Thành Phần Hóa Học Của Lá Cistanche

Tóm tắt: Cistanchelá từ lâu đã được sử dụng làm thuốc y học cổ truyền chođiều trịđột quỵ thiếu máu cục bộ, đau thắt ngực, Vàtăng huyết ápvà như một thức uống lành mạnh vàmỹ phẩm chochống lão hóa. Nghiên cứu này nhằm mục đích phân lập càng nhiều hợp chất càng tốt từ dịch chiết ethanolcủa lá hồng để xác định các hợp chất có hoạt tính sinh học. Tác dụng chống oxy hóacủa lớp etyl axetat từ chiết xuất etanol của lá hồng được chứng minh bằng2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) và sắc ký lỏng hiệu năng cao trực tuyến-2,20 -casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (HPLC-ABTS) phân tích. Một loại flavonoid mới,Kaempferol-3-O- -D-2"-coumaroylgalactoside (1) và một hợp chất tự nhiên mới, kaempferol-3-O- -D-2"-feruloylglucoside (3) được phân lập từ lớp etyl axetat, cùng với 25các hợp chất đã biết, bao gồmmười bốn flavonoid, một ionone, hai coumarin, bảy triterpenoid,và một acetophenone. Việc giải thích dữ liệu quang phổ và quang phổ xác định cấu trúc của chúng. Tất cả các hợp chất cô lập được đánh giá nhanh chóng bằng cách sử dụng trực tuyếnHPLC-ABTSxét nghiệm, và trong số này, các hợp chất4–8, 11, 13, 15, Và16 cho thấy rõ ràngtác dụng chống oxy hóa. Cáclượng của các hợp chất này là {{0}}.3–0,65 phần trăm của dịch chiết.

từ khóa:Diospyros kaki; lá hồng; flavonoit; chống oxy hóa

Bấm vào đây để lấy Cistanche giàu flavonoid cho mỹ phẩm chống lão hóa

1. Giới thiệu

Diospyros kakithunb. (hồng) thuộc họ Ebenaceae và được phổ biến rộng rãiphân bố ở Hàn Quốc, Trung Quốc, Nhật Bản. Quả của nó được ăn tươi hoặc khô, trong khi lá cótừ lâu đã được sử dụng như một bài thuốc cổ truyền để điều trị đột quỵ do thiếu máu cục bộ, đau thắt ngực, tăng huyết áp,xơ vữa động mạch và các bệnh truyền nhiễm [1]. Hơn nữa, lá của nó đã được sử dụngnhư đồ uống và mỹ phẩm tốt cho sức khỏe do đặc tính chống lão hóa và khả nănggiúp ngăn chặn sự tích tụ cholesterol và hắc tố [1]. Nghiên cứu gần đây đã gợi ýrằng chất chiết xuất từ ​​lá hồng có nhiều đặc tính sinh học,bao gồm thu gom gốc tự do, bảo vệ thần kinh, ức chế huyết khối, chống xơ vữa động mạch,và chống dị ứng [2–6]. Một cuộc điều tra hóa chất thực vật trước đây đã gợi ý rằng nhiều loạicác loạiflavonoidvà terpenoid là thành phần chính [7], và một số tanin,naphthoquinones, coumarins, ionones, và axit béo cũng đã được báo cáo [8–12]. Các loại oxy phản ứng (ROS) là các phân tử phản ứng được tạo ra trong các hệ thống sinh học,và sự cân bằng giữa việc tạo ra và loại bỏ ROS được kiểm soát tốt trong điều kiện bình thườngsinh lý tế bào [13]. Tuy nhiên, việc tạo ra quá nhiều ROS gây ra thiệt hại oxy hóa,và ngược lại, lão hóa và các bệnh liên quan đến tuổi tác bao gồm ung thư, tiểu đường và Parkinsonbệnh [14]. Do đó, khám phá các chất chống oxy hóa như flavonoid và các hợp chất phenoliccó thể là một chiến lược đầy hứa hẹn để điều trị các bệnh này.

Là một phần trong dự án liên tục của chúng tôi nhằm tìm ra các hợp chất có hoạt tính sinh học [15], cáctác dụng chống oxy hóa của chiết xuất ethanol (EtOH) và phân vùng dung môi từ quả hồnglá được đánh giá bằng xét nghiệm 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) và hiệu suất cao trực tuyếnsắc ký lỏng-2,20 -casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-axit sulfonic)phân tích (HPLC-ABTS). Một nghiên cứu về hóa học thực vật trên lá hồng đã dẫn đến sự phân lậpcủa một flavonoid mới (1), một hợp chất tự nhiên mới (3), và25 trước đâyhợp chất đã biết. Việc áp dụng các phương pháp quang phổ và đo phổ đặc trưng cho các cấu trúc. Tất cả các hợp chất cô lập đã được nhanh chóng sàng lọc cho họtác dụng chống oxy hóa bằng cách sử dụng HPLC-ABTS trực tuyến. Hơn nữa, phân tích định lượng củatất cả các hợp chất bị cô lập đã được thực hiện trong nghiên cứu này.

2. Kết quả và thảo luận

2.1. Tác dụng chống oxy hóa của lá hồng

Tác dụng chống oxy hóa của dịch chiết ethanol (EtOH) của lá hồng bì được đánh giásàng lọc sơ bộ thông qua DPPH (Hình1MỘT). 0.125 mg/mL củachiết xuất đã loại bỏ khoảng 80 phần trăm gốc DPPH, trong khi 0,025 mg/mL ascorbicaxit chiếm 94 phần trăm gốc tự do. Xét nghiệm HPLC-ABTS trực tuyến được thực hiện nhanh chóngđảm bảo độ tin cậy của các kết quả này (Hình1D). Axit galic và Trolox được sử dụng như nộitiêu chuẩn. Sắc ký đồ ở bước sóng 734 nm (đỉnh âm) gợi ý rằng khoảngchín thành phần có thể có hoạt động chống oxy hóa. Axit galic và Trolox (6-hydroxy- 2,5,7,8-tetrametyl chroman-2-cacboxylicaxit) đã được sử dụng làm tiêu chuẩn nội bộ để đảm bảođộ tin cậy của kết quả. Suy ra rằng hầu hết các pic này đều là dẫn xuất của flavonoitchẳng hạn như flavonoid glycoside và flavanol, dựa trên phân tích dereplication được thực hiệnbằng cách so sánh phổ tử ngoại (UV) và khối phổ của các hợp chất với công bốdữ liệu. Phân đoạn hướng dẫn xét nghiệm sinh học cho thấy rằng các hợp chất chống oxy hóa này làcó nhiều trong lớp etyl axetat (EtOAc), trong khi nước (H2O) lớp cho thấy yếuhoạt động (Hình1B,C). 

Hình 1. Hiệu ứng quét DPPH của dịch chiết EtOH (A), lớp EtOAc (B) và lớp H O (C) lớp HhO của lá hồng: (D) sắc ký đồ ABTS-HPLC trực tuyến của dịch chiết EtOH.

2.2. Điều tra hóa chất thực vật

Để xác định các hợp chất chống oxy hóa này, nhiều phương pháp sắc ký và quang phổCác phương pháp đã được thực hiện để phân lập và xác định đặc điểm cấu trúc củaCác hợp chất. Một flflavonoid mới (1) và một hợp chất tự nhiên mới (3) được lấy từlớp etyl axetat của chiết xuất etanol, cùng với 25 hợp chất đã được báo cáo trước đây,cụ thể là kaempferol-3-O- -2"-coumaroylglucoside (2) [16], ( cộng )-catechin (4) [17], hyperoside(5) [17], isoquercitrin (6) [18], quercetin-3-O- -2"-galloylgalactoside (7) [19], quercetin-3-O- -2"-galloylglucoside (8) [20], Trifolin (9) [18], Astragalin (10) [18], Kaempferol-3-O- - 2"-galloylgalactoside (11) [21], Kaempferol-3-O- -arabinoside (12) [22], Kaempferol-3-O- - 2"-galloylglucoside (13) [23], quercetin-3-O- -2"-coumaroylglucoside (14) [24], quercetin(15) [15], Kaempferol (16) [25], (6S,9S)-roseoside (17) [26], Scopoletin (18) [27], cái rốn(19) [28], 1-(2,4-dihydroxy-6-metylphenyl)ethanon (20) [29], axit barbinervic (21) [30], axit diospyric B (22) [7], axit rotungen (23) [31], axit pomolic (24) [32], axit siaresinolic(25) [33], axit oleanolic (26) [25], và axit ursolic (27) [25] bằng cách sử dụng quang phổ vàdữ liệu quang phổ và vật lý so với dữ liệu đã công bố và cả với mỏngphân tích sắc ký lớp (TLC) (Hình2 Và3). Trong đó, hợp chất2, 16, 17, 19, 20, Và24 đầu tiên được phân lập từD. kaki. 

Hợp chất 1 thu được ở dạng bột màu vàng, trong đó công thức phân tử được thiết lập là C3olO3 dựa trên dữ liệu sắc ký khối phổ có độ phân giải cao (HRMS). Quang phổ thể hiện các dải hấp thụ ở 207 và 315 nm, cho thấy rằng hợp chất1 có xương sống flavonol. Dữ liệu cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 'H (Bảng 1, Hình S1) cho thấy một dạng điển hình của flavonol glycoside đồng hóa, cho thấy hai bộ tín hiệu loại AA'BB' ({{10}}.{{11 }} (2H, d, J= 8.5 Hz, H-2' và H-6 ),6,87 (2H, d, J{{20}} .5 HzH-3' và H-5')) trong vòng B của kaempferol cũng như các tín hiệu (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 HzH-2 và H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3 và H-5 phần trăm ) trong vòng thơm của nhóm coumaroyl. Hai tín hiệu cặp đôi (8H 7,65 (1H, d, J=15.5 Hz, H-7"") và 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8") đã được quan sát, biểu thị các proton chuyển hóa olefin của nhóm quốc gia. Ngoài ra, tín hiệu proton dị thường (0H 5.57 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1) đã được quan sát thấy trong vùng đường, cho thấy sự hiện diện của nhóm đường tuần hoàn được cấu hình B. 13C và tăng cường không bị biến dạng bằng dữ liệu NMR truyền phân cực (Iable 1Hình S2) cho thấy 30 cộng hưởng bao gồm hai nguyên tử cacbon chuyển hóa olefinic, mười nguyên tử cacbon thơm và sáu nguyên tử cacbon gốc glucosyl, và mười nguyên tử cacbon không proton hóa bao gồm hai nguyên tử cacbonyl. Đặc biệt, sự dịch chuyển hóa học tại C-2, C-3 và C-4 (8c 158.1, 134.9 và 179.2) là các tín hiệu đặc trưng của flavonol3-0-glycoside. Ngoài ra, tín hiệu carbonyl carbon tại C-1" (8c 168.7) và hai tín hiệu carbon chuyển hóa olefinic tại C-2'" và C-3"(6 146.9 , 115,2) là sự dịch chuyển hóa học điển hình của nhóm coumaroyl. Tín hiệu carbon dị thường ở C-1(6C 100,4) và các tín hiệu khác cho gốc glycosyl từ C-2" đến C-6" ' (6c74.3, 73.4, 70.5, 77.4 và 62.0) đã được quan sát. Những dữ liệu NMR một chiều (1D) này có thể thay thế cho dữ liệu của kaempferol-3-0-B-2"-coumaroylglucoside (2) (16]. Tuy nhiên, việc so sánh cẩn thận dữ liệu NMR 13C giữa hai hợp chất cho thấy rằng hợp chất 1 có một nửa galactose, điều này đã được chứng minh rõ hơn bằng dữ liệu NMR quang phổ tăng cường của hạt nhân (NOESY) (Hình S6). H-2 và H-4 đã được quan sát thấy trong hợp chất 2, không có mối tương quan giữa các proton này trong hợp chất 1. Nói chung, diễn giải dữ liệu 13C NMR và NOESYNMR là một phương pháp hiệu quả để xác định loại gốc glycosyl . Vị trí của gốc galactose được suy ra là tại C-3 theo sự dịch chuyển trường xuống của C-2và C-4, như được chứng minh rõ hơn bởi mối tương quan liên kết đa nhân dị nhân (HMBCgiữa H{ {123}}" và C-3 (Hình S5). Vị trí của nhóm coumaroyl đã được chứng minh là tại C-2" dựa trên sự dịch chuyển trường xuống (0 5.36 (1H, dd, J=10.0, 8.0 Hz, H{ {134}}")) và mối tương quan HMBC giữa H-2' và C-1. Kết quả là, cấu trúc của hợp chất 1 được xác định là kaempferol-3-0-B-2"-coumaroylgalactoside. Mặc dù trước đây hợp chất 2 đã được phân lập từ nhiều nguồn khác nhau, bao gồm cả Ouercus suber (16] và Alliumporrum (34), hợp chất 1 được phân lập và đặc trưng cấu trúc lần đầu tiên.

hợp chất3 được phân lập dưới dạng bột màu vàng và công thức phân tử được thiết lậpTăng dần31H28O14 bằng cách phân tích dữ liệu HRMS. Phổ UV cho thấy UVhấp thụ ở 210 và 327 nm do cùng một aglycone với các hợp chất1 Và2. Các1H Dữ liệu NMR (Bảng1, Hình S10) tương tự như của hợp chất2, nhưng hợp chất3 có một nhóm feruloyl thay vì nhóm coumaroyl, bằng chứng là sự hiện diện của mộtnhóm methoxy bổ sung (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Ngoài ra, một proton dị thườngtín hiệu (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) đã được quan sát, chỉ ra rằng liên kết glycosyllà một-cấu hình, và tín hiệu dịch chuyển trường xuống (5.03 (1H, t,J = 8.5 Hz, H-200 )) đã được hiển thị trong khu vực đường, như với hợp chất1. Các13Dữ liệu C NMR (Bảng1, Nhân vậtS11) cho thấy 31 cộng hưởng bao gồm haiDịch-cacbon olefifinic, mười cacbon bậc bốn,mười nguyên tử cacbon thơm, sáu nguyên tử cacbon gốc glucosyl và một nguyên tử cacbon methoxy và mười nguyên tử cacbon không proton hóacacbon, bao gồm hai cacbonyl cacbon tương ứng với kaempferol, feruloyl,và nhóm glucôzơ. Đặc biệt, tín hiệu carbon từ C-200 đến C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 và 62,5) cho thấy sự hiện diện của gốc glucoza. Vị trí của phân tử glucosevà nhóm feruloyl được chỉ định bởi các tương quan HMBC tầm xa giữa H-100 VàC-3 (δC 134.8) và H-200 và C-1000 (δC 168.4) (Hình S14). Vị trí của một bổ sungnhóm methoxy được xác định bởi mối tương quan chính giữa 3000 -OCH3 và C-3000 (δC 149.4). Kết quả trên đã gợi ý cấu trúc của hợp chất3 dưới dạng kaempferol-3-O- - 2"-feruloyl glucoside. Theo hiểu biết tốt nhất của chúng tôi, hợp chất3 chỉ được báo cáo là mộtsản phẩm thủy phân của 3-O- -(2-O-feruloyl)-glucosyl-7,40 -di-O- -glucosyl kaempferol, bị cô lập khỏiAllium tuberosum[35]. Vì vậy, cấu trúc của3 đã được làm sáng tỏ như một cái mớihợp chất tự nhiên.

hợp chất11 được phân lập dưới dạng bột màu vàng. Các1Dữ liệu H NMR (Hình S19)hiển thị một bộ AA0 BB0 -loại tín hiệu (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-30, H-50 )) trong vòng B của kaempferol và tín hiệu nhóm đơn tạiδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) của hợp chất galloyl trong vùng thơm, đây là tín hiệu đặc trưngcủa flavonol được phân bổ. Một tín hiệu proton dị thường (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) chỉ ra rằng liên kết glycosyl là một-cấu hình. Hơn nữa, một trường dướitín hiệu proton dịch chuyển (5.27 (1H, t,J = 9.5 Hz, H-200 )) cho rằng nhóm galloylđược gắn vào nhóm hydroxyl của C-200 bởi vì sự thay đổi này có thể được quy choảnh hưởng dị hướng củaO-galloyl nửa [21]. Các13Dữ liệu C NMR (Hình S20)thể hiện 26 cộng hưởng, cho thấy flavonol glycoside được phân bổ. Tín hiệu cacbontừ C-200 đến C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 và 60.1) đề xuất sự có mặt của galactosethị trấn. Do đó, cấu trúc của hợp chất11 đã được xác nhận là kaempferol-3-O- -200 - galloylgalactoside. mặc dù hợp chất11 trước đây đã được phân lập từ nhiều nguồn khác nhau,bao gồmD. kaki[21,36], chỉ1Dữ liệu H NMR và MS đã được báo cáo trước đây. Như vậy,các13Dữ liệu C NMR lần đầu tiên được báo cáo trong nghiên cứu này

2.3. Hoạt động chống oxy hóa của các hợp chất cô lập

Tất cả các hợp chất cô lập đã được đánh giá về tác dụng chống oxy hóa của chúng bằng cách sử dụng nhanh trênphân tích dòng HPLC-ABTS để xác định hợp chất nào đã góp phần chống oxy hóatác dụng của lá hồng bì. Các hợp chất4–8, 11, 13, 15, Và16 cho thấy khả năng chống oxy hóa mạnhhoạt động ý tưởng (Hình4). Hầu hết các hợp chất này là kaempferol và quercetindẫn xuất, nhưng một số dẫn xuất (1–3, 9, 10, 12, Và14) không hiển thị các hoạt động. Cácmối quan hệ cấu trúc-hoạt động không được xác định đầy đủ nhưng đã được tiết lộ một phần. TRONGđặc biệt, quercetin và kaempferol với gốc galloyl (7, 8, 11, Và13) được tìm thấycó hoạt tính mạnh, nhưng những chất có gốc coumaroyl hoặc feruloyl (1–3 Và16) đã khônghiển thị bất kỳ hoạt động nào.

Hinh 4.Các hoạt động nhặt gốc tự do của các hợp chất cô lập (4–8, 11, 13, 15, Và16) được đánh giá trực tuyếnXét nghiệm HPLC-ABTS.

2.4. Phân tích định lượng các hợp chất cô lập

Phân tích định lượng tất cả các hợp chất đã phân lập trong dịch chiết hòa tan trong EtOAcđã được thực hiện để xác nhận rằng tác dụng chống oxy hóa của lá hồng có thể đượcgây ra bởi các hợp chất hoạt tính này. Một phương pháp HPLC cụ thể với phát hiện mảng diode vàmáy dò tán xạ ánh sáng bay hơi được phát triển để xác định đồng thờicủa 27 hợp chất. Hàm lượng của tất cả các triterpenoid cô lập được xấp xỉ 5,9%dịch chiết, và trong số này, dịch chiết của axit siaresinolic (25), axit oleanolic (26) và ursolicaxit (27) chiếm một phần đáng kể, như đã báo cáo trong các nghiên cứu trước đây [7]. Cáchàm lượng flavonoid xấp xỉ 5,4 phần trăm, và trong số này, hàm lượng của các hợp chất hoạt tínhlà 3,2 phần trăm (Bảng2). Đặc biệt, nội dung của kaempferol-3-O- -200 -galloylgalactoside(9), kaempferol-3-O- -2"-galloylglucoside (10), isoquercitrin (13) và quercetin-3-O- -2"- Galloylglucoside (15) nhiều hơn 0.3 phần trăm . Phương pháp phân tích đã được xác minh bằng cách sử dụng mộtthủ tục xác nhận đơn giản để đảm bảo tính phù hợp của phương pháp, cho thấy đầy đủtính đặc hiệu, tuyến tính, độ chính xác và độ chụm.

Hỏi thêm:

Email:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp cùng với 86 15292862950