Nghiên cứu về ảnh hưởng của khả năng miễn dịch ở chuột

Để tìm hiểu thêm thông tin, xin vui lòng liên hệdavid.wan@wecistanche.com

Hai trong số ba mươi namDBA / 2NCrl(D2N) chuột được sử dụng như một chủng kiểm soát trong phân tích dữ liệu nền củaDBA / 2N-MDXchuột, được trình bày với những phát hiện bất thường cho thấy nhiễm trùng. Trường hợp 1: Một con chuột D2N đực 4- tuần tuổi có tổn thương mảng trắng ở thận trái (không có triệu chứng lâm sàng) và một cuộc kiểm tra bệnh lý của thận đã được thực hiện. Sự xâm nhập tế bào viêm, chủ yếu là bạch cầu trung tính, được quan sát thấy trong các ống và kẽ thận trái, và Staphylococcus aureus (S.aureus) được phát hiện từ đoạn thận trái. Do đó, tổn thương này trên thận trái được chẩn đoán là chèn éptubulointerstitialviêm thận do nhiễm S. aureus. Trường hợp 2: Chứng vẹo cổ bên trái kèm theo sụt cân được phát hiện ở chuột D2N đực, 9- tuần tuổi. Đánh giá mô học cho thấy viêm xuất tiết xung quanh lỗ hầu họng của vòi trứng, và viêm mủ ở cả tai giữa và tai trong bên trái với sự hình thành áp xe và tụ lại thành các vi khuẩn gram dương. S. aureus được xác định từ việc cấy tăm bông của cả hai ống tai ngoài. Kết quả là, trường hợp này là do bệnh viêm tai giữa cấp do S. aureus gây ra và mạng internet. S. aureus được biết đến như một mầm bệnh cơ hội có khả năng thường xuyên gây ra các bệnh cấp cứu cho động vật thí nghiệm không đủ khả năng miễn dịch. Tuy nhiên, theo hiểu biết của chúng tôi, trường hợp nhiễm trùng S. aureus này có biểu hiện cộng hưởng từ chuột D2N không được báo cáo.

Bấm vào đây để tìm hiểu thêm về Cistanche

Một chủng Staphylococcus aureus (MRSA) kháng methicillin đã xuất hiện trên một con chuột thí nghiệm tại Trung tâm Khoa học Động vật Phòng thí nghiệm của Trường Cao đẳng Y tế Quốc phòng vào năm 2018 vàMRSAcác chủng phân lập được thu hồi từ chuột cũng trong các phòng chuột khác sau đó. Trên các phân lập MRSA này, đánh máy phân tử như gõ trình tự đa locus (MLST), gõ Staphylococcus aureus Protein A (spa), gõ SCCmec và gõ coagulase được thực hiện để xác định kiểu gen của chúng. Tất cả các dòng phân lập đều tiết lộ kiểu gen giống hệt nhau (ST1, spa t1784, SCCmec loại IV và coagulase loại VII), cho thấy rằng các dòng phân lập là các dòng giống hệt nhau. Trước khi MRSA xuất hiện vào năm 2018, không có chủng nào có kiểu gen như vậy chưa được phân lập tại cơ sở này, người ta cho rằng dòng MRSA đã được đưa vào cơ sở thông qua người hoặc động vật thí nghiệm. STl1 là MRSA do cộng đồng mắc phải đầu tiên được phục hồi từ trẻ em ở Hoa Kỳ, tuy nhiên, ST1 hiện được phục hồi từ người và động vật trên toàn thế giới. Tại Nhật Bản, chủng ST1 và SCCmec týp IV đã được phân lập từ người và mèo, cho thấy rằng ST1 lây truyền giữa người và động vật. Một chủng MRSA với những kiểu gen này nhưng cũng có spa tl784 đã được phục hồi từ người. Hiện tại, sự phân biệt giữa MRSA mắc phải ở bệnh viện, MRSA do cộng đồng mắc phải và MRSA liên quan đến chăn nuôi còn mơ hồ hơn. Những kết quả này cho thấy chuột có thể hoạt động như một ổ chứa MRSA.

Trong liệu pháp miễn dịch ung thư gần đây, hoạt động của các phân tử như PD -1 bị ức chế để tăng hoạt động của các tế bào miễn dịch chống lại ung thư. Mặc dù mang lại hiệu quả điều trị cao nhưng vẫn có trường hợp bệnh tự miễn phát triển trong liệu pháp miễn dịch ung thư. Tại đây, chúng tôi đã thiết lập một hệ thống có thể làm suy giảm PD -1 theo thời gian cụ thể trong các tế bào và chuột được nuôi cấy bằng cách sử dụngHệ thống degron SMASh. Protein dung hợp PD -1- SMASh trong tế bào Jurkat và CD3 cộng với tế bào lách đã giảm 1 ngày sau khi dùng Asunaprevir (ASV) hoặc Grazoprevir (GRV) là những chất ức chế protease NS3 / 4A. Sự phát triển của tế bào ung thư biểu mô tuyến MC -38 được cấy vào PD -1- cherry-SMASh knockin (KI) với ASV bị kìm hãm so với chuột kiểu hoang dã (WT) và chuột KI không được điều trị. Hơn nữa, những con chuột WT được cấy ghép tế bào tủy xương KI sau khi được chiếu bức xạ gây chết người có thể từ chối các tế bào MC -38 có GRV. Chuột KI tỏ ra khỏe mạnh và không có dấu hiệu của bệnh tự miễn dịch. Chúng tôi gợi ý rằng việc sử dụng hệ thống degron trong các sinh vật sống được kỳ vọng sẽ thúc đẩy không chỉ các nghiên cứu sinh học khác nhau mà còn trong việc điều trị bệnh.

Progesterone (P4) được tiết ra từ nhau thai để duy trì thai kỳ và hoạt động như một chất điều hòa miễn dịch. Glucocorticoid là mộtđiều hòa miễn dịchsteroid để điều chỉnh tình trạng viêm. Trong nghiên cứu này, các tế bào đơn nhân trong máu ngoại vi của người (PBMC) được cấy vào chuột NOG để gây ra bệnh ghép so với vật chủ (GVHD) và được sử dụng để so sánh giữa hiệu ứng P4 và cortisol (COR). PBMC được kích thích khi có các nồng độ P4 hoặc COR khác nhau và các tế bào được phân tích bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy (FCM). Các biệt danh củaPBMCđược cấy vào chuột NOG, và P4 hoặc COR được tiêm vào chuột hai lần một tuần. Sau 28 ngày, FCM và các phân tích hóa mô miễn dịch được thực hiện. Kết quả là nồng độ cao của P4 đã ức chế sự hoạt hóa tế bào T trong ống nghiệm, trong khi sự ức chế không tiếp tục sau khi loại bỏ. Sự ức chế hoạt hóa tế bào T ít hơn trong điều trị COR so với P4, và sự kiệt sức của tế bào T nổi bật hơn. Những con chuột được tiêm P 4- mang nhiều tế bào lách hơn, đặc biệt là tế bào T CD8, so với những con chuột đối chứng. Tuy nhiên, sự biểu hiện của CD25 thấp hơn, sự xâm nhập của các tế bào T của con người vào phổi và gan ít hơn, và ít hơnGVHDcác triệu chứng đã được quan sát thấy. Mặt khác, số lượng tế bào lách, đặc biệt là tế bào T, ở những con chuột được tiêm COR thấp hơn đáng kể, và các tế bào đã hoạt hóa / cạn kiệt rất nhiều. Những kết quả này cho thấy P4 thích duy trì tế bào T hơn so với COR trong ống nghiệm.

Helicobacter hepaticus và hóa đơn Helicobacter được biết đến như những mầm bệnh gây viêm gan và viêm đại tràng ở chuột. Sự tồn tại của một số trường hợp dương tính vẫn được xác nhận hàng năm trong các cơ sở động vật thí nghiệm ở Nhật Bản. Tốt nhất là sử dụng chất chứa trong manh tràng hoặc phân tươi làm mẫu để xét nghiệm PCR của H. hepaticus và H. bilis.

Gần đây, các thuốc thử vận ​​chuyển và lưu trữ DNA và RNA đã được sản xuất bởi nhiều nhà sản xuất khác nhau. Hy vọng rằng những thuốc thử này sẽ là vấn đề trong việc vận chuyển các mẫu được sử dụng cho các xét nghiệm PCR sẽ được giải quyết. Do đó, trong nghiên cứu này, tính hữu dụng của thuốc thử bảo quản axit nucleic đã được kiểm tra bằng cách thực hiện thử nghiệm PCR đối với Helicobacter bằng cách sử dụng các chất chứa trong manh tràng được bảo quản bằng thuốc thử bảo quản axit nucleic. Kết quả là, các mẫu được lưu trữ trong 7 ngày bằng dung dịch bảo quản có thể được phát hiện Helicobacter ở cùng mức độ với mẫu tươi. Từ những điều trên, có ý kiến ​​cho rằng trong phép thử PCR đối với Helicobacter, ngay cả khi việc vận chuyển mất nhiều ngày, có thể thực hiện phép thử với độ chính xác cao bằng cách vận chuyển mẫu ngâm trong thuốc thử bảo quản axit nucleic bằng phương pháp bay trong tủ lạnh.

Trước đây, chúng tôi đã phát triển các chủng đột biến E.coli với khả năng bám dính được tăng cường đáng kể đối với các bề mặt rắn trong ống nghiệm bằng cách sửa đổi các gen phản ứng với sự đói dinh dưỡng. Để đánh giá sự tương tác giữa các chủng E. coli tăng cường khả năng bám dính (AEEs) và môi trường ruột in vivo, chúng tôi đã đánh giá khả năng xâm nhập của chúng vào đường ruột bằng cách cấy vào chuột.

Trước khi thử nghiệm đánh giá, chúng tôi đã biến đổi AEEs với một plasmid biểu hiện luciferase để hình dung in vivo. như được cấy bằng miệng vào những con chuột đã nhịn ăn và thu thập phân vài ngày một lần. Số lượng sốngAEEsđược ước tính bằng cách đo CFU từ phân được thu thập.

Kết quả là, so với chủng đối chứng, AEE có nhiều hơn trong phân trong hơn một tuần, điều này cho thấy khả năng xâm nhập của khuẩn lạc trong đường ruột được tăng cường. Bằng cách quan sát sự định vị của sự phát quang luciferase bằng hình ảnh không xâm lấn sử dụng IVIS, người ta cũng nhận thấy rằng AEE có xu hướng khu trú ở manh tràng và ruột kết.

[Mục tiêu] Hiện tại, [Pasteurella]khí phế thủngđã được phân loại lại thành một chi mới Rodentibacter. Trong số này, R.pneumotropicus và R. Healy là mục tiêu chính để giám sát vi sinh vật ở loài gặm nhấm. Chúng tôi đã phân lập được một số loài Rodentibacter sp. không thể được xác định là loài từ loài gặm nhấm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tìm hiểu các đặc điểm của Rodentibacter sp. phân lập, tập trung vào độc lực của vi khuẩn. [Phương pháp] Rodentibacter sp. được phân lập từ khí quản chuột được sử dụng cho nghiên cứu. Việc giải trình tự gen dự thảo được thực hiện trên trình tự trình tự thế hệ tiếp theo, và sau đó, các gen liên quan đến độc lực được dự đoán. Trong các thí nghiệm trên động vật, chuột Rag2 đã được sử dụng cho Rodentibacter sp. nhiễm trùng.|Kết quả|Bằng cách giải trình tự bộ gen dự thảo, một gen mã hóa độc tố RTX duy nhất đã được xác định trong Rodentibacter sp. Trình tự protein của độc tố RTX tương đồng với trình tự do Enterobacteriaceae tạo ra hơn là Pasteurellaceae. Trong một thí nghiệm trên động vật, hầu hết tất cả những con chuột bị nhiễm Rag 2 đều được xác nhận là bị viêm phổi hoặc nhiễm trùng huyết gây tử vong. Mặc dù không thể xác định được chủng phân lập là R.neumotropicus và R. heylii, loài có quan hệ họ hàng gần này có thể gây chết động vật bị suy giảm miễn dịch khi có các yếu tố độc lực như độc tố RTX.

Trong Chương trình Phát triển Công nghệ Cơ bản của NBRP (2018-2019), chúng tôi đã giải trình tự bộ gen của vi khuẩn gây bệnh cơ hội ở chó và thực hiệnRNAseqcủa động vật nguyên sinh ở chuột, để phát triển các xét nghiệm PCR cho những sinh vật này. Chúng tôi sử dụng những kết quả này để phân tích Rodentibacter spp. và động vật nguyên sinh ở chuột với sự hợp tác của Đại học Kyoto (NBRP Rat). Tại đây, chúng tôi báo cáo kết quả xét nghiệm trên các mẫu chuột. [Phương pháp] Trình tự gen 16S rRNA của khoảng 1,5 kbp được đọc bằng PCR đối với sáu dòng chuột phân lập Rodentibacter spp., Và trình tự gen dự thảo của một dòng phân lập (# 25) được xác định bằng cách sử dụng Illumina HiSeq 2500. PCR của nội dung trong phân chuột là được thực hiện dựa trên kết quả RNAseq của động vật nguyên sinh chuột. [Kết quả] Trình tự gen 16S rRNA của tất cả các chủng phân lập đều giống hệt nhau và chúng được xác định là Rodentibacter Ratti bằng phân tích OTU. Kết quả lại mẫu phân lập # 25 cũng cho thấy chủng này là R. Ratti.PCR đối với động vật nguyên sinh của chuột cho kết quả dương tính với amip chuột. Không có kết quả tích cực nào thu được đối với TrichomonasPCRtrên tiêu bản chuột. [Thảo luận] Các phân lập chuột của Rodentibacter spp. kiểm tra trong báo cáo này là R. Ratti. Điều quan trọng là phải nhận thức được sự hiện diện của R. Ratti khi thực hiện các xét nghiệm Rodentibacter ở chuột. Một số mẫu phân chuột dương tính với PCR amip. Đây là bước đầu tiên trong quá trình phát triển PCR để phát hiện động vật nguyên sinh ở chuột.

Sinh vật gặm nhấm 'Pasteurella pneumotropica' là vi khuẩn gây bệnh cơ hội gây bệnh đường hô hấp ở chuột nhắt và chuột cống. Trước đây chúng được phân loại trong chi Pasteurella, và một số chủng được đề xuất dự kiến ​​là các dạng biotype. Vào năm 2017, chúng được tổ chức lại thành chi Rodentibacter. Các chủng MaM và MaR lần lượt được phân lập từ chuột nhắt và chuột cống vào khoảng những năm 1980. Trong nghiên cứu này, chúng tôi xác định trình tự bộ gen của cả hai chủng và so sánh chúng với trình tự gen của chi Rodentibacter, vật liệu và phương pháp Các chủng MaM và MaR được lấy từ Viện Các bệnh Truyền nhiễm Quốc gia (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Cả hai chủng đều được nuôi cấy lỏng để chiết xuất DNA bộ gen và trình tự bộ gen được xác định bằng cách sử dụng Illumina Hiseq 2500 và PacBio Sequel. [Kết quả] Dựa trên trình tự gen 16S rRNA, chủng MaM được xác định là R.pneumotropicus và chủng MaR như R. Ratti. Hơn nữa, trình tự bộ gen hoàn chỉnh (2.213.961 bp) của chủng MaR đã được xác định (số lượng operon rRNA là 6 và số lượng gen được ước tính là 2.063). [Discussionl Các chủng MaM và MaR đã được sử dụng làm tiêu chuẩn để xác định 'Pasteurella pneumotropica' ở Nhật Bản. Từ phân tích này, chúng tôi xác định được loài của cả hai chủng như sau: chủng MaM là R.pneumotropicus và chủng MaR là R.ratti. Đáng chú ý, những kết quả này cho thấy R. Ratti có thể được phân lập từ chuột ở Nhật Bản.

Clostridium pili for me (CP) dễ bị lây nhiễm ở các động vật thí nghiệm khác nhau bao gồm chuột cống và chuột nhắt và biểu hiện nhiễm trùng không có triệu chứng ngoại trừ ở động vật bị suy giảm miễn dịch. Nó được coi là một chẩn đoán phân biệt chính để duy trì các cơ sở động vật và nổi tiếng là ảnh hưởng đến dữ liệu thực nghiệm từ các nghiên cứu trên động vật. Chẩn đoán huyết thanh (ELISA, IFA) và PCR thường được sử dụng để chẩn đoán CP vì việc phân lập trong môi trường dinh dưỡng nhân tạo rất khó đối với CP. Tuy nhiên, sự tồn tại của kháng thể không đặc hiệu cho thấy phản ứng chéo với CP bằng phương pháp chẩn đoán huyết thanh đã được báo cáo và thường được công nhận trong một trường hợp tương tự tại các cơ sở của chúng tôi. Hơn nữa, phương pháp PCR có giới hạn là một phương pháp chẩn đoán đáng tin cậy với việc theo dõi định kỳ, vì CP không thể phát hiện được trong phân sau khi hiệu giá kháng thể ngày càng tăng. Gần đây, chúng tôi đã kiểm tra một cách tiếp cận khác, bảo quản phân từ động vật hàng tháng. Chúng tôi đã áp dụng xét nghiệm PCR cho CP không bị ảnh hưởng bởi ảnh hưởng của các kháng thể vì chẩn đoán đáng tin cậy hơn bằng cách sử dụng phân được bảo quản liên tục. Trong báo cáo này, chúng tôi đưa ra một ví dụ gần đây. (kháng thể không đặc hiệu) để dẫn đến việc kiểm tra luồng đang phát triển trong công ty của chúng tôi.