Tiềm năng bảo vệ thần kinh của Isothiocyanates trong một mô hình viêm thần kinh trong ống nghiệm
Mar 27, 2022
Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tiziana Latronico1 · Marilena Larocca2 · Serafna Milella1 · Anna Fasano1 · Rocco Rossano2 · Grazia Maria Liuzzi1
Ngày nhận: ngày 10 tháng 7 năm 2020 / Được chấp nhận: ngày 25 tháng 10 năm 2020 / Xuất bản trực tuyến: ngày 16 tháng 11 năm 2020
© (Các) Tác giả 2020
Chức năng bột thảo dược Cistanche: có một rất tốttác dụng bảo vệ thần kinh
trừu tượng
Isothiocyanates (ITC), hiện diện dưới dạng tiền chất glucosinolate trong các loại rau họ cải, đã cho thấychống viêm, chống oxy hóa và các hoạt động chống ung thư. Ở đây, chúng tôi đã so sánh tác động của ba ITC khác nhau đối với việc sản xuất ROS và sự biểu hiện của ma trận metalloproteinase (MMP) -2 và -9, đại diện cho các yếu tố di truyền bệnh quan trọng của các bệnh thần kinh khác nhau. Cấy tế bào hình sao chính của chuột được kích hoạt bởi LPS và được xử lý đồng thời với các liều lượng khác nhau của Allyl isothiocyanate (AITC), 2- Phenethyl isothiocyanate (PEITC) và 2- Sulforaphane (SFN). Kết quả cho thấy SFN và PEITC có thể chống lại sự sản sinh ROS do H2O2 gây ra. Phân tích zymographic của các chất nổi trên bề mặt nuôi cấy tế bào đã chứng minh rằng PEITC và SFN là những chất ức chế hiệu quả nhất của MMP -9, trong khi chỉ SFN mới ức chế đáng kể hoạt động của MMP -2. Phân tích PCR cho thấy rằng tất cả các ITC được sử dụng đều ức chế đáng kể cả biểu hiện MMP -2 và MMP -9. Cuộc điều tra về lộ trình truyền tín hiệu protein kinase hoạt hóa mitogen (MAPK) đã chứng minh rằng ITC điều chỉnh quá trình phiên mã MMP bằng cách ức chế hoạt động của protein kinase điều hòa ngoại bào (ERK). Kết quả của nghiên cứu này cho thấy rằng ITC có thể là tác nhân dinh dưỡng đầy hứa hẹn trong việc phòng ngừa và điều trị bổ sung các bệnh thần kinh liên quan đến MMP.
Từ khóaChất chống oxy hóa · Chống viêm · Isothiocyanate · Matrix metalloproteinase · Bệnh thoái hóa thần kinh
Giới thiệu
Viêm thần kinh là một phản ứng phức tạp đối với chấn thương não liên quan đến một loạt các sự kiện sinh hóa dẫn đến việc kích hoạt các tế bào thường trú của hệ thần kinh trung ương (CNS). Sự hoạt hóa không bình thường của tế bào hình sao làm tổn hại đến vai trò bảo vệ thần kinh của chúng, dẫn đến giải phóng các chất trung gian gây viêm, chẳng hạn như các loại oxy phản ứng (ROS), nitric oxide (NO), cytokine, chemokine và ma trận metalloproteinase
(MMPs).
MMP là một họ lớn các endopeptidase trung tính, phụ thuộc cộng với Zn2, có mục tiêu chính là các thành phần của chất nền ngoại bào (ECM) như fibronectin, collagen, elastin và laminin (Latronico và Liuzzi 2017).
Tiziana Latronico
tiziana.latronico@uniba.it
Khoa Khoa học Sinh học, Công nghệ Sinh học và Dược sinh học, Đại học Bari "Aldo Moro",
Bari, Ý
Khoa Khoa học, Đại học Basilicata, Potenza,
Nước Ý
Trong CNS, MMP có liên quan đến các phản ứng sinh lý khác nhau, chẳng hạn như quá trình hình thành, thay đổi và tái tạo ECM, tạo phôi và sửa chữa vết thương; tuy nhiên, khi MMPs thoát khỏi cơ chế điều chỉnh, chúng sẽ trở nên có hại (Rosenberg 2009; Agrawal et al. 2008).
Về mặt này, người ta biết rằng những thay đổi trong biểu hiện và hoạt động của MMP là những sự kiện di truyền bệnh chính trong một số rối loạn thần kinh (Latronico và Liuzzi 2017; Mastroianni và Liuzzi 2007; Brkic và cộng sự 2015). Bằng chứng thực nghiệm đã gợi ý rằng trong số các MMP, gelatinase A (MMP -2) và B (MMP -9) có liên quan đặc biệt đến chứng viêm thần kinh vì sự điều tiết của chúng có thể làm tổn hại đến tính toàn vẹn của hàng rào máu não (BBB). Điều này dẫn đến tăng cường tuyển dụng và thâm nhập các tế bào máu ngoại vi miễn dịch vào nhu mô não, kéo dài quá trình viêm, nguyên nhân gây mất tế bào thần kinh tiến triển và suy giảm chức năng tế bào thần kinh (Rivest 2009). Một số nghiên cứu in vitro và in vivo đã chỉ ra rằng sản xuất ROS là một trong những yếu tố liên quan đến việc điều chỉnh sự biểu hiện MMP -9 trong tế bào não thông qua cơ chế phụ thuộc vào con đường truyền tín hiệu do mitogen kích hoạt (MAPK) (Hsieh và Yang 2013).
Dựa trên bằng chứng này, rõ ràng là việc giảm điều hòa các yếu tố gây độc thần kinh, dẫn đến giảm phản ứng viêm thần kinh, có thể đại diện cho một chiến lược điều trị hiệu quả để ngăn chặn sự khởi phát hoặc làm giảm sự tiến triển của các bệnh não.
Trong những năm gần đây, mối quan tâm y sinh học trong lĩnh vực logic thần kinh ngày càng tập trung vào việc nghiên cứu các hợp chất tự nhiên có thể điều chỉnh các quá trình liên quan đến các phản ứng viêm thần kinh. Về mặt này, một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng các hợp chất phytochemical, chẳng hạn như polyphenol, isothiocyanates (ITC), và các hợp chất khác, có tiềm năng bảo vệ thần kinh, cũng bắt nguồn từ khả năng ức chế sự biểu hiện của MMP và chống lại sự sản sinh ROS (Dinkova-Kostova và Kostov 2012; Liuzzi và cộng sự 2007, 2011).
Isothiocyanates là chất chuyển hóa được tạo ra bởi một số cây thuộc họ Brassicaceae như một hệ thống bảo vệ chống lại sự tấn công của mầm bệnh (Bones và Rossiter 2006). Chúng bắt nguồn từ sự phân hủy glucosinolate (GSL) của enzyme myrosinase. ITC có trong các loại rau họ cải thường được tiêu thụ như bông cải xanh, cải Brussels, bắp cải, củ cải, cải ngựa, su hào, mù tạt, củ cải, cải xoong và cải xoăn. Lượng của chúng trong thực phẩm rất thay đổi và phụ thuộc vào quá trình chế biến và chuẩn bị thực phẩm.
Gần đây, người ta đã chỉ ra rằng ITC có nhiều tác dụng điều trị khác nhau, bao gồm tác dụng chống oxy hóa, kháng khuẩn, chống viêm và ngăn ngừa hóa chất (Dufour và cộng sự 2015; Marzocco và cộng sự 2015).
Hoạt động bảo vệ của ITC được thực hiện thông qua việc điều chỉnh các con đường tín hiệu khác nhau liên quan đến quá trình giải độc, viêm, apoptosis và điều hòa chu kỳ tế bào. Một số bằng chứng chỉ ra rằng đặc tính chống ung thư và chống viêm của ITC có thể chủ yếu được quy cho khả năng kích hoạt con đường liên quan đến yếu tố hạt nhân 2- erythroid 2- yếu tố 2 (Nrf2) của chúng. Nrf2 là một yếu tố phiên mã nhạy cảm với oxy hóa khử, khi có mặt các tác nhân điện phân và điều kiện stress oxy hóa sẽ chuyển vào nhân nơi nó liên kết với các yếu tố phản ứng chống oxy hóa (ARE), gây ra sự biểu hiện của các gen bảo vệ tế bào liên quan đến quá trình giải độc và điều chỉnh các điều kiện oxy hóa và các quá trình viêm (Heiss và cộng sự 2001). Về mặt này, người ta đã báo cáo rằng ITC có thể làm tăng khả năng chống oxy hóa của tế bào người bằng cách gây ra sự biểu hiện của các enzym giải độc giai đoạn II và bằng cách điều chỉnh tăng sản xuất GSH (Wagner và cộng sự 2010). Hơn nữa, người ta đã báo cáo sự tồn tại của một cuộc nói chuyện chéo giữa Nrf2 và con đường yếu tố hạt nhân (NF) -κB dẫn đến việc điều chỉnh quá trình viêm (Sturm và Wagner 2017; Lee và Johnson 2004). Về mặt này, các mô hình viêm thần kinh in vitro và in vivo khác nhau đã chứng minh rằng ITC có thể làm giảm đáng kể sự chuyển vị NF-κB với việc ức chế các cytokine tiền viêm và MMPs (Lee và cộng sự 2015; Subedi và cộng sự 2017).
Trong bài báo này, chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của ba ITC, tức là Allyl isothiocyanate (AITC), 2- Phenethyl isothiocyanate (PEITC) và 2- Sulforaphane (SFN) đối với việc giải phóng MMP -2 và -9 cũng như sản xuất ROS bởi các tế bào hình sao được kích hoạt LPS. Kết quả của chúng tôi đã chứng minh rằng PEITC, SFN và AITC có thể ức chế sự biểu hiện trong ống nghiệm của MMP -9 và MMP -2 trong tế bào hình sao được kích hoạt LPS và chống lại sự sản sinh ROS do H2O2 gây ra. Ngoài ra, chúng tôi đã chứng minh rằng ITC điều chỉnh sự biểu hiện quá mức của MMP với các cơ chế liên quan đến việc ức chế hoạt động của protein kinase điều hòa ngoại bào (ERK). Những kết quả này cho thấy rằng một chế độ ăn nhiều rau họ cải có thể có những lợi ích tiềm năng trong việc phòng ngừa và điều trị bổ sung các bệnh thần kinh.
Nguyên liệu và phương pháp
Hóa chất và thuốc thử
Môi trường Eagle's cải tiến (DMEM), huyết thanh bò thai (FBS), penicillin và streptomycin của Dulbecco được cung cấp bởi GIBCO (Paisley, Scotland). Gelatin, DNase 1, poly-L-lysine
(PLL), trypsin, lipopolysaccharide (LPS), Trypan Blue và 3- (4, 5- dimethylthiazol -2- yl) -2. 5- diphenyltetrazolium bromide (MTT ), Allyl isothiocyanate (AITC) [cá tuyết. 377,430, độ tinh khiết 95 phần trăm (HPLC)], 2- Phenethyl isothiocyanate (PEITC) [cá tuyết. 253,731, độ tinh khiết 99 phần trăm)], 2- Sulforaphane (SFN) [cá tuyết. S6317, độ tinh khiết Lớn hơn hoặc bằng 95 phần trăm (HPLC)] được cung cấp từ Sigma (St. Louis, MO, Hoa Kỳ). 2 ′, 7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) đã được mua từ Calbiochem. Protein tiêu chuẩn và R -250 Coomassie Brilliant Blue đến từ Bio-Rad (Hercules, CA, Hoa Kỳ). Các kháng thể kháng protein axit tạo sợi thần kinh đệm (GFAP) (RRID: AB _2294571) được mua từ Serotec (Oxford, Vương quốc Anh). Các kháng thể chống lại protein kinase điều hòa ngoại bào (ERK) 1/2 và ERK 1/2 được phosphoryl hóa (p-ERK 1/2) đến từ Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Màng Hybond-P PVDF, Hệ thống phân tích thấm máu phương Tây tăng cường phát quang hóa học (ECL) và kháng thể thứ cấp chống chuột-HRP là từ GE
Khoa học đời sống chăm sóc sức khỏe (Little Chalfont, Buckinghamshire,
Nước Anh). Các cặp mồi cụ thể cho MMP -2, MMP -9 và rRNA 18S đến từ Sigma Genosys (Cambs, Vương quốc Anh). RNeasy mini kit và QuantiTect Reverse Transcription được mua từ Qiagen (Valencia, CA, USA). Thuốc thử Econo- Taq PLUS GREEN 2X Master Mix cho PCR được mua từ Lucigen Corporation (Middleton, WI, USA).
Chuẩn mực đạo đức
Các thí nghiệm liên quan đến động vật được thực hiện theo các khuyến nghị trong Hướng dẫn của NIH về Chăm sóc và Sử dụng Động vật Phòng thí nghiệm và với sự chấp thuận của Tổ chức Chăm sóc và Sử dụng Động vật của Đại học Bari, Ý (Số Giấy phép: 23-98- MỘT).
Chuẩn bị nuôi cấy tế bào hình sao
Tế bào hình sao được điều chế từ các mô tân sinh của chuột Wistar {{0}} một ngày tuổi (RRID: RGD _737960, Harlan Laboratories srl, Udine, Ý). Để chuẩn bị các tế bào hình sao, 6 lứa 12 con, mỗi con đều được sử dụng. Các con vật bị chết do tiếp xúc với carbon dioxide (CO2) và bị giết chết bởi sự chặt đầu nhanh chóng. Các mô tế bào thần kinh đệm được mổ xẻ và sử dụng để tinh chế các tế bào thần kinh đệm sơ cấp theo phương pháp được báo cáo bởi Latronico và cộng sự. (2 0 18). Tóm lại, sau khi mổ xẻ, não chuột rút hết màng não và mạch máu, được băm nhỏ và tiêu hóa bằng 0. 25% trypsin với 0. 01% DNase. Sau khi ly tâm và đánh giá khả năng sống của tế bào, các tế bào được mạ trong bình phủ PLL (75 cm2) với mật độ 1,5 × 107 tế bào / bình trong DMEM, 10 phần trăm FBS, 100 IU mL -1 penicilin, 100 µg mL -1 streptomycin , và duy trì ở 37 độ trong 5% CO2. Sau 7 ngày, các bình được lắc để loại bỏ tế bào oligodendrocytes và microglia. Độ tinh khiết của tế bào hình sao, thu được bằng phương pháp trypsin hóa (0,25% trypsin / 0,02% EDTA), được đánh giá bằng phương pháp nhuộm miễn dịch đối với GFAP.
Xử lý tế bào hình sao được kích hoạt LPS bằng Allyl isothiocyanate, Phenethyl isothiocyanate hoặc 2 ‑ Sulforaphane
Tế bào hình sao hợp lưu, được gieo trong 96 đĩa tốt, được kích thích với 10 µg mL −1 LPS và được xử lý đồng thời với các nồng độ khác nhau của Allyl isothiocyanate (AITC), 2- Phenethyl isothiocyanate (PEITC) hoặc 2- Sulforaphane (SFN) trong DMEM không có huyết thanh. Tế bào hình sao trong DMEM không có huyết thanh và tế bào hình sao được kích hoạt LPS lần lượt đại diện cho các đối chứng âm tính và dương tính. Ngoài ra, vì các dung dịch gốc của AITC (100 µM), PEITC (67 µM) và SFN (56.4 µM) được tạo ra trong DMSO, một đường cong đáp ứng liều đối với DMSO, được pha loãng trong môi trường nuôi cấy ở cùng nồng độ dung môi có trong các mẫu phân tích được chạy để ước tính độc tính của hợp chất. Sau 20 giờ ủ ở 37 độ, 5 phần trăm CO2, chất nổi phía trên được thu thập và bảo quản ở -20 độ cho đến khi sử dụng trong khi các tế bào được thử nghiệm MTT để đánh giá khả năng sống sót của tế bào.
Thử nghiệm khả năng tồn tại của tế bào MTT
Độc tính tế bào của AITC, PEITC và SFN trên tế bào hình sao được phát hiện bằng cách sử dụng MTT [{{0}} (4, 5- dimethylthiazol -2- yl) - 2, {{5 }} thử nghiệm diphenyl tetrazolium bromide]. Xét nghiệm này dựa trên sự giảm MTT bởi succinate dehydrogenase của ty thể trong các tế bào sống sót, thành sản phẩm formazan màu xanh không hòa tan có thể được đo bằng quang phổ. Tóm lại, sau khi xử lý trong 20 giờ với AITC, PEITC hoặc SFN, môi trường nuôi cấy được lấy ra và các tế bào được nạp 0,5 mg mL-1 MTT. Sau khi ủ trong 2 giờ ở 37 độ, môi trường 5% CO2 được loại bỏ và các tinh thể formazan trong tế bào được hòa tan bằng 90% etanol. Sau khi lắc đĩa trong 15 phút để tinh thể hòa tan hoàn toàn, lượng sản phẩm formazan được xác định bằng độ hấp thụ quang ở bước sóng 560 nm với bước sóng chuẩn là 690 nm. Khả năng tồn tại của tế bào được biểu thị bằng phần trăm kiểm soát (CTRL), được đại diện bởi các tế bào chưa được xử lý, được đặt ở mức 100 phần trăm. Đối với mỗi hợp chất, một đường cong đáp ứng liều lượng của khả năng sống sót của tế bào đã được thu được.
Phát hiện các loài oxy phản ứng
Việc phát hiện các loại oxy phản ứng (ROS) được thực hiện bằng cách nạp các tế bào hình sao với 10 μM của 2 ′, 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) trong DMEM không có màu đỏ phenol ở 37 độ trong 30 phút. Sau đó DCFH-DA được loại bỏ khỏi giếng và các tế bào được xử lý trong 1 giờ với AITC (400 μM), PEITC (10 μM) hoặc SFN (25 μM) trong DMEM không có màu đỏ phenol với sự hiện diện của H2O2 ở nồng độ cuối cùng là 100 μM . Các tế bào chỉ được xử lý bằng DCFH-DA hoặc với H2O2 lần lượt đại diện cho các đối chứng âm tính (CTRL) và dương tính (H2O2). Sau khi ủ, các tế bào được rửa sạch bằng PBS và ly giải với
Tris – HCl 10 mM / NaCl 150 mM / Triton X -100 0. 5 phần trăm, pH 7,5,
sau đó ly tâm ở 10, 000 × g, 4 độ trong 10 phút. Các chất nổi được thu thập và phân tích quang phổ của chúng được thực hiện ở bước sóng 525 nm dưới sự kích thích ở bước sóng 485 nm. Kết quả được chuẩn hóa đối với tổng hàm lượng protein và sản xuất ROS được biểu thị bằng tỷ lệ phần trăm tương đối của cường độ phát quang (PL) so với đối chứng dương tính.
Phát hiện gelatinase
Hoạt động của gelatinase trong các chất nổi của tế bào (SN) được phát hiện bằng phân tích zymographic theo báo cáo của Latronico et al. (2 0 13). Một cách ngắn gọn, một lượng SN, tương ứng với khoảng 10 µg tổng số protein, được hòa tan với 30 µl dung dịch đệm mẫu Laemmli không có -mercaptoetanol. Các mẫu được chạy trong gel polyacrylamide 7,5% được đồng trùng hợp với 0,1% (wt / v) gelatin. Sau khi chạy điện di, gel được tráng hai lần với 2,5 phần trăm Triton X -100 / 10 mM CaCl2 trong 50 mM Tris – HCl, pH 7,4 và ủ trong 24 giờ ở 37 độ trong 1 phần trăm Triton X -100 / 50 mM Tris – HCl / 10 mM CaCl2, pH 7,4. Gel được nhuộm màu xanh lam rực rỡ Coomassie R -250 và bị hủy trong metanol / axit axetic / H2O (4: 1: 5 v / v). Hoạt tính của gelatinase được hình dung dưới dạng một dải phân hủy rõ ràng trên nền màu xanh lam của gel và được định lượng bằng phân tích hình ảnh đo mật độ vi tính sử dụng Phần mềm Image LabTM (Phòng thí nghiệm Bio-Rad). Gelatinase
hoạt độ được biểu thị bằng mật độ quang học (OD) × mm2, đại diện cho vùng quét dưới các đường cong có tính đến cả độ sáng và chiều rộng của vùng ly giải chất nền. Dữ liệu được biểu thị bằng công thức sau: phần trăm ức chế=[100 - (OD mẫu / OD đối chứng dương tính) × 100].
Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược (RT ‑ PCR)
Tế bào hình sao, được gieo trong 6 đĩa giếng, được kích hoạt bằng LPS (10 µg mL-1) và được xử lý đồng thời với ITC ở nồng độ không độc hại tối đa. Sau 20 giờ ủ, RNA tổng số được chiết xuất từ tế bào hình sao bằng bộ Qiagen RNeasy mini theo hướng dẫn của nhà sản xuất. DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ 500 ng RNA bằng cách sử dụng bộ phiên mã ngược QuantiTect theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Tổng cộng 25 ng sản phẩm phiên mã ngược được sử dụng để khuếch đại đoạn 591 bp bằng cách sử dụng các đoạn mồi cụ thể (cảm giác 5′-GTC ACT CCG CTG CGC TTT TCT CG -3 ′; antisense 5′-GAC ACA TGG GGC ACC TTC TGA -3 ′) cho trình tự MMP của chuột -2 và đoạn 541 bp sử dụng các đoạn mồi cụ thể (sense 5′-CGG AGC ACG GGG ACG GGT ATC 3 ′; anti-sense 5′-AAG ACG AAG GGG AAG ACG CAC ATC 3 ′) cho trình tự MMP -9 chuột. Song song đó, việc khuếch đại đoạn 308 bp của rRNA 18S của chuột (cảm giác 5′-GCCTAGATA CCGCAGCTAGGA -3 ′; antisense 5′-TCATGGCCTCAG TTCCGAA -3 ′), một gen tham chiếu bên trong tương đối bất biến, đã được thực hiện . Các bộ mồi, đã được xác nhận trong các nghiên cứu khác (Latronico và cộng sự 2013; Liuzzi và cộng sự 2004; Gramegna và cộng sự 2011) đặc biệt chỉ nhận ra các gen quan tâm như được chỉ ra bằng cách khuếch đại một dải duy nhất có kích thước mong đợi của PCR Mỹ phẩm. Quá trình khuếch đại PCR được thực hiện trong 25 chu kỳ, mỗi chu kỳ bao gồm biến tính ở 94 độ, ủ ở 59 độ và kéo dài ở 72 độ. Sau khi khuếch đại, các sản phẩm được phân tích trong 1,5% gel agarose. Sau khi phân tích mật độ gel, sự khuếch đại của các gen mục tiêu được bình thường hóa thành biểu hiện rRNA 18S và kết quả được biểu thị dưới dạng phần trăm ức chế so với đối chứng dương tính như được báo cáo về định lượng gelatinase.
Phát hiện sự phosphoryl hóa ERK 1/2 bằng phân tích Western blot
ERK 1/2 được phát hiện bằng phân tích immunoblot như được báo cáo trong Latronico et al. (2018). Tóm lại, sơ cấp hợp lưu
tế bào hình sao được mạ trong đĩa giếng {{0}}, làm yên trong môi trường không có huyết thanh trong 24 giờ, được xử lý trước trong 1 giờ với AITC (4 0 0 μM), PEITC (10 μM), hoặc SFN (25 μM) trong DMEM không có màu đỏ phenol. Sau khi được kích thích trong 2 giờ với 10 ug mL-1 LPS, tế bào được ly giải bằng 20 mM Tris – HCl, 150 mM NaCl, 2,5 mM Na-pyrophosphat, 1 mM -glycerophosphat 1 phần trăm Triton X -100, 1 mM phenylmethylsulfonyl fuoride, 20 ug / mL aprotinin, 1 mM EGTA, 1 mM Na-fuoride, 1 mM Na3VO4, pH 7,5. Sáu mươi ug tổng số protein của mỗi mẫu được phân giải bằng phương pháp điện di trên gel SDS-polyacrylamide 10% và các protein sau đó được tạo rãnh miễn dịch trên màng polyvinylidene difluoride. Sau khi ngăn chặn qua đêm ở 4 độ với 0,05% Tween 20, 1% sữa, 1% albumin huyết thanh bò trong 150 mM NaCl, 20 mM Tris – HCl (pH 7,5), màng được thăm dò qua đêm ở 4 độ với chất kháng p- đơn dòng ERK 1/2 kháng thể (1: 500). Sau đó, màng lọc được rửa ba lần với 0,05 phần trăm Tween 20 trong nước muối đệm Tris, được thăm dò bằng kháng thể thứ cấp peroxidase chống chuột và cải ngựa (1:20, 000) trong 2- giờ ở 24 độ và được phát hiện với sự phát quang hóa học tăng cường. Để đánh giá tổng lượng ERK, các màng được tách ra và ủ với kháng thể đặc hiệu cho ERK 1/2 (1: 500) không được phosphoryl hóa. Các cường độ dải được định lượng bằng cách quét mật độ các đốm màu và mức độ phosphoryl hóa của ERK 1/2 được chuẩn hóa thành ERK 1/2 không được phosphoryl hóa và được biểu thị bằng phần trăm so với đối chứng dương tính (tế bào hình sao được xử lý bằng LPS), theo phương trình sau:
phần trăm pERK 1 / 2=(ODsample / ODpositive control) × 100.
Phân tích thống kê
Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng cách sử dụng GraphPad Prism 5. 0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SD. Phân tích thống kê được thực hiện bằng cách sử dụng phân tích phương sai một chiều (ANOVA), sau đó là bài kiểm tra hậu kỳ so sánh nhiều lần của Dunnett.
Kết quả
Ảnh hưởng của các hợp chất isothiocyanate đến khả năng tồn tại của tế bào hình sao
Các thí nghiệm sơ bộ đã được thực hiện để đánh giá độc tính tế bào của AITC, PEITC hoặc SFN. Với mục đích này, các tế bào hình sao tinh khiết được xử lý trong 20 giờ với các hợp chất ITC ở nồng độ từ 5 đến 400 µM hoặc với DMSO được pha loãng trong môi trường nuôi cấy như được mô tả trong Phần Phương pháp. Như thể hiện trong Hình 1, DMSO không độc hại ở tất cả các nồng độ được sử dụng phù hợp với nồng độ của các dung dịch ITC đã thử nghiệm. Trong số các ITC được điều tra, AITC
Hình 1 Khả năng sống của tế bào của tế bào hình sao được xử lý bằng các hợp chất isothiocyanate. Tế bào hình sao chính trong dòng nước thải được xử lý trong 20 giờ bằng Allyl isothiocyanate (AITC), 2- Phenethyl isothiocyanate (PEITC), hoặc 2- Sulforaphane (SFN) ở nồng độ được chỉ định sau đó được tiến hành xét nghiệm MTT. Ngoài ra, vì nó trong dung dịch gốc được hòa tan trong dimethyl sulfoxide (DMSO), một đường cong đáp ứng liều lượng đối với DMSO, được pha loãng trong môi trường nuôi cấy ở cùng nồng độ dung môi (phần trăm) có trong các mẫu ITC được chạy trong mỗi thí nghiệm để thu được một ước tính đáng tin cậy về độc tính của ITC. Kiểm soát (CTRL) là đại diện
hương thơm từ các tế bào hình sao chưa qua xử lý trong DMEM không có huyết thanh. Các đồ thị đại diện cho các đường cong đáp ứng liều lượng của khả năng sống sót của tế bào, được biểu thị bằng tỷ lệ phần trăm sống sót của tế bào so với đối chứng. Liều lượng của các hợp chất xác định khả năng sống sót của tế bào trên 60 phần trăm được chọn làm nồng độ không độc hại tối đa. Giá trị là trung bình ± SD của n=3 thí nghiệm được thực hiện trên các quần thể tế bào khác nhau. Biểu đồ vi mô cho thấy kết quả đại diện về hình thái tế bào được quan sát dưới kính hiển vi tương phản pha (độ phóng đại 50X) sau khi xử lý với các hợp chất khác nhau
ít độc hơn đối với tế bào hình sao. Đặc biệt, AITC không gây độc cho tế bào lên đến 400 µM trong khi PEITC và SFN độc với nồng độ tương ứng trên 10 và 25 µM. Quan sát bằng kính hiển vi đã xác nhận kết quả của thử nghiệm MTT cho thấy ở nồng độ độc tố của PEITC và SFN, các tế bào hình sao bị giảm số lượng và những tế bào vẫn còn lại cho thấy những thay đổi về độc tế bào trong tế bào chất của chúng.
Tác dụng bảo vệ của các hợp chất ITC đối với việc sản xuất ROS trong các tế bào hình sao được xử lý bằng hydrogen peroxide
Để đánh giá tác dụng bảo vệ của ITC đối với stress oxy hóa, các tế bào hình sao được xử lý trước bằng PEITC, AITC và SFN ở nồng độ không độc hại tối đa sau đó được kích thích bằng H2O2. Quá trình sản xuất ROS nội bào, được tạo ra bởi H2O2, được thử nghiệm bởi DCFH-DA. Như thể hiện trong Hình 2, việc tiếp xúc với tín hiệu huỳnh quang tăng cường H2O2 trong
Hình 2 Sản xuất các loại oxy phản ứng (ROS) trong tế bào hình sao được xử lý bằng ITC. Sự hiện diện của ROS được kiểm tra bằng cách đo những thay đổi của tín hiệu huỳnh quang của 2 ′, 7'-dichlorofluorescein (DCFA) như được báo cáo trong phần Vật liệu và Phương pháp. Tế bào hình sao, được gieo trong 6 đĩa giếng, được xử lý trước trong 3 0 phút với DCFA sau đó được xử lý trong 1 giờ với 10 μM PEITC, 400 μM AITC hoặc 25 μM SFN với sự hiện diện của H2O2 ở nồng độ cuối cùng là 100 μM . Tế bào hình sao được điều trị bằng DCFA đơn độc (CTRL) hoặc với 100 μM H2O2 tương ứng là đối chứng âm tính và dương tính. Tín hiệu huỳnh quang được phát hiện trong dịch ly giải của tế bào được đo bằng máy đo fluorometer ở bước sóng 525 nm dưới sự kích thích ở bước sóng 485 nm. Sản lượng ROS được biểu thị bằng phần trăm (phần trăm) cường độ phát quang (PL) so với đối chứng dương. Giá trị là trung bình ± SD của n=3 thí nghiệm được thực hiện trên các quần thể tế bào khác nhau. Sự giảm đáng kể về mặt thống kê so với H2O2 được biểu thị bằng dấu hoa thị (ANOVA một chiều theo sau là thử nghiệm post hoc của Dun- net; * p <>
tế bào hình sao so với đối chứng (CTRL). Bằng chứng là cường độ huỳnh quang DCF giảm, việc xử lý trước tế bào hình sao bằng các hợp chất ITC đã chống lại sự tạo ROS do H2O2 gây ra. Trong số các ITC được thử nghiệm, chỉ PEITC và SFN có thể giảm đáng kể việc sản xuất ROS lần lượt khoảng 20 và 24% so với đối chứng tích cực (H2O2).
Các hợp chất isothiocyanate ức chế mức MMP-2 và MMP-9 trong các tế bào hình sao được kích hoạt LPS
Ảnh hưởng của các hợp chất ITC lên mức MMP -2 và MMP -9 được đánh giá trên các tế bào hình sao được kích hoạt bằng LPS, được biết là gây ra sự biểu hiện của gelatinase (Gottschall và Deb 1996), đồng thời được điều trị bằng AITC, PEITC, hoặc SFN trong phạm vi nồng độ không gây độc cho tế bào. Như thể hiện trong Hình 3a, hai dải phân hủy rõ ràng là 72 và 92 kDa có mặt trên gel tương ứng với MMP -2 và MMP -9. Việc kích hoạt tế bào hình sao với LPS làm tăng mức MMP -2 và tạo ra sự tổng hợp MMP -9. Điều trị bằng AITC (Hình 3b), PEITC (Hình 3c), hoặc SFN (Hình 3d) xác định phụ thuộc vào liều lượng
giảm mức MMP -9, mức này thay đổi tùy thuộc vào hợp chất được sử dụng. Đặc biệt, trong số các ITC được sử dụng, SFN có hiệu quả nhất trong việc ức chế MMP -9 vì nó xác định được 70% sự ức chế ở liều 10 μM và 100% ức chế ở liều 25 μM. Ngoài ra, chỉ SFN ở nồng độ không độc hại tối đa mới có thể ức chế đáng kể MMP -2 (Hình 2d).
Các hợp chất isothiocyanate ức chế sự biểu hiện gen MMP-2 và MMP-9 trong các tế bào hình sao được kích hoạt LPS
Để xác định xem các hợp chất ITC được nghiên cứu có thể ức chế sự biểu hiện MMP -2 và MMP -9 hay không, RT-PCR được thực hiện trên các tế bào hình sao kích hoạt LPS được xử lý với nồng độ tối đa không độc hại của ITC. Như được thể hiện trong gel đại diện trong Hình 4a, việc xử lý các tế bào hình sao được kích hoạt LPS với các ITC riêng lẻ có thể chống lại sự biểu hiện gia tăng của MMP -2 và MMP -9 mRNA. Như được trình bày trong Hình 4b, kết quả phân tích định lượng, bằng chứng rằng, ở nồng độ không độc hại tối đa, các hợp chất ITC, đã xác định sự ức chế có ý nghĩa thống kê đối với biểu hiện MMP -2 và MMP -9 khi so sánh sang kiểm soát tích cực (LPS). Cụ thể, PEITC và SFN gây ra cùng một tỷ lệ phần trăm ức chế đối với MMP -2 (85 phần trăm) và MMP -9 (100 phần trăm) trong khi AITC kém hiệu quả hơn PEITC và SFN trong việc ức chế MMP {{17} } (65 phần trăm) và MMP -9 (90 phần trăm).
ERK 1/2 liên quan đến sự ức chế biểu hiện MMP của ITC
Vì ERK 1/2 là con đường dẫn truyền tín hiệu chính liên quan đến việc điều chỉnh sự biểu hiện MMP -2 và MMP -9 trong tế bào hình sao được kích hoạt LPS (Lee và cộng sự 2003), ảnh hưởng của các hợp chất ITC lên sự hoạt hóa của protein kinase điều hòa ngoại bào (ERK) 1/2 đã được thử nghiệm.
Như được thể hiện trong Hình 5 LPS đã gây ra sự gia tăng có ý nghĩa thống kê mức ERK 1/2 (p-ERK) được phosphoryl hóa đã bị chống lại bằng cách xử lý trước với các hợp chất ITC.
Thảo luận
Người ta tin rằng các chiến lược phòng thủ chính chống lại nhiều bệnh chủ yếu bao gồm việc tránh các yếu tố nguy cơ và áp dụng một lối sống đúng đắn. Có rất nhiều bằng chứng khoa học ủng hộ giả thuyết rằng một số chất chuyển hóa tự nhiên, thường được tạo ra từ các loại trái cây và rau quả khác nhau có thể điều chỉnh các hiện tượng bệnh lý như ung thư, bệnh thần kinh và các bệnh đa yếu tố khác. Trong trường hợp này, các isothiocyanates (ITC) đã thu hút sự quan tâm lớn nhờ khả năng kháng nấm, kháng khuẩn của chúng,
Hình 3 Ảnh hưởng của các hợp chất isothiocyanate lên mức MMP -2 và MMP -9 trong các tế bào hình sao được kích hoạt bằng LPS. Trong một được báo cáo, một gel zymographic đại diện phân tích các chất nổi nuôi cấy từ các tế bào hình sao được kích hoạt bằng LPS (10 ug mL -1) và được xử lý đồng thời trong 20 giờ với AITC, PEITC hoặc SFN ở các nồng độ được chỉ định (μM). Đối chứng âm tính và dương tính thu được từ các tế bào hình sao không được kích thích và không được điều trị trong môi trường không có huyết thanh (CTRL) và LPS-
các ô được kích hoạt (LPS), tương ứng. Biểu đồ b – d thể hiện kết quả (trung bình ± SD) của n {{0}} thí nghiệm được thực hiện trên các quần thể tế bào khác nhau, được biểu thị bằng phần trăm ức chế MMP so với LPS, được tính toán sau khi quét mật độ và phân tích gel trên máy tính . Mức giảm đáng kể về mặt thống kê so với LPS được biểu thị bằng dấu hoa thị (ANOVA một chiều theo sau là bài kiểm tra post hoc của Dunnet; * p <0. 05,="" **="" p=""><>
các đặc tính sinh học chống ung thư, kháng mô, chống oxy hóa và chống viêm (Dufour và cộng sự 2015; Marzocco và cộng sự 2015; Vig và cộng sự, 2009; Talalay và Fahey 2001). Iso- thiocyanat có nguồn gốc từ sự phân giải enzym của glucosinolate (GSL) là chất chuyển hóa thứ cấp có trong 15 họ thực vật thuộc bộ Capparales và rất nhiều trong họ Brassicaceae (Fahey et al. 2001). GSL được thủy phân bởi myrosinase (-thioglucoside glucohydrolase e; EC 3.2.3.147) trong nhiều thành phần khác nhau như ITC, nitrit, thiocyanat, epithionitriles, SFGate, glucose và oxazolidines (Li và Kushad 2005). Mặc dù ITC đã được nghiên cứu rộng rãi trong lĩnh vực hóa trị liệu (Grundemann và Huber 2018), rất ít nghiên cứu được thực hiện về tiềm năng điều trị của chúng trong các bệnh thần kinh mặc dù nó đã được chứng minh khả năng SFN và AITC vượt qua BBB và tích tụ vào nhu mô não. (Clarke và cộng sự 2011; Jazwa và cộng sự 2011; Zhang 2010). Trong bài báo này, chúng tôi đã so sánh tác động của ba ITC,
hiện diện trong một số loại rau họ cải thường được tiêu thụ, trên sản xuất oxy phản ứng (ROS) và biểu hiện metalloproteinase nền (MMP) trong một mô hình in vitro của chứng viêm thần kinh được đại diện bởi các tế bào hình sao được kích hoạt bằng lipopolysaccharide (LPS) hoặc được xử lý bằng H2O2. Tế bào hình sao, loại tế bào thần kinh đệm phong phú nhất của thần kinh trung ương, đóng một vai trò quan trọng trong việc duy trì cân bằng nội môi của não và là dấu hiệu nhận biết của các bệnh thần kinh khác nhau (Cekanaviciute và Buckwalter 2016; Colombo và Farina 2016). Chúng được coi là cơ quan điều chỉnh quan trọng của phản ứng miễn dịch bẩm sinh và phản ứng của chúng đối với những lời xúc phạm có hại, chẳng hạn như stress oxy hóa, có thể làm trầm trọng thêm các phản ứng viêm và tổn thương mô hoặc thúc đẩy quá trình sửa chữa mô. Ai cũng biết rằng các tế bào hình sao được kích hoạt tạo ra các yếu tố gây độc thần kinh như MMP, có vai trò quan trọng trong việc thúc đẩy quá trình viêm thần kinh và mất tế bào thần kinh tiến triển trong các bệnh thần kinh (Hsieh và Yang 2013). Do đó, điều chế của
Hình 4 Ảnh hưởng của các hợp chất ITC lên biểu hiện MMP -2 và MMP -9 trong các tế bào hình sao được kích hoạt LPS. Tế bào hình sao, được gieo trong 6 đĩa giếng, được kích hoạt bằng LPS (10 µg mL -1) và được xử lý đồng thời trong 20 giờ với AITC (400 μM), PEITC (10 μM) hoặc SFN (25 μM), sau đó được xử lý RT-PCR. Gel agarose đại diện của biểu thức MMP -2 và MMP -9 được báo cáo trong (a). Biểu đồ trong (b) biểu thị kết quả (trung bình ± SD) của n=3 thử nghiệm được thực hiện trên ô khác nhau
các sự kiện xảy ra sau khi kích hoạt tế bào hình sao có thể làm giảm phản ứng viêm và tổn thương tế bào thần kinh.
Kết quả của nghiên cứu này chỉ ra rằng trong số các ITC được nghiên cứu, AITC ít độc hơn vì nó không làm giảm khả năng sống của tế bào ở tất cả các nồng độ được sử dụng. Ngược lại, tương tự như những gì đã được quan sát bởi các tác giả khác trên các dòng tế bào thần kinh đệm khác nhau, PEITC và SFN cho thấy độc tính tế bào ở nồng độ lớn hơn 10 và 25 µM, tương ứng (Lee và cộng sự 2015; Eren và cộng sự 2018; Su và cộng sự . 2015).
Trong các tài liệu khoa học hiện nay, có nhiều dữ liệu gây tranh cãi về các cơ chế phân tử cơ bản tác động của ITC đến khả năng tồn tại của tế bào. Về mặt này, hầu hết các nghiên cứu đã gợi ý rằng ITC ức chế quá trình chết rụng gây tăng trưởng tế bào, bắt giữ chu kỳ tế bào, tạo ra ROS ở tế bào ung thư nhưng không ở tế bào bình thường (Fofaria và cộng sự 2 0 15; Qin và cộng sự al. 2018; Sestili và Fimognari 2015). Chúng tôi phát hiện ra rằng SFN và PEITC, nhưng không phải AITC, có vai trò bảo vệ chống lại stress oxy hóa trong tế bào hình sao, thực sự ở nồng độ không độc hại tối đa, chúng có thể chống lại sự sản sinh ROS do tiếp xúc với H2O2. Thần kinh trung ương đặc biệt dễ bị tổn thương bởi stress oxy hóa do tiêu thụ nhiều oxy, hệ thống chống oxy hóa yếu và hàm lượng cao các phân tử sinh học dễ bị oxy hóa. Việc tạo ra ROS và tổn thương oxy hóa được cho là có liên quan đến bệnh sinh của các rối loạn thần kinh như bệnh Alzheimer (AD), bệnh Parkinson (PD), bệnh xơ cứng teo cơ bên (ALS) và bệnh đa xơ cứng (MS) (Lee et al. 2015). Do đó, mặc dù trong các thí nghiệm in vitro của chúng tôi, SFN và PEITC đã chống lại việc sản xuất ROS ở mức độ vừa phải, chúng tôi có thể giả định rằng việc sử dụng ITC trong cơ thể người được mong đợi từ lâu có thể dẫn đến giảm ROS đáng kể hơn, theo thời gian, có thể dẫn đến đối với các quần thể được biểu thị bằng phần trăm ức chế MMP so với đối chứng dương tính (LPS), được tính toán sau khi quét mật độ và phân tích gel trên máy tính. Sự giảm đáng kể về mặt thống kê của biểu thức MMP -2 và MMP -9 so với LPS được biểu thị bằng dấu hoa thị (ANOVA một chiều theo sau là bài kiểm tra sau hoc của Dunnet; * p <>
phòng ngừa và điều chỉnh các bệnh về não. ROS hoạt động như một phân tử tín hiệu quan trọng để kích hoạt dòng phản ứng viêm vào thần kinh trung ương. Về mặt này, ai cũng biết rằng ROS điều chỉnh sự biểu hiện của nhiều gen liên quan đến chứng viêm thần kinh thông qua việc kích hoạt các yếu tố phiên mã gây viêm như yếu tố hạt nhân-κB (NF-κB) (Lee et al. 2015; Chiurchiù et al. 2016; Martorana và cộng sự 2019). Trong kịch bản này, MMPs đóng một vai trò quan trọng mà sự biểu hiện được điều chỉnh bởi ROS thông qua việc kích hoạt NF-κB (Yan và Boyd 2007).
Vì rối loạn điều hòa MMP góp phần vào cơ chế bệnh sinh của nhiều bệnh viêm thần kinh và thoái hóa thần kinh, nên việc ức chế chúng là một chiến lược điều trị quan trọng. Vì lý do này, sự quan tâm ngày càng tăng đã được tập trung vào tiềm năng của các loại thuốc và hợp chất tự nhiên để ức chế MMPs. Nhiều nghiên cứu trong ống nghiệm đã chứng minh rằng tác dụng chống viêm và chống oxy hóa của một số loại thuốc và hợp chất hoạt tính sinh học có trong rau và sinh vật biển có liên quan đến khả năng ức chế sự biểu hiện của MMPs (Latronico et al. 2016, 2018; Di Bari et al. . 2015). Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chứng minh rằng trong số các ITC đã được thử nghiệm, SFN và PEITC là hiệu quả nhất trong việc ức chế mức độ MMP -2 và MMP -9 và biểu hiện trong các tế bào hình sao được kích hoạt bằng LPS. Sự ức chế MMPs bởi ITC đã được báo cáo trong các nghiên cứu in vivo và in vitro khác. Đặc biệt, Li et al. (2013) đã chứng minh rằng SFN có thể giảm thiểu thiệt hại BBB bằng cách ức chế biểu hiện MMP -9 trong mô hình in vivo của bệnh viêm cơ não tự miễn thực nghiệm. Các tác giả khác báo cáo rằng SFN có thể làm giảm biểu hiện MMP -9 sau chấn thương tủy sống ở chuột (Mao và cộng sự 2010a). Ngoài ra, các nghiên cứu trong ống nghiệm đã chứng minh rằng sự ức chế của ITC đối với sự di chuyển của tế bào và
Hình 5 Kinase 1/2 (ERK 1/2) điều hòa tín hiệu ngoại bào có liên quan đến việc ức chế biểu hiện MMP bởi các hợp chất ITC. Phim tự động đại diện phân tích thấm phương tây của các chất ly giải từ tế bào hình sao được xử lý trước trong 1 giờ với AITC (400 μM), PEITC (10 μM) hoặc SFN (25 μM), và sau đó được kích hoạt trong 2 giờ với LPS (10 μg mL {{ 13}}). Các ô chưa được xử lý và không được kích thích đại diện cho kiểm soát âm (CTRL). Biểu đồ ở (b) đại diện cho sự xâm lấn mức pERK1 / 2 trong tế bào u thần kinh đệm C6 có liên quan đến sự ức chế biểu hiện MMP -9 qua trung gian NF-κB (Lee và cộng sự 2015).
Các cơ chế phân tử mà ITC ức chế MMP vẫn chưa rõ ràng, và không có nghiên cứu nào điều tra các đặc tính chống oxy hóa và chống viêm của ITC trên nền văn hóa tế bào hình sao chính. Một số nghiên cứu ủng hộ giả thuyết rằng tác dụng ức chế của ITC là hệ quả của khả năng ngăn chặn NF-κB của chúng theo con đường tín hiệu Nrf2. Về mặt này, một nghiên cứu in vivo bằng chứng rằng những con chuột loại Nrf2 nhạy cảm hơn với phản ứng viêm qua trung gian NF-κB của tủy sống và tăng biểu hiện của các gen phụ thuộc NFκB bao gồm MMP -9 (Mao et al. 2010b ). Mặc dù các con đường NF-κB và Nrf2 có thể ảnh hưởng lẫn nhau, nhưng chúng tôi đã chứng minh rằng sự điều hòa của NF-κB cũng xảy ra thông qua sự điều biến các cơ chế phân tử độc lập với Nrf2. Thật vậy, chúng tôi nhận thấy rằng AITC, PEITC và SFN đã ức chế sự hoạt hóa của ERK1 / 2, đóng vai trò quan trọng trong chuỗi các sự kiện truyền tín hiệu cuối cùng điều chỉnh phiên mã gen MMP.
Tuy nhiên, bằng chứng thực nghiệm cho thấy SFN ở nồng độ không độc hại tối đa ức chế hoàn toàn cả biểu hiện và mức độ MMP -9 trong khi AITC và PEITC ức chế đến mức tối đa mở rộng biểu hiện MMP -9 nhưng chỉ làm giảm MMP {{3} } ở mức khoảng 50 phần trăm, có thể gợi ý rằng các hợp chất này điều chỉnh quá trình phiên mã MMP -9 bằng các cơ chế hoạt động khác nhau. Về mặt này, đã có báo cáo rằng SFN, ngoài việc ức chế sự hoạt hóa NF-κB do LPS gây ra, còn cản trở sự gắn kết của LPS với thụ thể TLR4 (Koo và cộng sự 2013). Tác dụng ức chế của SFN trên TLR4 có thể ngăn chặn sự hoạt hóa của tế bào hình sao bởi LPS và điều này có thể dẫn đến sự ức chế ngược dòng biểu hiện MMP -9 với hậu quả là thiếu sản xuất MMP -9.
thu được sau khi quét mật độ các phim chụp tự động và chuẩn hóa thành ERK 1/2 không phosphoryl hóa. Dữ liệu đại diện có nghĩa là ± SD của n=3 thí nghiệm được thực hiện trên các quần thể tế bào khác nhau. Dấu hoa thị đại diện cho các giá trị khác biệt về mặt thống kê so với kiểm soát dương tính (tế bào hình sao được kích hoạt LPS), được đặt ở mức 1 0 0 phần trăm (ANOVA một chiều theo sau là bài kiểm tra hậu kỳ so sánh nhiều lần của Dunnett; * p <>
Kết luận
Tóm lại, dữ liệu của chúng tôi chỉ ra rằng việc điều trị tế bào hình sao bằng ITC làm giảm sự hình thành ROS và ức chế sự giải phóng MMP -2 và MMP -9, cung cấp những hiểu biết mới về các đặc tính chống oxy hóa và chống viêm của ITC trên thần kinh đệm tế bào. Những kết quả này cho thấy ITC có thể là tác nhân dinh dưỡng đầy hứa hẹn cho sự phát triển của các can thiệp dinh dưỡng thần kinh, dựa trên việc sử dụng các loại thực phẩm lành mạnh, để phòng ngừa và điều trị bổ sung các bệnh thần kinh.
Tài trợ Nguồn vốn truy cập mở do Università Degli Studi di Bari Aldo Moro cung cấp trong Thỏa thuận CRUI-CARE.
Tuân thủ các tiêu chuẩn đạo đức
Xung đột lợi ích Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.
Truy cập mở Bài viết này được cấp phép theo Creative Commons Attribution 4. 0 Giấy phép Quốc tế, cho phép sử dụng, chia sẻ, điều chỉnh, phân phối và sao chép ở bất kỳ phương tiện hoặc định dạng nào, miễn là bạn ghi công phù hợp cho tác giả gốc (các) và nguồn, cung cấp liên kết đến giấy phép Creative Commons và cho biết liệu các thay đổi có được thực hiện hay không. Hình ảnh hoặc tài liệu của bên thứ ba khác trong bài viết này được bao gồm trong giấy phép Creative Commons của bài viết trừ khi có chỉ định khác trong hạn mức tín dụng cho tài liệu. Nếu tài liệu không có trong giấy phép Creative Commons của bài viết và mục đích sử dụng của bạn không được quy định pháp luật cho phép hoặc vượt quá mục đích sử dụng được phép, bạn sẽ cần xin phép trực tiếp từ chủ bản quyền. Để xem bản sao của giấy phép này, hãy truy cập http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.