ Saccharomyces cerevisiae đã được sử dụng, đó là các tế bào nấm men rỗng có kích thước 2–4 micron được làm từ (1,3) -glucan đậm đặc. Đặc tính chi tiết của WGP -glucan được mô tả trong một trong những nghiên cứu khác của chúng tôi. Không giống như các dạng -glucan khác được sử dụng trong quá trình miễn dịch đã được huấn luyện, công thức này độc đáo ở chỗ nó ở dạng hạt và yêu cầu quá trình thực bào tích cực để phát huy tác dụng của nó. Để đánh giá việc buôn bán hạt -glucan này, WGP đã được gắn thẻ (5-(4,6- Dichlorotriazinyl) Aminofluorescein) (DTAF) và tiêm IP vào chuột hoang dã (WT) C57BL/6. Ba ngày sau khi sử dụng IP (3-day WGP), phổi, lá lách, hạch bạch huyết bẹn và mạc treo, tế bào khoang phúc mạc và tuyến tụy đã được thu hoạch, rửa bằng PBS lạnh băng để rửa sạch DTAFWGP khỏi phúc mạc có thể đã được dính vào bề mặt của cơ quan và sự hiện diện của DTAF-WGP trong mỗi cơ quan được đánh giá bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Mặc dù có một số vụ buôn bán DTAF-WGP đến lá lách, hạch bạch huyết mạc treo và DTAF-WGP còn sót lại trong khoang phúc mạc, tuyến tụy cho thấy sự hiện diện nổi bật và bất ngờ của DTAF-WGP (Hình 1a).

Để đánh giá thêm việc buôn bán này và để đảm bảo rằng nhãn DTAF không liên quan đến cơ chế buôn bán, WGP đã được dán nhãn phóng xạ bằng 89Zr và tiêm IP (Hình 1b) hoặc được ủ với các đại thực bào phúc mạc sau đó được tiêm IP (Hình 1c). Chuột lần đầu tiên được chụp ảnh bằng chụp PET/CT 48 giờ sau khi tiêm và các vòng tròn màu xanh lá cây được sử dụng để biểu thị sự tích lũy ưu tiên quan sát được của 89Zr-WGP trong tuyến tụy. Sau đó, một cuộc khám nghiệm tử thi đã được thực hiện và dấu hiệu phóng xạ của từng cơ quan được đo. Bằng dữ liệu tế bào học dòng chảy, 89Zr-WGP đã được vận chuyển với số lượng lớn đến tuyến tụy và được tìm thấy ở mức độ thấp hơn trong hệ thống lá lách, gan và ruột. Các đại thực bào phúc mạc được nuôi cấy bằng 89Zr-WGP và sau đó được tiêm IP có hoạt động buôn bán tương tự mặc dù đa dạng hơn một chút so với 89Zr-WGP thuần túy và cũng được tích lũy nhiều nhất trong tuyến tụy (Hình 1d). Việc buôn bán các đại thực bào phúc mạc được nạp WGP đến tuyến tụy cho thấy rằng cả WGP trần trụi cũng như các đại thực bào có WGP bị thực bào đều hiển thị tính ái tính đối với tuyến tụy.

Để đánh giá vai trò của thụ thể đã biết của WGP trong việc buôn bán WGP, những con chuột thiếu thụ thể lectin loại C, Dectin-1, (Dectin-1−/− chuột) đã được tiêm IP với DTAF-WGP. So với chuột WT, chuột Dectin-1−/− cho thấy lượng WGP được vận chuyển đến tuyến tụy giảm gấp 5 lần, được đánh giá bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (Hình 1d). 89ZrWGP cũng đã đưa IP vào chuột WT và chuột Dectin-1−/−. So với động vật WT, việc buôn bán 89Zr-WGP đến tuyến tụy của Dectin-1−/− chuột (Hình 1e) ít hơn đáng kể. Để đảm bảo rằng quy trình này là -glucan cụ thể, một hạt huỳnh quang 3 μm dựa trên polystyrene, có cùng kích thước với hạt WGP, đã được tiêm IP và không được tìm thấy tích tụ trong tuyến tụy (Hình bổ sung. 1a). Cùng với nhau, những dữ liệu này làm nổi bật một xu hướng phụ thuộc dectin-1 chưa được xác định trước đó trong đó -glucan vận chuyển đến tuyến tụy.

Hình 1 Vận chuyển -glucan dạng hạt đến tuyến tụy theo cách thức phụ thuộc-1-dectin. một DTAF-WGP đã được tiêm IP và 3 ngày sau các mô khác nhau (n=3) đã được thu hoạch và đánh giá sự hiện diện của DTAF-WGP bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Biểu đồ chấm đại diện và dữ liệu tóm tắt được hiển thị. *p=0.032, **p=0.0057, ****p < 0,0001. b WGP được dán nhãn 89Zr-WGP hoặc c đại thực bào phúc mạc được ủ với 89Zr-WGP và rửa sạch, sau đó tiêm IP. Hình ảnh PET/CT hiển thị việc buôn bán 89Zr-WGP sau 48 giờ. Các cơ quan được đánh giá riêng lẻ về độ phóng xạ sau khi mổ tử thi bằng máy đếm gamma. Trong c, ý nghĩa được báo cáo so với tuyến tụy (n=3). **** p < 0,0001. d Dectin-1−/− chuột hoặc chuột WT được tiêm DTAF-WGP và sự tích lũy DTAF-WGP trong tuyến tụy được đánh giá bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (WT PBS n=3, WT WGP n {{ 27}}, KO cộng PBS n=3, KO cộng WGP n=4). e Dectin-1−/− chuột hoặc chuột WT (n=4) đã được tiêm 89Zr-WGP và 48 giờ sau, PET/CT được sử dụng để đánh giá số lượng trong tuyến tụy. Tín hiệu được định lượng bằng cách báo cáo phần trăm liều được tiêm (phần trăm ID) trong tuyến tụy. *p=0.046. ANOVA một chiều với nhiều phép so sánh của Tukey đã được sử dụng trong a–d và bài kiểm tra t của học sinh hai đuôi, không ghép đôi đã được sử dụng trong e. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± SEM. ns không đáng kể; Mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập duy nhất được lặp lại ít nhất hai lần để xác minh kết quả.

-Glucan vận chuyển đến tuyến tụy kích thích một dòng tế bào miễn dịch bẩm sinh thể hiện kiểu hình của khả năng miễn dịch được đào tạo.

Sau khi phát hiện ra rằng -glucan hiển thị hướng hướng về tuyến tụy, người ta cũng quan sát thấy rằng cảnh quan miễn dịch của tuyến tụy đã bị thay đổi đáng kể sau khi điều trị bằng WGP. Sự xuất hiện của WGP đến tuyến tụy đi kèm với một dòng CD11b khác biệt cộng với các tế bào tủy đến tuyến tụy vào ngày thứ 3, một số trong đó đã thực bào WGP (Hình 2a).

Phát hiện này đã khiến chúng tôi kiểm tra xem các quần thể miễn dịch tổng thể của tuyến tụy bị ảnh hưởng như thế nào sau khi điều trị bằng IP WGP. Vì trước đây người ta đã quan sát thấy rằng những thay đổi miễn dịch liên quan đến khả năng miễn dịch được đào tạo trong BM rõ rệt nhất 1-tuần sau khi tiếp xúc với -glucan22, hồ sơ miễn dịch của tuyến tụy đã được kiểm tra ở những con chuột được điều trị bằng vi hạt polystyrene 3 μm hoặc WGP 7 ngày sau khi dùng. Đầu tiên, người ta quan sát thấy rằng có sự gia tăng khoảng 7 lần về tổng số tuyệt đối của CD45 cộng với các tế bào miễn dịch trong tuyến tụy sau khi điều trị bằng WGP (Hình 2b). Việc kiểm soát vi hạt polystyrene 3 μm không có tác dụng như vậy (Hình bổ sung. 1b), cho thấy dòng tế bào miễn dịch này là đặc hiệu của WGP. Ngoài ra, có sự gia tăng quan sát thấy về tỷ lệ CD45 cộng với các tế bào miễn dịch (Hình bổ sung. 1c).

Để phân loại thêm loại tế bào nào chịu trách nhiệm cho sự mở rộng quần thể miễn dịch cộng với CD45 này, số lượng tuyệt đối (Hình 2b) và phần trăm tương đối (Hình bổ sung 1c) của các tế bào dòng tủy (CD11b cộng với ), tế bào T (CD3 cộng với ) , tế bào B (CD19 plus ) và tế bào NK (NK1.1 plus ) đã được đánh giá. Những thay đổi tích lũy trong tuyến tụy được thể hiện bằng các biểu đồ hình tròn chứng minh rằng sự mở rộng của khoang tủy chịu trách nhiệm cho sự giảm tương đối về tỷ lệ phần trăm của các quần thể tế bào khác và sự gia tăng tổng thể của CD45 cộng với dân số sau khi điều trị bằng WGP (Hình 2c) . Tiếp theo, chúng tôi đã điều tra xem liệu dòng CD11b cộng với các tế bào miễn dịch này có phải là tạm thời hay không, vì vậy tỷ lệ phần trăm của tổng số tế bào cộng với CD45 và CD11b cộng với tế bào trong tuyến tụy sau khi tiêm IP được đo ở 7,10, 18 và 30 ngày.

Hình. {{0}}glucan kích thích một dòng tế bào tủy được đào tạo vào tuyến tụy. một Phần trăm CD45 cộng với CD11b cộng với DTAF cộng với các tế bào trong tuyến tụy 3 ngày sau khi chuột WT nhận được IP DTAF-WGP. b Bảy ngày sau khi tiêm PBS hoặc WGP, số lượng tuyệt đối của CD45 cộng (n=15), CD11b cộng (n=18), CD3 cộng (n {{1{{30} }}}), các ô CD19 plus (n=10) và NK1.1 plus (n=14) được hiển thị. ****p < 0.0001. c Biểu đồ hình tròn thể hiện sự thay đổi tần số của các quần thể tế bào miễn dịch chính sau khi điều trị bằng WGP. chuột d WT được tiêm PBS (n=5) hoặc WGP (n=5) và phần trăm tế bào CD45 plus và CD45 plus CD11b plus được đo vào 7, 10, 18 và 30 ngày sau ( n= 3). **p=0.0034, ****p < 0,0001 (CD45), **p=0.0023 (CD11b). e Số tuyệt đối của F4/80 plus (n=10), Ly6C plus (n=10) và Ly6G plus (n=8) trong quần thể CD11b plus. **p=0.003, ****p < 0,0001. f Bảy ngày sau IP PBS hoặc WGP tuyến tụy đã được mô phỏng lại bằng LPS. Quá trình sản xuất TNF trong CD11b cộng với (n=28), CD11b cộng với F4/80 cộng với (n=9) và CD11b cộng với Ly6C cộng với (n=8) ô đã được đo. *p=0.024, ***p=0.0001, ****p < 0,0001. g Bảy ngày sau PBS hoặc WGP, quần thể cộng với CD45 cộng với CD11b đã được làm giàu (n=4). Các tế bào được mô phỏng lại có hoặc không có LPS trong 24 giờ. Quá trình sản xuất TNF và IL-6 được đo bằng ELISA. **** p < 0,0001. h CD11b tuyến tụy cộng với các tế bào từ chuột được huấn luyện PBS và WGP đã được sắp xếp. RT-qPCR đã được thực hiện để định lượng TNF (n=4), IL-6 (n=4), iNOS (PBS n=4, WGP n=3) và IL-10 (PBS n=4, WGP n=5) các mức biểu thức mRNA. *p=0.028, **p=0.0018, ****p < 0,0001. Tôi CD11b cộng với các tế bào từ chuột được tiêm PBS hoặc WGP (24 giờ) đã được sắp xếp (n=4). Các histone được phân lập và được phân tích Western blot (trên cùng) hoặc ELISA (dưới cùng) đối với H3K4me3, H3K27Ac, ​​H3K27me3 và H3 tổng. **** p < 0,0001. j Bảy ngày sau IP WGP hoặc PBS, quần thể CD45 cộng với CD1b cộng với tuyến tụy đã được sắp xếp. Phân tích RNA-Seq đã được thực hiện (PBS n=3, WGP n=3).

Sự phân bố của các giá trị p (–log10(p-value)) và các thay đổi về nếp gấp (log2 FC) của các gen biểu hiện khác nhau được trình bày. k biểu đồ t-SNE của quần thể CD11b cộng với chuột được huấn luyện bằng PBS hoặc WGP 7 ngày trước và được phân tích bằng CyTOF (PBS n=3, WGP n=3). Các bài kiểm tra t của học sinh hai đuôi, không ghép đôi được sử dụng trong b, e, f và h. ANOVA một chiều với nhiều phép so sánh đã được sử dụng trong d, g và i. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± SEM. ns không đáng kể. Mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập.

Trong khi phần trăm tế bào cộng với CD11b đạt đỉnh vào ngày thứ 7, thì phần trăm tế bào cộng với CD45 dường như đạt đỉnh vào ngày thứ 10, điều này có thể cho thấy rằng sau dòng tế bào cộng với CD11b đến tuyến tụy, một dòng tế bào miễn dịch khác có thể theo sau. Tỷ lệ tế bào miễn dịch trong tuyến tụy giảm xuống mức cơ bản vào ngày thứ 30, chứng tỏ rằng dòng này chỉ là nhất thời (Hình 2d). Trong khoang tủy, chúng tôi đã quan sát thấy số lượng tuyệt đối (Hình 2e) và phần trăm (Hình bổ sung 1c) của đại thực bào (F4/80 plus ), bạch cầu đơn nhân (Ly6C plus ) và bạch cầu trung tính (Ly6G plus ) đều tăng lên. Dòng tế bào miễn dịch vào tuyến tụy cũng được chứng minh là phụ thuộc vào liều WGP được tiêm, trong đó liều WGP cao hơn có liên quan đến sự gia tăng dòng tổng thể của CD45 cộng với CD11b cộng với tế bào myeloid và CD45 cộng với CD11b cộng với F4/80 cộng với đại thực bào (Hình bổ sung. 1d).

Vì viêm tụy và sự phá hủy các tiểu đảo tụy có liên quan đến sự xâm nhập của tế bào miễn dịch vào tuyến tụy, H cộng với E của tuyến tụy đã được thực hiện để đánh giá tính toàn vẹn của acini 7 ngày sau khi dùng WGP (Hình bổ sung. 1e). Amylase huyết thanh, một dấu hiệu chẩn đoán viêm tụy, cũng được đo ở chuột được điều trị bằng WGP so với PBS 7 ngày sau khi tiêm (Hình bổ sung. 1f). Cả đảo nhỏ và amylase huyết thanh đều không bị ảnh hưởng bất lợi khi điều trị bằng WGP và dòng miễn dịch quan sát được, cho thấy dòng tế bào miễn dịch trong cơ chế này không gây ra sự phá hủy tuyến tụy.

Để tìm hiểu xem các tế bào được phát hiện xâm nhập vào tuyến tụy của chuột sau khi điều trị bằng WGP có hiển thị kiểu hình miễn dịch được huấn luyện hay không, chúng tôi đã sử dụng một quy trình huấn luyện tiêu chuẩn trong đó chuột được điều trị bằng WGP hoặc PBS và 7 ngày sau, tuyến tụy được thu hoạch và sau đó được mô phỏng lại bằng LPS. TNF- sản xuất đã được sử dụng như một dấu hiệu thay thế để đánh giá phản ứng được đào tạo. Nhìn chung, CD11b cộng với các tế bào tủy, CD11b cộng với F4/80 cộng với đại thực bào và CD11b cộng với Ly6C cộng với bạch cầu đơn nhân đều được chứng minh là tạo ra nhiều TNF- hơn do đã tiếp xúc với WGP trước đó, được đánh giá bằng phần trăm tế bào TNF- cộng với và MFI (Hình .2f). Để đánh giá thêm những phát hiện này, các tế bào cộng với CD11b đã được sắp xếp từ tuyến tụy của những con chuột này và mô phỏng lại ex vivo bằng LPS, đồng thời đo nồng độ TNF- và IL-6 trong dịch nổi phía trên bằng ELISA. So với CD11b cộng với các tế bào từ chuột PBS, các tế bào từ chuột được huấn luyện bằng WGP được mô phỏng lại bằng LPS tạo ra nhiều TNF- và IL-6 hơn đáng kể (Hình 2g), cho thấy rằng các tế bào cộng với CD11b tuyến tụy được xử lý bằng WGP đã được huấn luyện.

Những kết quả này đã được xác nhận thêm bằng cách sử dụng RT-PCR, trong đó các tế bào CD11b tuyến tụy cộng với các tế bào được sắp xếp từ chuột được huấn luyện bằng PBS hoặc WGP đã được hiển thị để tạo ra nhiều TNF-, IL-6, iNOS và ít IL-10 hơn do Xử lý WGP (Hình 2h). Do khả năng miễn dịch được đào tạo có liên quan đến quá trình tái lập trình trao đổi chất và biểu sinh23, nên chúng tôi đã đo mức lactate để kiểm tra xem liệu có liên quan đến quá trình đường phân hay không. Thật vậy, các tế bào cộng với CD11b được đào tạo WGP tiết ra nhiều sữa mẹ hơn so với các tế bào chưa được đào tạo (Hình bổ sung. 1g). Chúng tôi cũng đã đo các sửa đổi histone của các tế bào cộng với CD11b được đào tạo bởi WGP. Như được hiển thị trong Hình 2I, các mức biểu hiện của H3K4me3 và H3K27Ac đã được tăng cường đáng kể trong các tế bào cộng với CD11b được đào tạo bởi WGP. Điều này đã được tiết lộ bởi cả phân tích Western blot (Hình 2i, trên cùng) và xét nghiệm định lượng ELISA (Hình 2i, dưới cùng). Những phát hiện này cùng nhau chỉ ra rằng WGP không chỉ kích thích một kiểu hình được đào tạo trong các tế bào lưu thông vào tuyến tụy, mà chúng còn trải qua quá trình tái lập trình trao đổi chất và biểu sinh.

Trình tự RNA (RNA-Seq) sau đó đã được thực hiện trên các tế bào CD45 cộng với CD11b được sắp xếp theo FACS 7 ngày sau khi sử dụng PBS hoặc WGP để thu được đặc tính khách quan và toàn diện của quần thể tủy trong tuyến tụy. Tổng cộng có 1459 gen biểu hiện khác nhau (DEG) đã được phát hiện, với 661 gen được điều hòa và 798 gen được điều hòa giảm trong cài đặt WGPtraining (Hình 2j). Các phân tích làm giàu bộ gen (GSEA) đã xác nhận thêm các điều chỉnh tăng được điều tra trước đó trong các lộ trình liên quan đến sản xuất TNF- và, IL -6 (Hình bổ sung 2a). Bằng dòng tế bào miễn dịch quan sát được, các DEG liên quan đến hóa trị liệu bạch cầu, di chuyển bạch cầu (Hình bổ sung 2a), hóa trị liệu đơn nhân, di chuyển đại thực bào và di chuyển bạch cầu myeloid (Hình bổ sung 2b) đều được làm giàu đáng kể trong nhóm WGP. Ngoài ra, các lộ trình Reactome CLEC7A dectin-1 tín hiệu và các lộ trình thụ thể lectin loại C đã được làm phong phú đáng kể, chứng thực thêm cho sự tham gia của Dectin-1 trong quá trình này (Hình bổ sung 2c).

Xem xét rằng quần thể tủy được quan sát là nguyên nhân gây ra sự mở rộng quần thể CD45 cộng với và các tế bào tủy là một quần thể đa dạng, phân tích CyTOF đã được thực hiện trên tuyến tụy từ những con chuột được điều trị bằng PBS hoặc WGP 7 ngày trước đó. Quần thể tế bào trong tuyến tụy đã được xác định và so sánh giữa các nhóm điều trị; Các biểu đồ t-SNE chỉ ra rằng sau khi điều trị bằng WGP, quần thể đại thực bào thường trú đã giảm tương đối, biểu hiện cao các dấu hiệu M2 như CD206. Chúng tôi cũng quan sát thấy sự xuất hiện của một số quần thể myeloid trong tuyến tụy được xác định là Ly6C cộng với các tế bào đơn nhân có nguồn gốc từ đại thực bào, các tế bào đơn nhân gây viêm xâm nhập, đại thực bào được kích hoạt và CD206 cộng với các đại thực bào được kích hoạt (Hình 2k và Hình bổ sung 2d). Các sơ đồ viSNE được kiểm soát trên CD11b cộng với quần thể cho thấy sự mở rộng rõ rệt của bạch cầu đơn nhân và đại thực bào, với sự gia tăng thêm của tế bào đuôi gai (DC), bạch cầu trung tính và quần thể NK sau khi điều trị bằng WGP (Hình bổ sung. 2e).

Ngoài ra, những phân tích này nhấn mạnh rằng sau khi đào tạo WGP và kích thích LPS, TNF chủ yếu được sản xuất bởi đại thực bào và bạch cầu đơn nhân, IL-6 và iNOS chủ yếu được sản xuất bởi đại thực bào, Granzyme-B được sản xuất bởi tế bào NK và đại thực bào, và IFN là chủ yếu được sản xuất bởi bạch cầu trung tính (Hình bổ sung 2f). Điều này cho thấy rằng trong khi nhiều quần thể tế bào bị thay đổi do điều trị bằng WGP, thì các tế bào chính được huấn luyện bởi WGP, được đánh giá bằng biểu hiện TNF tăng lên, là các đại thực bào và bạch cầu đơn nhân và không có một loại tế bào nào chịu trách nhiệm về kiểu hình của khả năng miễn dịch được huấn luyện đó. đã được quan sát.

Để đánh giá xem hiện tượng dòng tế bào tủy và kích hoạt này có phụ thuộc vào các quần thể miễn dịch khác hay do chính các tế bào tủy điều khiển hoàn toàn hay không, chúng tôi đã làm cạn kiệt các quần thể miễn dịch cụ thể và quan sát kiểu hình được huấn luyện. AntiCD4 và anti-CD8 mAbs được sử dụng một mình và kết hợp để làm cạn kiệt các tế bào T, hiệu quả của sự suy giảm được đánh giá (Hình bổ sung 3a) và kiểu hình được đào tạo của các tế bào myeloid đã được quan sát (Hình bổ sung 3b, c). Các tế bào NK cũng bị cạn kiệt khi sử dụng mAb PK136, hiệu quả cạn kiệt được đánh giá (Hình bổ sung 3d) và kiểu hình được đào tạo đã được quan sát (Hình bổ sung 3e, f). Trong trường hợp không có tế bào T và tế bào NK, các tế bào myeloid vẫn được WGP huấn luyện. Kiểu hình được đào tạo cũng được đánh giá ở chuột NSG thiếu tế bào B, tế bào T và tế bào NK (Hình bổ sung 3g, h). Những con chuột này vẫn cho thấy một kiểu hình rõ ràng về khả năng miễn dịch đã được huấn luyện.

Cuối cùng, chúng tôi đã làm cạn kiệt bạch cầu trung tính bằng Ly6G mAb. Mặc dù sự cạn kiệt của bạch cầu hạt, chúng tôi vẫn quan sát thấy quá trình đào tạo do WGP gây ra trong CD11b cộng với khoang tủy (Hình bổ sung. 3iiêu k). Kết hợp lại với nhau, dữ liệu của chúng tôi hỗ trợ rằng các tế bào myeloid xâm nhập trong tuyến tụy được huấn luyện bởi -glucan mà không cần sự hỗ trợ hoặc ảnh hưởng của các quần thể miễn dịch thích nghi, tế bào NK hoặc bạch cầu hạt.

Giải trình tự RNA đơn bào tiết lộ các quần thể cụ thể của đại thực bào/bạch cầu đơn nhân tiền viêm lưu thông đến tuyến tụy khi điều trị bằng -glucan.

Vì các phân tích CyTOF của chúng tôi đã tiết lộ sự xuất hiện của một số quần thể chưa bị biến đổi trước đây trong tuyến tụy sau khi điều trị bằng WGP, để hiểu sâu hơn về các quần thể tế bào có trong tuyến tụy, một trình tự RNA đơn bào (scRNA-Seq) đã được thực hiện trên CD45 được sắp xếp cộng với các tế bào từ chuột được xử lý bằng PBS và chuột được xử lý bằng WGP ba (3-WGP ngày) và bảy ngày trước (7-WGP ngày). Biểu diễn UMAP hai chiều của 11.132 ô được tổng hợp từ ba mẫu với các cụm do k hàng xóm gần nhất và thuật toán Louvain phân chia thành 19 cụm riêng biệt (Hình 3a, b). Tần suất tương đối của từng cụm trong mỗi nhóm thử nghiệm đã được đánh giá.

Ở đây, sự gia tăng đáng kể về tần suất của các cụm 3, 4 và 10 đã được quan sát thấy vào ngày thứ 7 sau khi xử lý WGP, cùng với sự biến mất gần như của cụm 5 (Hình 3c). Tần số tương đối của một số quần thể khác cũng được chứng minh là giảm theo thời gian. Tuy nhiên, xu hướng rõ ràng này có thể là do sự gia tăng tương đối về tần suất của các quần thể khác. Nhìn chung, các cụm 3,4,10 và 5 dường như bị thay đổi đáng kể nhất do xử lý WGP (Hình 3d).

Các quần thể được ghi nhận trước đây bị thay đổi đáng kể nhất theo thời gian do điều trị bằng WGP là một phần của khoang tủy, như được xác định bởi biểu hiện CSF1R (Hình 3d, e). Vì những dữ liệu này cùng với những phát hiện trước đó cho thấy rằng các quần thể myeloid thúc đẩy những thay đổi miễn dịch liên quan đến điều trị bằng WGP, nên CSF1R động cộng với các cụm 3,4,10 và 5 đã được nghiên cứu chi tiết hơn như được thể hiện bằng các sơ đồ violon (Hình 3f) và dấu chấm các biểu đồ đại diện cho 12 gen đánh dấu hàng đầu theo điểm Z trung bình cho mỗi cụm (Hình 3g). Cụm 5, hiện diện ở chuột PBS nhưng hầu như biến mất sau khi điều trị bằng WGP được xác định là đại thực bào thường trú24,25. Cụm này cũng thể hiện đáng chú ý MAF và APO, cả hai đều liên quan đến sự phân cực của đại thực bào M226–28. Cụm 19 hầu như không thay đổi theo thời gian nên không được mô tả chi tiết hơn, nhưng thể hiện một cấu hình biểu hiện tương tự như cụm 5, và do đó cũng đại diện cho một tập hợp con của các đại thực bào cư trú trong mô. Cụm 10, quần thể đại thực bào Ly6Clo, cũng có cấu hình biểu hiện tương tự với cụm đại thực bào thường trú 5 và các dấu hiệu biểu hiện đáng chú ý của ARG1 và FABP. Chúng tôi đưa ra giả thuyết quần thể này là các đại thực bào thường trú được tái cực do thiếu biểu hiện Ly6C, tương tự như quần thể đại thực bào thường trú và sự biến mất của quần thể cư dân sau khi điều trị bằng WGP. Các cụm 3 và 4 được chia sẻ đặc điểm kiểu hình chung khi Ly6CHi xâm nhập vào các tế bào đơn nhân / đại thực bào. Cụm 4 có biểu hiện đáng chú ý của Chil3 và Plac8, chúng đã được một nhóm khác xác định cùng nhau để xác định các đại thực bào xâm nhập Ly6Chi29.

Cuối cùng, cụm 3, không có ở những con chuột ngây thơ và cho thấy tần suất tương đối tăng cao nhất trong số tất cả các cụm sau khi điều trị bằng WGP, biểu thị các dấu hiệu đáng kể của TNFAIP2, IL1B, SOD2 và PRDX5, cho thấy kiểu hình gây viêm mạnh. Do đó, cụm 3 được xác định là các bạch cầu đơn nhân / đại thực bào xâm nhập vào tình trạng viêm Ly6CHi. Điều thú vị là, trong tập hợp con dòng tủy, các quần thể tăng lên do điều trị bằng WGP là quần thể duy nhất biểu hiện TNFAIP2, cho thấy các tế bào đi vào tuyến tụy có khả năng là các tế bào dòng tủy đã được huấn luyện.

Để mô tả thêm trạng thái kích hoạt của từng cụm trong số bốn cụm myeloid động, các ô chấm được xây dựng để hiển thị biểu hiện tương đối của các gen liên quan đến trạng thái tiền viêm và trạng thái chống viêm (Hình 3h). Cụm 3 và 4, các tế bào đơn nhân/đại thực bào xâm nhập, được chứng minh là có tính chất gây viêm, các đại thực bào thường trú có tác dụng chống viêm và các đại thực bào trong cụm 10 cho thấy một kiểu hình trung gian. Theo thỏa thuận với CyTOF trước đây và dữ liệu tế bào học dòng chảy, dữ liệu scRNA-Seq này mô tả thêm các tế bào myeloid mới được xác định này trong tuyến tụy là một quần thể không đồng nhất của các đại thực bào Ly6CLo đã biến đổi và tái cực và các đại thực bào Ly6CHi gây viêm xâm nhập thể hiện chữ ký của khả năng miễn dịch được đào tạo.

Dòng được điều khiển bởi WGP và quá trình đào tạo các tế bào tủy trong tuyến tụy phụ thuộc vào CCR2-và xảy ra sớm nhất là sau 24 giờ điều trị sau WGP.

Tiếp theo, chúng tôi đã kiểm tra cơ chế nào chịu trách nhiệm cho dòng tế bào này vào tuyến tụy. Dữ liệu RNA-Seq được sử dụng để mô tả các chemokine và cytokine có biểu hiện được điều chỉnh tăng đáng kể khi điều trị bằng WGP (Hình 4a). Trong khi một số chemokine và cytokine đã được điều chỉnh lại, thì quan sát của chúng tôi về dòng đại thực bào và bạch cầu đơn nhân vào tuyến tụy đã khơi dậy mối quan tâm cụ thể đối với CCR2 do nó có liên quan đến việc tuyển dụng bạch cầu đơn nhân và đại thực bào và thoát ra khỏi tủy xương30–32. Dữ liệu CyTOF cũng cho thấy sự gia tăng rõ rệt của các tế bào dương tính với CCR2-sau khi xử lý bằng WGP (Hình 4b) và scRNA-Seq cho thấy biểu hiện khác biệt của CCR2 trong cụm 3 và 4, là hai quần thể biểu hiện khác biệt nhất kiểu hình của khả năng miễn dịch được đào tạo (Hình 4c). Ngoài ra, sau 24 giờ điều trị sau WGP, toàn bộ dịch ly giải tụy cho thấy CCL2 tăng gấp 30-, đây là phối tử cho CCR2 và tham gia vào quá trình hóa trị liệu đơn nhân trung gian (Hình 4d).

Dữ liệu RNA-Seq đã cho thấy một dấu hiệu rõ ràng về việc tuyển dụng và buôn bán tế bào miễn dịch, đồng thời những dữ liệu này cũng chỉ ra rằng WGP đã điều chỉnh tăng sự tăng sinh của bạch cầu và tế bào đơn nhân (Hình 4e). Để điều tra xem liệu CCR2 cộng với các tế bào myeloid có tăng sinh khi chúng đến tuyến tụy hay không, tỷ lệ phần trăm của CCR2 cộng với các tế bào biểu hiện Ki67 đã được đánh giá ở chuột được điều trị bằng PBS và WGP. Sau khi điều trị bằng WGP, có sự gia tăng tổng thể các tế bào tăng sinh (Hình 4f) và phần lớn các tế bào tăng sinh này là CD11b cộng với CCR2 cộng với (Hình 4g). Sau đó, chúng tôi đã điều tra sự đóng góp của CCR2 cộng với các tế bào cho kiểu hình được đào tạo. 7 ngày sau khi điều trị in vivo với quần thể PBS hoặc WGP, CCR2 plus và CCR2– được đo cho phản ứng được huấn luyện (Hình 4h). Dữ liệu này chỉ ra rằng phần lớn các tế bào được đào tạo sau khi xử lý WGP là CCR2 cộng với .

Để kiểm tra thêm vai trò của CCR2 trong các bạch cầu đơn nhân/đại thực bào được huấn luyện bằng -glucan, chuột CCR2−/− đã được huấn luyện bằng WGP -glucan. Chuột CCR2 - / - không trải qua dòng CD45 cộng (Hình 4i) hoặc CD45 cộng với CD11b cộng với tế bào tủy (Hình 4j) vào tuyến tụy và không cho thấy phản ứng được đào tạo như tiết lộ của sản xuất TNF (Hình. 4k). Dữ liệu này chỉ ra rằng CCR2 đóng một vai trò quan trọng trong việc di chuyển các tế bào miễn dịch bẩm sinh đến tuyến tụy và tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo ngoại vi trong tuyến tụy.

Như đã lưu ý trước đây, CCR2 rất quan trọng đối với việc tuyển dụng sớm các tế bào đơn nhân, nhưng ít quan trọng hơn đối với việc tuyển dụng muộn33. Cho đến nay, chúng tôi cũng đã quan sát thấy rằng sau 7 ngày sau khóa đào tạo WGP, CCR2 rất quan trọng đối với việc tuyển dụng các tế bào tủy được đào tạo vào tuyến tụy. Tiếp theo, chúng tôi đã kiểm tra xem dòng chảy này có xảy ra sớm khi đào tạo WGP hay không và liệu CCR2 cộng với các tế bào tủy có được tuyển dụng vào tuyến tụy hay không. Cuối cùng, những con chuột được điều trị bằng PBS hoặc WGP, và các mô tụy được phân tích 24 và 48 giờ sau đó. Đáng ngạc nhiên là ngay sau 24 giờ đào tạo WGP, CD45 cộng (Hình bổ sung 4a), CD11b cộng (Hình bổ sung 4b), F4/80 cộng (Hình bổ sung 4c), Ly6C cộng (Hình bổ sung 4d) và các tế bào CD11b cộng với CCR2 cộng với (Hình bổ sung 4e) đã được quan sát.

Ngoài ra, người ta đã chứng minh rằng các tế bào myeloid này đã được đào tạo sớm nhất là 24 giờ sau khi điều trị bằng WGP (Hình bổ sung. 4f). Quan sát này nêu bật sự khác biệt giữa các kết quả này và các kiểu hình miễn dịch được đào tạo đã quan sát trước đó thường không được bắt đầu cho đến ít nhất 3 ngày sau khi đào tạo.

Hình 4 CCR2 là cần thiết để vận chuyển tế bào miễn dịch vào tuyến tụy. sơ đồ nhiệt gồm các chemokine và cytokine đã được điều chỉnh tăng trong 7-CD11b được xử lý bằng WGP ngày cùng với các tế bào dựa trên dữ liệu RNA-Seq. biểu đồ b viSNE của CD11b cộng với quần thể tuyến tụy ở chuột PBS và 7-ngày được huấn luyện bằng WGP, làm nổi bật biểu hiện của CCR2. Hình ảnh được tạo bằng dữ liệu CyTOF. c Dữ liệu scRNA-Seq hiển thị UMAP của các cụm myeloid biểu hiện CCR2. d Biểu hiện CCL2 trong toàn bộ dịch tụy ly giải 24 giờ sau khi điều trị bằng WGP được đo bằng RT-PCR (n=6). ****p=0.0001. e GSEA đã tạo ra các biểu đồ làm giàu của các gen liên quan đến sự tăng sinh bạch cầu trong CD11b cộng với các tế bào tuyến tụy từ 7-ngày được đào tạo bằng WGP so với chuột PBS. PBS đã được sử dụng làm đối chứng và được so sánh với WGP. f Dữ liệu tóm tắt về phần trăm CD45 cộng với các tế bào tuyến tụy là Ki67 cộng với PBS và 7-chuột được huấn luyện WGP ngày (n=4). ***p=0.0007. g Các tế bào lần đầu tiên được kiểm soát trên quần thể CD45 cộng với Ki67 cộng với. Các biểu đồ hiển thị tỷ lệ phần trăm của CD45 cộng với Ki67 cộng với các tế bào tuyến tụy tăng sinh là CD11b cộng với CCR2 cộng với PBS và 7-chuột được đào tạo bằng WGP ngày (n=4). *p=0.0261. h Các tế bào tuyến tụy từ PBS và 7-chuột được huấn luyện WGP ngày (n=5) đã được mô phỏng lại bằng LPS và phần trăm tế bào dương tính và âm tính CCR2 tạo ra TNF được đo trong từng điều kiện. Các ô lần đầu tiên được kiểm soát trên CD45 cộng với CD11b cộng với tập hợp con. Biểu đồ chấm đại diện và dữ liệu tóm tắt đã được hiển thị. *p=0.022, **p=0.0073, ***p=0.0007. i–k WT và CCR2−/− chuột được điều trị bằng PBS hoặc WGP và phần trăm tế bào I CD45 cộng với trong tuyến tụy (****p < 0,0001) và j phần trăm tế bào cộng CD45 là CD11b cộng được đánh giá . **p=0.0013. k Phần trăm CD45 cộng với CD11b cộng với các tế bào sản xuất TNF . Sơ đồ dòng chảy đại diện và dữ liệu tóm tắt được hiển thị. Mỗi dấu chấm đại diện cho dữ liệu từ một con chuột. ***p=0.0002. (i–k: WT PBS n=9, WT WGP n=9, CCR2−/− PBS n=8, CCR2−/− WGP n=8).

Bài kiểm tra t của học sinh hai đuôi, chưa ghép đôi được sử dụng trong d, f và g, trong khi ANOVA một chiều với nhiều phép so sánh được sử dụng trong h–k. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± SEM. ns không đáng kể. Trong f - k, mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập duy nhất được lặp lại ít nhất hai lần để xác minh kết quả.

Các tế bào myeloid xâm nhập tuyến tụy được đào tạo bởi WGP thể hiện các phản ứng được đào tạo đối với các yếu tố được tiết ra từ ung thư tuyến tụy và tăng cường thực bào và gây độc tế bào qua trung gian ROS đối với các tế bào khối u.

Như chúng tôi đã chỉ ra rằng việc sử dụng WGP như một tác nhân kích thích ban đầu dẫn đến các tế bào miễn dịch bẩm sinh được đào tạo để phản ứng mạnh mẽ hơn khi tiếp xúc với LPS lần thứ hai và các tế bào này tích tụ trong tuyến tụy sau khi điều trị, chúng tôi muốn biết liệu các kích thích thứ cấp có liên quan đến khối u tuyến tụy hay không. cũng có thể gợi ra phản ứng được đào tạo này. Để đạt được điều này, trước tiên chúng tôi đã điều tra xem liệu bản thân các tế bào ung thư tuyến tụy có khả năng gợi ra phản ứng được đào tạo do WGP gây ra hay không. Để thăm dò câu hỏi này, các đại thực bào phúc mạc được nuôi cấy bằng PBS hoặc WGP trong ống nghiệm và 7 ngày sau đó được mô phỏng lại bằng LPS, phần nổi phía trên từ các tế bào được nuôi cấy từ một tuyến tụy chuột ngây thơ và phần nổi phía trên từ các tế bào KPC được nuôi cấy, là một dòng tế bào của một khối u tụy trên nền C57BL/6 có nguồn gốc từ LSL-KrasG12D/ plus ; LSL-Trp53R172H/ thêm ; chuột Pdx1-Cre (KPC) hoặc tế bào ung thư tuyến tụy Pan02 trong 24 giờ. Sản xuất TNF- ở phần nổi phía trên được đo bằng ELISA.

So với dịch nổi từ các tế bào tuyến tụy bình thường được nuôi cấy không kích hoạt các đại thực bào được đào tạo trước đó, dịch nổi từ các tế bào ung thư tuyến tụy KPC và Pan02 được nuôi cấy đã kích thích nhiều đại thực bào được đào tạo TNF- -sản xuất trong -glucan hơn (Hình bổ sung 5a). Ngoài ra, để kiểm soát khả năng quá trình thực bào có thể khiến các tế bào bị kích hoạt, các đại thực bào phúc mạc được nuôi cấy với các hạt vi hạt polystyrene 3 μm và sau đó được mô phỏng lại bằng PBS hoặc LPS (Hình bổ sung 5b). Kết quả cho thấy việc tăng cường sản xuất TNF là dành riêng cho đào tạo WGP.

Điều này sau đó đã được thử nghiệm trong môi trường ex vivo trong đó chuột được điều trị bằng PBS hoặc WGP và 7 ngày sau, tuyến tụy được thu hoạch, các tế bào tủy tụy được làm giàu, sau đó được mô phỏng lại bằng chất nổi trên bề mặt từ KPC được nuôi cấy (Hình bổ sung 5c) hoặc Pan02 các ô (Hình bổ sung 5d). Nó cho thấy rằng WGP in vivo đã được đào tạo CD11b cộng với các tế bào tủy trong tuyến tụy đã tạo ra nhiều TNF- hơn đáng kể để đáp ứng với môi trường điều hòa khối u. Bản thân các tế bào khối u tiết ra vô số yếu tố có thể hoạt động cụ thể như tác nhân kích thích thứ hai trong khả năng miễn dịch đã được huấn luyện. Được biết, các tế bào khối u tuyến tụy biểu hiện mức độ cao của các mẫu phân tử liên quan đến tổn thương (DAMPs) và các yếu tố gây viêm, chẳng hạn như yếu tố ức chế di chuyển đại thực bào (MIF). MIF là một cytokine được biết là được tiết ra ở nồng độ cao bởi các khối u tuyến tụy có thể tác động trực tiếp lên các tế bào tủy34,35.

Thật vậy, MIF đã có mặt ở phần nổi phía trên của các tế bào KPC và Pan02 được đánh giá bởi ELISA (Hình bổ sung 5e). Do đó, chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng MIF có thể là một yếu tố tiềm ẩn do khối u tiết ra có thể hoạt động như một tín hiệu thứ hai trong cài đặt khả năng miễn dịch được đào tạo do WGP gây ra. Để điều tra điều này, các tế bào tủy tụy từ những con chuột được huấn luyện WGP in vivo đã được mô phỏng lại với nồng độ MIF tái tổ hợp (rMIF) tương tự như trong môi trường điều hòa khối u. Như thể hiện trong Hình bổ sung 5f, các tế bào tủy tụy được đào tạo trước đó với WGP cho thấy việc sản xuất TNF- được tăng cường khi tái cấu trúc rMIF. Nói chung, những dữ liệu này gợi ý khái niệm rằng các tế bào khối u tuyến tụy, thông qua các yếu tố hòa tan mà chúng giải phóng, có thể đóng vai trò là tín hiệu thứ hai để kích hoạt các tế bào tủy trong tuyến tụy đã được WGP đào tạo.

Tiếp theo, chúng tôi đã kiểm tra xem các tế bào miễn dịch bẩm sinh được huấn luyện bởi WGP này có tăng cường các đặc tính chống khối u nội tại hay không. Dữ liệu giải trình tự RNA chỉ ra rằng các cơ chế liên quan đến thực bào đã được điều chỉnh lại trong cài đặt WGP (Hình 5a), mà chúng tôi đưa ra giả thuyết có thể là một cơ chế của chức năng chống khối u. 20 con đường KEGG được làm giàu hàng đầu và các quy trình sinh học Gene Onology (GO) khi đào tạo WGP được liệt kê trong Bảng bổ sung 1 và 2. CD45 cộng với tế bào miễn dịch pan và CD11b cộng với tế bào myeloid từ tuyến tụy chuột được đào tạo bằng WGP đã được thu hoạch và thử nghiệm về khả năng thực bào. Điều trị bằng WGP dẫn đến sự gia tăng đáng kể tiềm năng thực bào của CD45 tổng thể cộng với các tế bào miễn dịch (Hình 5b) và trong CD11b cộng với các tế bào tủy (Hình 5c).

Ngoài ra, các tế bào myeloid được đào tạo in vivo cho thấy sự gia tăng quá trình thực bào của các tế bào khối u KPC (Hình 5d). Sau đó, chúng tôi đã đánh giá xem các tế bào myeloid được đào tạo bởi WGP có cho thấy khả năng gây độc tế bào đối với các tế bào KPC hay không. Dữ liệu RNA-Seq chỉ ra rằng các DEG liên quan đến các quá trình sinh tổng hợp các loại oxy phản ứng (ROS) và điều hòa tích cực các quá trình trao đổi chất của ROS đã được làm giàu đáng kể trong các tế bào myeloid được xử lý bằng WGP (Hình 5e).

Do đó, chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng việc điều chỉnh lại quá trình sản xuất ROS của WGP sẽ dẫn đến tăng độc tính tế bào tủy tụy đối với các tế bào khối u KPC. Để khám phá giả thuyết này, các tế bào CD11b cộng với tuyến tụy đã được phân lập từ những con chuột được huấn luyện hoặc chưa được huấn luyện -glucan và được phủ tế bào KPC biểu hiện luciferase (KPCLuc plus) trong 24 giờ. Các tế bào myeloid được đào tạo bởi WGP cho thấy khả năng gây độc tế bào tăng gấp ba lần đối với các tế bào khối u KPC và việc ức chế sản xuất ROS bằng cách sử dụng chất ức chế ROS N-Acetyl Cysteine ​​(NAC) đã loại bỏ hoàn toàn sự gia tăng độc tính tế bào do WGP gây ra (Hình 5f). Quá trình peroxy hóa lipid do ROS gây ra đóng một vai trò quan trọng trong quá trình chết theo chương trình, bệnh tự kỷ và bệnh ferroptosis36. Do đó, chúng tôi đã sử dụng hai chất ức chế ROS bổ sung, Trolox và deferoxamine (DFO), để kiểm tra tác dụng của chúng đối với độc tính tế bào.Việc bổ sung Trolox và DFO đã ức chế đáng kể CD11b được đào tạo bởi WGP cộng với khả năng gây độc tế bào qua trung gian tế bào (Hình 5g), cho thấyrằng peroxidase lipid do ROS gây ra có liên quan, ít nhất là một phần, trong quá trình gây độc tế bào qua trung gian ROS này.

Hình 5 Các tế bào myeloid xâm nhập tuyến tụy được đào tạo bởi WGP cho thấy khả năng thực bào tăng cường và khả năng gây độc tế bào qua trung gian ROS. Sơ đồ làm giàu (GSEA) và sơ đồ nhiệt của các gen liên quan đến sự điều hòa tích cực của quá trình thực bào trong CD11b cộng với các tế bào từ 7-ngày được đào tạo bằng WGP so với chuột PBS. b Phần trăm CD45 cộng với các tế bào tuyến tụy đã thực bào một hạt Staph Aureus xanh pHrodo ở chuột PBS (n=10) và 7-day WGP (n=9) cùng với MFI của pHrodo Hạt Staph Aureus màu xanh lá cây. Mỗi dấu chấm đại diện cho dữ liệu từ một con chuột. *p {{10}}.043, ****p < 0,0001. c Tỷ lệ phần trăm của CD11b cộng với các tế bào tuyến tụy dạng tủy đã thực bào một hạt Staph Aureus xanh pHrodo ở PBS (n=13) và chuột WGP 7-ngày (n=13). Các tế bào lần đầu tiên được kiểm soát trên quần thể CD45 plus. MFI của hạt Staph Aureus pHrodo Green được hiển thị. **p=0.0021, ***p=0.0002. d Tỷ lệ phần trăm của CD11b cộng với các tế bào tuyến tụy dòng tủy đã thực bào KPCGFP cộng với các tế bào khối u ở chuột PBS (n=5) và 7-day WGP (n=5). *p=0.0103. Các tế bào lần đầu tiên được kiểm soát trên quần thể CD45 plus. MFI tóm tắt của tín hiệu cộng GFP cũng được hiển thị. *p=0.0379. e Sơ đồ làm giàu (GSEA) và sơ đồ nhiệt của các gen liên quan đến quá trình sinh tổng hợp của các loại oxy phản ứng và sự điều hòa tích cực của các quá trình trao đổi chất của các loại oxy phản ứng trong CD11b cộng với các tế bào từ 7-ngày được đào tạo bằng WGP so với chuột PBS. f Kết quả tóm tắt từ thử nghiệm độc tính tế bào trong đó CD11b cộng với các tế bào từ PBS và 7-chuột được huấn luyện WGP ngày được sắp xếp và ủ theo tỷ lệ 1:20 KPCLuc cộng : CD11b cộng với tế bào trong 24 giờ. NAC được sử dụng để ngăn chặn biểu hiện ROS và khả năng gây độc tế bào của khối u được đánh giá bằng phát quang (PBS n=3, WGP n=4). g Dữ liệu tóm tắt từ các thử nghiệm độc tính tế bào trong đó CD11b cộng với tế bào từ 7-chuột được huấn luyện WGP ngày được sắp xếp và ủ theo tỷ lệ 1:20 KPCLuc cộng : CD11b cộng với tế bào trong 24 giờ. Trolox hoặc DFO hoặc các điều khiển phương tiện tương ứng đã được thêm vào và khả năng gây độc tế bào của khối u được xác định bằng cách đo độ phát quang (n=3). *p=0.0255, **p=0.0019. Bài kiểm tra t của học sinh hai đuôi, chưa ghép đôi đã được sử dụng trong b - d, và g và ANOVA một chiều với nhiều phép so sánh đã được sử dụng cho f. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± SEM. ns không đáng kể. Trong b - g, mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập duy nhất được lặp lại ít nhất hai lần để xác minh kết quả.

Cuối cùng, dữ liệu này xác định rằng các tế bào khối u tuyến tụy có khả năng kích hoạt lại các tế bào myeloid xâm nhập được đào tạo bởi WGP trong tuyến tụy và các tế bào này cho thấy khả năng thực bào tăng cường và gây độc tế bào qua trung gian ROS.

Khả năng miễn dịch được đào tạo do WGP gây ra làm giảm sự phát triển của khối u và kéo dài thời gian sống sót trong các mô hình ung thư tuyến tụy chỉnh hình.

Tiếp theo, chúng tôi đã điều tra xem liệu các phản ứng miễn dịch bẩm sinh được đào tạo qua trung gian -glucan trong tuyến tụy có dẫn đến việc thiết lập một môi trường vi mô chống khối u có thể đủ để vượt qua TME ức chế miễn dịch đặc trưng của PDAC hay không. Theo đó, những con chuột được tiêm 1 liều PBS hoặc WGP vào ngày −7 và vào ngày 0, 1 × 105 KPC hoặc KPCLuc cộng với các tế bào được cấy trực tiếp vào đuôi tụy (Hình 6a). Vào ngày 21, chuột đã được phú dưỡng và đo trọng lượng khối u (Hình 6b). Trong môi trường tiêm tế bào cộng với KPCLuc, chuột được tiêm chất nền luciferase và các khối u được chụp ảnh (Hình 6c).

Cả hai nghiên cứu đều cho thấy gánh nặng khối u giảm đáng kể nhờ điều trị bằng WGP và khả năng sống sót cũng được kéo dài đáng kể ở những con chuột được huấn luyện bằng WGP (Hình 6d). Kiểu hình miễn dịch của các khối u cho thấy sự gia tăng liên tục của CD45 cộng với tế bào miễn dịch, CD11b cộng với tế bào tủy và F4/80 cộng với đại thực bào trong môi trường được đào tạo bởi WGP (Hình 6e). CD11b cộng với các tế bào tủy (Hình 6f) và CD11b cộng với F4/80 cộng với đại thực bào (Hình 6g) trong khối u cũng cho thấy sự gia tăng đáng kể trong sản xuất TNF- do WGP. Cả việc tăng số lượng tế bào CD11b cộng với tế bào tủy (Hình 6h, bên trái) và tăng tỷ lệ phần trăm của CD11b cộng với các tế bào sản xuất TNF- (Hình 6h, bên phải) tương quan đáng kể với việc giảm gánh nặng khối u. Cả tế bào T CD4 cộng với và CD8 cộng với đều không tăng IFN-, hỗ trợ thêm cho việc giảm gánh nặng khối u được thúc đẩy bởi các tế bào myeloid được đào tạo bởi WGP (Hình 6i). Các tác dụng chống khối u tương tự cũng được quan sát thấy ở những con chuột được cấy ghép chỉnh hình khối u Pan02 (Hình bổ sung 6a).

Để xác nhận thêm rằng các tế bào miễn dịch bẩm sinh chịu trách nhiệm cho các phản ứng miễn dịch chống khối u đã quan sát được, các khối u KPC chỉnh hình đã được cấy vào chuột NSG. Tương tự như chuột WT, chuột NSG cũng cho thấy kích thước khối u giảm đáng kể do đào tạo WGP, xác nhận rằng tác dụng chống khối u của WGP được điều khiển bởi các tế bào miễn dịch bẩm sinh và hoạt động độc lập với các phản ứng thích nghi (Hình bổ sung 6b). Kalafati và cộng sự. đã chỉ ra rằng việc đào tạo miễn dịch bẩm sinh của tạo hạt thúc đẩy khả năng miễn dịch chống khối u21.

Mặc dù chúng tôi chưa thấy sự đóng góp quan trọng của bạch cầu hạt đối với kiểu hình miễn dịch được đào tạo của chúng tôi, nhưng chúng tôi đã kiểm tra xem bạch cầu hạt có liên quan đến việc giảm phụ thuộc WGP trong khối u tụy hay không bằng cách làm cạn kiệt bạch cầu trung tính và quan sát sự phát triển của khối u ở chuột được điều trị bằng PBS và WGP. Hiệu quả suy giảm của bạch cầu trung tính trong tuyến tụy (Hình bổ sung 6c) cùng với gánh nặng khối u tuyến tụy đã được đánh giá (Hình bổ sung 6d). Kết quả của chúng tôi cho thấy kích thước khối u giảm đáng kể trong nhóm WGP khi không có bạch cầu trung tính.

Hình 6 Việc tạo ra khả năng miễn dịch được đào tạo trong tuyến tụy có tác dụng chống khối u. một giản đồ thực nghiệm. b Chuột C57BL/6 được tiêm một mũi WGP hoặc PBS IP duy nhất và 7 ngày chuột được cấy trực tiếp tế bào ung thư tuyến tụy KPC. Hình ảnh đại diện của khối u và phân tích định lượng trọng lượng khối u được hiển thị. Trọng lượng khối u được đo vào ngày 21 (PBS n=10, WGP n=12). ***p=0.0004. c Chuột C57BL/6 (n=4) đã được tiêm WGP hoặc PBS ip duy nhất và 7 ngày sau đó được cấy tế bào ung thư tuyến tụy KPC cộng với Luc theo phương pháp chỉnh hình. Vào ngày thứ 21 sau khi cấy ghép khối u, những con chuột được cung cấp chất nền phát quang sinh học IP luciferin và được đặt trong một thiết bị tạo ảnh photon để đo kích thước khối u trong cơ thể. *p=0.0403. d Sự sống sót của chuột trong lược đồ thử nghiệm được hiển thị trong a, sử dụng các ô KPC (n=5). **p=0.0018. e Kiểu hình của các khối u cho thấy tỷ lệ phần trăm các tế bào khả thi là CD45 cộng thêm , phần trăm của quần thể CD45 cộng với CD11b cộng thêm và phần trăm tế bào CD11b cộng với F4/80 cộng thêm (PBS n=10, WGP n= 9). *p=0.0165 (CD45), ***p=0.0001 (CD11b), **p=0.0034 (F4/80). f Quá trình sản xuất TNF trong CD11b cộng với các tế bào từ PBS và 7-ngày được đào tạo bằng WGP đã được mô phỏng lại bằng LPS. Phần trăm TNF cộng với các ô và MFI của TNF được hiển thị (PBS n=10, WGP n=9). **p=0.007, ***p=0.0002. g Dữ liệu tóm tắt về quá trình sản xuất TNF trong CD11b cộng với F4/80 cộng với các ô từ PBS và 7-ngày được đào tạo bằng WGP đã được mô phỏng lại bằng LPS. Phần trăm TNF cộng với các ô và MFI của TNF được hiển thị (PBS n=10, WGP n=9). *p=0.0155, ***p=0.0001. h Trọng lượng khối u tương quan với tỷ lệ phần trăm của CD45 cộng với các tế bào miễn dịch là CD11b cộng với (trái) và phần trăm của CD45 cộng với CD11b cộng với tế bào TNF cộng với (phải). (PBS n= 10, WGP n=9). i Dữ liệu tóm tắt về tỷ lệ phần trăm tế bào T cộng với CD4 và CD8 biểu thị IFN (PBS n=10, WGP n=9) Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± SEM. Các hệ số tương quan Pearson được sử dụng để đo lường độ mạnh của các liên kết tuyến tính và các bài kiểm tra t của sinh viên hai đuôi, không ghép đôi được sử dụng theo cách khác. ns không đáng kể. Mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập duy nhất được lặp lại ít nhất hai lần để xác minh kết quả.

CCR2 được đào tạo cộng với các tế bào myeloid là các tế bào hiệu ứng chính trong cơ chế chống khối u.

Do sự ức chế hoàn toàn việc buôn bán tế bào miễn dịch bẩm sinh vào tuyến tụy và đào tạo các tế bào tủy tụy sau khi điều trị bằng WGP ở chuột CCR2 - / -, chúng tôi cho rằng chuột CCR2 - / - cũng sẽ không cho thấy tác dụng miễn dịch chống khối u có lợi của đào tạo WGP . Theo giả thuyết này, CCR2 - / - chuột nhận WGP không cho thấy gánh nặng khối u giảm (Hình 7a) so với chuột WT.

Điều này chứng minh rằng CCR2 là cần thiết cho dòng tế bào miễn dịch bẩm sinh được đào tạo theo hướng WGP vào tuyến tụy và đó là kết quả của các tác dụng chống khối u. Mặc dù tín hiệu CCL2-CCR2 đã được xác định là rất quan trọng trong việc tuyển dụng các đại thực bào có nguồn gốc bạch cầu đơn nhân được đào tạo cho tuyến tụy, chúng tôi cũng muốn biết liệu sự hiện diện của các HSC được đào tạo trong tủy xương và việc tạo ra hệ thống miễn dịch được đào tạo tập trung. một mình là đủ để làm chậm sự phát triển của khối u tụy chỉnh hình.

Để xác nhận thêm chức năng chống khối u trực tiếp của CCR2 cộng với các tế bào myeloid xâm nhập, quần thể CCR2 plus và CCR2- myeloid từ những con chuột được huấn luyện bởi WGP đã được sắp xếp, trộn với các tế bào khối u KPC và cấy ghép trực tiếp vào chuột. Các khối u được trộn với các tế bào CCR2 cộng nhỏ hơn so với các khối được trộn với các tế bào CCR2−, hỗ trợ thêm rằng chính các tế bào CCR2 cộng với các tế bào myeloid đã được đào tạo là một tế bào hiệu ứng chính trong cơ chế chống khối u (Hình 7b). Phân tích CyTOF của các khối u này cho thấy rằng CCR2 cộng với các khối u hỗn hợp có CD11b cộng với các tế bào tủy ít hơn đáng kể và tăng đáng kể CD8 cộng với các tế bào T có trong khối u (Hình 7c, d). Tỷ lệ CD8 cộng với tế bào T: CD11b cộng với tế bào myeloid cũng tăng đáng kể trong điều kiện trộn lẫn CCR2 cộng với (Hình 7e).

Hình 7 Cơ chế tác động chống khối u của điều trị WGP và các mô hình liên quan đến lâm sàng. một con chuột WT và CCR2 - / - được điều trị bằng PBS hoặc WGP và 7 ngày sau đó được cấy các tế bào khối u tuyến tụy KPC chỉnh hình. Trọng lượng khối u vào ngày 21 được báo cáo. (WT PBS n=5, WT WGP n=6, CCR2 PBS n=6, CCR2−/− WGP n=6). **p=0.0027 (WT PBS so với WT WGP), *p=0.0118 (WT WGP so với CCR2−/− PBS), **p=0.0034 (WT WGP so với CCR2−/− WGP). b Các tế bào CD11b cộng với CCR2 plus và CCR2− tuyến tụy được sắp xếp từ những con chuột được huấn luyện WGP được trộn với các tế bào KPC và được cấy ghép chỉnh hình. Kích thước khối u được đánh giá sau 21 ngày (CCR2 cộng với n=5, CCR2− n=5). *p=0.0247. Các sơ đồ c t-SNE được tạo bởi phân tích CyTOF về các khối u trộn từ b. Các cụm thể hiện sự khác biệt đáng kể giữa các nhóm được biểu thị bằng các vòng tròn. Tổng dữ liệu (trái) và biểu đồ t-SNE đại diện của mỗi nhóm được hiển thị. d Phần trăm tổng hợp của các tế bào cộng với CD8 và CD11b trong các khối u hỗn hợp (PBS n=4, WGP n=3). *p=0.01, **p=0.007. e Tỷ lệ của CD8 cộng : CD11b cộng với các tế bào trong các khối u hỗn hợp (PBS n=4, WGP n=3). *p=0.0474. f Biểu hiện của PD-L1 trên các tế bào khối u KPC, tế bào CD11b plus và F4/80 plus trong khối u KPC 21 ngày sau khi cấy ghép (KPC n=5, CD11b plus n=6, F4/80 plus n=6). g Lược đồ thử nghiệm của WGP và liệu pháp chống PD-L1. Chuột (n= 5) được điều trị bằng PBS hoặc WGP và 7 ngày sau đó được cấy khối u tuyến tụy KPC chỉnh hình. Vào các ngày thứ 3, 7 và 11 sau khi cấy ghép, chuột được cho kiểm soát kiểu mẫu IgG2b mAb kháng-PD-L1 hoặc kháng chuột. Sống sót đã được theo dõi. **p=0.0018 (WGP so với PBS hoặc PD-L1), **p=0.0021 (WGP so với WGP cộng với PD-L1). h Lược đồ thử nghiệm của WGP được sử dụng trong môi trường trị liệu. Chuột được cấy khối u tuyến tụy KPC chỉnh hình và được tiêm WGP sau khi chuột hồi phục sau ca phẫu thuật vào ngày thứ 4 và 1 tuần sau đó vào ngày 11. *p=0.0163. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng trung bình ± SEM. ANOVA một chiều với nhiều phép so sánh đã được sử dụng cho a và bài kiểm tra t của học sinh hai đuôi, không ghép đôi được sử dụng cho b, d và e. Kiểm tra thứ hạng log đã được sử dụng cho g và h. ns không đáng kể. Mỗi mẫu đại diện cho một động vật độc lập về mặt sinh học thu được qua một thí nghiệm độc lập duy nhất được lặp lại ít nhất hai lần để xác minh kết quả.

WGP kết hợp với liệu pháp chống PD-L1 mAb để kéo dài thời gian sống sót trong các mô hình PDAC.

Mặc dù đã giảm đáng kể gánh nặng khối u do đào tạo WGP, nhưng có trường hợp tất cả những con chuột đều phát triển khối u gây tử vong. Các nghiên cứu của chúng tôi đã xác định rằng việc điều trị bằng WGP đã tác động mạnh mẽ đến kiểu hình của quần thể tủy trong tuyến tụy.

Mặc dù chúng tôi đã xác định rằng tế bào hiệu ứng chính chịu trách nhiệm về tác dụng chống khối u của WGP là CCR2 cộng với các tế bào đơn nhân/đại thực bào xâm nhập, chúng tôi lập luận rằng những thay đổi miễn dịch này cũng có thể tác động đến TME tổng thể theo cách có thể làm cho các tế bào miễn dịch thích ứng phản ứng nhanh hơn với liệu pháp phong tỏa trạm kiểm soát. Cụ thể, bởi vì chúng tôi đã quan sát thấy sự gia tăng tỷ lệ CD8 cộng với các tế bào T có trong CCR2 cộng với các khối u trộn lẫn (Hình 7c) và cũng đã quan sát thấy biểu hiện PD-L1 đáng kể trên các tế bào myeloid có trong các khối u KPC (Hình 7f), chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng điều trị bằng WGP có thể làm tăng tác dụng của liệu pháp chống PD-L1 mAb.

Để đánh giá liệu liệu pháp kháng PD-L1 mAb có phối hợp với khả năng miễn dịch được huấn luyện do WGP gây ra ở tuyến tụy hay không, những con chuột được điều trị bằng PBS hoặc WGP được cấy các khối u KCP chỉnh hình sau đó được sử dụng kháng thể kháng PD-L1 mAb hoặc kiểm soát kiểu mẫu IgG2b của chuột. Như đã được chứng minh trong một số thử nghiệm lâm sàng, chỉ riêng liệu pháp kháng PD-L1 đã thất bại trong việc kéo dài thời gian sống sót thậm chí vượt xa so với chuột được điều trị bằng mAb kiểm soát kiểu hình IgG2b (Hình 7g). Chuột được huấn luyện bằng WGP sống sót lâu hơn đáng kể so với chuột được điều trị bằng isotype IgG2b và chuột được điều trị bằng thuốc chống PD-L1. Tuy nhiên, sự kết hợp giữa WGP và anti-PD-L1 cùng nhau kéo dài thời gian sống sót một cách hiệu quả nhất. Điều này cho thấy rằng có một lợi ích lâm sàng khi kết hợp WGP với liệu pháp phong tỏa điểm kiểm tra miễn dịch antiPD-L1.

Cho đến nay, việc sử dụng WGP đã được mô tả trong bối cảnh trong đó WGP được quản lý trước khi các tế bào khối u được cấy ghép. Xem xét việc giảm kích thước khối u của mô hình này, chúng tôi cũng đã thử nghiệm một mô hình phù hợp hơn về mặt lâm sàng, trong đó chuột được cấy khối u KPC chỉnh hình và WGP được sử dụng để kích thích khả năng miễn dịch được đào tạo sau đó (Hình 7h). Trong môi trường trị liệu, dòng tế bào myeloid được đào tạo theo hướng WGP đến tuyến tụy cũng được chứng minh là kéo dài thời gian sống sót. Cùng với nhau, những dữ liệu này cho thấy rằng việc bắt đầu miễn dịch được đào tạo ở tuyến tụy bằng WGP có các ứng dụng lâm sàng phù hợp trong điều trị ung thư tuyến tụy cần nghiên cứu và điều tra tịnh tiến hơn nữa.

For more information:1950477648nn@gmail.com