Đặc điểm của miễn dịch tế bào T ở những bà mẹ bị nhiễm vi-rút viêm gan B mãn tính với giá vé Alanine Transaminase sau sinh
May 15, 2023
trừu tượng
Lý lịch:
Giá vé alanine transaminase (ALT) sau sinh xảy ra thường xuyên ở những bà mẹ bị nhiễm vi-rút viêm gan B mãn tính (HBV) - được điều trị bằng thuốc kháng vi-rút trước sinh (AVT). Chúng tôi nhằm mục đích mô tả đặc điểm khả năng miễn dịch tế bào T ở những bà mẹ bị nhiễm HBV trải qua giá vé ALT sau sinh.
phương pháp:
Hai mươi phụ nữ mang thai nhiễm HBV được điều trị AVT ở tuần 26–28 của thai kỳ đã được ghi danh và theo dõi cho đến 15–18 tuần sau khi sinh. Trong số 20 phụ nữ mang thai bị nhiễm HBV, 6 người có ALT sau khi sinh (bà mẹ AF), trong khi 14 người thì không (bà mẹ NAF). Các kiểu hình và chức năng của tế bào lympho T được phân tích bằng phương pháp tế bào học dòng chảy.
Có một mối quan hệ nhất định giữa alanine aminotransferase (ALT) sau sinh và khả năng miễn dịch. Alanine aminotransferase là một loại enzyme ở màng trong của tế bào gan, tham gia vào quá trình chuyển hóa axit amin và có độ nhạy cảm cao với tổn thương tế bào gan. Trong thời kỳ hậu sản, men alanine aminotransferase có thể tăng cao do sự điều chỉnh của cơ thể trong quá trình mang thai và sinh nở. ALT cao có thể phản ánh chức năng gan bị suy giảm, có thể dẫn đến giảm khả năng miễn dịch. Gan là cơ quan miễn dịch quan trọng trong cơ thể con người. Chức năng gan suy giảm có thể ảnh hưởng đến khả năng miễn dịch của cơ thể, ảnh hưởng đến khả năng chống lại mầm bệnh của cơ thể và gây ra các bệnh khác nhau.
Do đó, ALT cao sau sinh có thể cho thấy khả năng miễn dịch của cơ thể bị suy yếu, cần tăng cường điều chỉnh thói quen sinh hoạt và chế độ dinh dưỡng để nâng cao khả năng miễn dịch và duy trì sức khỏe của gan. Đồng thời, khi mẹ bị ALT cao nên kịp thời đi khám để tìm ra nguyên nhân và tiến hành điều trị tương ứng. Từ quan điểm này, tầm quan trọng của khả năng miễn dịch là rất quan trọng. Ngoài ra đối với phụ nữ mang thai, chúng ta cũng nên chú ý đến khả năng miễn dịch, đặc biệt là nâng cao khả năng miễn dịch. Cistanche có thể cải thiện đáng kể khả năng miễn dịch. Cistanche rất giàu các chất chống oxy hóa khác nhau, chẳng hạn như vitamin C, carotenoid, v.v. Những thành phần này có thể loại bỏ các gốc tự do, giảm stress oxy hóa và cải thiện sức đề kháng của hệ thống miễn dịch.
Nhấp vào lợi ích cistanche tubulosa
Kết quả:
So với các bà mẹ NAF, nồng độ HBsAg định lượng ở các bà mẹ AF giảm đáng kể sau 6–8 hoặc 15–18 tuần sau sinh. Sự khác biệt đáng kể về mức độ HBeAg giữa các nhóm này chỉ được tìm thấy khi sinh. Số lượng tế bào T điều tiết (Treg) ở các bà mẹ AF thấp hơn so với các bà mẹ NAF trước AVT; tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể về số Treg tại các điểm theo dõi khác. Biểu hiện của các kiểu hình tế bào T khác là tương tự nhau giữa hai nhóm. Tế bào T ở bà mẹ AF sản xuất nhiều cytokine tiền viêm (IFN-, IL-21, TNF-, IL-2) hoặc ít cytokine chống viêm (IL-10) hơn so với tế bào T ở bà mẹ NAF các bà mẹ trước, trong hoặc sau khi điều trị bằng thuốc kháng vi-rút. Tỷ lệ IFN- trên IL-10 được sản xuất bởi CD4 cộng với tế bào T hoặc CD8 cộng với tế bào T ở những bà mẹ AF cao hơn so với những bà mẹ NAF trong khi mang thai hoặc sau khi sinh.
kết luận:
Các đặc điểm của khả năng miễn dịch tế bào T là khác biệt giữa những bà mẹ có giá trị ALT sau sinh và những người không có giá trị ALT từ khi mang thai đến sau khi sinh, điều này cho thấy khả năng miễn dịch tế bào T có thể liên quan đến giá trị ALT sau sinh.
từ khóa:
Virus viêm gan B, Sau khi sinh, Giá vé Alanine transaminase, Miễn dịch tế bào T.
Lý lịch
Trên toàn cầu, nhiễm vi-rút viêm gan B (HBV) tiếp tục là một vấn đề sức khỏe cộng đồng lớn. Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) ước tính rằng vào năm 2015, có 257 triệu người đang chung sống với nhiễm HBV mạn tính và các bệnh liên quan đến HBV đã dẫn đến 887000 ca tử vong hàng năm trên toàn thế giới [1]. Ở các quốc gia có dịch lưu hành cao, lây truyền từ mẹ sang con (MTCT) là con đường lây truyền chính của HBV; khoảng 40–50 phần trăm bệnh nhân HBsAg cộng với bị nhiễm trùng qua MTCT [2]. Theo ước tính mới nhất của WHO, tỷ lệ trẻ em dưới 5 tuổi bị nhiễm vi rút viêm gan B mạn tính đã giảm từ 5% trong giai đoạn trước khi tiêm chủng từ những năm 1980 đến đầu những năm 2000 xuống dưới 1% vào năm 2019 [1] .
Giảm tỷ lệ mắc MTCT vẫn là một thách thức lớn. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng mức độ HBV DNA ở những bà mẹ bị nhiễm HBV là một yếu tố nguy cơ độc lập đối với MTCT [3–5]. Đã có báo cáo rằng MTCT không xảy ra ở những bà mẹ có tải lượng vi rút < 6 log10 bản sao/mL [6]. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng cùng với việc tiêm vắc-xin HBV và globulin miễn dịch, liệu pháp kháng vi-rút trước sinh (AVT) có thể làm giảm hơn nữa tỷ lệ MTCT ở phụ nữ mang thai có tải lượng vi-rút cao [7-9]. Các nghiên cứu trước đây chủ yếu tập trung vào tính hiệu quả và an toàn của AVT, cũng như xác suất và mức độ nghiêm trọng của đợt bùng phát alanine transaminase (ALT) ở mẹ sau khi sinh [10]. Đặc điểm của đợt bùng phát ALT sau sinh chủ yếu là những bất thường nhẹ đến trung bình, có thể tự khỏi ở phần lớn các bà mẹ [11]. Hiện tại, liệu can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút trong thai kỳ có làm tăng tỷ lệ bùng phát ALT sau sinh hay không vẫn còn gây tranh cãi [7, 12, 13].
Mang thai thành công phụ thuộc vào hệ thống miễn dịch của người phụ nữ mang thai, hệ thống này không chỉ cần dung nạp các kháng nguyên của người cha mà còn cần bảo vệ người phụ nữ và thai nhi đang phát triển chống lại mầm bệnh xâm nhập [14]. Trong các giai đoạn khác nhau của thai kỳ, hệ thống miễn dịch của phụ nữ mang thai có sự thay đổi mạnh mẽ. Miễn dịch tiền viêm chiếm ưu thế trong ba tháng đầu của thai kỳ, trong khi giai đoạn thứ hai của thai kỳ chủ yếu là chống viêm. Miễn dịch tiền viêm lại chiếm ưu thế trong giai đoạn cuối của thai kỳ [15]. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng tần số tế bào T điều hòa (Treg) trong máu ngoại vi của phụ nữ mang thai giảm trong thời kỳ mang thai, điều này có thể do thay đổi nồng độ estrogen và progesterone [16]. Sự giảm này cũng có thể xảy ra do Treg của mẹ di chuyển đến bề mặt của mẹ-thai để ngăn chặn sự đào thải của mẹ-thai, dẫn đến tần số Treg trong máu ngoại vi giảm [17].
Vì vậy, tình trạng miễn dịch của phụ nữ mang thai nhiễm HBV mạn tính khác với tình trạng miễn dịch của phụ nữ nhiễm HBV mạn tính nhưng không mang thai. Những thay đổi này đảo ngược nhanh chóng sau khi sinh. Các giả thuyết hiện tại suy luận rằng những thay đổi trong hệ thống miễn dịch trong thời kỳ mang thai có thể là nguyên nhân dẫn đến tỷ lệ ALT sau sinh cao ở phụ nữ nhiễm HBV [18]. Tuy nhiên, các đặc điểm miễn dịch của các bà mẹ bị nhiễm HBV trải qua giá vé ALT sau sinh chưa được nghiên cứu.
Nghiên cứu này nhằm mục đích mô tả khả năng miễn dịch tế bào T của các bà mẹ bị nhiễm HBV và khám phá các cơ chế miễn dịch của giá trị ALT sau sinh bằng cách so sánh khả năng miễn dịch tế bào T của các bà mẹ nhiễm HBV đã trải qua giá trị ALT sau sinh với các bà mẹ nhiễm HBV không có giá trị ALT.
những bệnh nhân và những phương pháp
Người bệnh
Từ tháng 9 năm 2017 đến tháng 4 năm 2020, 20 phụ nữ mang thai bị nhiễm HBV mạn tính đã được can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút dự phòng (telbivudine hoặc tenofovir) để phòng ngừa MTCT đã được ghi danh và theo dõi tại Bệnh viện Nam Phương ở Quảng Châu, Trung Quốc. Những phụ nữ mang thai này đang trong giai đoạn dung nạp miễn dịch đối với nhiễm HBV mạn tính khi đăng ký, cho thấy HBeAg dương tính, mức ALT bình thường và mức DNA HBV cao (Lớn hơn hoặc bằng 6 log10 IU/mL) trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút. Tất cả các đối tượng được tuyển dụng cho nghiên cứu này đều âm tính với vi rút viêm gan C và vi rút gây suy giảm miễn dịch ở người. Ngoài ra, những người được điều trị đồng thời liên quan đến thuốc gây độc tế bào, chất điều hòa miễn dịch và glucocorticoid, cũng như những người mắc bệnh ác tính toàn thân, xơ gan, bệnh tim hoặc rối loạn chức năng thận đều bị loại trừ.
AVT ngắn hạn được thực hiện cho các đối tượng bắt đầu từ tuần 26–28 của thai kỳ cho đến khi sinh. Họ được thăm khám vào tuần 26–28 của thai kỳ (trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút), 1 tháng sau khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút, khi sinh, 6–8 tuần sau sinh và 15–18 tuần sau sinh. Giá vé ALT được xác định là Lớn hơn hoặc bằng 2×giới hạn trên của mức bình thường (ULN). Các bà mẹ có ALT (bà mẹ AF) là những bà mẹ bị nhiễm HBV trải qua giá vé ALT sau sinh (n=6), trong khi những bà mẹ không có ALT (bà mẹ NAF) là những bà mẹ bị nhiễm HBV có ALT sau sinh<2×ULN (n=14).
Đánh giá về virus học và huyết thanh học
Nồng độ HBsAg và HBeAg trong huyết thanh được đo bằng xét nghiệm Roche Elecsys (Roche, Basel, Thụy Sĩ). Nồng độ HBV DNA trong huyết thanh được xác định định lượng bằng phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực (PCR) bằng cách sử dụng bộ chẩn đoán axit nucleic thương mại (Sansure Biotech, Changsha, China) với giới hạn phát hiện (LOD) thấp hơn là 100 IU/mL. Các dấu hiệu huyết thanh học và xét nghiệm HBV DNA được thực hiện tại Phòng thí nghiệm nghiên cứu viêm gan virut, Bệnh viện Nam Phương (Quảng Châu, Trung Quốc). Nồng độ ALT huyết thanh và aspartate transaminase (AST) được kiểm tra tại Khoa xét nghiệm lâm sàng của Bệnh viện Nam Phương (Quảng Châu, Trung Quốc).
Phân tích tế bào học dòng tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC)'
Các mẫu tĩnh mạch máu ngoại vi được lấy từ từng phụ nữ trước, trong và sau khi ngừng can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút. PBMC được phân lập bằng ly tâm gradient mật độ Ficoll–Hypaque và bảo quản lạnh trong nitơ lỏng để phân tích sau [19]. Đối với phân tích tế bào học dòng chảy, các PBMC đã rã đông được nhuộm bằng vết tế bào chết có thể sửa chữa Live/Dead (eBioscience, San Diego, CA, USA) trong 10 phút ở nhiệt độ phòng. Sau đó, các tế bào này được nhuộm trong 30 phút ở 4 độ trong bóng tối bằng cách sử dụng các kháng thể (abs) sau: phức hợp protein diệp lục peridinin (PerCP)–Cy5.5- hoặc fluorescein isothiocyanate (FITC)-antiCD4 (nhân bản SK3 và RAP -T4, tương ứng; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), FITC- hoặc allophycocyanin (APC)-anti-CD8 (nhân bản RPA-T8; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), phycoerythrin (PE)-anti -CD45RA (HI100; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), PE–CY7-anti-CD62L (bản sao DREG-56; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), PE–CY 7-anti-CD25 (bản sao M-A251; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), APC-anti-CD69 (bản sao FN50; Biolegend, San Diego, CA, USA), PE–CY{{34 }}anti-CD38 (bản sao HIT2; BioLegend, San Diego, CA, USA) và PE-anti-PD-1 (bản sao MIH4; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA). Việc nhuộm màu APC-anti-forkhead P3 (FOXP3; clone PCH101; eBioscience, San Diego, CA, USA) được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các tế bào nhuộm màu được đánh giá bằng phương pháp tế bào học dòng chảy bằng hệ thống BD FACSDiva (BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) và dữ liệu được phân tích bằng phần mềm FlowJo (TreeStar Inc., Ashland, OR, USA) [20].
Phân tích tế bào học dòng nhuộm cytokine nội bào (ICS)
Để phân tích quá trình sản xuất cytokine nội bào, 5×105 tế bào/giếng được kích thích bằng 5 ug/mL kháng thể đơn dòng kháng CD3 (mAb; clone 145-2C11; BD Bioscatics) và 5 ug/mL mAb kháng CD28 hòa tan (bản sao 37.51; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) trong 96-đĩa có đáy dày ở nhiệt độ 37 độ trong 24 giờ. Brefeldin A (10 ug/mL; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) được thêm vào trong 6 giờ ủ cuối cùng. Các tế bào được nhuộm bằng vết tế bào chết Live/Dead Fixable (eBioscience, San Diego, CA, USA) ở nhiệt độ phòng. Sau khi rửa sạch, các tế bào được nhuộm bằng PerCP-Cy5.5-antiCD4 và FITC-anti-CD8 ở 4 độ trong 30 phút. Các tế bào nhuộm màu bề mặt được cố định và thấm bằng thuốc thử cố định/thấm (BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) trong 20 phút, sau đó nhuộm bằng PE–Cy7-anti interferon (IFN)-y (nhân bản B27; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), PE-anti-interleukin (IL)-10 (bản sao JES3-9D7; Biolegend, San Diego, CA, USA), PE-anti- IL-21 (bản sao 3A3-N2.1; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), APCyếu tố hoại tử chống khối u (TNF)- (bản sao 6401.1111; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA), PE-anti-IL-2 (nhân bản MQ1-17H12; BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) và PE-Cy7-anti-IL{{55} } (bản sao 8D4-8; BD Bioscatics San Jose, CA, USA) trong 30 phút. Các phân tích được thực hiện bằng hệ thống BD FACSDiva (BD Bioscatics, San Jose, CA, USA) và chương trình FlowJo (TreeStar Inc., Ashland, OR, USA) [21].
Phân tích thống kê
Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung vị với khoảng tin cậy (CI) 95 phần trăm hoặc phạm vi liên vùng. Thử nghiệm Mann–Whitney U không tham số được sử dụng để phân tích thống kê dựa trên các thử nghiệm giả thuyết hai phía bằng phần mềm GraphPad Prism (v.8.0; GraphPad Software, San Diego, CA, USA). giá trị P<0.05 were considered significant.
Kết quả
Đặc điểm lâm sàng của bà mẹ nhiễm HBV mạn tính
The clinical characteristics are comparable between the AF mothers and the NAF mothers. No statistically significant differences were found between the two groups in terms of age, number of births, weeks of gestation, AVT duration, or delivery methods. The levels of ALT or AST in HBV-infected mothers from the AF group or NAF group were all within the normal range before the antiviral intervention, and the median levels of ALT (interquartile range) were 22.00 (15.50, 23.50) and 21.00 (15.75, 24.25) U/L, respectively, while the median levels of AST (interquartile range) were 21.00 (16.50, 29.00) and 19.00 (16.75, 21.25) U/L, respectively, and no statistically significant differences were found. ALT and AST were within 1×ULN during antiviral treatment in the NAF mothers (including one month after antiviral intervention and at delivery), while one mother from the AF mothers had ALT over 2×ULN and her ALT levels returned to normal at delivery. Other AF mothers maintained ALT and AST levels in the normal range (1×ULN) during the antiviral intervention. At 6–8 weeks postpartum, 2 mothers (33.33%) from the AF group developed transient ALT>2×ULN. Another 4 mothers had ALT>2×ULN sau 15–18 tuần sau sinh. Hai bà mẹ thuộc nhóm AF tiếp tục có ALT bất thường và điều trị bằng thuốc kháng vi-rút đã được bắt đầu lại sau khi sinh (Bảng 1).
Đặc điểm virus học và huyết thanh học của bà mẹ nhiễm HBV trong thời kỳ mang thai và sau khi sinh
Nồng độ trung bình của HBsAg ở các bà mẹ AF thấp hơn so với các bà mẹ NAF trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút, trong AVT hoặc sau khi ngừng điều trị bằng thuốc kháng vi-rút sau khi sinh. Sự khác biệt đáng kể chỉ được tìm thấy ở 6–8 tuần và 15–18 tuần sau khi sinh (p=0.459, p=0.294, p=0.415, p=0 .027, p=0.021). Tất cả các bà mẹ đều bị giảm nhẹ nồng độ HBsAg trong AVT và tăng nồng độ sau khi sinh (Hình 1A). Ngoài ra, nồng độ HBeAg ở nhóm AF thấp hơn so với nhóm NAF ở 5 thời điểm theo dõi từ 26 – 28 tuần tuổi thai đến 15 – 18 tuần sau sinh, chỉ khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa 2 nhóm. xảy ra khi giao hàng (p=0.035) (Hình 1 B). Liên quan đến nồng độ HBV DNA, không có sự khác biệt đáng kể nào được tìm thấy giữa các bà mẹ AF và NAF tại bất kỳ điểm theo dõi nào (Hình 1C).
So sánh các kiểu hình tế bào CD4 cộng với tế bào T của các bà mẹ AF và NAF trước, trong và sau AVT
Để phân tích các đặc điểm của CD4 cộng với kiểu hình tế bào T ở các bà mẹ AF, chúng tôi đã so sánh sự khác biệt trong biểu hiện kiểu hình của CD4 cộng với tế bào T dựa trên sự hiện diện của CD45RA, CD62L, CD38, CD69 và PD-1 giữa AF và Các nhóm NAF trước, trong và sau khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút (Hình 2A–E). Không có sự khác biệt đáng kể nào được quan sát thấy trong biểu hiện của CD45RA, CD62L, CD38 hoặc PD-1 của CD4 cộng với các tế bào T tại bất kỳ điểm theo dõi nào. Tuy nhiên, chúng tôi nhận thấy rằng dấu hiệu kích hoạt CD69 được biểu thị bằng CD4 cộng với tế bào T ở các bà mẹ AF với tỷ lệ cao hơn đáng kể so với các bà mẹ NAF ở tuần 26–28 của thai kỳ (trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút) và 15–18 tuần sau khi sinh (p=0.04, p=0.04) (Hình 2D). Chúng tôi đã kiểm tra thêm số lượng Treg (CD4 cộng với CD25 cộng với Foxp3 cộng với ) giữa hai nhóm trước, trong và sau khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút và nhận thấy rằng số lượng Treg ở các bà mẹ AF cao hơn đáng kể so với các bà mẹ NAF trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút (tức là khi thai được 26–28 tuần) (p=0.02). Không có sự khác biệt đáng kể về số lượng Treg giữa hai nhóm trong và sau khi ngừng can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút (Hình 2F).
So sánh CD8 cộng với kiểu hình tế bào T của AF và các bà mẹ NAF trước, trong và sau AVT
Biểu đồ FACS đại diện hiển thị kiểu hình của CD8 cộng với tế bào T dựa trên sự hiện diện của CD45RA, CD62L, CD38, CD69 và PD-1 được hiển thị trong Hình 3A. Từ 26 đến 28 tuần thai cho đến 15–18 tuần sau khi sinh, số lượng CD8 cộng với CD45RA cộng với tế bào, CD8 cộng với CD62L cộng với tế bào, CD8 cộng với CD38 cộng với tế bào, CD8 cộng với CD69 cộng với tế bào và CD8 cộng với PD-1 cộng với các tế bào tương tự nhau giữa các bà mẹ AF và NAF (Hình 3B, F).
Tế bào CD4 cộng với T ở các bà mẹ AF sản xuất nhiều cytokine tiền viêm hơn
Sau khi kích thích chống CD3/chống CD28, chúng tôi đã phân tích mức độ của các cytokine được tiết ra bởi CD4 cộng với các tế bào T ở 6 bà mẹ AF và 14 bà mẹ NAF bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Biểu đồ chấm FACS đại diện của quá trình sản xuất cytokine từ CD4 cộng với tế bào T được thể hiện trong Hình 4A. Trước khi điều trị bằng thuốc kháng vi-rút (ở tuần 26–28 của thai kỳ, Hình 4B), CD4 cộng với tế bào T ở các bà mẹ AF tiết ra nhiều IFN- , IL-21 và IL-2 hơn CD4 cộng với tế bào T ở NAF các bà mẹ (p=0.007, p=0.035, p=0.021). Ngoài ra, có vẻ như sự bài tiết TNF- của CD4 cộng với tế bào T ở các bà mẹ AF cao hơn ở các bà mẹ NAF (p=0.087). Tuy nhiên, so với CD4 cộng với các tế bào T từ các bà mẹ NAF, các tế bào từ các bà mẹ AF cho thấy khả năng tiết ra cytokine kháng viêm IL-10 (p=0.024) giảm. Sự bài tiết IL-4 của CD4 cộng với tế bào T không khác biệt đáng kể giữa hai nhóm (p > 0,999) (Hình 4B). Trong AVT (bao gồm một tháng sau khi điều trị bằng thuốc kháng vi-rút và khi sinh), không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê trong việc tiết ra các loại cytokine khác nhau bởi CD4 cộng với tế bào T giữa các bà mẹ AF và NAF (Hình 4C, D). Sau khi ngừng can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút (bao gồm cả 6–8 tuần sau sinh và 15–18 tuần sau sinh), khả năng CD4 cộng với tế bào T tiết ra IFN- ở các bà mẹ AF cao hơn so với các bà mẹ NAF (p=0.049 , p=0.035). Hơn nữa, các bà mẹ AF thể hiện sự bài tiết IL-10 suy giảm ở 15–18 tuần sau khi sinh (p=0.004) (Hình 4E, F). Cuối cùng, khi so sánh tỷ lệ tần số của tế bào T tiết CD4 cộng với IFN với tế bào IL-10-tiết CD4 cộng với tế bào T ở các bà mẹ AF với các bà mẹ NAF ở tất cả các thời điểm theo dõi, chúng tôi thấy rằng tỷ lệ ở các bà mẹ AF cao hơn đáng kể so với ở những bà mẹ NAF (p=0.002, p=0.046, p=0.001, p=0.005) trước khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút, một tháng sau khi can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút, khi sinh và sau 15–18 tuần sau sinh. Vào 6–8 tuần sau khi sinh, không có sự khác biệt đáng kể về tỷ lệ các cytokine tiền viêm/chống viêm được sản xuất bởi CD4 cộng với tế bào T, nhưng xu hướng tương tự cũng được quan sát thấy (p=0.072) (Hình. 4G).
CD8 cộng với các tế bào T từ các bà mẹ AF tạo ra nhiều cytokine tiền viêm hơn
Biểu đồ FACS đại diện chấm các cytokine tiền viêm (IFN- , IL-21, TNF- và IL-2) và các cytokine chống viêm (IL-4 và IL-10 ) được sản xuất bởi CD8 cộng với các tế bào T được hiển thị trong Hình 5A. Khi so sánh sự bài tiết cytokine tiền viêm và kháng viêm từ CD8 cộng với tế bào T ở các bà mẹ AF với các bà mẹ NAF trước, trong và sau AVT, chúng tôi thấy rằng lượng IFN- -bài tiết CD8 cộng với Tế bào T ở các bà mẹ AF cao hơn đáng kể so với các bà mẹ NAF ở tuần 26–28 của thai kỳ và 6–8 tuần sau khi sinh (p=0.046, p=0.035). Lượng IL-10-tiết CD8 cộng với tế bào T trong nhóm NAF cao hơn đáng kể so với nhóm AF ở tất cả các điểm theo dõi (p=0.005, p=0. 044, p=0.039, p=0.025, p=0.002) (Hình 5B–F). Ngoài ra, sau khi phân tích tỷ lệ giữa IFN- -tiết CD8 cộng với tế bào T so với IL-10-tiết CD8 cộng với tế bào T tại mỗi điểm theo dõi, các bà mẹ AF được phát hiện có tỷ lệ cao hơn đáng kể các tế bào này so với các bà mẹ NAF trước và sau khi ngừng AVT (6–8 tuần sau sinh và 15–18 tuần sau sinh) (p=0.007, p=0.046, p{{50} }.027). Tỷ lệ trung bình của các bà mẹ AF cao hơn so với các bà mẹ NAF ở tuần 30–32 của thai kỳ hoặc khi sinh, nhưng không quan sát thấy sự khác biệt đáng kể nào (p=0.127, p=0.058) (Hình 5G). Tóm lại, khả năng tiết ra các yếu tố gây viêm của CD8 cộng với tế bào T ở nhóm AF cao hơn so với nhóm NAF, trong khi khả năng tiết ra yếu tố chống viêm IL-10 yếu hơn đáng kể so với nhóm nhóm NAF.
Cuộc thảo luận
Trong những năm gần đây, các hướng dẫn về viêm gan B khuyến cáo rằng nên thực hiện can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút cho phụ nữ mang thai có nồng độ HBV DNA cao để ngăn chặn MTCT và ngừng sử dụng sau khi sinh [22–24]. Đã có báo cáo rằng một số bà mẹ bị nhiễm HBV đã trải qua các biện pháp can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút vào cuối thai kỳ đã trải qua tình trạng tăng ALT sau sinh sau khi ngừng thuốc [25–28]. Cỡ mẫu lớn và nghiên cứu hồi cứu cho thấy nồng độ ALT tăng cao và nồng độ HBV DNA có thể phát hiện được khi sinh là các yếu tố nguy cơ độc lập đối với bệnh hậu sản [27]. Tuy nhiên, dữ liệu về miễn dịch tế bào T ở bệnh nhân nhiễm HBV có bất thường ALT sau sinh còn hạn chế. Do đó, trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã tìm cách kiểm tra khả năng miễn dịch tế bào T của những bà mẹ bị nhiễm HBV đã trải qua giá vé ALT sau sinh, để khám phá các cơ chế miễn dịch có thể làm cơ sở cho giá vé ALT sau sinh.
Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy 95 phần trăm (19/20) phụ nữ mang thai bị nhiễm HBV duy trì mức ALT bình thường trong giai đoạn kháng vi-rút. Giá vé ALT sau sinh xuất hiện ở 30 phần trăm (6/20) bà mẹ có HBsAg cộng /HBeAg cộng sau khi ngừng can thiệp bằng thuốc kháng vi-rút, trong đó 4 trường hợp tự nhiên trở lại bình thường và 2 trường hợp còn lại cần bắt đầu lại điều trị bằng thuốc kháng vi-rút. Chúng tôi thấy rằng nồng độ HBsAg ở những bà mẹ AF thấp hơn đáng kể so với những bà mẹ NAF ở tuần 6–8 và 15–18 tuần sau khi sinh. Kết quả này cho thấy những bà mẹ nhiễm HBV mạn tính có nồng độ HBsAg thấp hơn dễ bị ALT sau khi sinh.
Đã có báo cáo rằng tổn thương gan sau sinh có thể xảy ra do thay đổi tình trạng miễn dịch của người mẹ [11, 18]. Trong nghiên cứu này, chúng tôi phát hiện ra rằng trước khi điều trị bằng thuốc kháng vi-rút (ở tuần thứ 26–28 của thai kỳ), so với lượng Treg ở bà mẹ NAF, lượng Treg ở bà mẹ AF giảm và tế bào T ở bà mẹ AF tiết ra lượng cytokine tiền viêm cao hơn đáng kể. (IFN- , IL-21, IL-2) và lượng cytokine chống viêm (IL-10) ít hơn. Tỷ lệ của cytokine tiền viêm (IFN- ) so với cytokine chống viêm (IL-10) trong CD4 cộng hoặc CD8 cộng với tế bào T ở những bà mẹ AF cao hơn so với những bà mẹ NAF trước, trong hoặc sau AVT. Treg hiện được công nhận là tế bào CD4 cộng với T có tác dụng ức chế miễn dịch đáng kể. Việc duy trì khả năng dung nạp miễn dịch chủ yếu được biểu hiện bằng việc Tregs có tác dụng ức chế miễn dịch đối với các phản ứng của tế bào T đặc hiệu với HBV, dẫn đến nhiễm trùng mãn tính [29, 30]. Ngoài ra, các cytokine tiền viêm (chẳng hạn như IFN- và IL-12) ngăn chặn khả năng dung nạp miễn dịch và tiêu diệt vi rút, trong khi các cytokine chống viêm (IL-10) duy trì khả năng dung nạp miễn dịch [31, 32].
So với các bà mẹ NAF, các bà mẹ AF có tần suất Treg thấp hơn ở tuần 26–28 của thai kỳ, khả năng miễn dịch chống viêm mạnh hơn và khả năng miễn dịch chống viêm yếu hơn từ 26 đến 28 tuần tuổi thai đến 15–18 tuần sau sinh. Những kết quả này chỉ ra rằng các bà mẹ bị nhiễm HBV có các đặc điểm khác biệt về miễn dịch tế bào T, đóng vai trò quan trọng trong giá vé ALT sau sinh. Những bà mẹ có tần số Treg thấp hơn và tỷ lệ cytokine tiền viêm cao hơn so với cytokine chống viêm trong các tế bào T CD4 cộng hoặc CD8 cộng sẽ có nhiều khả năng gặp phải tình trạng ALT sau sinh. Từ trên, chúng tôi suy luận rằng khi khả năng miễn dịch tiền viêm chiếm ưu thế (nghĩa là tế bào T tiết ra nhiều cytokine tiền viêm hơn và ít cytokine chống viêm hơn; lượng Treg giảm) ở phụ nữ mang thai bị nhiễm HBV, khả năng dung nạp miễn dịch của bệnh nhân có xu hướng giảm. bị suy giảm, do đó giá vé ALT sau sinh có nhiều khả năng xảy ra hơn.
Bởi vì sự khác biệt về cấu hình của các cytokine tiền viêm/chống viêm đã tồn tại ngay từ 26–28 tuần của thai kỳ (trước AVT) và vẫn có ý nghĩa cho đến 15–18 tuần sau sinh, chúng tôi đã xem xét các đặc điểm khác biệt đó của miễn dịch tế bào T không phải do AVT cũng như tình trạng thai nghén gây ra. Lúc ban đầu, các bà mẹ bị nhiễm HBV biểu hiện các đặc điểm khác biệt của khả năng miễn dịch tế bào T, mặc dù các thông số sinh hóa của họ là bình thường. Do đó, cần theo dõi nồng độ ALT sau sinh ở phụ nữ mang thai nhiễm HBV mạn tính và cần chú ý nhiều hơn đến những người có ALT vì họ có khả năng trải qua quá trình chuyển đổi từ giai đoạn dung nạp miễn dịch sang giai đoạn thanh thải miễn dịch.
Nghiên cứu này bị hạn chế do thiếu phân tích theo dõi lâu dài về HBsAg cộng với /HBeAg cộng với những bà mẹ có tải lượng vi-rút cao không trải qua AVT; do đó, chúng tôi không thể phân tích liệu AVT có ảnh hưởng đến tỷ lệ mắc và mức độ nghiêm trọng của giá vé ALT sau sinh hay không. Ngoài ra, cỡ mẫu của nghiên cứu này nhỏ, đặc biệt là ở nhóm AF. Cần nhiều nghiên cứu hơn với cỡ mẫu lớn hơn để xác nhận thêm kết quả của nghiên cứu này.
Phần kết luận
Trong nghiên cứu này, chúng tôi thấy rằng các đặc điểm của miễn dịch tế bào T là khác biệt giữa các bà mẹ AF và NAF từ khi mang thai đến sau khi sinh. Khả năng miễn dịch tế bào T ở các bà mẹ AF được đặc trưng bởi tần số Treg thấp hơn và tỷ lệ cao hơn của cytokine tiền viêm so với cytokine chống viêm trong các tế bào T CD4 cộng với hoặc CD8 cộng với. Kết quả chỉ ra rằng tình trạng miễn dịch của mẹ có thể đóng một vai trò quan trọng trong giá trị ALT sau sinh ở những bà mẹ bị nhiễm HBV. Do đó, những bà mẹ nhiễm HBV có ALT sau sinh nên được theo dõi chặt chẽ vì họ có thể trải qua quá trình chuyển từ giai đoạn dung nạp miễn dịch sang giai đoạn hoạt động miễn dịch.
Các từ viết tắt
ALT: Alanine transaminase; HBV: Vi rút viêm gan B; AVT: Liệu pháp kháng vi-rút trước sinh; AF: Giá vé ALT; NAF: Giá vé không ALT; Treg: Tế bào T điều tiết; WHO: Tổ chức Y tế Thế giới; MTCT: Lây truyền từ mẹ sang con; ULN: Giới hạn trên của mức bình thường; AST: Aspartate transaminase; PBMCs: Tế bào đơn nhân máu ngoại vi; PerCP: Protein diệp lục peridinin; FITC: Fluorescein isothiocyanat; APC: Allophycocyanin; PE: Phycoerythrin; FOXP3: Đầu hộp P3; ICS: Nhuộm cytokine nội bào; mAb: Kháng thể đơn dòng; IFN: Interferon; IL: Interleukin; TNF: Yếu tố hoại tử khối u; CI: Khoảng tin cậy.
Sự nhìn nhận
Chúng tôi rất biết ơn những bà mẹ đã tham gia vào nghiên cứu này và chúng tôi cảm ơn các đồng nghiệp của chúng tôi ở Khoa Truyền nhiễm, Bệnh viện Nam Phương, vì đã giúp thu thập các mẫu và dữ liệu lâm sàng.
Tác giả đóng góp
ZHL, YFG, JH và MTH thiết kế nghiên cứu. MTH đã thu thập các mẫu, thực hiện các thí nghiệm, tiến hành phân tích thống kê và soạn thảo bản thảo. XRY, XLZ và YHH đã thu thập dữ liệu lâm sàng và theo dõi bệnh nhân. ZHL, YFG, JH và MTH đã sửa đổi bản thảo. Tất cả các tác giả đọc và phê duyệt bản thảo cuối cùng.
Kinh phí
Công trình này được hỗ trợ bởi Quỹ Khoa học Tự nhiên Quốc gia Trung Quốc (Grant No.81673243), Quỹ Nghiên cứu Quốc gia Trung Quốc về Kế hoạch 5 năm lần thứ 13 cho các Dự án Trọng điểm về Bệnh Truyền nhiễm (2017ZX10201201) và Dự án Y học Tam Minh ở Thâm Quyến ( SZSM201911001).
Sự sẵn có của dữ liệu và tài liệu
Các bộ dữ liệu được sử dụng trong nghiên cứu hiện tại có sẵn từ tác giả tương ứng theo yêu cầu hợp lý.
tuyên bố
Phê duyệt đạo đức và đồng ý tham gia
Nghiên cứu này được thực hiện bởi Good Clinical Practice, tuân theo các quy định của địa phương và các nguyên tắc đạo đức được mô tả trong Tuyên bố Helsinki. Quy trình nghiên cứu đã được phê duyệt bởi Hội đồng Đánh giá Thể chế của Bệnh viện Nam Phương, Đại học Y khoa Miền Nam (IRB No. NFEC-2019-197) và đã nhận được sự đồng ý bằng văn bản từ tất cả các đối tượng.
Đồng ý xuất bản
Không áp dụng.
Lợi ích cạnh tranh
Nhiều tác giả tuyên bố rằng họ không có hứng thú với việc cạnh tranh.
chi tiết tác giả
Khoa Truyền nhiễm, Bệnh viện Nam Phương, Đại học Y phía Nam, Quảng Châu 510515, Trung Quốc. 2 Địa chỉ hiện tại: Khoa Truyền nhiễm, Bệnh viện Nhân dân số 3 Huệ Châu, Đại học Y Quảng Châu, Huệ Châu 516002, Trung Quốc. 3 Địa chỉ hiện tại: Khoa Phụ sản, Chi nhánh Zengcheng của Bệnh viện Nam Phương, Đại học Y khoa phía Nam, Quảng Châu 511340, Trung Quốc. 4 Khoa Quản lý Nhiễm trùng Bệnh viện, Bệnh viện Chu Giang, Đại học Y khoa Phương Nam, Quảng Châu 510280, Trung Quốc. 5 Trung tâm Bệnh gan, Bệnh viện Đại học Y khoa Nam Thâm Quyến, Thâm Quyến 518000, Trung Quốc.
Người giới thiệu
1. Tổ chức Y tế Thế giới. Tờ thông tin về bệnh viêm gan B. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b. Truy cập ngày 27 tháng 7 năm 2020.
2. Su W, Chen S, Yang C, Chuang P, Chang H, Chang M. Tác động của việc chủng ngừa viêm gan B toàn cầu cho trẻ sơ sinh trong việc giảm tỷ lệ mang mầm bệnh viêm gan B ở phụ nữ mang thai. J lây nhiễm Dis. 2019;220(7):1118–26.
3. Peng T, Cai Q, Yang M, Chen S, Chen F, Wang M, Peng L, Wong G, Shen C, Cheng W, et al. Xu hướng dịch tễ học và đặc điểm virus học của nhiễm virus viêm gan B ở phụ nữ mang thai và trẻ sơ sinh. Vòm Virol. 2019;164(5):1335–41.
4. Terrault NA, Levy MT, Cheung KW, Jourdain G. Viêm gan siêu vi và mang thai. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2021;18(2):117–30.
5. Yi W, Pan CQ, Hao J, Hu Y, Liu M, Li L, Liang D. Nguy cơ lây truyền viêm gan B theo chiều dọc sau khi chọc ối ở những bà mẹ có kháng nguyên HBs dương tính. J Hepatol. 2013;60(3):523–9.
6. Zou H, Chen Y, Duan Z, Zhang H, Pan C. Các yếu tố virus học liên quan đến thất bại trong điều trị dự phòng miễn dịch chủ động thụ động ở trẻ sơ sinh có mẹ dương tính với HBsAg. J Virus gan. 2012;19(2):e18–25.
7. Pan CQ, Duan Z, Dai E, Zhang S, Han G, Wang Y, Zhang H, Zou H, Zhu B, Zhao W, et al. Tenofovir để ngăn ngừa lây truyền viêm gan B ở những bà mẹ có tải lượng virus cao. N Engl J Med. 2016;374(24):2324–34.
8. Brown RJ, McMahon BJ, Lok AS, Wong JB, Ahmed AT, Mouchli MA, Wang Z, Prokop LJ, Murad MH, Mohammed K. Liệu pháp kháng vi-rút trong nhiễm vi-rút viêm gan B mãn tính trong thai kỳ: tổng quan hệ thống và phân tích tổng hợp . khoa gan. 2016;63(1):319–33.
9. Funk AL, Lu Y, Yoshida K, Zhao T, Boucheron P, van Holten J, Chou R, Bulterys M, Shimakawa Y. Hiệu quả và an toàn của điều trị dự phòng bằng thuốc kháng vi-rút trong thời kỳ mang thai để ngăn ngừa lây truyền vi-rút viêm gan B từ mẹ sang con : tổng quan hệ thống và phân tích tổng hợp. Lancet lây nhiễm Dis. 2021;21(1):70–84.
10. Li Z, Duan X, Hu Y, Zhou M, Liu M, Kang K, Cai H, Yi W, Fu D, Gao X. Hiệu quả và an toàn của lamivudine hoặc telbivudine trong việc ngăn ngừa lây truyền viêm gan B từ mẹ sang con virus: một nghiên cứu trong thế giới thực. Biomed Res Int. 2020;2020:1374276.
11. Bzowej NH, Tran TT, Li R, Belle SH, Smith CI, Khalili M, Chung R, Tsai N, Terrault N. Tổng lượng alanine aminotransferase (ALT) ở phụ nữ Bắc Mỹ mang thai bị nhiễm viêm gan B mãn tính: kết quả từ một nghiên cứu nghiên cứu quan sát trong tương lai. Là J Gastroenterol. 2019;114(8):1283–91.
12. Zhang H, Pan CQ, Pang Q, Tian R, Yan M, Liu X. Sử dụng telbivudine hoặc lamivudine trong giai đoạn cuối thai kỳ giúp giảm lây truyền vi-rút viêm gan B chu sinh một cách an toàn trong thực tế cuộc sống. khoa gan. 2014;60(2):468–76.
13. Jourdain G, Ngo-Giang-Huong N, Harrison L, Decker L, Khamduang W, Tierney C, Salvadori N, Cressey TR, Sirirungsi W, Achalapong J, et al. Tenofovir so với giả dược để ngăn ngừa lây truyền viêm gan B chu sinh. N Engl J Med. 2018;378(10):911–23.
14. Trương YH, Tôn HX. Các phân tử điểm kiểm soát miễn dịch trong thai kỳ: tập trung vào các tế bào T điều hòa. Miễn dịch Eur J. 2020;50(2):160–9.
15. Chatterjee P, Chiasson VL, Giới hạn KR, Mitchell BM. Điều chỉnh các cytokine kháng viêm interleukin-4 và interleukin-10 trong thời kỳ mang thai. Miễn dịch phía trước. 2014;5:253.
16. Mjosberg J, Svensson J, Johansson E, Hellstrom L, Casas R, Jenmalm MC, Boij R, Matthiesen L, Jonsson JI, Berg G, et al. Giảm hệ thống của CD4dimCD25highFoxp3 cộng với Tregs ức chế chức năng trong thai kỳ thứ hai của con người được gây ra bởi progesterone và 17 beta-estradiol. Miễn dịch J. 2009;183(1):759–69.
17. Tilburgs T, Roelen DL, van der Mast BJ, de Groot-Swings GM, Kleijburg C, Scherjon SA, Claas FH. Bằng chứng về sự di chuyển có chọn lọc của các tế bào T điều hòa sáng CD4 cộng với CD25 đặc hiệu cho thai nhi từ máu ngoại vi sang màng rụng tóc trong thai kỳ ở người. Miễn dịch J. 2008;180(8):5737–45.
18. Joshi SS, Cofn CS. Viêm gan B và thai kỳ: đặc điểm virus học và miễn dịch. Cộng đồng Hepatol 2019;4(2):157–71.
19. Bøyum A. Phân lập tế bào lympho, bạch cầu hạt và đại thực bào. Miễn dịch Scand J. 1976;5(s5):9–15.
20. Barathan M, Mohamed R, Vadivelu J, Chang LY, Vignesh R, Krishnan J, Sigamani P, Saeidi A, Ram MR, Velu V, et al. CD8 cộng với các tế bào T của bệnh nhân nhiễm HCV mãn tính biểu hiện nhiều điểm kiểm tra miễn dịch âm tính sau khi kích thích bằng peptit HCV. Miễn dịch tế bào. 2017;313:1–9.
21. Huang M, Gao Y, Liao D, Li J, Tang B, Ma Y, Yin X, Li Y, Liu Z. Ảnh hưởng của việc tiếp xúc trong tử cung với HBeAg có nguồn gốc từ mẹ đối với khả năng miễn dịch của tế bào T trong máu cuống rốn. Miễn dịch Scand J. 2020;92(2):e12914.
22. Hiệp hội Nghiên cứu về Gan Châu Âu. Hướng dẫn thực hành lâm sàng EASL 2017 về quản lý nhiễm vi rút viêm gan B. J Hepatol. 2017;67(2):370–98. 23. Hiệp hội Gan học Trung Quốc, Hiệp hội Y khoa Trung Quốc; Hiệp hội bệnh truyền nhiễm Trung Quốc, Hiệp hội y tế Trung Quốc. Hướng dẫn phòng và điều trị viêm gan B mãn tính (phiên bản 2019). Trung Hoa Gan Zang Bing Za Zhi. 2019;27(12):938–61.
24. Hou J, Cui F, Ding Y, Dou X, Duan Z, Han G, Jia J, Mao Q, Li J, Li Z, et al. Thuật toán quản lý để làm gián đoạn sự lây truyền vi-rút viêm gan B từ mẹ sang con. Phòng khám Gastroenterol Hepatol. 2019;17(10):1929–36.
25. Giles M, Visvanathan K, Lewin S, Bowden S, Locarnini S, Spelman T, Sasadeusz J. Các yếu tố dự đoán lâm sàng và virus học về giá vé gan ở phụ nữ mang thai bị viêm gan B mãn tính. 2015;64(11):1810–5.
For more information:1950477648nn@gmail.com
