Sự khác biệt về thành phần và tác dụng chữa bệnh của sản phẩm thô và rượu Sản phẩm chế biến bằng hơi nước từ Cistanches Herba

Tóm tắt:

Khách quanSo sánh sự thay đổi thành phần hóa học và tác dụng chữa bệnh của Roucongrong (Cistanches Herba) trước và sau khi chế biến, nhằm làm rõ nguyên lý hầm rượu.

Phương pháp LC-MS được áp dụng để xác định các loại thành phần hóa học trước và sau khi pha chế Cistanches Herba, kết hợp với phân tích thống kê đa biến để tìm ra sự chênh lệch về thành phần trước và sau khi hầm với rượu. Sự khác biệt về hiệu quả đã được chứng minh bằng mô hình chuột bị thiếu cortisonethận do hydro hóa.

Kết quảTổng cộng có 45 thành phần hóa học được xác định từMẫu Cistanches Herba; Các hợp chất góp phần tạo nên sự khác biệt giữaCistanches Herba và Cistanches Herba hầm rượu vanglàEchinacoside, verascoside, isoacteoside và tubuloside B; Chiết xuất tổng số phenylethanoid glycoside từ Cistanches Herba có tác dụng tốt hơn trong việc cải thiện mô hình chuột bị suy thận dương so với Cistanches Herba hầm rượu. Kết luận Thành phần của Cistanche được thay đổi sau khi được hầm với rượu, và tác dụng bổ thận dương đã được nâng cao. Thành phần chuyển hóa từ Cistanches Herbato hầm rượu có thể là hoạt chất bồi bổ thận, hỗ trợ dương.

Từ khóa: Cistanches Herba; Cistanches Herba hầm rượu vang;thận dương suy yếu;echinacoside;verascoside; isoacteoside;tubuloside B

BÁN THẢO DƯỢC CISTANCHE CHẤT LƯỢNG CAO

Dịch vụ hỗ trợ của Wecistanche

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Điện thoại:+86 15292862950

Nó được gọi là "nhân sâm" và được phân phối chủ yếu ở Nội Mông, Ninh Hạ (Azuqi), Cam Túc (Changma), Tân Cương và các khu vực khác [1]. Cistanche có tính ấm, vị ngọt và mặn, đi vào kinh thận và ruột già. Có tác dụng bổ gan thận, ích tinh huyết, làm ẩm ruột, giảm táo bón. Nó có thể được sử dụng cho thận dương suy yếu, bất lực và vô sinh, đau nhức thắt lưng và đầu gối, yếu cơ và xương, khô ruột và táo bón [2]. Nghiên cứu hiện đại cho thấy thân thịt có lá vảy của cây Cistanche chủ yếu chứa nhiều thành phần hóa học khác nhau như phenylanol glycoside, cyclopentane ether terpenes và các glycosid, lignan, đường, v.v. của chúng [3], đồng thời có nhiều tác dụng dược lý nhưchống lão hóa,chất chống oxy hóa,chống mất trí nhớ,chống mệt mỏi, làm ẩm ruột và giảm táo bón [4].

Sau khi hầm với rượu, tác dụng bổ thận, tăng dương của Cistanche được tăng cường. Nguyên tắc xử lý chưa được giải thích rõ ràng. Fan Yanan và cộng sự. [5-7] đã nghiên cứu tác động của Cistanche đối với khả năng đại tiện của chuột, chức năng miễn dịch, chất dẫn truyền thần kinh trong ruột và các biểu hiện gen liên quan trước và sau khi xử lý. Đà và cộng sự. sử dụng ảnh hưởng của phenyletanol glycoside trước và sau khi xử lý để giải thích nguyên lý xử lý của nó; Zhang Chao và cộng sự. [8] đã sử dụng sự thay đổi hàm lượng phenyletanol glycoside trước và sau khi chế biến để giải thích nguyên lý chế biến; Zhang Shuyun và cộng sự. [9] đã sử dụng những thay đổi về hàm lượng betaine trước và sau khi xử lý để giải thích tác động của quá trình xử lý lên Cistanche. Các tài liệu hiện có về quá trình xử lý Cistanche chủ yếu tập trung vào dược lý học và nghiên cứu về các thành phần cũng tập trung vào sự thay đổi hàm lượng của các thành phần cụ thể, thiếu nghiên cứu có hệ thống về sự khác biệt của các thành phần. Thí nghiệm này sử dụng công nghệ sắc ký lỏng-khối phổ (LC-MS) kết hợp với phân tích thống kê đa biến để xác định các thành phần hóa học trong Cistanche, nhằm tìm ra dấu hiệu khác biệt giữa Cistanche thô và các sản phẩm hầm rượu, đồng thời nghiên cứu sự khác biệt về hiệu quả của Cistanche thô và các sản phẩm hầm rượu thông qua mô hình chuột bị thiếu thận dương do hydrocortisone gây ra, để giải thích cơ sở vật chất củaCistanche trong việc bổ thận và tăng cường dươngvà nguyên tắc chế biến món Cistanche hầm rượu vang.

BÁN THẢO DƯỢC CISTANCHE CHẤT LƯỢNG CAO

1 Vật liệu

1.1 Dụng cụ

Máy quang phổ khối lượng có độ phân giải cao bẫy ion song song trường tĩnh điện UPLC-LTQ Orbitrap XL (Thermo Fisher Scientific, Hoa Kỳ), máy trạm Theraio Xcaliber; Cân điện tử BT125D 1/100000 (Hệ thống thiết bị Sartorius, Đức); Máy làm sạch siêu âm CNC KQ500DE (Công ty TNHH Dụng cụ siêu âm Kunshan); Máy phân tán tốc độ cao XHF-D (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Đầu đọc vi đĩa Multiskan FC (Thermo Scientific); máy ly tâm tốc độ cao HC-3518 (Công ty TNHH dụng cụ khoa học An Huy Zhongke Zhongjia); BW-YLS-1B máy ghi hoạt động tự nguyện của chuột đa chức năng (Công ty TNHH Phát triển Công nghệ Ruanlong Thượng Hải).

1.2 Thuốc

Loại metanol đo khối phổ (Fisher); axit formic cấp khối phổ (phần khối lượng 99%, Sigma Aldrich); nước (nước cất Watsons); Jinkui Shenqi Pills (Nhà máy Dược phẩm Công ty TNHH Phát triển Công nghệ Tongrentang Bắc Kinh, số lô 1701653); muối natri hydrocortisone succinate (Công ty TNHH Dược phẩm Sinh hóa Thiên Tân, số lô 011705067); Bộ superoxide dismutase (SOD) (số lô 20170115) và bộ malondialdehyd (MDA) (số lô 20170117) đã được mua từ Công ty TNHH Công nghệ sinh học Jian Cheng Nam Kinh; testosterone (T) và estradiol (E2) được xác định tại Trung tâm Kiểm tra Chất lượng Thanh Đảo Kechuang, và creatinine (CREA) và nitơ urê máu (BUN) được xác định tại Trung tâm Phân tích và Xét nghiệm của Đại học Y Nội Mông.

1.3 Động vật

100 con chuột SD đực, nặng 180-200 g, được mua từ Trang trại Động vật Thực nghiệm Xinglong ở Quận Haidian, Bắc Kinh, số giấy phép: SCXK (Bắc Kinh) 2016-0003. Thí nghiệm trên động vật này đã được Ủy ban đạo đức của Đại học Y học Trung Quốc Bắc Kinh phê duyệt, số đạo đức: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Mẫu

Sáu lô Cistanche Deserticola đã được xác định là hàng thật bởi Giáo sư Li Xiangri của Trường Y học Trung Quốc, Đại học Y học Trung Quốc Bắc Kinh và có nguồn gốc từ thân thịt khô với lá vảy của Cistanche Deserticola YC Ma, một loại cây thuộc họ Orobanchaceae. Thông tin chi tiết về các mẫu được thể hiện trong Bảng 1.

Bảng 1 Bảng thông tin các mẫu Cistanches Herba

2 phương pháp

2.1 Chuẩn bị mẫu

2.1.1 Sơ chế nguyên liệu Lấy quả Cistanche Deserticola sạch, làm mềm, cắt thành từng lát dày rồi để ráo.

2.1.2 Chế biến món hầm rượu

Lấy 100 g lát sa mạc Cistanche, thêm 30 ml rượu gạo, trộn đều rồi đun nhỏ lửa cho đến khi rượu ngấm. Ngâm trong nước 12h, vớt ra để nguội một chút rồi phơi khô. Xem Hình 1 để biết các mẫu Cistanche Deserticola thô và các mẫu Cistanche Deserticola hầm rượu vang.

2.2 Nghiên cứu sự khác biệt thành phần của rượu Cistanche Deserticola trước và sau khi hầm rượu

2.2.1 Chuẩn bị dung dịch

Lấy khoảng {{0}},2 g bột mẫu khô (đã qua 65-rây lưới), cân chính xác, cho vào bình định mức màu nâu 50 mL, thêm 25 mL metanol 50% dung dịch nước, đậy kín, cân khối lượng, ngâm trong 30 phút, xử lý siêu âm trong 40 phút (công suất 250 W, tần số 35 kHz), làm nguội, cân lại, thêm dung dịch nước metanol 50% để bù khối lượng đã mất, lắc tốt, để yên, lọc phần nổi phía trên qua màng lọc vi mô 0,22 μm và đặt dịch lọc vào chai pha lỏng màu nâu để thu được dung dịch.

BÁN THẢO DƯỢC CISTANCHE CHẤT LƯỢNG CAO

2.2.2 Điều kiện sắc ký

Cột sắc ký Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (100 mm×2,1 mm, 1,7 μm), nhiệt độ cột 35 độ ; nhiệt độ buồng mẫu là 10 độ, thể tích bơm mẫu là 3 μL, metanol (A)-0.1% dung dịch nước axit formic (B) dưới dạng pha động, rửa giải gradient: 0-4 phút, 10%{ {13}}% metanol; 4-18 phút, 26%-40% metanol; 18-24 phút, 40%-100% metanol; 24-28 phút, 100% metanol. Tốc độ dòng thể tích là 0,3 mL/phút và bước sóng phát hiện là 330 nm.

2.2.3 Điều kiện khối phổ

Nguồn ion hóa phun điện tử (ESI) đã được sử dụng, quét ở chế độ ion âm, nhiệt độ mao quản là 350 độ, tốc độ dòng thể tích khí trong vỏ bọc là 30 arb, tốc độ dòng thể tích khí phụ trợ là 10 arb, điện áp phun là 3

KV, điện áp mao quản là −35 V, điện áp ống kính là −110 V, phạm vi quét là m/z 100-1 000, hệ thống thu thập dữ liệu là Xcalibur 2.1.

2.2.4 Phân tích thành phần chính (PCA)

Sau khi có được ma trận hai chiều của các cặp dữ liệu thời gian lưu khối lượng chính xác, bảng điều khiển sẽ hiển thị tất cả thông tin thời gian lưu chính xác được nhập tự động và phương pháp PCA của mô-đun thống kê mở rộng sẽ được sử dụng để phân tích.

2.2.5 Phân tích phân biệt bình phương nhỏ nhất từng phần trực giao (OPLS-DA) LCMS kết hợp khả năng phân tách cao của sắc ký lỏng với độ nhạy cao của phép đo phổ khối. Dữ liệu được thu thập khá lớn và cần phải phân tích thống kê đa biến để xử lý dữ liệu. OPLS-DA chia dữ liệu thành hai nhóm và sử dụng mô hình thống kê có giám sát để thu được số lượng lớn phổ trực giao, cho thấy rõ sự khác biệt giữa hai nhóm mẫu. Trong định dạng S-Plot của hình bổ sung, mỗi điểm biểu thị một cặp dữ liệu thời gian lưu khối lượng chính xác, trục X biểu thị biến, điểm dữ liệu càng xa điểm 0 thì đóng góp của điểm vào chênh lệch mẫu càng lớn ; Trục Y biểu thị mối tương quan giữa các mẫu trong cùng một nhóm mẫu, cặp dữ liệu khối lượng và thời gian lưu chính xác càng xa điểm 0 thì mối tương quan càng mạnh. Do đó, các cặp dữ liệu thời gian lưu chính xác về khối lượng ở cả hai đầu của đường cong hình chữ S biểu thị các ion đặc trưng đáng tin cậy nhất từ ​​​​mỗi nhóm mẫu.

BÁN THẢO DƯỢC CISTANCHE CHẤT LƯỢNG CAO

2.2.6 Phân tích cấu trúc khối phổ

Sau khi thu được các ion đặc trưng, ​​thành phần nguyên tố và sự so sánh hợp chất được thực hiện bằng cách tính khối lượng phân tử tương đối chính xác và kết hợp cơ sở dữ liệu hiện có và tài liệu liên quan để xác định các thành phần khác biệt.

2.3 Nghiên cứu sự khác biệt hiệu quả trước và sau khi hầm rượu

2.3.1 Chuẩn bị chiết xuất Cistanche Deserticola

Cistanche Deserticola (số lô 160901) và bột Cistanche Deserticola hầm rượu tương ứng được chiết xuất theo các điều kiện trong "2.2.1", được lọc sau khi xử lý siêu âm, lặp lại hai lần, dịch lọc được kết hợp, cô đặc bằng chưng cất chân không và đông lạnh- khô.

2.3.2 Phân nhóm thí nghiệm trên động vật và quản lý thuốc

Hình 1 Cistanches Herba A và Cistanches Herba B hầm rượu vang

(1) Phân nhóm: Chuột được cung cấp nước và chế độ ăn uống miễn phí. Sau 1 tuần cho ăn thích ứng, chúng được chia ngẫu nhiên thành 5 nhóm (Bảng 2), mỗi nhóm 10 con, cụ thể là nhóm bình thường, nhóm mẫu, nhóm Cistanche Deserticola sống (PR), nhóm Cistanche Deserticola hầm rượu vang (PW) , và nhóm Jinkui Shenqi Pill (JK) kiểm soát tích cực. (2) Làm mô hình: Ngoại trừ nhóm bình thường, 4 nhóm còn lại đều được tiêm tĩnh mạch hydrocortisone natri succinate với liều 20 mg/kg trong 14 ngày liên tục. Nhóm bình thường được tiêm cùng một lượng nước muối thông thường. Tình trạng chung của những con chuột trong mỗi nhóm được quan sát để xác định xem chúng có biểu hiện các triệu chứng như sợ lạnh, ưa ấm, chân tay lạnh, nước tiểu trong và dài, cong và cong lưng, tóc xỉn màu và rối bù và suy nhược tinh thần hay không. Đồng thời, trọng lượng cơ thể, số lượng hoạt động tự phát, lượng thức ăn, lượng nước uống, lượng nước tiểu và các chỉ số khác của chuột trong mỗi nhóm đều được đo.

(3) Cách dùng: Liều dùng cho chuột được tính toán dựa trên liều lượng lâm sàng của Thuốc Jinkui Shenqi và Cistanche Deserticola. Liều lượng của mỗi nhóm Cistanche Deserticola là 1,80 g/kg tính theo lượng thuốc thô. Liều lượng cụ thể được trình bày trong Bảng 2. Mỗi chiết xuất của thuốc Cistanche Deserticola và Jinkui Shenqi được pha chế thành dung dịch có nồng độ nhất định với nước khử ion. Dung dịch này được tiêm vào dạ dày mỗi ngày với thể tích 10 mL/kg trong 30 ngày liên tiếp. Nhóm bình thường và nhóm mô hình được tiêm vào dạ dày với một lượng nước khử ion bằng nhau mỗi ngày. Trọng lượng cơ thể được đo hàng tuần và thể tích trong dạ dày được điều chỉnh theo trọng lượng cơ thể của chuột. Sau khi dùng thuốc, chuột được nhịn ăn trong 12 giờ. Sau khi gây mê bằng pentobarbital, máu được lấy từ động mạch chủ bụng để phát hiện chỉ số huyết thanh. Thận, tinh hoàn, mào tinh hoàn, túi tinh và tuyến tiền liệt đã được cắt bỏ để phát hiện các chỉ số liên quan.