Tác dụng hạ thấp axit uric và cơ chế của acteoside và echinacoside được chiết xuất từ ​​cistanche tubulosa

Tóm tắt:Nhằm mục đích khám phá các tác dụng và cơ chế giảm axit uric của acteoside (AS) và echinacoside (ECH) được chiết xuất từCistanche tubulosa.

Phương phápMô hình chuột tăng huyết áp (HUA) được thiết lập bằng kali oxonate (1,5 g · kg -1 · d -1) kết hợp với adenine (100 mg · kg -1 · d {{6}). Chuột mô hình HUA được chia ngẫu nhiên thành một nhóm kiểm soát mô hình, một nhóm allopurinol (30 mg · kg -1 · d -1), thấp và thấp (50, 100 mg · kg mg · kg -1 · d -1) nhóm liều. Một nhóm kiểm soát bình thường đã được thành lập trước đó. Sau bốn tuần quản trị, máy phân tích sinh hóa máu đã được sử dụng để phát hiện nồng độ SUA urê, CREA, adenosine deaminase (ADA) và axit Uric (UUA) trong nước tiểu. Xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme được sử dụng để phát hiện nồng độ xanthine oxyase (XOD) trong huyết thanh. Mô thận được thu thập, và hệ số thận được cân và tính toán. Nhuộm hematoxylin eosin (HE) được sử dụng để quan sát những thay đổi bệnh lý thận. Hóa mô miễn dịch (IHC) và PCR thời gian thực đã được sử dụng để phát hiện mức độ biểu hiện protein và mRNA của chất vận chuyển urate 1 (URAT1), chất vận chuyển glucose 9 (GLUT9), chất vận chuyển anion hữu cơ 1 (OAT1) và chất vận chuyển anion hữu cơ 3 (OAT3) trong RENAL Kết quả và ECH có thể cải thiện chức năng thận ở chuột mô hình HUA, giảm nồng độ axit uric máu, thúc đẩy bài tiết axit uric, điều hòa nồng độ ADA và XOD trong huyết thanh, và điều chỉnh lại biểu hiện protein và mRNA của URAT1 và GLUT9 trong mô thận, trong khi điều chỉnh lại biểu hiện protein và mRNA.

Kết luận Các glycoside phenylethanoid AS và ECH từ cistanche tubulosa có thể phát huy tác dụng hạ thấp axit uric bằng cách cải thiện chức năng thận ở chuột mô hình HUA, giảm mức ADA và XOD và điều chỉnh biểu hiện của URAT1, GLUT9, OAT1 và OAT3.

Từ khóa: Cistanche tubulosa; acteoside; Echinacoside; tăng huyết áp; giảm axit uric; cơ chế

 

 

 

Chiết xuất cistanche tubulosa với 16% acteoside

Liên hệ với chúng tôi ngay bây giờ

 

 

 

Tăng huyết áp (HUA) là một bệnh chuyển hóa gây ra bởi sự chuyển hóa purine rối loạn trong cơ thể con người, dẫn đến nồng độ axit uric máu tăng cao [1]. Nó thường được chẩn đoán khi nồng độ axit uric máu vượt quá 7. 0 mg · dl⁻⁻ (416. Sự phát triển của tăng huyết áp chủ yếu liên quan đến các yếu tố như chế độ ăn nhiều đường, tiêu thụ rượu mãn tính, sử dụng thuốc và suy giáp. Nó không chỉ làm tăng nguy cơ mắc các bệnh tim mạch, bệnh tiểu đường và tăng huyết áp [3-4}] mà còn ảnh hưởng đáng kể đến sức khỏe của bệnh nhân.

Hiện tại, các phương pháp điều trị lâm sàng cho tăng huyết áp chủ yếu bao gồm các loại thuốc ức chế sản xuất axit uric và thúc đẩy bài tiết axit uric. Tuy nhiên, các phương pháp điều trị này có những hạn chế nhất định đối với bệnh nhân bị suy yếu chức năng gan hoặc thận [5-6]. Do đó, khám phá các loại thuốc hiệu quả với tác dụng phụ thấp có ý nghĩa lớn đối với việc phòng ngừa và điều trị tăng huyết áp.

Cistanche tubulosa (Schenk) R. Wight, thường được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc như một loại thảo mộc gây bệnh thận, được sử dụng để điều trị các tình trạng như bất lực, vô sinh, thiếu hụt tinh chất và máu, yếu ở lưng và đầu gối, yếu cơ và táo bón do khô ruột [7]. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằngCistanche tubulosasở hữu bảo vệ thần kinh [8], chống viêm [9], điều hòa chuyển hóa xương [10] và tác dụng tăng cường hiệu quả trong hóa trị liệu cho bệnh nhân ung thư [11]. Trong số các thành phần hoạt động khác nhau của nó, glycoside phenylethanoid là phong phú nhất.

Acteoside (AS) và echinacoside (ECH), hai glycoside phenylethanoid có hàm lượng cao trongCistanche tubulosa, thể hiện hoạt động sinh học mạnh mẽ và có tiềm năng đáng kể cho sự phát triển và ứng dụng. Do đó, nhóm nghiên cứu của chúng tôi được chọn là và ECH để nghiên cứu thêm. Thông qua các dự đoán dược lý mạng và các thử nghiệm trước ở chuột, chúng tôi đã phát hiện ra rằng chiết xuất glycoside phenylethanoid từCistanche tubulosacó thể có tác dụng hạ thấp axit uric nhất định. Tuy nhiên, các con đường và cơ chế của các hiệu ứng này vẫn chưa rõ ràng.

Do đó, bằng cách sử dụng các cơ chế sản xuất axit uric và các con đường bài tiết chính của nó làm trọng tâm nghiên cứu, chúng tôi đã nghiên cứu các tác dụng hạ thấp axit uric của chiết xuất glycoside phenylethanoid AS và ECH. Nghiên cứu này nhằm mục đích làm sáng tỏ các con đường và cơ chế mà qua đó và ECH phát huy tác dụng hạ thấp axit uric của chúng.

1 vật liệu

1.1 Động vật thí nghiệm

Bảy mươi con chuột Spf-Dawley (SD) của SPF-Dawley (SD), nặng 150 Lỗi180 g, được mua từ Trung tâm động vật thử nghiệm của Đại học Y khoa Tân Cương. Số giấy phép sản xuất động vật: SCXK (Xin) 2023-0001. Thí nghiệm này đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật của Viện Nghiên cứu Y học Uygur của Vùng Tân Cương, với số phê duyệt đạo đức động vật: IACUC- (Zhun) -2024-009.

1.2 Thuốc và thuốc thử

Chiết xuất glycoside phenylethanoid (AS và ECH)từCistanche tubulosa (purity >98%, được xác minh bằng sắc ký lỏng hiệu suất cao) đã được chiết xuất, tinh chế và được chuẩn bị bởi phòng thí nghiệm chính của khoa học công thức Uygur, Viện nghiên cứu y học Uygur tự trị Tân Cương. Số lô: 20220617 (AS) và 20220526 (ECH).

Máy tính bảng allopurinol, Số lô: 62208726, được sản xuất bởi Jiangsu Wanbang Biochemical Dược phẩm Công ty TNHH Công ty TNHH.

Kali oxonateVàadenine, Số lô: I2130050 và C2202255, được mua từ Thượng Hải Aladdin Technology Technology Co., Ltd.

Crea (creatinine), ua (axit uric), urê và ada (adenosine deaminase), Số lô: 141123010, 141223004, 141323008 và 043624005, được mua từ Thâm Quyến Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.

Bộ dụng cụ xét nghiệm hoạt động của XOD (Xanthine oxyase), Số lô: Y10001219, được mua từ Thượng Hải Macklin Technology Co., Ltd.

Kháng thể (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), Số lô: 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, được mua từ Bioscatics ái lực.

IgG chống chuột có nhãn HRP, Số lô: 245440113, được mua từ ZSGB-BIO.

Dung dịch nhuộm hematoxylin, Số lô: 24135741H, được mua từ Bắc Kinh Lanjieke Technology Co., Ltd.

Bộ thuốc thử nhiễm sắc thể Dab, Số lô: 240010512, được mua từ ZSGB-BIO.

DEPC (Diethyl pyrocarbonate), Số danh mục: D 60029-500 ml, được mua từ Amresco (Hoa Kỳ).

M5 Hiclear DL2000 DNA đánh dấu, Số danh mục: MF025, được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Bắc Kinh, Ltd.

Thuốc thử Trizol ™, Số danh mục: 15596026, được mua từ Thermo Fisher Khoa học (Hoa Kỳ).

Mastermix RT All-in-One RT 5XVàEvagreen Express 2 × qPCR Mastermix-Low-Low, Số danh mục: G492 và G891, cả hai đều được mua từ vật liệu sinh học ứng dụng Inc. (ABM).

2 Phương pháp

2.1 Thiết lập và nhóm mô hình

Bảy mươi con chuột đực Sprague-Dawley (SD) được thích nghi và chia thành hai nhóm: một nhóm kiểm soát bình thường (1 0 chuột) và nhóm điều khiển mô hình (60 con chuột). Nhóm kiểm soát bình thường được quản lý 0,5% CMC-NA thông qua Gavage. Nhóm kiểm soát mô hình được sử dụng kali oxonate (1,5 g · kg⁻) kết hợp với adenine (100 mg · kg⁻) với liều 10 ml · kg⁻, mỗi ngày một lần trong 14 ngày liên tiếp. Mô hình được coi là thiết lập thành công khi mức urê, CREA và SUA tăng đáng kể, được đo bằng máy phân tích sinh hóa.

Chuột mô hình tăng huyết áp được chia thành các nhóm sau dựa trên mức SUA, urê và CREA: nhóm kiểm soát mô hình, nhóm allopurinol (3 0 mg · kg⁻) Nhóm ECH (100 mg · kg⁻), với 10 con chuột trong mỗi nhóm. Để duy trì tăng huyết áp ổn định, tất cả các nhóm ngoại trừ nhóm đối chứng bình thường đã được sử dụng kali oxonate (500 mg · kg⁻) kết hợp với adenine (100 mg · kg⁻) thông qua Gavage vào buổi sáng, sau đó là dùng thuốc tương ứng trong mỗi nhóm điều trị vào buổi chiều. Nhóm đối chứng bình thường đã nhận được dung dịch CMC-NA 0,5% vào buổi sáng và nước uống vào buổi chiều với liều 10 ml · kg⁻, mỗi ngày một lần trong 14 ngày liên tiếp. Sau đó, việc quản lý các tác nhân mô hình đã bị dừng lại và các loại thuốc tương ứng được sử dụng liên tục hàng ngày trong 14 ngày nữa.

 

2.2 Bộ sưu tập mẫu

Sau liều cuối cùng, những con chuột được nhịn ăn qua đêm (nước không bị hạn chế). Nước tiểu từ mỗi nhóm được thu thập để thử nghiệm axit uric. Trọng lượng cơ thể được đo sau khi nhịn ăn và các mẫu máu được thu thập dưới gây mê. Huyết thanh được phân tách bằng cách ly tâm và được lưu trữ để sử dụng trong tương lai. Các mô thận được thu thập và cân. Một quả thận đã được cố định trong dung dịch paraformaldehyd 4%, trong khi loại còn lại là đông lạnh trong nitơ lỏng để phân tích thêm.

 

2.3 Đo axit uric trong nước tiểu chuột

Các mẫu nước tiểu từ mỗi nhóm được ly tâm (3, 000 r · min⁻, 10 phút, bán kính ly tâm 14 cm) và phần nổi phía trên được thu thập. Các mẫu nước tiểu được pha loãng 1: 9 với nước muối và được phân tích hàm lượng axit uric bằng máy phân tích sinh hóa.

2.4 Đo ADA, urê, Crea và SUA trong huyết thanh chuột

Các mẫu máu từ mỗi nhóm được ly tâm (3, 000 r · min⁻, 10 phút, bán kính ly tâm 14 cm) và huyết thanh được thu thập. Nồng độ ADA, urê, CREA và SUA trong huyết thanh được đo bằng máy phân tích sinh hóa.

 

2.5 Đo XOD trong huyết thanh chuột

Những thay đổi về nồng độ XOD trong huyết thanh chuột được đo bằng xét nghiệm enzyme theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Độ hấp thụ ban đầu (A₁) và độ hấp thụ cuối cùng (A₂) ở tốc độ 290nm đã được ghi lại và ΔA (ΔA=A₂ - a₁) đã được tính toán. ΔA được thay thế vào công thức:
XOD (nmol⁻⁻ · min⁻⁻ · ml⁻⁻)=[Δa × hệ thống phản ứng tổng thể tích ÷ (hệ số tuyệt chủng mol của axit uric × chiều dài đường quang) × 10⁹],
Để tính toán lượng axit uric được xúc tác mỗi phút trên mỗi ml huyết thanh.

 

2.6 Đo hệ số thận

Các mô thận được thu thập, rửa bằng nước muối và nước thừa được loại bỏ. Trọng lượng cơ quan được đo chính xác và hệ số thận được tính toán như sau:
Hệ số thận=Trọng lượng thận (mg) / trọng lượng cơ thể (g).

 

2.7 Quan sát mô bệnh học của mô thận bằng cách anh ta nhuộm

Các mô thận cố định trong dung dịch paraformaldehyd 4% được khử nước với nồng độ ethanol được phân loại, được làm sạch bằng xylene, được nhúng trong parafin và được chia thành các lát {1}} μm. Các phần được khử trùng bằng xylen, ngậm nước với ethanol được phân loại, nhuộm màu hematoxylin và eosin (HE), và được niêm phong bằng kẹo cao su trung tính. Những thay đổi hình thái trong mô thận được quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng và hình ảnh được chụp ở độ phóng đại 400 ×.

 

2.8 Phát hiện biểu hiện protein URAT1, GLUT9, OAT1 và OAT3 trong mô thận của IHC

Các mô thận cố định trong dung dịch paraformaldehyd 4% được khử nước với nồng độ ethanol được phân loại, được làm sạch bằng xylen, được nhúng trong parafin và cắt. Việc thu hồi kháng nguyên và chặn huyết thanh dê đã được thực hiện. Các kháng thể chính (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) đã được thêm vào với độ pha loãng 1: 200 và được ủ qua đêm ở 4 độ. Ngày hôm sau, các phần được rửa bằng PBS, sấy khô không khí và được ủ với IgG chống chuột có nhãn biotin ở 37 độ trong 30 phút. Các phần được rửa bằng PBS và được ủ với thuốc thử DAB DAB trong 10 phút, sau đó rửa sạch PBS, nhuộm hematoxylin trong 3 phút, biệt hóa với dung dịch ethanol axit clohydric, xanh lithium cacbonat, khử nước bằng ethanol độ dốc, làm sạch bằng xylene, và niêm phong với neutral.

Đối với mỗi con chuột, hai trường 4 0 0 × của các phần thận đã được chọn. Nhuộm dương (màu vàng nâu) đã được phân tích và mật độ quang tích hợp (IOD) của mỗi trường được đo bằng Image-Pro Plus 6.0 để phân tích thống kê.