Phần 3: Echinacoside được phân lập từ Cistanche Tubulosa Kích thích một cách rõ ràng sự tiết ra hormone tăng trưởng thông qua sự kích hoạt của thụ thể Ghrelin

Echinacoside được phân lập từ Cistanche tubulosa Kích thích một cách rõ ràng sự tiết ra hormone tăng trưởng thông qua việc kích hoạt thụ thể Ghrelin

Chieh-Ju Wu 1, Mei-Yin Chien 2, Nan-Hei Lin 1, Yi-Chiao Lin 1, Wen-Ying Chen 3, Chao-Hsiang Chen 2,4, * và Jason TC Tzen 1, *

1 Viện Cao học Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Chung-Hsing, Đài Trung 402, Đài Loan; baby159357520@gmail.com (C.-JW); CMNHEI@mohw.gov.tw (N.-HL); s9755702@gmail.com (Y.-CL)

2 Ko Da Pharmaceutical Co. Ltd., Taoyuan 324, Taiwan; rd1@koda.com.tw

3 Khoa Thú y, Đại học Quốc gia Chung-Hsing, Đài Trung 402, Đài Loan; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 Viện Sau đại học về Dược lý, Đại học Y khoa Đài Bắc, 110 Đài Bắc, Đài Loan

* Thư từ: gm@koda.com.tw (C.-HC); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (JTCT); Điện thoại: plus 886-4-22840328 (máy lẻ 776) (JTCT); Fax: cộng với 886-4-22853527 (JTCT)

Biên tập viên học thuật: Pinarosa Avato

Nhận: ngày 22 tháng 1 năm 2019; Được chấp nhận: ngày 14 tháng 2 năm 2019; Xuất bản: 17 tháng 2, 2019

Tiếp xúc:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Trừu tượng:Cistancheloài nhân sâm của sa mạc đã được ghi nhận có nhiều hoạt tính sinh học trong dược lý cổ truyền Trung Quốc và được dùng làm thuốc chống lão hóa. Ba glycoside phenylethanoid—echinacoside, tubuloside A, và acteoside — được phát hiện trong chiết xuất nước củaCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight và thành phần chính,echinacoside, đã được hoàn thiện hơn nữa.Echinacosidecó nồng độ cao hơn 10_6 M cho thấy hoạt động đáng kể không thể kích thích sự tiết hormone tăng trưởng của các tế bào tuyến yên của chuột. Tương tự như hormone giải phóng hormone tăng trưởng -6, một chất tương tự tổng hợp của ghrelin, kích thích tiết hormone tăng trưởng bởi echinacoside bị ức chế bởi [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11] -mục P , một chất chủ vận nghịch đảo của thụ thể ghrelin. Mô hình phân tử cho thấy rằng tất cả ba phenylethanoid glycoside tương tác đầy đủ với túi liên kết của thụ thể ghrelin, và echinacoside thể hiện sự tương tác với thụ thể này tốt hơn một chút so với tubuloside A và acteoside. Kết quả cho thấy rằng glycoside phenylethanoid, đặc biệt là echinacoside, là những thành phần hoạt động chịu trách nhiệm về mặt tác dụng chống lão hóa của C. tubulosa và có thể được coi là phát triển như các chất tương tự không peptidyl của ghrelin.

Từ khóa: cistanchetubulosa;echinacoside; ghrelin; tiết hormone tăng trưởng;phenylethanoidglycoside

echinacosideTrongcistanchecó nhiều tác dụng

Xin vui lòng nhấp vào đây để Phần 2

4. Vật liệu và Phương pháp

4.1. Hóa chất và Vật liệu thực vật

CistancheDesticola YC Ma được lấy từ chợ địa phương và được xác thực bởi Tiến sĩ Nan-Hei Lin.Cistanchetubulosa (Schenk) R. Wight được mua từ Sinopharm Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., (Hàng Châu, Trung Quốc). Axetonitril cấp HPLC, axit formic và metanol được mua từ Công ty TNHH Hóa chất ECHO, (Miaoli, Đài Loan). Môi trường Modi fi ed Eagle của Dulbecco (DMEM), huyết thanh bò thai đã thẩm tách (DFBS) và Trypsin-EDTA được mua từ Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). DNase tôi đã được mua từ Worthington Biochemical (Lakewood, NJ, Hoa Kỳ). Hormone giải phóng hormone tăng trưởng -6 (GHRP -6) được lấy từ Gen Way Biotech, Inc. (San Diego, CA, Hoa Kỳ). Collagenase type I và [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11] -substance P được mua từ Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA). Bộ kit ELISA hormone tăng trưởng chuột được mua từ Công ty Cổ phần Công nghệ Sinh học Sunred (Thượng Hải, Trung Quốc).

4.2. Phân tích HPLC / UV và LC _ MSn về việc khai thác nước của Cistanche spp.

Thân cây khô (25 g) trong sốCistancheDesticola YC Ma hoặcCistanchetubulosa (Schenk) R được chiết ba lần với 5 0 0 mL nước cất trong 60 phút ở 50 độ trong nồi cách thủy. Dung dịch được lọc qua Bộ lọc Syria 13 mm với màng lọc 0,45 um PP (Pall Corporation, Glen Cove, NY, USA), và trải qua các phân tích sau đây. Các thành phần hóa học trong chất chiết xuất đã được phân tích

sử dụng cột Syncronis C18 (đường kính trong 4,6 × 250 mm, 5 um, Thermo Scienti fi c, Waltham, MA, USA) trong hệ thống HPLC kết hợp với máy dò mảng diode quang mẫu 600E (Waters Corporation,

Milford, MA, Hoa Kỳ). Pha động bao gồm (A) nước chứa {{0}}. 1 phần trăm axit fomic và (B) axetonitril. Gradient rửa giải như sau: 0 - 60 phút, gradient tuyến tính từ 14 phần trăm B; 0–3 phút, 14 phần trăm đến 17 phần trăm B; 3–4 phút, 17 phần trăm B; 4–15 phút, 17 phần trăm đến 20 phần trăm B; 15–20 phút, 20 phần trăm B; 20–50 phút, 20 phần trăm đến 14 phần trăm B; 50–60

min, 14% B. Bước sóng phát hiện độ hấp thụ tia cực tím (UV) được đặt ở 330 nm. Máy đo khối phổ tứ cực bẫy tuyến tính (LTQ) song song (Thermo Electron, San Jose, CA, USA) được trang bị giao diện ion hóa tia điện tử (ESI) được kết nối với hệ thống Surveyor LC (Thermo Electron)

với vòng lặp mẫu 5 uL. Gradient rửa giải như sau: 0 - 9 0 min, gradient tuyến tính từ 14 phần trăm B; 0–24 phút, 14 phần trăm đến 17 phần trăm B; 24–25 phút, 17 phần trăm B; 25–36 phút, 17 phần trăm đến 20 phần trăm B; 36–37 phút, 20 phần trăm B; 37–80 phút,

20% to 14% B; 80–90 min, 14% B. The heated capillary temperature was set at 300℃ with a spray voltage of 4.5 kV. Negative ESI mode was firstly scanned ranging from m/z 400–1000. Data-dependent MSN was obtained using the high purity helium (>99,99 phần trăm) như khí va chạm.

4.3. Phân lập Echinacoside

Dịch chiết nước từ thân khô (25 g) của C. tubulosa được cô đặc dưới áp suất giảm để tạo ra xi-rô màu nâu đậm. Quá trình chiết xuất thô được làm lơ lửng bằng nước cất và đông khô bằng máy sấy đông lạnh. Bột 100 mg được phân giải trong nước cất 5 mL và được lọc bằng cách sử dụng cột Sephadex LH -20 (100 mL; GE Healthcare Bio-Sciences AB, Thụy Điển) được rửa giải bằng dung dịch metanol nước 10% và được giám sát bởi HPLC . Các phân đoạn có chứa echinacoside được phát hiện bằng cách đọc độ hấp thụ ở bước sóng 245 nm và được thu hoạch bằng cách sử dụng thiết bị lấy mẫu tự động.

4.4. Loài vật

Các thí nghiệm đã được phê duyệt bởi Tổ chức chăm sóc và sử dụng động vật Ủy ban của Đại học Quốc gia Chung _ Hsing với số phê duyệt của IACUC 106-079. Chuột đực Sprague _ Dawley nặng 250_300 g được mua từ BioLASCO, Taiwan Co., Ltd. (Đài Bắc, Đài Loan). Hai con mỗi chuồng được duy trì trong môi trường có kiểm soát 23 o2, độ ẩm 60 o 10 phần trăm và chu kỳ sáng / tối 12 giờ. Những con chuột được cho ăn chế độ ăn kiêng tiêu chuẩn chow (cung cấp calo

bởi 28,7 phần trăm protein, 13,4 phần trăm chất béo và 57,9 phần trăm carbohydrate, 5001 Rodent LabDiet, St. Louis, MO, USA) và ad libitum nước cất.

4.5. Văn hóa tế bào tuyến yên chính

Tế bào tuyến yên được phân lập theo một phương pháp phân tán bằng enzym được phát triển bởi Yamazaki và cộng sự. [29]. Brie fl y, chuột đực Sprague Dawley được gây mê bằng Zoletil 50 (40 mg / kg, IP; Phòng thí nghiệm Virbac, Carros, Pháp), và các tuyến trước tuyến yên được cắt bỏ và phân tán để nuôi cấy tế bào tuyến yên ở dạng huyền phù, như đã mô tả trước đây [30].

4.6. Thử nghiệm tiết hormone tăng trưởng

Tế bào thùy trước tuyến yên chính của 4 × 104 tế bào / giếng được nuôi cấy ở 37 độ CO2 dưới 5% trong 2 ngày trước khi làm xét nghiệm tiết hormone tăng trưởng theo quy trình đã mô tả trước đây [30].

Sau khi loại bỏ môi trường nuôi cấy, các tế bào được bỏ đói trong môi trường Modi fi ed Eagle's (DMEM) không có huyết thanh của Dulbecco trong 90 phút để ổn định sự tiết hormone cơ bản. Môi trường đói được thay thế bằng DMEM mới có chứa echinacoside (từ 10_8 đến 10_5 M) hoặc GHRP -6 (chất chủ vận của thụ thể ghrelin ở người, GHSR, 10_7 M) như một đối chứng tích cực, và các tế bào được ủ trong 15 và 30 phút ở 37 độ dưới 5% CO2. Để phát hiện hiệu ứng đối kháng, các tế bào được ủ với GHSR

chất chủ vận nghịch đảo, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-chất P (0. 5 uM), và sau đó được xử lý bằng DMEM có chứa echinacoside (10_5 M) hoặc GHRP -6 (10_7 M) trong 30 phút. Phương tiện được thu thập cho

xác định sự tiết hormone tăng trưởng bằng kit ELISA hormone tăng trưởng chuột (Công ty Công nghệ sinh học Sunred Thượng Hải).

4.7. Phân tích thống kê

Dữ liệu được trình bày dưới dạng giá trị trung bình o SD. Sự khác biệt đã được phân tích bằng T-Test. Tính toán thống kê được thực hiện bởi GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA). Mức p <0. 05="" được="" coi="" là="" không="" có="" ý="" nghĩa="" thống="">

4.8. Lập mô hình và lập bản đồ đồng nhất

Mô hình đồng nhất và gắn kết với thụ thể ghrelin ở người, thụ thể kích thích tiết hormone tăng trưởng (GHSR, số gia nhập AAI13548), được thiết lập dựa trên cấu trúc trước đây của chúng tôi [21,24]. Brie fl y, cấu trúc tinh thể của 1 và 2 thụ thể adrenergic (PDB 2YCY và 3PDS) với các phối tử liên kết, cyanopindolol và FAUC50 được sử dụng làm khuôn để xây dựng cấu trúc GHSR [31,32]. Cấu trúc GHSR với tổng năng lượng PDF thấp nhất đã được chọn để gắn thêm với GHRP -6, echinacoside, tubuloside A và acteoside. Tất cả các quy trình mô hình hóa được thực hiện bằng nền tảng Discovery Studio 2.1 (http://accelrys.com/).

Cấu trúc 3D của GHRP -6 đã được tải xuống từ cơ sở dữ liệu kết hợp Pub-Chem trên trang web NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Các cấu trúc 3D của echinacoside, tubuloside A và acteoside được xây dựng bằng chương trình Chem3D (http://www.cambridgesoft.com/). Vị trí liên kết phối tử của GHSR được coi là không gian hình cầu với bán kính 14 Å tính từ tâm của túi liên kết trong mô phỏng lắp ghép. Việc gắn GHRP -6, echinacoside, tubuloside A hoặc acteoside vào vị trí liên kết của GHSR được thực hiện trong silico bằng cách sử dụng mô-đun LibDock trong gói Discover Studio 2.1 và được thu nhỏ hơn nữa bằng thuật toán thu nhỏ thông minh với trường lực CHARMm trong Gói Discover Studio 2.1 [33]. Để so sánh độ liên kết tương đối của echinacoside, tubuloside A và acteoside trong GHSR, vùng trung tâm hoạt động được xây dựng bằng GHRP -6 trong GHSR đã được sử dụng để gắn đế và năng lượng liên kết được tính toán bởi GEMDOCK (Viện Tin sinh học , Đại học Quốc gia Chiao Tung, Đài Loan).

Đóng góp của Tác giả: Thí nghiệm trên động vật, C.-JW, Y.-CL, và W.-YC; Xác định cation và cation tinh khiết: MY.C., N.-HL, và C.-HC; Mô hình phân tử: C.-JW, Y.-CL, và JTCT; Thiết kế và viết dự án: C.-HC và JTCT

Tài trợ: Công việc được hỗ trợ một phần bởi khoản tài trợ cho Jason TC Tzen của Đại học Quốc gia Chung-Hsing (NCHU -102 D604).

Lời cảm ơn: Các tác giả cảm ơn Tian-Shun Weng đã chia sẻ kinh nghiệm chuyên môn của mình trong việc sử dụng các loài Cistanche.

Mối quan tâm: Tất cả các tác giả tuyên bố không có hành vi quan tâm.

Người giới thiệu

1. Vương, T.; Zhang, X. .; Xie, W. Cistanche Desticola YC Ma, "Nhân sâm sa mạc": Một đánh giá. Là. J. Chin. Med. 2012,40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. Vương, T.; Chen, C.; Yang, M.; Đặng, B.; Kirby, MG; Zhang, X. Chiết xuất ethanol từ Cistanche tubulosa làm trung gian nồng độ hormone sinh dục của chuột bằng cách cảm ứng các enzym steroid sinh tinh hoàn. Dược phẩm. Biol. 2016, 54, 481–487. [CrossRef] [PubMed]

3. Lin, WY; Chun, Y. Jack, C.; Kao, ST; Tsai, FJ; Liu, HP Các con đường phân tử liên quan đến việc tăng tuổi thọ và cải thiện nhận thức của Cistanche tubulosa ở Drosophila. Phytomedicine 2017, 26, 37–44. [CrossRef]

4. Ngô, CR; Lin, HC; Su, MH Đảo ngược bằng chất chiết xuất từ ​​nước của Cistanche tubulosa từ các hành vi trong mô hình chuột giống bệnh Alzheimer: Sự phù hợp đối với sự lắng đọng amyloid và chức năng dẫn truyền thần kinh trung ương. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef]

5. Xuan, GD; Liu, CQ Nghiên cứu về tác dụng của phenylethanoid glycosides (PEG) của Cistanche Desticola đối với việc chống lão hóa ở chuột già do D-galactose gây ra. Zhong Yao Cai 2008, 31, 1385–1388. [PubMed]

6. Giang, Y.; Tu, PF Phân tích các thành phần hóa học ở các loài Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

7. Gao, C.; Vương, C.; Wu, G. Cistanche tổng số glycoside trên cơ thể chuột sa sút trí tuệ trong học tập và trí nhớ và nghiên cứu cơ chế. Cái cằm. Thảo mộc. Med. 2005, 36, 1852–1855.

8. Li, F.; Yang, Y. Zhu, P.; Chen, W .; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z .; Li, P. Echinacoside thúc đẩy quá trình tái tạo xương bằng cách tăng tỷ lệ OPG / RANKL trong tế bào MC3T 3- E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef]

9. Shimoda, H.; Tanaka, J.; Takahara, Y. Takemoto, K .; Shan, SJ; Su, MH Tác dụng hạ cholesterol máu của chiết xuất Cistanche tubulosa, một loại thuốc thô truyền thống của Trung Quốc, trên chuột. Là. J. Chin. Med. 2009, 37, 1125–1138. [CrossRef]

10. Tang, F.; Hảo, Y .; Zhang, X. .; Qin, J. Ảnh hưởng của echinacoside trên chứng suy thận bằng cách ức chế con đường truyền tín hiệu TGF - 1 / Smads trong mô hình chuột DB / DB bị bệnh thận do đái tháo đường. Thuốc Des. Devel. Họ. 2017, 11,2813–2826. [CrossRef]

11. Xiong, WT; Gu, L.; Vương, C.; CN, HX; Liu, X. Tác dụng chống tăng đường huyết và hạ natri máu của Cistanche tubulosa trên chuột DB / DB tiểu đường týp 2. J. Ethnopharmacol. 2013, 150, 935–945. [CrossRef] [PubMed]

12. Bao, XX; Ma, HH; Đinh, H.; Li, WW; Zhu, M. Tối ưu hóa sơ bộ công thức thuốc thảo dược Trung Quốc dựa trên tác dụng bảo vệ thần kinh trên mô hình chuột mắc bệnh Parkinson do rotenone gây ra. J. Integr. Med. 2018, 16, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

13. Kojima, M.; Hosoda, H.; Ngày, Y .; Nakazato, M.; Matsuo, H.; Kanagawa, K. Ghrelin là một peptide acyl hóa giải phóng hormone tăng trưởng từ dạ dày. Bản chất 1999, 402, 656–660. [CrossRef] [PubMed]

14. Zigman, JM; Jones, JE; Lee, CE; Saper, CB; Elmquist, JK Biểu hiện của mRNA thụ thể ghrelin ở chuột và não chuột. J. Comp. Neurol. 2006, 494, 528–548. [CrossRef] [PubMed]

15. Castaneda, TR; Tống, J.; Datta, R.; Culler, M.; Tschop, MH Ghrelin trong việc điều hòa trọng lượng cơ thể và chuyển hóa. Đổi diện. Neuroendocrinol. 2010, 31, 44–60. [CrossRef] [PubMed]

16. Rudman, D.; Feller, AG; Nagraj, HS; Người Đức, GA; Lalitha, PY; Goldberg, AF; Schlenker, RA; Cohn, L.; Rudman, IW; Mattson, DE Ảnh hưởng của hormone tăng trưởng con người ở nam giới trên 60 tuổi. N. Engl. J. Med. 1990, 323, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

17. Lưu, H.; Bravata, DM; Olkin, tôi; Nayak, S. .; Roberts, B.; Garber, AM; Hoffman, AR Đánh giá có hệ thống: Tính an toàn và hiệu quả của hormone tăng trưởng ở người cao tuổi khỏe mạnh. Ann. Thực tập sinh. Med. 2007, 146, 104–115. [CrossRef] [PubMed]

18. Giordano, R .; Bonelli, L.; Marinazzo, E.; Ghigo, E.; Arviat, E. Điều trị hormone tăng trưởng trong quá trình lão hóa của con người: Lợi ích và rủi ro. Nội tiết tố 2008, 7, 133–139. [CrossRef] [PubMed]

19. Sattler, FR Hormone tăng trưởng ở nam giới tuổi già. Pract tốt nhất. Res. Clin. Nội tiết tố. 2013, 27, 541–555. [CrossRef]

20. Lo, YH; Chen, YJ; Chang, CI; Lin, YW; Chen, CY; Lee, MR; Lee, VS; Tzen, JTC Teaghrelins, tetraglycosid fl avonoid acyl hóa duy nhất trong trà ô long Chin-shin, là chất chủ vận đường uống giả định của thụ thể ghrelin.

J. Agric. Chem chép thực phẩm. 2014, 62, 5085–5091. [CrossRef]

21. Hsieh, SK; Lo, YH; Ngô, CC; Chung, TY; Tzen, JTC Xác định cation của các chất trung gian sinh tổng hợp của teaghrelin và các hợp chất tương tự như teaghrelin trong trà ô long, và sự gắn kết phân tử của chúng với thụ thể ghrelin.

J. Hậu môn Thuốc Thực phẩm. 2015, 23, 660–670. [CrossRef]

22. Hsieh, SK; Chung, TY; Li, YC; Lo, YH; Lin, NH; Kuo, PC; Chen, WY; Tzen, JTC Ginkgoghrelins, glycoside acyl hóa fl avonoid độc nhất trong Folium Ginkgo, kích thích tiết hormone tăng trưởng thông qua kích hoạt thụ thể ghrelin. J. Ethnopharmacol. 2016, 193, 237–247. [CrossRef]

23. Han, L.; Mavis, BY; Liu, E.; Zhang, Y. Li, W .; Bài hát, X.; Fu, F .; Gao, X. Đặc điểm cấu trúc và xác định cation của phenylethanoid glycoside từ Cistanches Desticola YC Ma bởi UHPLC / ESI-QTOF-MS / MS. Phytochem. Hậu môn. 2012, 23, 668–676. [CrossRef]

24. Lu, D.; Zhang, J .; Yang, Z .; Lưu, H.; Li, S.; Ngô, B.; Ma, Z. Phân tích định lượng Cistanches Herba bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp với phát hiện dãy diode và khối phổ có độ phân giải cao kết hợp với các phương pháp đo hóa học. J. Sep. Khoa học viễn tưởng. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef]

25. Mặt Trăng, M.; Kim, HG; Hwang, L.; Seo, JH; Kim, S.; Hwang, S.; Kim, S.; Lee, D.; Chung, H.; Ồ, MS; et al. Tác dụng bảo vệ thần kinh của ghrelin trong 1- methyl -4- phenyl -1, 2, 3, một 6- tetrahydropyridine mô hình chuột của bệnh Parkinson bằng cách ngăn chặn sự kích hoạt vi tế bào. Neurotox. Res. 2009, 15, 332–347. [CrossRef]

26. Lupien, SJ; Isabelle, OM; Hupbach, A.; Tú, MT; Buss, C.; Người đi bộ, D.; Pruessner, J.; Mcewen, BS Vượt ra ngoài khái niệm căng thẳng: Tải trọng cân bằng-Một quan điểm sinh học và nhận thức phát triển. Trong Tâm thần học Phát triển: Tập Hai: Khoa học Thần kinh Phát triển; John Wiley & Sons, Inc: New York, NY, USA, 2015; trang 578–628.

27. Rizzo, M.; Rizvi, AA; Sudar, E.; Soskic, S.; Obradovic, M.; Montalto, G.; Boutjdir, M.; Mikhailidis, DP; Isenovic, ER Một đánh giá về tác dụng tim mạch và chống xơ vữa của ghrelin. Curr. Dược phẩm. Des. 2013, 19, 4953–4963. [CrossRef]

28. Holst, B.; Lang, M.; Brandt, E.; Bạch, A.; Howard, A. .; Frimurer, TM; Beck-Sickinger, A.; Schwartz, TW Chất chủ vận nghịch đảo thụ thể Ghrelin: Xác định cation của lõi peptit hoạt động và các biểu mô tương tác của nó trên thụ thể. Mol Pharmacol. 2006, 70, 936–946. [CrossRef]

29. Yamazaki, M.; Nakamura, K .; Kobayashi, H.; Matsubara, M.; Hayashi, Y. Kanagawa, K .; Sakai, T. Tác động điều tiết của ghrelin đối với sự bài tiết hormone tăng trưởng từ các tế bào thùy trước tuyến yên được tưới máu của chuột. J. Neuroendocrinol. 2002, 14, 156–162. [CrossRef]

30. Lo, YH; Chen, YJ; Chung, TY; Lin, NH; Chen, WY; Chen, CY; Lee, MR; Chou, CC; Tzen, JTC Emoghrelin, một dẫn xuất emodin độc nhất trong Heshouwu, kích thích tiết hormone tăng trưởng thông qua việc kích hoạt thụ thể ghrelin. J. Ethnopharmacol. 2015, 159, 1–8. [CrossRef]

31. Moukhametzianov, R .; Warne, T.; Edwards, PC; Serrano-Vega, MJ; Leslie, AG; Tate, CG; Schertler, GF Hai cấu trúc khác biệt của chuỗi xoắn 6 được quan sát thấy trong cấu trúc liên kết đối kháng của thụ thể adrenergic beta 1-. Proc. Natl. Acad. Khoa học. Hoa Kỳ 2011, 108, 8228–8232. [CrossRef]

32. Rosenbaum, DM; Zhang, C.; Lyons, JA; Holl, R .; Aragao, D.; Arlow, DH; Rasmussen, SG; Choi, HJ; Devree, BT; Sunahara, RK; et al. Cấu trúc và chức năng của phức hợp thụ thể adrenoceptor chủ vận beta (2) không thể đảo ngược. Nature 2011, 469, 236–240. [CrossRef]

33. Brooks, BR; Bruccoleri, RE; Olafson, BD; Kỳ, DJ; Swaminathan, S.; Karplus, M. CHARMM — Một chương trình tính toán năng lượng đại phân tử, cực tiểu hóa và động lực học. J. Tính toán. Chèm. 1983, 4, 187–217. [CrossRef]